Summary
Vi har utviklet en enkel og allsidig system for å mate vanskelig flått på laboratoriet kaniner. Våre ikke-arbeidskrevende bruker lett tilgjengelige materialer og kan justeres avhengig av hva forskjellige eksperimentelle innstillinger. Den tillater komfortabel overvåking og/eller prøvetaking av flått i løpet av hele perioden.
Abstract
Bruk av levende dyr i kryss forskning er avgjørende for en rekke eksperimentelle formål, herunder vedlikehold av vanskelig kryss kolonier i laboratoriet. Alle utviklingsstadier (unntatt egg) er hematophagous i flått, og anskaffe en blod-måltid når knyttet til sine virveldyr verter er avgjørende for en vellykket gjennomføring av deres livet syklus. Her viser vi en enkel metode som bruker lett kan åpnes kapsler for fôring av hard flått på kaniner. Fordelene med den foreslåtte metoden inkluderer dens enkelhet, kort varighet og viktigst allsidig justering for eksperimentell behov. Metoden muliggjør bruk av flere kamre (ulike størrelser) på samme dyret, som tillater fôring av flere stadier eller annen eksperimentell grupper samtidig redusere totale dyr kravet. Ikke-irriterende og lett tilgjengelig materialer minimerer ubehag å dyrene, som kan enkelt utvinnes fra et eksperiment og tilbys for adopsjon eller brukes på nytt hvis den etiske protokollen tillater det.
Introduction
Hard flått (Ixodidae) er kjent som langsom fôring leddyr og kan festes på en vert i flere dager eller uker, avhengig av arten og utviklingsmessige trinn1. Disse obligatoriske hematophagous leddyr er vektorer av en rekke smittestoffer, som bakterier og protozoer virus, og dermed utgjør en betydelig risiko for mennesker og dyrehelse1. Når studere tick biologi eller vurdere nye metoder, etablering av en effektiv sjekke fôring system er avgjørende for å effektivt designe eksperimenter og oppnå mål (e) av studien. Nylig flere kunstige tick mating systemer (unngå bruk av levende dyr) har vært utviklet2,3,4 og de skal brukes når det er mulig. Men disse systemene har ikke klart å erstatte tick fôring på levende dyr, og de er ikke passer substitutes for mange fysiologiske forhold kreves for vitenskapelige studier. Derfor, i noen tilfeller kan bruk av eksperimentelle dyr verter er avgjørende garantere relevansen av eksperimentelle resultater.
Laboratoriet New Zealand kaniner har vist seg for å være mest egnet og tilgjengelig vertene for flere ixodid kryss arter5,6,7,8,9. Ofte brukt to felles strategier av tick fôring på kaniner: a) fôring på rabbit ører dekket med bomull klut eller sokker6,7og b) fôring i bomull poser9, nylon flasker10 eller neopren Chambers11 limt til kaninens tilbake. Fôring på kanin ører er ikke en elegant system, fordi flått (spesielt tidlig larver og nymfer) kan gjennomgå og knytte dypt i ørekanalen, som er ubehagelig for dyret og gjør overvåkingen av tick fôring og/eller utvinning av engorged flått vanskelig. Dette systemet er også begrenset til bare to kryss grupper på ørene fullstendig dekket av sokker beskyttet av elisabethanske krage, som representerer en betydelig ubehag for dyret. Andre systemer9,10,11 er definitivt mer avanserte og godt egnet for vanskelig kryss kolonien vedlikehold. Men er de begrenset i antall eksperimentelle grupper på kaninen og modifiserbare størrelser/figurene av fôring kamre. I tillegg krever disse protokollene ofte hobbling bakre kanin bena for å unngå riper og bruk av elisabethanske krage å hindre grooming.
Her foreslår vi en enkel, non-arbeidskrevende og svært effektiv metode for å mate flere grupper av hard flått i lukkede rom limt til kaninen tilbake dekket av en jakke, eliminerer behovet for elisabethanske krage eller hobbling under eksperimentet. Systemet vårt bruker spesielt elastisk kapsler fra en etylen-vinyl acetate (EVA) skumlag dekket av mygg mesh og limt til barbert kaninen tilbake med rask styrket (3 min) ikke-irriterende latex limet. Denne teknikken kan feste flere kapsler med ønsket størrelse eller form, og noen uker etter eksperimentet kaniner er helt frisk. Systemet egner seg hovedsakelig til nymphal og voksen vanskelig sjekke etappene, men med en liten modifikasjon kan det brukes til Larvene fôring også. EVA skum-baserte metoder for vanskelig kryss fôring kan tilpasses andre typer virveldyr verter, for eksempel sauer (som vises som ett av alternativene i dette papiret).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Merk: I denne studien kaniner ble opprettholdt i standard bur med mat og vann tilbudt annonse libitum i fransk byrået for mat, miljø og yrkesmessig Helse & sikkerhet (ANSES) akkreditert dyr anlegg i Maisons-Alfort, Frankrike. Dyrene ble overvåket to ganger daglig av to erfarne teknikere for unormal hudreaksjoner, helseproblemer eller komplikasjoner. Eksperimentell rommet ble sikret ved innramming innsiden av døren med dobbeltsidig tape å unngå uvesentlig flukt av flått. Metoden fungerer best hvis to personer fungerer som et team, men det er mulig å fullføre enkelt handedly av en erfaren person. Selv om de fleste kanin er føyelig og rolig, kan tegn på stress oppstå under bearbeidingen. For å sikre at en kanin ikke skade selv av sliter, manuell tilbakeholdenhet kan oppnås ved å forsiktig holde av scruff av halsen i den ene hånden mens derimot støtter det bakben kvartaler. De seks måneder gamle, Rambouillet kvinnelige sauer ble holdt ved Senter for biomedisinsk forskning (CRBM) anlegg på de Veterinærinstituttet School of Alfort (ENVA), der vann og mat var levert ad lib, og det ble sjekket to ganger daglig.
Merk: Vårt laboratorium har fått tillatelse til å bruke kaniner og sau sjekke fôring av komité for etikk for dyr eksperimenter kommer Anses/ENVA/UPEC, tillater tall 01741.01 og 11/10/16-5B, henholdsvis. Siden vi brukte bare patogen-fri flått i vårt forsøk, ble alle kaninene brukt i denne studien tilbudt for adopsjon via White Rabbit foreningen, Paris, Frankrike.
1. utarbeidelse av kapsler
- Kutte ønsket størrelse på kapselen fra EVA skumark (figur 1A). Rundt ytre hjørner (figur 1B) av kapselen å minimere utilsiktet avdeling når lime det kanin huden.
Merk: Ramme tykkelsen på kapselen bør være rundt 8 mm. Bruk en 5 mm tykk skumark for larver, nymfer og små tick voksne arter som Ixodes. En 1 cm tykkelse skumark er egnet for store størrelse voksen flått som Amblyomma sp., Hyalomma sp., etc. størrelsen på kapselen varierer basert på kravene eksperimentelle. For eksempel 20 Ixodes voksen par, 200 nymfer eller 1000 larver bruker vi en indre kapsel størrelse 5 x 5 cm2, 6 x 7 cm2 eller 7 x 9 cm2, henholdsvis. - Kutt det 8 mm bred strimler av selvklebende kroken tape (se Tabell for materiale) og stikke dem forberedt EVA skum rammen (figur 1C).
- Kutt samme størrelse strimler fra selvklebende loop tape (se Tabell for materiale) og binde dem til kroken sidene festet til EVA-skum rammen (figur 1D).
- Klipp riktig størrelse for fine mygg mesh (maske størrelse mindre enn 50 µm) størrelsen på EVA skum rammen og holde det til den selvklebende loopen (figur 1E og 1F). Kuttet overheng om nødvendig.
Merk: Denne typen capsule kan brukes til å mate nymfer og voksne i vanskelig kryss arter, mens et annet tetting system av kapsler er nødvendig for larver fôring (supplerende figur 1) å forhindre uvesentlig flukt næringsplante via det festet krok og loop side.
2. utarbeidelse av kanin før sjekke av Infestation
- Barbere området kanin baksiden og sidene som skal brukes med avklipt (figur 2A).
- Bruk ikke-irriterende latex lim til hele overflaten av forberedt kapselen og vente 1 min (figur 2B).
- Fest kapselen ved å trykke på huden (spesielt i hjørnene) med fingrene i ca 3 minutter (figur 2C og 2D).
Merk: Når lime mer enn ettall capsule, pass på å holde minst 5 mm avstand mellom dem (figur 2E og 2F). Vi unngår vanligvis regionen i ryggen, men det kan brukes om nødvendig. - Litt løft kapsler for å visuelt kontrollere sin tilknytning til huden. Hvis ikke-tilknyttede områder finnes, gjelder limet ved hjelp av en slikkepott og trykk for en annen 3 minutter.
- Bruke beskyttelsesbåndet bakre paws av kaninen å forhindre jakke skade (figur 2G).
Merk: Dette trinnet er valgfritt, og er hovedsakelig for å hindre jakke skade, ikke skade å sjekke kapselen. - Satt på kaninen jakken ved å plassere forbena gjennom åpningene og stramme nakken, gjør at kaninen puste fortsatt komfortabel. Ikke plasser baksiden ben gjennom elastisk vedleggene på dette trinnet og la glidelås åpne (figur 2H).
3. tick Infestation
- Plass flått i en plastsprøyte (1 eller 5 mL avhengig av antall personer) med p-slutten kuttet og koblet med bomull (figur 1G). Hvis en liten mengde flått være infisert, bruk tang.
Merk: For tick kolonien vedlikehold tillate engorged haken female(s) å legge egg med påfølgende klekking i sprøyten (5 eller 10 mL) dekket av mygg mesh pakket med en strikk12 å unngå arbeidskrevende manipulering av Larvene når de er brukes til verten (figur 1H). Også fullt engorged Larvene kan tillates å molt i sprøyten (supplerende figur 1I; 5 eller 10 mL) for direkte angrep av kaninen med nymfer. - Plasser sprøyten dypt inn i kapselen via åpne hjørne og vaksinere flått ved å skyve sprøytestempelet. Sakte vri av stempelet mot kanin huden for å fjerne gjenværende kryssene tilknyttet stempelet og samtidig trekke det ut fra kapselen (figur 2jeg).
Merk: Hvis noen av individene krype ut av kapselen, returnere dem ved hjelp av pinsett. - Lukke kapselen ved refastening krok og loop båndet.
- Plass baksiden ben av rabbit i bakre elastisk skap jakke og zip lukket.
Merk: Kontroller at en pekefinger kan passe mellom av jakken og kaninen å sikre komfort, og også å unngå tygger på jakken. - Tilbake kaninen til buret (figur 2J).
Merk: Tiden fra infestation til samling av fylt flått variere mellom ulike kryss arter og utviklingsstadier. For eksempel Ixodes scapularis og Skogflåtter varighetene for fôring for voksne, nymfer, og Larvene 6-9, 3-4, og 2-3 dager, henholdsvis. En liste over referanser for 29 forskjellige vanskelig kryss sykluser under laboratorieforhold finnes i Levin og Shumacher (2016)9.
4. innhenting og overvåking av flått
- Ta kaninen fra buret til benken og pakk jakken.
- Forsiktig holde kaninen med hendene. Åpne kapselen ved løsne krok og loop båndet (figur 2 K og 2 L) og samle flått ved børsting engorged larver (supplerende figur 1) eller nymfer til en plast rett eller tang for voksne (figur 2L ). Hvis delvis matet (ikke fylt) flått er nødvendig, bruker en tick twister eller tang koble dem.
Merk: Hvis opprettholde tick koloniene se notatet i trinn 3.1. Opprettholde engorged flått i aktuelle fuktig og temperaturforhold avhengig bestemt tick. - Hvis nødvendig, skrus krok og loop båndet for å lukke kapselen.
5. utvinning av kaninen
- Fjerne mygg mesh helt fra kapselen og la jakken på kaninen (figur 2M).
- Vent 3-4 uker, og prøve å fjerne kapselen av forsiktig skjære et av hjørnene (figur 2N). Hvis kapselen er fortsatt godt festet, gjentar du dette trinnet en uke senere.
- Fjern jakke og la kaninen gjenopprette i buret.
Merk: Når kapselen er av, se huden av kaninen for unormal reaksjoner. Selv om vanligvis ingen behandling er nødvendig, kan en mykgjørende lotion brukes ved irritasjon. - Hvis protokollen og eksperimenter tillater, kan gjenopprettede kaninen (figur 2O) gjenbrukes eller tilbys for adopsjon.
Merk: Kanin har vist å erverve tick motstand når de utsettes for gjentatte tick infestations13; reinfestations er derfor ikke anbefalt med mindre eksperimentet krever.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Her foreslår vi for første gang en detaljert steg-for trinn metode for vanskelig kryss fôring i EVA skum kapsler på en barbert kanin rygg, dekket av en jakke (figur 1 og figur 2). Denne protokollen er egnet for ulike typer eksperimenter når ulike tick grupper på samme vert er nødvendige og kan brukes til masse oppdrett av hard flått. Tick fôring suksess i laboratoriet mest avhengig av egnethet av tick enkeltpersoner og hensiktsmessigheten av kanin verten for bestemt kryss arter, snarere enn teknikken selv. Systemet vårt bruker EVA-skum kapsler limt til kaninen tilbake har vist seg for å være svært vellykket når fôring ulike utviklingsmessige stadier av ulike vanskelig kryss arter (tabell 1) og kan også tilpasses for andre typer laboratorium hosts, som sauer ( Figur 3).
De viktigste fordelene med denne metoden er enkelhet, lett tilgjengelig materialer (Tabell for materiale) og, viktigst, en behagelig åpne-lukke system tillater enkel overvåking av flått under fôring. Dessuten, denne allsidige metoden gir mulighet for en rekke forskjellige eksperimentelle innstillinger basert på samme tall, form og sammensetningen av kapsler på verten (figur 2D-F), møte utfordringene i det studien. Bruk av svært effektiv hurtigtørkende og ikke-irriterende latex limet sikrer at kapselen limes fast i tre minutter og fortsatt festet i minst tre uker. Denne prosedyren kan også fullstendig gjenoppretting av rabbit verter etter eksperimenter (figur 2O).
Figur 1 : Forberedelse av EVA skum capsule og flått. (A, B) Kutte kapselen fra EVA skum. (C) å plassere strimler av selvklebende kroken tape til kapselen. (D) bindende loop siden strimler og peeling tapen fra festene. (E, F) Stikker mygg mesh til limet strimler. (G) eksempel på voksen vanskelig flått i sprøyten (5 mL) med cut p-slutten dekket av bomull. (H) eksempel på fersk klekking larver i sprøyten med cut p-slutten dekket av mygg mesh holdt på plass av en strikk. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2 : Lime kapselen til kaninen, sjekke av infestation/utvinne og kapsel fjerning. (A) barbert kanin tilbake. (B) bruk av limet på forberedt EVA skum kapselen. (C, D) Vedlegg av forskjellig størrelse kapsler å kaninen. (E, F) Dorsal visning av kanin viser to eller flere kamre festet til baksiden, henholdsvis. (G) tape er plassert rundt den bakre fot. (H) jakken brukes fra den forreste beina og nakken, og den bakre delen er igjen åpen. Åpne hjørnet av kapselen vises også. (jeg) å plassere flått til capsule via åpne hjørnet med sprøyten. (J) jakken er zippet helt og kaninen er flyttet til buret. (K) overvåke flått under deres fôring ved å åpne kapselen. (L) samle fylt flått bruke pinsett. (M) tom kapsel etter tikk fjerning. (N) avdeling av kapselen (etter 3-4 uker) fra kaninen. (O) helt frisk kanin Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3 : EVA skum system tilpasset sau. (A) vedlegg av skum kapsler til et barbert og renset i den laterale siden av sauene tilbake. (B) etter infestation, tilknyttede kapsler er dekket med en bandasje (Ortopedisk glattstrikk), i stedet for en jakke. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
| Kryss arter | Antall infested flått/antall engorged merker (%) | ||
| Larvene | Nymfer | Kvinner | |
| Skogflått | - | 692/557 (80.49%) | 670/592 (88.35%) |
| Ixodes scapularis | - | - | 40/34 (85%) |
| Dermacentor nettsnegl | 3,550/3255 (91,7%) | 900/803 (89.22%) | 323/305 (94.42%) |
| Rhipicephalus appendiculatus | 3300/2822 (85.52%) | 490/421 (85.91%) | 370/362 (97.83%) |
| Rhipicephalus pulchelus | - | 1,920/1831 (95.36%) | 282/257 (91.13%) |
| Amblyomma variegatum | 332/225 (67.77%) | 404/308 (76.24%) | 207/146 (70.53%) |
| Amblyomma americanum | - | 140/134 (95.71%) | 31/27 (var 87,1%) |
| Hyalomma excavatum | 1000 * | 510 * (58.8%) | 380/313 (82.36%) |
Tabell 1: Overfylling rate av ulike utviklingsmessige stadier av vanskelig kryss arter fôring på kaniner inne EVA-skum kapsler. * Grunn til rask molting prosessen av H. excavatum umodne stadier, ble engorged Larvene (data ikke vist) overlatt til molt inn i nymfer som senere engorged i samme kapselen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Viktigste i denne hele protokollen er å lime kapselen fast til barbert huden. Derfor er konstant press i minst 3 minutter viktig, spesielt i hjørnene. Når vaksinere flått i kapselen, er det viktig å bruke dem dypt inn i motsatt hjørne fra den åpne å unngå kryss flykte under tetting. Når du planlegger eksperimenter, sørg for at alle Kapslene er dekket av jakken å unngå skade ved tygge eller riper. Kontroller at nakken regionen av jakken er stramt nok til å hindre tygge men tilstrekkelig løs at kaninen er komfortabel.
En av fordelene ved beskrevet teknikken er dens enkelhet og at endringer i størrelse og antall kapsler kan brukes. Under våre eksperimenter, avdeling av kapsler fra huden var ikke observert. Men kan sporadisk skade av jakken (men ikke kapselen) av kaninen oppstå.
I kaniner, har vi observert at i kapselen, fullt engorged rekkehus flått (hovedsakelig umodne stadier som larver og nymfer) utenå tørrlegge overflaten raskere på grunn av temperaturen på kaninen. Derfor foreslår vi for å estimere varigheten av perioden av bestemt kryss arter og scenen, planlegge engorged haken samling umiddelbart etter deres avdelingen. Selv om systemet har blitt testet for fôring av ulike vanskelig kryss arter (tabell 1), er kaninen ikke en naturlig vert for alle vanskelig kryss arter14. Denne begrensningen kan overvinnes ved å tilpasse dette systemet til andre dyr verter egnet for en bestemt vanskelig kryss arter. Her rapportert vi bruk av EVA skum systemet tilpasset sauer å mate alle utviklingsmessige stadier av I. ricinus (Figur 3). I dette tilfellet må sauene være barbert og vasket med bomull impregnert med 70% etanol å fjerne olje tilstede på overflaten av huden. Etterpå samme prosedyre som beskrevet for kaniner ble fulgt, men i stedet for en jakke, brukte en bomull bandasje på baksiden som vist i Figur 3.
Ved utvikling av dette systemet, betalt vi spesiell oppmerksomhet til minimere mengden materialer og trinnene av fremgangsmåten. Sammenlignet med andre metoder, bruker vi ikke anestesi, kanin krage, øre sokker eller hobbling av de bakre Ben5,6,7,8,9,10. I tillegg finnes protokollen er ikke arbeidskrevende, og ingen intensiv trening er nødvendig for å bli kjent med denne teknikken. EVA-skum basert tick fôring systemet i denne studien er forventet å bli brukt for en rekke forskjellige eksperimenter når studere tick biologi, vert-vektor-patogen interaksjoner, eller evaluering annen kontroll tiltak som acaricides eller vaksiner. Vår fremtidige retning vil være å tilpasse EVA skum kapselen fôring systemet til musemodell å mate umodne stadier av hard flått.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne ikke avsløre.
Acknowledgments
Vi erkjenner teknisk assistanse av Evelyne Le Naour, fransk National Institute of Agricultural Research (INRA), Alain Bernier (INRA) og Océane Le Bidel (ANSES). Consuelo Almazán ble støttet av et fellesskap fra laboratoriet of Excellence, integrerende biologi av fremvoksende infeksjonssykdommer (LabEx IBEID), Pasteur Institute. Kaniner og sauer ble kjøpt av ANSES. Del av dette arbeidet ble finansiert av National Institutes of Health grant RO1AI090062 Y. Park. Dr. Jeffrey L. Blair er anerkjent for gjennomgang manuskriptet.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| New Zealand Rabbits (2.5-3.5 kg) | Charles River | Strain Code 571 | |
| Rambouillet sheep | Local provider-tick free farm | Female 6 months old | |
| EVA foam 5 mm thick | Cosplay Shop | EVA-PE451kg (950mm x 450mm) | 10 mm PE45 kg foam from the Cosplay Shop may be used for the large adult tick species |
| Foam Sheet 9" X 12" 6 mm-White | Amazon | FOAMSHT6-20 | 6 mm-EVA foam ca be ordered via Amazon as an alternative to the foam from Cosplay Shop |
| Full length rabbit jackets | Harvard Apparatus, Inc. | 620077- medium, 6270078 - large | |
| Non-toxic latex glue | Tear mender | Fabric & Leather Adhesive | |
| Tubular cotton orthopedic stockinette | BSN Medical | 9076 (12-15 cm wide) | |
| Mosquito mesh | Loisirs Creatifs | Very fine filter nylon mesh fabric | Any mosquito mesh, or curtain material with the mesh size less than 50 μm is suitable. |
| Leukoplast | BSN medical S.A.S | LF 72361-02 | |
| Adhesive hook-and-loop tape | AIEX store | AIEX 39.37 Feet/12m Hook and Loop Self Adhesive Tape Roll, 20 mm width, white colour | Fullfiled by Amazon |
| Fast drying glue | Fixtout | Superglue |
References
- Sonenshine, D. E., Roe, M. Ticks, People and Animals. Biology of Ticks, Vol I. , Oxford University Press. (2014).
- Kröber, T., Guerin, P. M. In vitro feeding assays for hard ticks. Trends in Parasitology. 23 (9), 445-449 (2007).
- Bonnet, S., Jouglin, M., Malandrin, L., Becker, C., Agoulon, A., L'hostis, M., Chauvin, A. Transstadial and transovarial persistence of Babesia divergens DNA in Ixodes ricinus.ticks fed on infected blood in a new skin-feeding technique. Parasitology. 134 (2), 197-207 (2007).
- Bonnet, S., Liu, X. Laboratory artificial infection of hard ticks: A tool for the analysis of tick-borne pathogen transmission. Acarologia. 52 (4), 453-464 (2012).
- Khols, G. M. Tick rearing methods with special reference to the Rocky Mountain Wood Tick, Dermacentor andersoni Stiles. Culture methods for invertebrate animals. , Dover Pubs. New York. (1937).
- Faccini, J. L. H., Chacon, S. C., Labruna, M. B. Rabbits (Oryctolagus cuniculus) as experimental hosts for Amblyomma dubitatum Neumann (Acari: Ixodidae) [Coelhos (Oryctolagus cuniculus) como hospedeiros experimentais de Amblyomma dubitatum Neumann (Acari: Ixodidae). Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia. 58 (6), 1236-1239 (2006).
- Chacon, S. C., Freitas, L. H. T., Barbieri, F. S. Relationship between weight and number of engorged Amblyomma cooperi. Nuttal (sic) and Warburton, 1908 (Acari: Ixodidae) larvae and nymphs and eggs from experimental infestations on domestic rabbits. Brazilian Journal of Veterinary Parasitology. 13, 6-12 (2004).
- Sonenshine, D. E. Maintenance of ticks in the laboratory. Maintenance of Human, Animal, and Plant Pathogen Vectors. , Science Publishers Inc. Enfield. (1999).
- Levin, M. L., Schumacher, L. B. M. Manual for maintenance of multi-host ixodid ticks in the laboratory. Experimental and Applied Acarology. 70 (3), 343-367 (2016).
- Bouchard, K. R., et al. Maintenance and experimental infestation of ticks in the laboratory setting. Biology of Disease Vectors. , Elsevier. San Diego. (2005).
- Jones, L. D., Davies, C. R., Steele, G. M., Nutall, P. A. The rearing and maintenance of ixodid and argasid ticks in the laboratory. Animal Technology. 39, 99-106 (1988).
- Slovák, M., Labuda, M., Marley, S. E. Mass laboratory rearing of Dermacentor reticulatus ticks (Acarina, Ixodidae). Biologia, Bratislava. 57 (2), 261-266 (2002).
- Rechav, Y., Dauth, J. Development of resistance in rabbits to immature stages of the Ixodid tick Rhipicephalus appendiculatus. Medical and Veterinary Entomology. 1, 177-183 (1987).
- Zacarias do Amaral, M. A., Azevedo Prata, M. C., Daemon, E., Furlong, J. Biological parameters of cattle ticks fed on rabbits. Brazilian Journal of Veterinary Parasitology. 21 (1), 22-27 (2012).
