Summary
Vi har udviklet en simpel og alsidig system for at fodre hårdt flåter på laboratoriet kaniner. Vores ikke-besværlige protokol bruger let tilgængelige materialer og kan justeres afhængigt af kravene i de forskellige eksperimentelle indstillinger. Metoden tillader komfortabel overvågning og/eller prøvetagning af flåter under hele fodring.
Abstract
Brugen af levende dyr i kryds forskning er afgørende for en række forskellige eksperimentelle formål herunder vedligeholdelse af hårde kryds kolonier i laboratoriet. I flåter, alle udviklingsstadier (undtagen æg) er hematophagous og erhverve en blodmel, når der er knyttet til deres hvirveldyr værter er afgørende for en vellykket gennemførelse af deres livscyklus. Her viser vi en simpel metode, der bruger let oplukkelige kapsler til fodring af hårde flåter på kaniner. Fordele ved den foreslåede metode omfatter dens enkelthed, kort varighed og vigtigst alsidige tilpasning til behovene hos særlige eksperimentelle krav. Metoden gør muligt brug af flere kamre (i forskellige størrelser) på det samme dyr, der tillader fodring af flere faser eller forskellige eksperimentelle grupper samtidig reducere det samlede animalske krav. Ikke-irriterende og let tilgængelige materialer minimerer ubehag til dyr, som nemt inddrives fra et eksperiment og udbydes til vedtagelse eller genbruges hvis den etiske protokollen tillader det.
Introduction
De hårde flåter (Ixodidae) er kendt som langsom fodring leddyr og kan være fastgjort på en vært til flere dage, eller uger, afhængigt af arten og udviklingsmæssige etape1. Disse obligatoriske hematophagous leddyr er vektorer for en bred vifte af smitsomme agenser, såsom bakterier, protozoer og virus, og dermed udgør en væsentlig risiko for mennesker og dyrs sundhed1. Når studerer kryds biologi eller evaluering af nye metoder, oprettelsen af en effektiv kryds fodring system er afgørende for effektivt design af eksperimenter og udføre goal(s) af undersøgelsen. For nylig, flere kunstige kryds fodersystemer (undgå brug af levende dyr) er blevet udviklet2,3,4 og de skal bruges, når det er muligt. Men disse systemer har ikke været i stand til helt at erstatte kryds fodring på levende dyr, og de er ikke egnede erstatningsprodukter for mange fysiologiske betingelser for videnskabelige undersøgelser. Derfor, i nogle tilfælde, brugen af eksperimentelle dyr værter er afgørende at sikre relevansen af eksperimentelle resultater.
Laboratoriet New Zealand kaniner har vist sig for at være de mest passende og tilgængelig værter for flere ixodid kryds arter5,6,7,8,9. To fælles strategier for kryds fodring på kaniner har været hyppigt anvendt: a) fodring på kanin ører dækket med bomuld klud eller sokker6,7, og b) fodring i bomuld poser9, nylon flasker10 eller neopren Chambers11 limet til kanins tilbage. Fodring på kanin ører er ikke en elegant system, fordi flåter (især tidlige stadier, larver og nymfer) kan kravle og vedhæfte dybt i øregangen, som er ubehageligt for dyret og gør overvågning af kryds fodring og/eller nyttiggørelse af engorged flåter vanskeligt. Dette system er også begrænset til kun to kryds grupper på ører fuldt dækket af sokker beskyttet af Elizabethan flip, der repræsenterer en betydelig ubehag for dyret. Andre systemer9,10,11 er klart mere avancerede og velegnet til hårde kryds koloni vedligeholdelse. Dog er de begrænset antal eksperimentelle grupper placeret på kanin samt i de modificerbare størrelser/former for fodring afdelinger. Desuden kræver disse protokoller ofte haltende bageste kanin ben for at undgå ridser og brugen af Elizabethan flip at forhindre grooming.
Heri foreslår vi en simpel, ikke-besværlige og meget effektiv metode til at fodre flere grupper af hårde flåter i lukkede kamre limet til kaninen tilbage er omfattet af en jakke, eliminerer behovet for Elizabethan flip eller haltende under eksperimentet. Specifikt, bruger vores system elastisk kapsler lavet fra en ethylen-vinyl vinylacetat (EVA) skum ark er omfattet af myg mesh og limet til glatbarberet kaninen tilbage med hurtig solidifying (3 min) ikke-irriterende latex lim. Denne teknik giver mulighed for fastgørelse af flere kapsler af ønskede størrelse eller form, og få uger efter forsøget kaniner er fuldt tilbagebetalt. Systemet egner sig primært til nymphal og voksen hårdt kryds faser, men med en lille ændring kan det bruges til larverne fodring så godt. EVA skum-baserede metoder til hårdt kryds fodring kan tilpasses til andre typer af hvirveldyr værter, for eksempel får (hvilket er vist som en af alternativer i dette papir).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Bemærk: I denne undersøgelse, kaniner blev opretholdt i standard bure med mad og vand tilbydes ad libitum på det franske agentur for fødevarer, miljø og Occupational Health & Safety (ANSES) akkrediteret animalske faciliteter i Maisons-Alfort, Frankrig. Dyr blev kontrolleret to gange dagligt af to erfarne teknikere for unormal hudreaktioner, sundhedsproblemer eller komplikationer. Den eksperimentelle værelse blev sikret ved udformningen af indre af døråbning med dobbeltklæbende tape til at undgå utilsigtet udslip af flåter. Metoden fungerer bedst, hvis to mennesker arbejder som et team, men det er muligt at fuldføre enkelt hånd af en erfaren person. Selv om de fleste kaniner er føjelige og rolig, kan tegn på stress opstå under manipulation. For at sikre, at en kanin ikke skade sig selv ved kæmper, manuel tilbageholdenhed kan ske ved forsigtigt holding af harmoniske af halsen i den ene hånd mens anden side støtter det bagparti. Den seks måneder gamle, Rambouillet hundyr blev holdt på Center for biomedicinsk forskning (CRBM) faciliteter på den nationale veterinær skole af Alfort (ENVA), hvor vand og mad var medfølgende ad libitum, og det blev kontrolleret to gange dagligt.
Bemærk: Vores laboratorium har modtaget tilladelse til at bruge kaniner og får for kryds fodring af den etiske komité for animalsk eksperimenter kommer Anses/ENVA/UPEC, tillade numre 01741.01 og 11/10/16-5B, henholdsvis. Da vi brugte kun patogenfrie flåter i vores eksperimenter, blev alle de kaniner, der anvendes i denne undersøgelse tilbudt for vedtagelsen via foreningen hvid kanin, Paris, Frankrig.
1. forberedelse af kapslerne
- Skære den ønskede størrelse af kapsel fra EVA skum ark (fig. 1A). Runde de ydre hjørner (figur 1B) af kapsel at minimere utilsigtet detachement, når limning det på kanin huden.
Bemærk: Rammetykkelse af kapslen skal være ca 8 mm. Brug en 5 mm tyk skum ark til larver, nymfer og lille kryds voksen arter såsom Ixodes. En 1 cm tykkelse skum ark er velegnet til store størrelse voksen flåter Amblyomma sp., Hyalomma sp., etc. størrelsen af kapslen varierer baseret på de eksperimentelle krav. For eksempel, til 20 Ixodes voksne par, 200 nymfer eller 1.000 larver bruger vi en indre kapsel størrelse 5 x 5 cm2, 6 x 7 cm2 eller 7 x 9 cm2, henholdsvis. - Cut 8 mm brede strimler af selvklæbende krog tape (Se Tabel af materialer) og holde dem til det forberedte EVA skum billede (figur 1C).
- Skær de samme størrelse strimler fra selvklæbende loop tape (Se Tabel af materialer) og binde dem til krog sider knyttet til EVA-skum billede (fig. 1D).
- Skære fine myg mesh (maskestørrelse er mindre end 50 µm) passende størrelse til størrelsen af rammen EVA skum og holde det til selvklæbende løkken (figur 1E og 1F). Skære udhæng, hvis nødvendigt.
Bemærk: Denne type af kapsel kan bruges til foder nymfer og voksne af hårdt kryds arter, mens en anden lukkeanordning af Kapslerne er nødvendige for larver fodring (supplerende figur 1) at forhindre utilsigtet udslip af larverne via den fastspændt krog og løkke side.
2. forberedelse af kanin før kryds skadedyrsangreb
- Barbere området af kanin ryg og sider skal anvendes med neglesaks (fig. 2A).
- Anvende ikke-irriterende latex lim på hele overfladen af den forberedte kapsel og vente for 1 min (figur 2B).
- Lim kapslen ved at trykke på huden (især i hjørnerne) med fingrene i ca 3 minutter (figur 2 c og 2D).
Bemærk: Når limning mere end én kapsel, Sørg for at holde mindst 5 mm plads mellem dem (figur 2E og 2F). Vi som regel undgå regionen i rygsøjlen, men det kan bruges hvis det er nødvendigt. - Lidt løft kapsler for at visuelt kontrollere deres hengivenhed til hud. Hvis løsgængerne regioner findes, anvende lim med en spatel og presse på for en anden 3 minutter.
- Anvend beskyttende tape til de bagerste poter af kanin at forhindre jakke skader (fig. 2G).
Bemærk: Dette trin er valgfrit og er primært at forebygge jakke skader, ikke skader på kryds kapsel. - Sætte på kanin jakke ved at placere forbenene gennem åbningerne og stramning i halsen, gør sikker på kanin vejrtrækning er stadig komfortable. Ikke placere de bageste ben gennem elastisk indhegninger på dette skridt og forlade lynlås åben (figur 2H).
3. kryds skadedyrsangreb
- Placer flåter i en plastik sprøjte (1 eller 5 mL afhængigt af antallet af personer) med nål-ende skæres og sat med bomuld (figur 1G). Hvis en lille mængde af flåter er at være inficeret, skal du bruge pincet.
Bemærk: For kryds koloni vedligeholdelse tillader engorged kryds female(s) at lægge æg med efterfølgende rugeæg inde i sprøjten (5 eller 10 mL) er omfattet af myg mesh indpakket med en elastik12 for at undgå besværlige manipulation af larverne på tidspunktet, de er anvendes til værten (figur 1H). Også, fuldt engorged larver kan tillades at molt i sprøjten (supplerende figur 1I; 5 eller 10 mL) for direkte angreb af kanin med nymfer. - Placer sprøjten dybt ind i kapsel via åbne hjørne og podes flåter ved at skubbe sprøjte stemplet. Langsomt dreje stemplet mod kanin huden for at fjerne de resterende flåter vedhæftet stemplet og samtidig trække det fra kapslen (figur 2jeg).
Bemærk: Hvis nogle personers kravle ud af kapslen, returnere dem ved hjælp af pincet. - Luk kapslen af genlukning krog og løkke tape.
- Placere de bageste ben kanin ind bag elastisk indhegninger af jakke og zip lukket.
Bemærk: Kontroller, at en pegefinger kan passe mellem hals af jakke og kaninen at sikre komfort og også at undgå at tygge på jakken. - Returnere kaninen til bur (figur 2J).
NOTE: Tid fra angreb til samling af fyldt flåter variere blandt forskellige kryds arter og udviklingsstadier. For eksempel, Ixodes scapularis Ixodes ricinusog er varigheder af fodring for voksne, nymfer og larver 6-9, 3-4, og 2-3 dage, henholdsvis. En liste over referencer til 29 forskellige hårdt kryds livscyklusser under laboratorieforhold kan findes i Levin og Shumacher (2016)9.
4. indsamling og overvågning af flåter
- Tage kaninen fra buret til bænken og unzip jakken.
- Forsigtigt dy kanin med dine hænder. Åbn kapslen ved åbne krog og løkke tape (figur 2 K og 2 L) og indsamle flåter ved børstning engorged larver (supplerende figur 1) eller nymfer til en plastik skål eller bruge pincet for voksne (figur 2L ). Hvis delvist fodret (ikke fyldt) flåter er påkrævet, bruge en tick twister eller pincet til at frigøre dem.
Bemærk: Hvis bevare kryds kolonier henvises til note i trin 3.1. Vedligeholde engorged flåter i passende fugtigt og temperaturforhold ifølge særlig kryds arter. - Hvis det er nødvendigt, refasten krog og løkke tape for at lukke kapslen.
5. genvinding af kanin
- Fjerne myg mesh helt fra kapslen og forlade jakken på kanin (figur 2M).
- Vente 3-4 uger og forsøge at fjerne kapslen af forsigtigt trimning et af hjørnerne (figur 2N). Hvis kapslen er stadig solidt fastgjort, Gentag dette trin, en uge senere.
- Fjerne jakke og lad kaninen inddrive i buret.
Bemærk: Når kapslen er, kontrollere huden af kanin for unormale reaktioner. Selvom normalt ingen behandling er nødvendig, kan en blødgørende lotion anvendes i tilfælde af irritation. - Hvis protokollen og eksperimenter tillader, kan den gendannede kanin (figur 2O) genbruges eller udbydes til vedtagelse.
Bemærk: Kaniner har vist at erhverve kryds modstand en gang udsat for gentagne kryds skadedyrsangreb13; reinfestations er derfor ikke anbefales, medmindre eksperimentet kræver.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Her foreslår vi for første gang en detaljeret trin-for trin metode af hårdt kryds fodring i EVA skum kapsler anvendes på en glatbarberet kanin tilbage, er omfattet af en jakke (figur 1 og figur 2). Denne protokol er velegnet til forskellige typer af forsøg, når forskellige kryds grupper på den samme vært er påkrævet og kan også bruges til masse opdræt af hårde flåter. Kryds fodring succes i laboratoriet for det meste bygger på fitness af kryds enkeltpersoner og egnetheden af kanin vært for særlige kryds arter, snarere end teknikken, selv. Vores system ved hjælp af EVA-skum kapsler limet til kanin tilbage har vist sig for at være yderst vellykket, når fodring forskellige udviklingsstadier af forskellige hårdt kryds arter (tabel 1) og kan også tilpasses andre slags laboratorium værter, som får ( Figur 3).
De vigtigste fordele ved denne metode er enkelheden, let tilgængelige materialer (Table of Materials) og vigtigst af alt, en komfortabel åbne-lukke-system giver mulighed for nem overvågning af flåter under fodring. Desuden denne alsidig metode giver mulighed for en række forskellige eksperimentelle indstillinger baseret på modificerbare antal, form og sammensætning af kapsler på værten (figur 2D-F), møde udfordringerne i den særlig undersøgelse. Brug af en yderst effektiv, hurtig tørring og ikke-irriterende latex lim sikrer at kapslen er limet fast i tre minutter og stadig er forbundet til mindst tre uger. Denne procedure giver også fuldstændig genopretning af kanin værter efter eksperimenter (figur 2O).
Figur 1 : Udarbejdelse af EVA skum kapsel og flåter. (A, B) Skære kapsel fra EVA skum. (C) placere strimler af selvklæbende krog tape til kapslen. (D) bindende sidebeslag loop og peeling tape fra fastenerne. (E, F) Stikning myg mesh til limen strimler. (G) eksempel på voksen hårdt flåter inde i sprøjten (5 mL) med cut nål-slutningen er omfattet af bomuld. (H) eksempel på frisk rugeæg larver inde i sprøjten med cut nål-slutningen er omfattet af myg mesh holdes på plads af en elastik. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2 : Lime kapsel til kanin, kryds skadedyrsangreb/inddrive og kapsel fjernelse. (A) barberet kanins tilbage. (B) anvendelse af lim til at rede EVA skum kapsel. (C, D) Fastgørelse af forskellige størrelse kapsler til kaninen. (E, F) Dorsale udsigt af en kanin, der viser to eller flere kamre fastgjort til bagsiden, henholdsvis. (G) tape er placeret i nærheden af de bageste fødder. (H) jakken er anvendes startende fra den forreste ben og hals, og den bageste del er efterladt åben. Åbne hjørne af kapslen er også vist. (jeg) placere flåter til kapsel via åbne hjørnet ved hjælp af sprøjten. (J) jakken er zippet helt og kanin er flyttet til buret. (K) overvågning af flåter under deres fodring ved at åbne kapslen. (L) indsamling fyldt flåter bruge pincet. (M) Tom kapsel efter kryds fjernelse. (N) detachement af kapsel (efter 3-4 uger) fra kaninen. (O) fuldt tilbagebetalt kanin venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3 : EVA skum system tilpasset til fårene. (A) fastgørelse af skum kapsler til en glatbarberet og rensede område i den laterale side af fårene tilbage. (B) efter angreb, de vedlagte kapsler er dækket med en forbinding (ortopædisk glatstrikkede), i stedet for en jakke. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
| Kryds arter | Antallet af inficerede flåter/antal engorged flåter (%) | ||
| Larver | Nymfer | Hunner | |
| Ixodes ricinus | - | 692/557 (80.49%) | 670/592 (88.35%) |
| Ixodes scapularis | - | - | 40/34 (85%) |
| Dermacentor reticulatus | 3,550/3255 (91.7%) | 900/803 (89.22%) | 323/305 (94.42%) |
| Rhipicephalus appendiculatus | 3.300/2822 (85.52%) | 490/421 (85.91%) | 370/362 (97.83%) |
| Rhipicephalus pulchelus | - | 1,920/1831 (95.36%) | 282/257 (91.13%) |
| Amblyomma Padderok | 332/225 (67.77%) | 404/308 (76.24%) | 207/146 (70.53%) |
| Amblyomma americanum | - | 140/134 (95.71%) | 31/27 (87.1%) |
| Hyalomma excavatum | 1.000 * | 510 * (58,8%) | 380/313 (82.36%) |
Tabel 1: Overfyldning sats på forskellige udviklingsstadier af hårdt kryds arter fodring på kaniner inde i EVA-skum kapsler. * Grund til hurtig molting processen med H. excavatum umodne stadier, blev engorged larverne (data ikke vist) overladt til molt ind nymfer, der efterfølgende engorged i den samme kapsel.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Det vigtigste skridt i denne hele protokol er at lime kapslen fast til den barberet hud. Af denne grund er konstant pres i mindst 3 minutter kritisk, især i hjørnerne. Når vaccinere flåter i kapslen, det er vigtigt at anvende dem dybt ind i det modsatte hjørne fra det åbne, at undgå kryds flugt under forsegling. Når du planlægger eksperimenterne, Sørg for at alle Kapslerne er omfattet af jakke til at undgå skader ved at tygge eller ridser. Sørg for at nakke region af jakken er stram nok til at forhindre, at tygge men tilstrækkeligt løs at kaninen er stadig komfortable.
En af de største fordele ved den beskrevne teknik er dets enkelhed, og at ændringer i størrelse og antallet af Kapslerne kan bruges. Under vores eksperimenter, udstationering af kapsler fra huden ikke blev overholdt. Lejlighedsvis beskadigelse af jakken (men ikke kapslen) af kanin kan dog forekomme.
I kaniner konstaterede vi, at i kapslen, fuldt engorged-løsrevet flåter (hovedsagelig umodne faser som larver og nymfer) udtørre hurtigere på grund af temperaturen i kaninen. Derfor foreslår vi for at anslå varigheden af perioden fodring bestemt kryds arter og udviklingstrin, at planlægge engorged kryds samling straks efter deres udstationering. Selv om vores system er blevet testet for fodring af forskellige hårdt kryds arter (tabel 1), er kaninen ikke en naturlig vært for alle hårdt kryds arter14. Denne begrænsning kan overvindes ved at tilpasse systemet til andre dyrs værter egnet til en særlig hårdt kryds arter. Her har vi rapporteret brugen af EVA skum system tilpasset til kvæg at fodre alle udviklingsstadier af I. ricinus (figur 3). I dette tilfælde skal fårene være glatbarberet og vasket med bomuld imprægneret med 70% ethanol til at fjerne olien findes på overfladen af huden. Bagefter den samme procedure som beskrevet for kaniner blev fulgt, men i stedet for en jakke, en bomuld bandage blev brugt rundt på bagsiden som vist i figur 3.
Ved udviklingen af dette system, betalt vi særlig vægt på at minimere mængden af de anvendte materialer og trin i proceduren. Sammenlignet med andre metoder, bruger vi ikke anæstesi, kanin kraver, øre sokker eller haltende på de bageste ben5,6,7,8,9,10. Derudover denne protokol er ikke besværlig, og ingen intensiv træning er forpligtet til at blive fortrolig med denne teknik. EVA-skum baseret kryds fodring system detaljeret i denne undersøgelse forventes at blive brugt til en lang række forskellige eksperimenter når man studerer kryds biologi, vært-vektor-patogen interaktioner, eller evaluere forskellige kontrolforanstaltninger som acaricider eller vacciner. Vores fremtidige retning vil tilpasse EVA skum kapsel fodring system til musemodel at fodre umodne stadier af hårde flåter.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ikke noget at oplyse.
Acknowledgments
Vi anerkender den tekniske bistand af Evelyne Le Naour, franske nationale Institut for landbrugs forskning (INRA), Alain Bernier (INRA) og Océane Le Bidel (ANSES). Consuelo Almazán blev støttet af et stipendium fra Laboratory of Excellence, Integrativ biologi af nye smitsomme sygdomme (LabEx IBEID), Pasteur-instituttet. Kaniner og fårene blev købt af ANSES. En del af dette arbejde blev finansieret af National Institutes af sundhed grant RO1AI090062 Y. Park. Dr. Jeffrey L. Blair er anerkendt for gennemgang af håndskriftet.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| New Zealand Rabbits (2.5-3.5 kg) | Charles River | Strain Code 571 | |
| Rambouillet sheep | Local provider-tick free farm | Female 6 months old | |
| EVA foam 5 mm thick | Cosplay Shop | EVA-PE451kg (950mm x 450mm) | 10 mm PE45 kg foam from the Cosplay Shop may be used for the large adult tick species |
| Foam Sheet 9" X 12" 6 mm-White | Amazon | FOAMSHT6-20 | 6 mm-EVA foam ca be ordered via Amazon as an alternative to the foam from Cosplay Shop |
| Full length rabbit jackets | Harvard Apparatus, Inc. | 620077- medium, 6270078 - large | |
| Non-toxic latex glue | Tear mender | Fabric & Leather Adhesive | |
| Tubular cotton orthopedic stockinette | BSN Medical | 9076 (12-15 cm wide) | |
| Mosquito mesh | Loisirs Creatifs | Very fine filter nylon mesh fabric | Any mosquito mesh, or curtain material with the mesh size less than 50 μm is suitable. |
| Leukoplast | BSN medical S.A.S | LF 72361-02 | |
| Adhesive hook-and-loop tape | AIEX store | AIEX 39.37 Feet/12m Hook and Loop Self Adhesive Tape Roll, 20 mm width, white colour | Fullfiled by Amazon |
| Fast drying glue | Fixtout | Superglue |
References
- Sonenshine, D. E., Roe, M. Ticks, People and Animals. Biology of Ticks, Vol I. , Oxford University Press. (2014).
- Kröber, T., Guerin, P. M. In vitro feeding assays for hard ticks. Trends in Parasitology. 23 (9), 445-449 (2007).
- Bonnet, S., Jouglin, M., Malandrin, L., Becker, C., Agoulon, A., L'hostis, M., Chauvin, A. Transstadial and transovarial persistence of Babesia divergens DNA in Ixodes ricinus.ticks fed on infected blood in a new skin-feeding technique. Parasitology. 134 (2), 197-207 (2007).
- Bonnet, S., Liu, X. Laboratory artificial infection of hard ticks: A tool for the analysis of tick-borne pathogen transmission. Acarologia. 52 (4), 453-464 (2012).
- Khols, G. M. Tick rearing methods with special reference to the Rocky Mountain Wood Tick, Dermacentor andersoni Stiles. Culture methods for invertebrate animals. , Dover Pubs. New York. (1937).
- Faccini, J. L. H., Chacon, S. C., Labruna, M. B. Rabbits (Oryctolagus cuniculus) as experimental hosts for Amblyomma dubitatum Neumann (Acari: Ixodidae) [Coelhos (Oryctolagus cuniculus) como hospedeiros experimentais de Amblyomma dubitatum Neumann (Acari: Ixodidae). Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia. 58 (6), 1236-1239 (2006).
- Chacon, S. C., Freitas, L. H. T., Barbieri, F. S. Relationship between weight and number of engorged Amblyomma cooperi. Nuttal (sic) and Warburton, 1908 (Acari: Ixodidae) larvae and nymphs and eggs from experimental infestations on domestic rabbits. Brazilian Journal of Veterinary Parasitology. 13, 6-12 (2004).
- Sonenshine, D. E. Maintenance of ticks in the laboratory. Maintenance of Human, Animal, and Plant Pathogen Vectors. , Science Publishers Inc. Enfield. (1999).
- Levin, M. L., Schumacher, L. B. M. Manual for maintenance of multi-host ixodid ticks in the laboratory. Experimental and Applied Acarology. 70 (3), 343-367 (2016).
- Bouchard, K. R., et al. Maintenance and experimental infestation of ticks in the laboratory setting. Biology of Disease Vectors. , Elsevier. San Diego. (2005).
- Jones, L. D., Davies, C. R., Steele, G. M., Nutall, P. A. The rearing and maintenance of ixodid and argasid ticks in the laboratory. Animal Technology. 39, 99-106 (1988).
- Slovák, M., Labuda, M., Marley, S. E. Mass laboratory rearing of Dermacentor reticulatus ticks (Acarina, Ixodidae). Biologia, Bratislava. 57 (2), 261-266 (2002).
- Rechav, Y., Dauth, J. Development of resistance in rabbits to immature stages of the Ixodid tick Rhipicephalus appendiculatus. Medical and Veterinary Entomology. 1, 177-183 (1987).
- Zacarias do Amaral, M. A., Azevedo Prata, M. C., Daemon, E., Furlong, J. Biological parameters of cattle ticks fed on rabbits. Brazilian Journal of Veterinary Parasitology. 21 (1), 22-27 (2012).
