Summary
Här presenterar vi ett protokoll för att etablera en replikerbar konduktiv hörselnedsättning induktion via kirurgiska tympanic membran punktering och verifiering av otoskop visualisering och beteendemässiga bedömning av klappa startle.
Abstract
Konduktiv hörselnedsättning (CHL) är en utbredd hörselnedsättning hos människor. Målet med protokollet är att beskriva ett enkelt kirurgiskt ingrepp för att inducera CHL på gnagare. Protokollet visar CHL av tympanic membran punktering. Verifiering av CHL kirurgi var genom otoskop undersökning och beteendemässiga bedömning av klappa skrämma svar, både Replikerbar och pålitlig, och är enkla metoder för att demonstrera hörselnedsättning har inträffat. Den enkla CHL förfarande är fördelaktigt på grund av dess reproducerbarhet och flexibilitet till olika sysselsätt i hörselnedsättning forskning. Begränsningarna av inducerande CHL genom en kirurgisk metod är förknippade med inlärningskurvan att utföra kirurgiska ingrepp och förtroende för audiologiska undersökning. Inducera en hörselnedsättning av CHL tillåter en att lätt studera neurala manifestationer och beteendemässiga resultat av hörselnedsättning.
Introduction
Förekomsten av hörselnedsättning hos barn och vuxna är cirka 19,5%1 respektive 15,2%2 . Emellertid, cirka 39,3% av alla nyfödda med en onormal hörsel screening får inte avhjälpande behandling som rapporterats av Centers for Disease Control3. Hörselnedsättning är ett allmänt studerat tillstånd, och gnagare är en robust modell för att studera normal hörsel och hörsel relaterade störningar4,5,6,7,8,9 ,10,11,12,13,14,15. Hörsel störningar såsom konduktiv hörselnedsättning (CHL) leder till en ökning av den kortsiktiga synaptiska depressionen i hörselbarken4, vilket resulterar i grundare psykometriska sluttningar i samband med frekvensmodulering detektions trösklar 5. konduktiv hörselnedsättning modeller av kirurgiskt avlägsnande/förskjutning av Malleus, tympanic membran (TM) punktering eller Öronpropp är lätt anställda och möjliggöra en snabb induktion av hörselnedsättning modell5,14 ,15,16,17,18. Målet med det nuvarande protokollet och metoden är att demonstrera en enkel och reproducerbar CHL-modell på gnagare.
Det nuvarande protokollet är billigt (≈ USD $300 med alla verktyg), och lätt kan ändras till olika forskningsaktiviteter. Råttan har haft detaljerade bedömningar av mellanörat anatomi19,20,21,22,23, kirurgiska metoder24, modeller i otitis media25, 26,27 och TM punkteringförnyelse 16,17,18,28,29,30, vilket gör det till en idealisk modell för att studera Hörselnedsättning. Här, en enkel CHL induktion förfarande beskrivs med verifiering av otoskop och beteendemässiga bedömning med klappa skrämsel respons i råtta, som sedan kan användas för att utforska ytterligare följdtillstånd av hörselnedsättning. CHL-proceduren induceras av kirurgisk punktering av TM. Verifiering av CHL förfarande utförs av otoskop visualisering för att avgöra frånvaro av TM. Beteendemässig bedömning utförs av en hög decibel (dB) Ljudtrycksnivå (SPL) hand-CLAP. Denna metod har tillämpats tidigare i en mängd gnagare. Det är lätt att replikera, producerar robusta psykometriska skillnader och förändringar i neurala fysiologiska svar4,5,16,17,18.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Den nuvarande studien och förfarandena godkändes av djur forskningsetiska kommittéer vid City University of Hong Kong, University of Hong Kong, och Department of Health i Hong Kongs särskilda administrativa region.
1. djur
- Använd Sprague-Dawley (SD) råttor av två månader (N = 90, 200-250 g).
Anmärkning: gnagare tillhandahölls av den ackrediterade laboratoriedjur enheten vid University of Hong Kong. - Håll råttorna under en konstant temperatur på 25 ° c och 60-70% luftfuktighet vid laboratorie enheten för djur forskning.
- Hus gnagare i 12/12-h ljus/mörker cykler med tillgång till mat och dricksvatten, AD libitum.
- Acclimate gnagare till bostadsmiljön under minst en dag före CHL kirurgi.
- Plocka upp gnagare av kragen och söva gnagare med en cocktail av ketamin och xylazin (80-100 mg/kg: 5-10 mg/kg, respektive) via intraperitoneal injektion (kombinera 1,0 ml ketamin med 0,5 ml xylazin som en slutlig koncentration).
Anmärkning: Använd en 1 mL spruta med en 23-25G nål. Injicera cirka 0,2 mL per 100 g kroppsvikt av råtta för 30 min av anestesi. - Utför tå nypa för att kontrollera smärta sensation och att bekräfta ordentlig anestesi. En reaktion på djup tå nypa (genom indragning av bakben) indikerar otillräcklig anestesi.
2. kirurgisk installation
- Sterilisera all utrustning i en autoklav eller varm glaspärla autoklav före början kirurgi. Rengör det kirurgiska området med 70% etanol.
- Använd latex handskar och Lab Coat innan du påbörjar proceduren.
- Placera ett sterilt kirurgiskt draperi på den rena bänken (figur 1a).
- Sterilisera mikro-sax och ett otoskop före operationen för att minimera öroninfektion (figur 1b).
- Placera mikro-sax och otoskop i det sterila området.
- Placera gnagare i Operations fältet och i linje med kirurgen.
- Fortsätt med den kirurgiska induktionen av CHL.
3. kirurgisk induktion av konduktiv hörselnedsättning
- Placera svansen och huvudet av gnagare justeras i en liggande position, huvudet närmast kirurgen.
- Visualisera vänster och höger öra av gnagare under otoskop att säkerställa hälsosamma trumhinnan (figur 2A). Utvärdera både höger och vänster öra i varje gnagare för att kontrollera friska tillstånd före CHL induktion.
- Ta tag i örat Helix och förlänga den yttre hörselgången (dvs hörselgången, yttre hörselgången, häri auditiva kanalen) att orsaka insidan blir skyms och svärtade av djup. Här är hörselgången görs vinkelrät mot ytan av TM.
Obs: se hörsel cannel Side är direkt parallellt nu och TM bildar en rätt vinkel med axeln av införandet av mikro-sax. Det kommer att visualiseras som en svart tub utan ljus. Ibland hörselgången måste lutas i en liten vinkel, ca 15 ° till den plana ytan av skallen. Detta säkerställer att kirurgen handen är vinkelrät mot ytan på TM. - Införa mikro-sax i mitten av hörselgången uppmärksamma att inte skumma eller Nick vävnaden i hörselgången och gå något, cirka ≈ 5 mm från centrum av mörker, stötande framåt försiktigt genom mitten av TM.
Obs: TM punktering kan bekräftas av en pop ljud när mikro-Scissor tips punktera TM. Den popping ljud kan höras vid ungefär ≈ 2 min 52 s i videon. Detta är inte ett saxljud; Detta är ett TM-punkteringsljud. Som uppmätt efter analys, "pop" är ungefär ≈ 20 dB SPL större än bakgrundsljud som registrerats av en högfrekvent mikrofon. Det finns ingen anledning att kontrollera "pop" ljud i denna utsträckning, otoskop visualisering är tillräcklig. Prövaren kan behöva öva på att se till att en "pop" hörs under varje CHL-procedur. - Omedelbart öppna fjäderbelastade mikro-sax och rotera tre gånger efter punktera TM för att säkerställa förskjutning av huvudet av Malleus bort från TM (endast om Malleus förskjutning önskas).
- Ta bort mikro-sax och placera gnagare under otoskop för visualisering.
Anmärkning: det är viktigt att notera att ingen signifikant blödning bör inträffa efter det kirurgiska ingreppet. Euthanize gnagare och inte gå vidare till beteendemässiga bedömning om blödning uppstår. - Inducera bilaterala CHL genom att fortsätta som ovan i motsatt öra.
4. otoscope visualisering
- Bekräfta en lyckad CHL kirurgi med ett otoskop med hjälp av en liten diameter spekulum att visualisera gnagare mellanörat.
- Utvärdera varje gnagare före och efter CHL kirurgiska ingrepp under otoscope. Säkerställ bekräftelse av normal TM (figur 2A) och skadat TM efter CHL-induktion (figur 2b).
-
Postoperativ vård för gnagare
- Placera gnagare i hem buren under en varm lampa.
- Observera gnagare post-CHL induktion tills gnagare rättigheter själv.
- Injicera gnagare med glukos (dextros/saltlösning) serum för att återvinna medvetandet och placera gnagare i homecage för återhämtning.
Anmärkning: Använd en 23G-nål med en 10 mL spruta för att injicera 5 mL saltlösning efter CHL-kirurgi. - Injicera gnagare via intramuskulär med antibakteriell enrofloxacin 0,05 mg/kg två gånger under 24 h återhämtningsperioden.
- Observera gnagare regelbundet för smärt beteende eller symtom efter operationen.
5. beteendemässig bedömning (validering av CHL-induktion)-klappa skrämma Response
- Bekräfta CHL (efter otoskop bekräftelse) 24 h efter operationen med beteende bedömning som består av CLAP-startle-test.
- Placera CHL inducerad råtta bredvid en vanlig råtta i två separata angränsande burar.
- Placera gnagare i ett tyst rum.
- Stå ca 0,5 m bort från gnagare och fortsätt att klappa i jämnt fördelade varaktigheter ett antal gånger (5 klappar valdes och fördelade över 1 sekund).
Anmärkning: den klappa skrämma produceras av handen klappa mätt ≈ 40 dB SPL större än bakgrundsljud som registrerats av en högfrekvent mikrofon.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Den enkla CHL förfarande utfördes på 90 råttor och ut ur denna grupp 2 hade betydande blödning och 2 hade inte hörselnedsättning nästa dag som bedöms av beteendemässiga klappa startle. Dessa fyra råttor kastades bort. Råttor bör kasseras som beskrivs av orsakerna i diskussionen på grund av komplikationer. Inducera TM punktering och/eller Malleus förskjutning/avlägsnande (figur 2b) framkallar CHL, vilket resulterar i beteendemässiga manifestationer (dvs. CHL-inget svar på LOUD dB SPL startle). Råttor bör kontrolleras av otoskop före operationen för att säkerställa normal tympanic membran och efter operationen för att säkerställa tympanic membran punktering (figur 2; Kompletterande figur 1). Observera att ingen blödning eller signifikant inflammation ska inträffa (kompletterande figur 2). Den CHL inducerad-gnagare kommer inte att svara på en högljudd dB SPL klappa ljud medan en kontroll hörsel bur Mate kommer att hoppa till högljudda klappa. CHL råtta är inte döva för ljud, men har en CHL och därför subtila beteendemässiga manifestationer inträffar5. En kontroll hörsel gnagare reagerar kraftigt med språng till en högljudd dB SPL ljud, såsom klappa startle. Hoppet/startle svar syns tydligt i videon från förhandlingen bur Mate, medan CHL inducerad råtta svarar inte. Beteendet för en CHL råtta kan vara subtler. Vi visar den allmänna klappa skrämma reflex för en representativ CHL råtta och kontroll hörsel råtta. Med tiden efter CHL kirurgi vissa råttor kan återfå klappa skrämma svar.
Med hjälp av CHL förfarande, tidigare studier har undersökt de neurala manifestationerna av hörselnedsättning. Till exempel har graden av hörselnedsättning efter ingreppet kvantifierats genom mätning av hörsel framkallade potentialer15,16,17, runda fönster inspelningar4,18och beteendemässiga hörsel trösklar5. Neurala aktivitet efter CHL har studerats med 2-deoxyglukos-metoden och hel cells inspelningar4,16,17. Auditiv nervaktivitet har också undersökts med runda fönster inspelningar18. Frekvens-modulering detektions trösklar har studerats behaviorally5. Detta CHL-förfarande är klart förenligt med ett brett spektrum av experimentella metoder för detaljerade studier av hörselnedsättning.
Bild 1: kirurgisk inställning. A) Placera gnagare i ett väl upplyst område med en kirurgisk lampa. Anesthetize gnagare. Gör dig redo ett sortiment av mikro-sax, om den minsta inte fungerar, kan ett större par se TM punktering. Se till att otoskop är redo. B) fjäderbelastad mikro-sax. Pincett räcker om försöksledaren kan styra öppningen och stängningen. Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2: representativt tympanic membran. A) tympanic membran (TM) före punktering. B) TM efter punktering. När du utför CHL och TM punktering bekräftelse med otoscope, är det absolut nödvändigt att först notera chefen för Malleus och efter CHL induktion, en lyckad borttagning och punktering av TM. Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.
Kompletterande information figur 1: före och efter CHL-kirurgi som visualiseras av en otoskop. Otoscope visualisering före och efter CHL kirurgi (omedelbar) i identisk råtta. Vänstra kolumnen av siffror är representativa råtta hörsel kanaler visualiseras innan CHL förfarande av otoskop med normal TM och mellanörat ossicles. Högra kolumnen av siffror är representativa råtta hörsel kanaler visualiseras efter CHL förfarande genom otoskop med punkterade TM och fördrivna mellanörat ossicles. Signifikant blödning består av blodansamling i öronen. Studera mellanörat anatomi gnagare innan du utför förfarandet19,20,21,22,23,24,25, 26,27,28,29. Otoscope visualisering genomfördes 24 timmar efter operationen. Vänligen klicka här för att ladda ner denna siffra.
Kompletterande information figur 2: kontroll och efter CHL kirurgi råtta hörselgången som bedöms av histologi. Histological beskåda av mellanörat i kontrollera och after CHL-kirurgi (bomma för = 500 μm). Auditiva kanaler behandlades av hematoxylin och eosin (H & E) och Massons trikrom (MT) färgning i kontroll och 24 timmar efter CHL kirurgi. Vänster kolumn av siffror är representativa histologiska avsnitt av hörselgången i kontroll råttor. Högerkolonnen av figurerar är representativa histologiska delar upp av hörsel kanalen After CHL tillvägagångssätt. Observera att ingen signifikant inflammation uppstår efter CHL kirurgi. Ingen skillnad märktes upp till en vecka. Vänligen klicka här för att ladda ner denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Vi beskriver en enkel kirurgisk induktion av CHL med verifiering med otoskop visualisering och beteendemässiga klappa skrämsel respons i råtta. Här visar vi metoden på råtta och tidigare denna metod har tillämpats på gerbiler och möss. Metoden kan lätt antas till andra gnagare. Induktion av CHL tillåter studiet av en subtil form av hörselnedsättning som manifesteras i auditiva kortikala förändringar och psykofysiska beteendemässiga fynd4,5,16,17,18 .
Underlåtenhet att inducera CHL kan bero på flera skäl som anges nedan. I varje fall rekommenderar vi att kassera råttan. Euthanize råttan om en av öronen är blödning. Blödning indikerar att saxen fick kontakt med hörselgången och det kirurgiska tillvägagångssättet var inte rent. Annars kan det betyda att punkteringen var djupare än att föredra, vilket orsakade inre skador, möjligen hjärnskador. Inre skador kan betyda en djup insättning eller Hack hörselgången. Förfarandet är ett minimalt invasiva trumhinnan och/eller Malleus avlägsnande/förskjutning; Därför bör ingen signifikant blödning förekomma (kompletterande figur 1). Om betydande blödning inträffar, euthanize råttan. Om ingen "pop" hörs under trumhinnan punktering, detta kan tyda på en dålig CHL, vilket innebär att saxen inte göra direkt kontakt med trumhinnan. Kassera gnagare från gruppen och euthanize. Använda otoscope, om visualisering bekräftar mellanörat liknar kontroll öron, indikerar detta att trumhinnan inte har punkteras. Ingen CHL inducerades och därför bör gnagare kasseras. Om gnagare reagerar på CLAP-Sound-test, bör det kasseras. Om en CHL inducerad gnagare språng eller hoppar efter klappa ljud, liknar dess bur Mate, indikerar detta kirurgiska ingrepp inte lyckades. Ett svar på ett klappa-ljud indikerar att ingen CHL har inträffat och att råtta ska kasseras eller avlivas. Begränsningarna att inducera CHL genom en kirurgisk metod är förknippade med inlärningskurvan för att utföra det kirurgiska ingreppet och förtroende för audiologisk undersökning19,20,22,23, 27,28,29. Dessutom använde detta protokoll inte ABR eller DPOAE för att bedöma hörselnedsättning15 för att upprätta ett enkelt protokoll för forskare som inte känner till audiologiska förfaranden. De audiologiska procedurerna ABR och DPOAE kan användas för forskare som vill ha en vidare bedömning av CHL15.
En modifiering av tekniken använder TM-punktering med Malleus förskjutning. För en nybörjare kan detta vara svårt att fastställa, men Malleus är tydligt visualiseras med ett otoskop i nästan alla gnagare öron. TM är ett fibrös membran med ett pellucid utseende som sänder ljus. Öva otoskop verifiering för att etablera konsekvent visualisering baserat på tidigare litteratur19,20,22,23,27,28,29 . Efter en är säker på Malleus visualisering, dess förskjutning under operationen är lätt bekräftas av en högljudd "pop" som kan höras på ≈ 2 min 52 s. Denna pop är en högljudd dB SPL förändring i ljudfilen på cirka 20 dB SPL före vridning av fjäderbelastade mikro-sax. Den högljudda pop bekräftar TM punktering och framgång utan att skada hörselgången kanalen. Två aspekter av det kirurgiska ingreppet måste utföras med försiktighet: 1) se till att mikro-saxen är placerade i mitten av hörselgången, och 2) se till att vinkeln på mikro-saxen är parallellt med hörselgången under den nedåtgående punkteringen. Se till att punkteringsrörelsen är snabb och cirka 5 mm nedåt från öppningen av hörselgången. Rotera och öppna mikro-sax för Malleus förskjutning om önskvärt.
De viktigaste stegen i CHL-protokollet är att säkerställa TM punktering och kontrollera beteendemässiga klappa startle. Säkerställa verifiering av Malleus avlägsnande/punktering av TM bekräftar CHL har utförts. Verifiering sker genom otoskopisk undersökning. De kritiska stegen för beteendemässig bedömning är att säkerställa en högljudd nog klappa att gnagare är skrämde. Skillnader har noterats när en CHL råtta placeras i en liknande bur som en hörsel råtta; här, en råtta är häpnadsväckande vid den annan, afton om den råtta kan icke höra fristen. En häpen råtta/gnagare kommer ofta hoppa eller hoppa, men detta är inte ett kriterium. Som kan observeras, den CHL råtta flyttar inte till CLAP. Eftersom TM punktering är en CHL, olika nivåer av dB SPL ljud kan höras av gnagare5.
Den primära betydelsen av denna enkla CHL-metod är att den kan utföras av ett brett spektrum av forskare, även med bara blygsamma resurser. Verifiering av hörselnedsättning utförs av otoskop visualisering och beteendemässiga klappa skrämsel respons i råtta. Här visar vi metoden på råtta och tidigare denna metod har tillämpats på gerbiler och möss. Metoden kan lätt antas till andra gnagare. Induktion av CHL tillåter studiet av en subtil form av hörselnedsättning som manifesteras i auditiva kortikala förändringar och psykofysiska beteendemässiga fynd4,5,16,17,18 Den nuvarande tekniken kan kombineras med elektrofysiologi och beteendemässiga tekniker för att bestämma de kortikala konsekvenserna av hörselnedsättning, som är av stort intresse för hörselnedsättning forskning31.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna deklarerar inga ekonomiska eller icke-finansiella intressekonflikter.
Acknowledgments
Detta arbete stöddes delvis av Hong Kongs forskningsanslag rådet, tidiga karriärprogram, projekt #21201217 till C. L., för projektet Brain Mapping guidad elektrofysiologi med tillämpningar i hörsel och bullerforskning. Vi tackar Posgrado en Ciencias Biomédicas, Instituto de Neurobiología vid Universidad Nacional Autónoma de México (UNAM), Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (CONACyT) México för Graduate Fellowship 578458 till FAM Manno.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Latex, polyvinyl or nitrile gloves | AMMEX | Use unpowdered gloves 8-mil | |
| Micro spring scissors (see Fig. 1b) | RWD Life Science | S11035-08 | 8.0 cm total length, with 3.5mm cutting edge, or similar micro forceps. Standard tweezers with spring action will suffice |
| Otoscope mini 3000 | HEINE | D-008.70.120M | Standard LED otoscope will suffice |
| Rat or mouse | JAX labs | Any small rodent | |
| Small rodent cage | Tecniplast | 1284L | Need two cages to separate CHL rodent from hearing rodent. If rodents are in direct contact with one-another, they will startle each other. Cage dimensions 365 x 207 x 140 mm, floor area: 530 cm2/82.15 in2 |
References
- Shargorodsky, J., Curhan, S. G., Curhan, G. C., Eavey, R. Change in prevalence of hearing loss in US adolescents. The Journal of the American Medical Association. 304 (7), 772-778 (2010).
- Lucas, J. W., Schiller, J. S., Benson, V. Summary health statistics for U.S. adults: National health interview survey, 2001. National Center for Health Statistics. Vital and health statistics. 10 (218), 1-134 (2004).
- Gaffney, M., Green, D. R., Gaffney, C. Newborn hearing screening and follow-up: Aare children receiving recommended services? Public Health Reports. 125 (2), 199-207 (2010).
- Xu, H., Kotak, V. C., Sanes, D. H. Conductive hearing loss disrupts synaptic and spike adaptation in developing auditory cortex. The Journal of Neuroscience. 27 (35), 9417-9426 (2007).
- Buran, B. N., et al. A sensitive period for the impact of hearing loss on auditory perception. The Journal of Neuroscience. 34 (6), 2276-2284 (2014).
- Finck, A., Sofouglu, M. Auditory sensitivity of the Mongolian gerbil. The Journal of Auditory Research. 6, 313-319 (1966).
- Finck, A. Auditory sensitivity of the Mongolian Gerbil (Merionesunguiculatus). The Journal of the Acoustical Society of America. 41 (60), 1579 (1967).
- Finck, A., Schneck, C. D., Hartman, A. F. Jr Development of auditory function in the Mongolian gerbil. The Journal of the Acoustical Society of America. 46 (1A), 107 (1969).
- Ryan, A. Hearing sensitivity of the Mongolian gerbil, Meriones Unguiculatis. The Journal of the Acoustical Society of America. 59, 1222-1226 (1976).
- Dallos, P., Harris, D., Ozdamar, O., Ryan, A. Behavioral, compound action potential, and single unit thresholds: relationship in normal and abnormal ears. The Journal of the Acoustical Society of America. 64 (1), 151-157 (1978).
- Kelly, J. B., Potash, M. Directional responses to sounds in young gerbils (Meriones unguiculatus. Journal of Comparative Psychology. 100 (1), 37-45 (1986).
- Heffner, H. E., Koay, G., Heffner, R. S. Behavioral assessment of hearing in mice--conditioned suppression. Current Protocols in Neuroscience. , Chapter 8, Unit 8.21D (2006).
- Heffner, R. S., Koay, G., Heffner, H. E. Audiograms of five species of rodents: implications for the evolution of hearing and the perception of pitch. Hearing Research. 157 (1-2), 138-152 (2001).
- Lupo, E. J., Koka, K., Thornton, J. L., Tollin, D. J. The effects of experimentally induced conductive hearing loss on spectral and temporal aspects of sound transmission through the ear. Hearing Research. 272 (1-2), 30-41 (2011).
- Liberman, M. C., Liberman, L. D., Maison, S. F. Chronic conductive hearing loss leads to cochlear degeneration. PLoS One. 10 (11), e0142341 (2015).
- Tucci, D. L., Cant, N. B., Durham, D. Conductive hearing loss results in a decrease in central auditory system activity in the young gerbil. Laryngoscope. 109, 1359-1371 (1999).
- Tucci, D. L., Cant, N. B., Durham, D. Effects of conductive hearing loss on gerbil central auditory system activity in silence. Hearing Research. 155, 124-132 (2001).
- Cook, R. D., Hung, T. Y., Miller, R. L., Smith, D. W., Tucci, D. L. Effects of conductive hearing loss on auditory nerve activity in gerbil. Hearing Research. 164, 127-137 (2002).
- Albuquerque, A. A., Rossato, M., Oliveira, J. A., Hyppolito, M. A. Understanding the anatomy of ears from guinea pigs and rats and its use in basic otologic research. Brazilian Journal of Otorhinolaryngology. 75, 43-49 (2009).
- Li, P., Gao, K., Ding, D., Salvi, R. Characteristic anatomical structures of rat temporal bone. Journal of Otology. 10, 118-124 (2015).
- Judkins, R. F., Li, H. Surgical anatomy of the rat middle ear. Otolaryngology-Head and Neck Surgery. 117, 438-447 (1997).
- Hellström, S., Salén, B., Stenfors, L. E. Anatomy of the rat middle ear. A study under the dissection microscope. Acta Anatomica (Basel). 112, 346-352 (1982).
- Albiin, N., Hellström, S., Salén, B., Stenfors, L. E., Wirell, S. The vascular supply of the rat tympanic membrane. The Anatomical Record. 212, 17-22 (1985).
- Li, P., Ding, D., Gao, K., Salvi, R. Standardized surgical approaches to ear surgery in rats. Journal of Otology. 10, 72-77 (2015).
- Johansson, U., Hellström, S., Anniko, M. Round window membrane in serous and purulent otitis media. Structural study in the rat. Annals of Otology, Rhinology & Laryngology. 102, 227-235 (1993).
- Magnuson, K., Hellström, S. Early structural changes in the rat tympanic membrane during pneumococcal otitis media. European Archives of Oto-Rhino-Laryngology. 251, 393-398 (1994).
- Hellström, S., Salén, B., Stenfors, L. E. The site of initial production and transport of effusion materials in otitis media serosa. A study on rat middle ear cavity. Acta Oto-Laryngologica. 93, 435-440 (1982).
- Shen, Y., et al. Scaffolds for tympanic membrane regeneration in rats. Tissue Engineering Part A. 19, 657-668 (2013).
- Wang, A. Y., et al. Rat model of chronic tympanic membrane perforation: Ventilation tube with mitomycin C and dexamethasone. International Journal of PediatricOtorhinolaryngology. 80, 61-68 (2016).
- Stenfeldt, K., Johansson, C., Hellström, S. The collagen structure of the tympanic membrane: collagen types I, II, and III in the healthy tympanic membrane, during healing of a perforation, and during infection. Archives of Otolaryngology--Head & Neck Surgery. 132, 293-298 (2006).
- Zhao, H., et al. Temporary conductive hearing loss in early life impairs spatial memory of rats in adulthood. Brain and Behavior. 8, e01004 (2018).
