Summary
Her presenterer vi en protokoll for å etablere en repliserbar ledende hørselstap induksjon via kirurgisk tromme membran punktering og verifisering av Otoskop visualisering og atferdsdata vurdering av klapp skremme.
Abstract
Mekanisk hørselstap (CHL) er en utbredt hørselsnedsettelse hos mennesker. Målet med protokollen er å beskrive en enkel kirurgisk prosedyre for inducing CHL i gnagere. Protokollen demonstrerer CHL av tromme membran punktering. Verifikasjon av CHL kirurgi var ved Otoskop undersøkelse og atferdsdata vurdering ved klapp skremme respons, både repliserbar og pålitelig, og er enkle metoder for å demonstrere hørselstap har oppstått. Den enkle CHL-prosedyren er fordelaktig på grunn av reproduserbarhet og fleksibilitet til ulike sysler i hørselstap forskning. Begrensningene ved å indusere CHL av en kirurgisk tilnærming er knyttet til læringskurven for å utføre den kirurgiske prosedyren og tilliten til audiologiske undersøkelse. Inducing en hørselshemming av CHL tillater en å lett studere nevrale manifestasjoner og atferds resultater av hørselstap.
Introduction
Utbredelsen av hørselstap hos barn og voksne er henholdsvis omtrent 19,5%1 og 15,2%2 . Men ca 39,3% av alle nyfødte med en unormal hørsel screening ikke får forebyggende behandling som rapportert av Centers for sykdom Control3. Hørselstap er en mye studert tilstand, og gnager er en robust modell for å studere normal hørsel og hørsel relaterte lidelser4,5,6,7,8,9 ,10,11,12,13,14,15. Hørsels lidelser som ledende hørselstap (CHL) fører til en økning på kort sikt Synaptic depresjon i hørsels barken4, noe som resulterer i grunnere psykometriske bakker assosiert med frekvens modulering deteksjon terskler 5. ledende hørselstap modeller ved kirurgisk fjerning/forskyvning av hekse, tromme membran (TM) punktering eller ørepropp er lett ansatt og tillater rask induksjon av hørselstap modell5,14 ,15,16,17,18. Målet med den nåværende protokollen og metoden er å demonstrere en enkel og reproduserbar CHL modell i gnagere.
Den nåværende protokollen er billig (≈ USD $300 med alle verktøy), og lett amendable til ulike forsknings sysler. Rotta har fikk detaljert vurderingen av midt øre anatomi19,20,21,22,23, inngrep tilnærmelser24, modeller inne otitis media25, 26,27 og TM punktering gjenfødelse16,17,18,28,29,30, noe som gjør det til en ideell modell for å studere hørselstap. Her over, en enkel CHL induksjon fremgangsmåte er beskrevet med bekreftelse av Otoskop og opptreden vurderingen med klapp skremme svaret inne rotten, hvilke så kanskje bli brukt til å utforske i tillegg sekvele av høring forlis. CHL prosedyren er indusert av kirurgisk punktering av TM. Verifisering av CHL prosedyren er utført av Otoskop visualisering for å bestemme fravær av TM. Behavioral vurdering er utført av en høy desibel (dB) lydtrykksnivå (SPL) hånd-klapp. Denne metoden har vært brukt tidligere i en rekke gnagere. Det er lett å gjenskape, produserer robuste psykometriske forskjeller og endringer i nevrale fysiologiske responser4,5,16,17,18.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Den nåværende studien og prosedyrene ble godkjent av dyret forskningsetikk komiteer av City University of Hong Kong, Universitetet i Hong Kong, og Department of Health i Hong Kong Special administrative region.
1. dyr
- Bruk Sprague-Dawley (SD) rotter på to måneder (N = 90, 200-250 g).
Merk: gnagere ble levert av akkreditert Laboratory Animal Unit ved University of Hong Kong. - Opprettholde rotter under en konstant 25 ° c temperatur og 60-70% fuktighet ved laboratoriet Animal Research Unit.
- House gnagere i 12/12-h lys/mørke sykluser med tilgang til mat og drikkevann, Ad lib.
- Acclimate gnagere til bolig miljøet i minst en dag før CHL kirurgi.
- Plukk opp gnager av scruff og bedøve den gnager med en cocktail av ketamin og xylazine (80-100 mg/kg: 5-10 mg/kg, henholdsvis) via intraperitoneal injeksjon (kombinere 1,0 mL ketamin med 0,5 mL av xylazine som en endelig konsentrasjon).
Merk: Bruk en 1 mL sprøyte med en 23-25G nål. Injiser ca 0,2 mL per 100 g kroppsvekt av rotte i 30 min av anestesi. - Utfør tå klype for å verifisere smerte følelse og å bekrefte riktig anestesi. En reaksjon på dyp tå knipe (ved tilbaketrekking av bakben lemmer) indikerer utilstrekkelig anestesi.
2. kirurgisk oppsett
- Sterilisere alt utstyr i et autoklav eller varmt glass perle steriliseringsapparat før begynnelsen kirurgi. Rengjør operasjonsområdet med 70% etanol.
- Bruk latex hansker og Laboratoriefrakk før du starter prosedyren.
- Plasser et sterilt kirurgisk bilde på den rene benken (figur 1a).
- Sterilisere mikro-saks og en Otoskop før operasjonen for å minimere øre betennelse (figur 1B).
- Plasser mikro-saks og Otoskop i det sterile området.
- Plasser gnager i operasjonsfeltet og i tråd med kirurgen.
- Fortsett med kirurgisk induksjon av CHL.
3. kirurgisk induksjon av mekanisk hørselstap
- Plasser halen og leder av gnager justert i en liggende posisjon, leder nærmest kirurgen.
- Visualiser venstre og høyre øre av gnager under Otoskop for å sikre sunn tromme membran (figur 2a). Evaluere både høyre og venstre øre av hver gnager for å verifisere sunn tilstand før CHL induksjon.
- Grip øre spiralen og forlenge den ytre øre kanalen (dvs. øre kanalen, ekstern hørsels meatus, heri øre kanalen) for å få innsiden til å bli skjult og formørket av dybde. Her er øre kanalen laget vinkelrett på overflaten av TM.
Merk: Sørg for at hørsels cannel er direkte parallell nå og TM danner en rett vinkel med aksen for innsetting av mikro-saks. Det vil bli visualisere som en svart tube uten lys. Noen ganger må øre kanalen vippes i en liten vinkel, ca. 15 ° til den Planar overflaten på hodeskallen. Dette sikrer at kirurgen hånden er vinkelrett på overflaten av TM. - Introduser mikro-saks i midten av øre kanalen betalende oppmerksomhet for ikke å skumme eller Nick vevet i øre kanalen og Fortsett litt, ca ≈ 5 mm fra sentrum av uklarhet, stakk fremover forsiktig gjennom midten av TM.
Merk: TM punktering kan bekreftes av en pop lyd når mikro-saks tips punktering av TM. Den popping lyden kan høres på ca ≈ 2 min 52 s i videoen. Dette er ikke en saks lyd; Dette er en TM punktering lyd. Som målt post-analyse, er "pop" ca ≈ 20 dB SPL større enn bakgrunnslyd som er registrert av en høy frekvens mikrofon. Det er ikke nødvendig å verifisere "pop" lyd i denne utstrekning, Otoskop visualisering er tilstrekkelig. Det etterforsker kanskje nød å praksis forsikrer en ' popmusikk ' er hørt i løpet av hver CHL fremgangsmåte. - Umiddelbart åpne våren lastet mikro-saks og roter tre ganger etter punktering den TM å sikre forskyvning av hodet av hekse bort fra TM (bare hvis hekse forskyvning er ønsket).
- Fjern mikro-saks og plassere gnager under Otoskop for visualisering.
Merk: det er viktig å merke seg at ingen signifikant blødning skal skje etter kirurgisk inngrep. Euthanize den gnager og ikke gå videre til atferdsdata vurdering hvis blødning oppstår. - Indusere bilaterale CHL ved å fortsette som ovenfor i det motsatte øret.
4. Otoskop visualisering
- Bekreft en vellykket CHL kirurgi med en Otoskop ved hjelp av en liten diameter, for å visualisere den gnager mellomøret.
- Evaluer alle gnager før og etter CHL kirurgiske prosedyren under Otoskop. Sikre bekreftelse av normal TM (figur 2a) og skadet TM etter CHL induksjon (figur 2b).
-
Post-operative omsorg for gnager
- Plasser gnager i hjemmet buret under en varm lampe.
- Observere gnager etter CHL induksjon til gnager rettighetene selv.
- Injisere gnager med glukose (druesukker/saltvann) serum å gjenopprette bevisstheten og plassere gnager i homecage for utvinning.
Merk: Bruk en 23G nål med en 10 mL sprøyte for å injisere 5 mL saltvann etter CHL kirurgi. - Injiser den gnager via intramuskulær med anti-bakteriell Enrofloksacin 0,05 mg/kg to ganger i løpet av 24 h utvinning perioden.
- Observer gnager regelmessig for smerte atferd eller symptomer etter operasjonen.
5. atferdsdata vurdering (validering av CHL induksjon)-klapp skremme respons
- Bekrefte CHL (etter Otoskop bekreftelse) 24 h post-kirurgi med atferdsdata vurdering bestående av klapp-skremme-test.
- Sted det CHL indusert rotten nærmest en normal rotten inne to separat tilstøtende burene.
- Plasser gnagere i et stille rom.
- Stå ca 0,5 meter fra gnagere og Fortsett å klappe i jevnt fordelte varigheter en rekke ganger (5 klapper ble valgt og fordeles over 1 sekund).
Merk: klapp skremme produsert av hånden klapp målt ≈ 40 dB SPL større enn bakgrunnslyd som er registrert av en høy frekvens mikrofon.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Det enkel CHL fremgangsmåte var utført opp på 90 rotter og ute av denne gruppe 2 fikk betydelig blø og 2 bydde ikke ha høring forlis morgendagen idet vurdert av opptreden klapp skremme. Disse fire rottene ble forkastet. Rotter burde være kasserte idet beskrevet av årsakene inne diskusjonen på grunn av komplikasjoner. Inducing TM punktering og/eller hekse forskyvning/fjerning (figur 2b) utløser CHL, som resulterer i atferdsmessige manifestasjoner (dvs. CHL-ingen respons på høyt DB SPL skremme). Rotter bør sjekkes av Otoskop før operasjonen for å sikre normal tromme membran og etter kirurgi for å sikre tromme membran punktering (figur 2; Supplerende figur 1). Merk, ingen blødning eller signifikant betennelse bør forekomme (supplerende figur 2). Den CHL indusert-gnager vil ikke svare på et høyt dB SPL klapp lyd mens en kontroll høring buret kompis vil hoppe til høyt klapp. Det CHL rotten er ikke døv å lyd, bortsett fra har en CHL og derfor subtil opptreden manifestasjoner finnes5. En kontroll høring gnager reagerer kraftig med sprang til en høy dB SPL lyd, for eksempel klapp skremme. Det hoppe/skremme svaret er tydelig synlig inne det video fra det høring bur make, stund det CHL indusert rotten reagerer ikke. Det opptreden for en CHL rotten kanskje være subtil. Vi viser den generelle klapp skremme refleks for en representativ CHL rotte og kontroll hørsel rotte. Over tid post-CHL kirurgi noen rotter kan gjenvinne klapp skremme respons.
Ved hjelp av CHL-prosedyren har tidligere studier undersøkt de nevrale manifestasjoner av hørselstap. For eksempel har graden av hørselstap som følge av prosedyren blitt kvantifisert ved å måle hørsel fremkalt potensial15,16,17, runde vindu innspillinger4,18, og atferdsmessige hørsel terskler5. Neural aktivitet etter CHL har blitt studert med 2-deoxyglucose metode og hel celle innspillinger4,16,17. Hørbar nerve aktivitet har også blitt undersøkt med runde vindu innspillinger18. Frekvens-modulerings terskel deteksjon terskler har blitt studert behaviorally5. Denne CHL-prosedyren er tydelig kompatibel med en rekke eksperimentelle metoder for detaljerte studier av hørselstap.
Figur 1: kirurgisk oppsett. A) sted gnager i et godt opplyst område med en kirurgisk lampe. Bedøve den gnager. Gjør klar et utvalg av mikro-saks, hvis den minste ikke fungerer, et større par kan sikre TM punktering. Sørg for at Otoskop er klar. B) våren lastet mikro-saks. Pinsett vil være nok hvis eksperimentator kan kontrollere åpning og lukking. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2: representativ tromme membran. A) tromme MEMBRAN (TM) før punktering. B) TM etter punktering. Når du utfører CHL og TM punktering bekreftelse med Otoskop, er det viktig å først merke hodet av hekse og etter CHL induksjon, en vellykket fjerning og punktering av TM. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Tilleggsinformasjon figur 1: før og etter CHL kirurgi AS i et Otoskop. Otoskop visualisering før og etter CHL kirurgi (umiddelbar) i identiske rotte. Venstre kolonne av tallene er representative rotte hørbar kanaler visualisere før CHL prosedyre ved Otoskop med normal TM og mellomøret ossicles. Høyre kolonne av tallene er representative rotte hørbar kanaler visualisere etter CHL prosedyre av Otoskop med punktert TM og fordrevne mellomøret ossicles. Betydelig blødning består av blod opphopning i ørene. Studer mellomøret anatomi av gnagere før du utfører prosedyren19,20,21,22,23,24,25, 26,27,28,29. Otoskop visualisering ble gjennomført 24 timer etter operasjonen. Vennligst klikk her for å laste ned dette tallet.
Supplerende informasjon figur 2: kontroll og etter CHL kirurgi rotte øre kanalen som vurdert av histologi. Histologiske syn på midt øret i kontroll og etter CHL kirurgi (bar = 500 μm). Hørbar kanaler ble behandlet av hematoksylin og eosin (H & E) og Masson ' s Trichrome (MT) farging i kontroll og 24 timer etter CHL kirurgi. Venstre kolonne med tall er representative histologiske deler av hørsels kanalen i kontroll rotter. Den høyre kolonnen med tall er representative histologiske deler av øre kanalen etter CHL-prosedyren. Merk at ingen signifikant betennelse oppstår etter CHL kirurgi. Ingen forskjell ble lagt merke til en uke. Vennligst klikk her for å laste ned dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Vi beskriver en enkel kirurgisk induksjon av CHL med verifisering ved hjelp av Otoskop visualisering og atferdsmessige klapp skremme respons i rotte. Her over vi demonstrere metoden opp på rotten og tidligere denne metoden er blitt anvendt å gerbils og mus. Metoden kanne lett være adoptert å annet Red. Induksjon av CHL tillater studiet av en subtil form for hørselstap som manifesterer i hørbar kortikale endringer og psykofysiske atferds resultater4,5,16,17,18 .
Unnlatelse av å indusere CHL kan skyldes flere grunner som er oppført nedenfor. I hvert tilfelle anbefaler vi at du forkaster rotta. Euthanize rotta hvis en av ørene blør. Blødning indikerer at saksen kom i kontakt med øre kanalen, og at den kirurgiske tilnærmingen ikke var ren. Ellers kan det bety at punktering var dypere enn foretrukket, forårsaker intern skade, muligens hjerneskade. Intern skade kan bety en dyp innsetting eller skår av øre kanalen. Prosedyren er en minimalt invasiv tromme membran og/eller hekse fjerning/forskyvning; Derfor bør det ikke forekomme signifikante blødninger (supplerende figur 1). Hvis det oppstår betydelige blødninger, euthanize rotta. Hvis ingen "pop" høres under tromme membran punktering, kan dette indikere en dårlig CHL, noe som betyr at saksen ikke gjorde direkte kontakt med tromme membranen. Kast gnager fra gruppen og euthanize. Ved hjelp av Otoskop, hvis visualisering bekrefter mellomøret er lik kontroll ører, indikerer dette at tromme membranen ikke har blitt punktert. Ingen CHL ble indusert og derfor gnager bør kastes. Hvis gnager reagerer på klapp-lyd-test, bør det kastes. Hvis en CHL indusert gnager hopper eller hopper etter klapp lyder, ligner på buret kompis, indikerer dette den kirurgiske prosedyren var ikke vellykket. En svaret å en klapp lyd viser nei CHL har hendelse og rotta burde være kasserte eller euthanized. Begrensningene ved å indusere CHL av en kirurgisk tilnærming er forbundet med læringskurve for å utføre kirurgisk inngrep og tillit i audiologiske eksamen19,20,22,23, 27,28,29. Videre har denne protokollen ikke brukt ABR eller DPOAE for å vurdere hørselstap15 for å etablere en enkel protokoll for forskere ukjent med audiologiske prosedyrer. De audiologiske prosedyrene ABR og DPOAE kan brukes for forskere som ønsker ytterligere vurdering av CHL15.
En modifikasjon av teknikken bruker TM punktering med hekse forskyvning. For en nybegynner kan dette være vanskelig å etablere, men hekse er klart å visualisere med en Otoskop i nesten alle gnager ører. TM er en fiber membran med et pellucid utseende som overfører lys. Øv Otoskop verifikasjon for å etablere konsistent visualisering basert på tidligere litteratur19,20,22,23,27,28,29 . Etter at man er trygg i hekse visualisering, dens forskyvning under operasjonen er lett bekreftes av et høyt "pop" som kan høres på ≈ 2 min 52 s. Dette pop er en høy dB SPL endring i lydfilen på ca 20 dB SPL før vridning av våren-lastet mikro-saks. Den høye pop bekrefter TM punktering og suksess uten å skade øre kanalen. To aspekter av den kirurgiske prosedyren må utføres med forsiktighet: 1) sikre mikro-saksen er plassert i midten av øre kanalen, og 2) sikre vinkelen på mikro-saksen er parallelt med øre kanalen under den nedadgående punktering. Sørg for at punktering bevegelsen er rask og ca 5 mm nedover fremstøt fra åpningen av øre kanalen. Roter og åpne mikro-saks for hekse forskyvning hvis ønskelig.
De viktigste trinnene i CHL protokollen er å sikre TM punktering og verifisere atferdsmessige klapp skremme. Sikre verifisering av hekse fjerning/punktering av TM bekrefter CHL har blitt utført. Verifisering gjøres gjennom otoscopic undersøkelse. Det betenkelig skritt for det opptreden vurderingen er å sikre en kraftig nok klapp det det gnager er forskrekket. Forskjellene ha blitt bemerket når en CHL rotten er oppstilt inne en lignende bur som høring rotten; Her over, ettall rotten er forskrekket av det annet, selv om rotta kan ikke høre lyden. En forskrekket rotten/gnager ville ofte hoppe eller tresteg, bortsett fra denne er ikke en kriterium. Som kan observeres, den CHL rotte ikke flytte til klapp. Siden TM punktering er en CHL, ulike nivåer av DB SPL lyder kan bli hørt av gnager5.
Den primære betydningen av denne enkle CHL-metoden er at den kan utføres av et bredt spekter av forskere, selv med bare beskjedne ressurser. Verifisering av hørselstap er utført av Otoskop visualisering og atferdsmessige klapp skremme respons i rotte. Her over vi demonstrere metoden opp på rotten og tidligere denne metoden er blitt anvendt å gerbils og mus. Metoden kanne lett være adoptert å annet Red. Induksjon av CHL tillater studiet av en subtil form for hørselstap som manifesterer i hørbar kortikale endringer og psykofysiske atferds resultater4,5,16,17,18 Den nåværende teknikken kan kombineres med elektrofysiologi og atferdsteknikker for å bestemme kortikale konsekvenser av hørselstap, som er av stor interesse for hørselstap forskning31.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne erklærer ingen økonomiske eller ikke-finansielle interessekonflikter.
Acknowledgments
Dette arbeidet ble støttet delvis av Hong Kong Research Grants Council, tidlig karriere Scheme, Project #21201217 til C. L., for prosjektet Brain kartlegging guidet elektrofysiologi med programmer i hørsel og støyforurensning forskning. Vi takker Posgrado en Ciencias Biomédicas, Instituto de Neurobiología ved Universidad Nacional Autónoma de México (UNAM), Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (CONACyT) México for Graduate Fellowship 578458 til FAM Manno.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Latex, polyvinyl or nitrile gloves | AMMEX | Use unpowdered gloves 8-mil | |
| Micro spring scissors (see Fig. 1b) | RWD Life Science | S11035-08 | 8.0 cm total length, with 3.5mm cutting edge, or similar micro forceps. Standard tweezers with spring action will suffice |
| Otoscope mini 3000 | HEINE | D-008.70.120M | Standard LED otoscope will suffice |
| Rat or mouse | JAX labs | Any small rodent | |
| Small rodent cage | Tecniplast | 1284L | Need two cages to separate CHL rodent from hearing rodent. If rodents are in direct contact with one-another, they will startle each other. Cage dimensions 365 x 207 x 140 mm, floor area: 530 cm2/82.15 in2 |
References
- Shargorodsky, J., Curhan, S. G., Curhan, G. C., Eavey, R. Change in prevalence of hearing loss in US adolescents. The Journal of the American Medical Association. 304 (7), 772-778 (2010).
- Lucas, J. W., Schiller, J. S., Benson, V. Summary health statistics for U.S. adults: National health interview survey, 2001. National Center for Health Statistics. Vital and health statistics. 10 (218), 1-134 (2004).
- Gaffney, M., Green, D. R., Gaffney, C. Newborn hearing screening and follow-up: Aare children receiving recommended services? Public Health Reports. 125 (2), 199-207 (2010).
- Xu, H., Kotak, V. C., Sanes, D. H. Conductive hearing loss disrupts synaptic and spike adaptation in developing auditory cortex. The Journal of Neuroscience. 27 (35), 9417-9426 (2007).
- Buran, B. N., et al. A sensitive period for the impact of hearing loss on auditory perception. The Journal of Neuroscience. 34 (6), 2276-2284 (2014).
- Finck, A., Sofouglu, M. Auditory sensitivity of the Mongolian gerbil. The Journal of Auditory Research. 6, 313-319 (1966).
- Finck, A. Auditory sensitivity of the Mongolian Gerbil (Merionesunguiculatus). The Journal of the Acoustical Society of America. 41 (60), 1579 (1967).
- Finck, A., Schneck, C. D., Hartman, A. F. Jr Development of auditory function in the Mongolian gerbil. The Journal of the Acoustical Society of America. 46 (1A), 107 (1969).
- Ryan, A. Hearing sensitivity of the Mongolian gerbil, Meriones Unguiculatis. The Journal of the Acoustical Society of America. 59, 1222-1226 (1976).
- Dallos, P., Harris, D., Ozdamar, O., Ryan, A. Behavioral, compound action potential, and single unit thresholds: relationship in normal and abnormal ears. The Journal of the Acoustical Society of America. 64 (1), 151-157 (1978).
- Kelly, J. B., Potash, M. Directional responses to sounds in young gerbils (Meriones unguiculatus. Journal of Comparative Psychology. 100 (1), 37-45 (1986).
- Heffner, H. E., Koay, G., Heffner, R. S. Behavioral assessment of hearing in mice--conditioned suppression. Current Protocols in Neuroscience. , Chapter 8, Unit 8.21D (2006).
- Heffner, R. S., Koay, G., Heffner, H. E. Audiograms of five species of rodents: implications for the evolution of hearing and the perception of pitch. Hearing Research. 157 (1-2), 138-152 (2001).
- Lupo, E. J., Koka, K., Thornton, J. L., Tollin, D. J. The effects of experimentally induced conductive hearing loss on spectral and temporal aspects of sound transmission through the ear. Hearing Research. 272 (1-2), 30-41 (2011).
- Liberman, M. C., Liberman, L. D., Maison, S. F. Chronic conductive hearing loss leads to cochlear degeneration. PLoS One. 10 (11), e0142341 (2015).
- Tucci, D. L., Cant, N. B., Durham, D. Conductive hearing loss results in a decrease in central auditory system activity in the young gerbil. Laryngoscope. 109, 1359-1371 (1999).
- Tucci, D. L., Cant, N. B., Durham, D. Effects of conductive hearing loss on gerbil central auditory system activity in silence. Hearing Research. 155, 124-132 (2001).
- Cook, R. D., Hung, T. Y., Miller, R. L., Smith, D. W., Tucci, D. L. Effects of conductive hearing loss on auditory nerve activity in gerbil. Hearing Research. 164, 127-137 (2002).
- Albuquerque, A. A., Rossato, M., Oliveira, J. A., Hyppolito, M. A. Understanding the anatomy of ears from guinea pigs and rats and its use in basic otologic research. Brazilian Journal of Otorhinolaryngology. 75, 43-49 (2009).
- Li, P., Gao, K., Ding, D., Salvi, R. Characteristic anatomical structures of rat temporal bone. Journal of Otology. 10, 118-124 (2015).
- Judkins, R. F., Li, H. Surgical anatomy of the rat middle ear. Otolaryngology-Head and Neck Surgery. 117, 438-447 (1997).
- Hellström, S., Salén, B., Stenfors, L. E. Anatomy of the rat middle ear. A study under the dissection microscope. Acta Anatomica (Basel). 112, 346-352 (1982).
- Albiin, N., Hellström, S., Salén, B., Stenfors, L. E., Wirell, S. The vascular supply of the rat tympanic membrane. The Anatomical Record. 212, 17-22 (1985).
- Li, P., Ding, D., Gao, K., Salvi, R. Standardized surgical approaches to ear surgery in rats. Journal of Otology. 10, 72-77 (2015).
- Johansson, U., Hellström, S., Anniko, M. Round window membrane in serous and purulent otitis media. Structural study in the rat. Annals of Otology, Rhinology & Laryngology. 102, 227-235 (1993).
- Magnuson, K., Hellström, S. Early structural changes in the rat tympanic membrane during pneumococcal otitis media. European Archives of Oto-Rhino-Laryngology. 251, 393-398 (1994).
- Hellström, S., Salén, B., Stenfors, L. E. The site of initial production and transport of effusion materials in otitis media serosa. A study on rat middle ear cavity. Acta Oto-Laryngologica. 93, 435-440 (1982).
- Shen, Y., et al. Scaffolds for tympanic membrane regeneration in rats. Tissue Engineering Part A. 19, 657-668 (2013).
- Wang, A. Y., et al. Rat model of chronic tympanic membrane perforation: Ventilation tube with mitomycin C and dexamethasone. International Journal of PediatricOtorhinolaryngology. 80, 61-68 (2016).
- Stenfeldt, K., Johansson, C., Hellström, S. The collagen structure of the tympanic membrane: collagen types I, II, and III in the healthy tympanic membrane, during healing of a perforation, and during infection. Archives of Otolaryngology--Head & Neck Surgery. 132, 293-298 (2006).
- Zhao, H., et al. Temporary conductive hearing loss in early life impairs spatial memory of rats in adulthood. Brain and Behavior. 8, e01004 (2018).
