Summary
Мы разработали систему простой и универсальный жесткий клещей питаются кролики лаборатории. Наши номера трудоемкий протокол использует легко доступных материалов и может быть скорректирована в зависимости от требований различных экспериментальных параметров. Метод позволяет комфортно мониторинг и/или выборки клещей в течение всего периода кормления.
Abstract
Использование живых животных в тик исследований имеет решающее значение для целого ряда экспериментальных целей, включая поддержание твердых тик колоний в лаборатории. Клещей все этапы развития (за исключением яйцо) являются hematophagous, в приобретении крови питание при подключении к их позвоночных хозяев имеет важное значение для успешного завершения их жизненного цикла. Здесь мы показываем, простой метод, который использует легко открывающиеся капсулы для кормления жестких импульсах на кроликов. Преимущества предложенного метода включают его простоты, короткой продолжительности и самое главное универсальный адаптации к потребностям конкретных экспериментальных требований. Этот метод делает возможным использование нескольких камер (различных размеров) на том же животное, которое позволяет кормление несколько этапов или различных экспериментальных групп при одновременном снижении общей животных требование. Не раздражает и легко доступных материалов, используемых сводит к минимуму дискомфорт для животных, которые могут быть легко оправился от эксперимент и предложены для принятия или повторно, если это позволяет этические протокол.
Introduction
Жесткий клещей (Иксодовые клещи) хорошо известны как медленное питание членистоногих и могут быть прикреплены на узле в течение нескольких дней, или недель, в зависимости от вида и развития этап1. Эти обязательные hematophagous членистоногих векторы широкого спектра инфекционных агентов, таких как бактерии, простейшие и вирусы и таким образом представляют значительную опасность для людей и животных здоровье1. При изучении биологии клеща или оценке новых методов управления, создание эффективной клеща, системы кормления решающее значение для эффективной разработки экспериментов и достичь цели исследования. Недавно несколько искусственный тик питание системы (избегая использования живых животных) были развитые2,3,4 , и они должны быть использованы, когда это возможно. Однако эти системы не были в состоянии полностью заменить тик, питаясь живыми животными, и они не имеют подходящих заменителей для многих физиологических условий, необходимых для научных исследований. Таким образом в некоторых случаях, использование экспериментальных животных хостов имеет решающее значение для обеспечения актуальности экспериментальных результатов.
Лаборатория Новой Зеландии кроликов показали быть хозяевами наиболее подходящими и доступными для нескольких иксодовых клеща видов5,6,,78,9. Две общие стратегии делений, питаются Кролики часто использовались:) кормления на уши кролика, покрытые хлопчатобумажной тканью или носки6,7и b) кормления в хлопка сумки9, нейлон бутылки10 или неопрена палат11 приклеены к кролика обратно. Питание на уши кролика не является элегантный системой, потому что клещей (особенно на ранних стадиях, личинки или нимфы) могут ползать и прикрепить глубоко в ушной канал, что неудобно для животных и делает мониторинг клеща кормления и/или восстановления наполненный клещи трудно. Эта система также ограничивается только две группы тик на уши, полностью покрываются носки, защищены елизаветинской воротники, представляющих значительный дискомфорт для животных. Другие системы9,10,11 определенно более продвинутые и хорошо подходит для обслуживания жесткого деления колонии. Однако они ограничены в число экспериментальных групп на кролика, а также в изменяемые размеры/формы кормления палат. Кроме того эти протоколы часто требуют ковыляя задние кролик ноги, чтобы избежать царапин и использовании елизаветинской ошейников для предотвращения ухода.
Здесь мы предлагаем простой, не трудоемкий и очень эффективный метод, чтобы кормить несколько групп жестких клещей в закрытых камерах приклеены к кролика обратно охватываемых пиджак, устраняя необходимость в елизаветинской Ошейники или ковыляя во время эксперимента. В частности наша система использует упругой капсулы из этилен виниловый листа пены винилацетата (EVA) в охватываемых москитные сетки и приклеены к бритая кролика обратно клеем быстро затвердевающий (3 мин) не раздражает латекса. Эта техника позволяет вложение нескольких капсул желаемого размера или формы, и несколько недель спустя после эксперимента кроликов полностью выздоровел. Система предназначена главным образом для этапов nymphal и взрослых жесткий клеща, но с немного изменений может использоваться для личинок, а также кормления. EVA пены-методы на основе жестких тика кормления могут быть адаптированы для других видов позвоночных хозяев, например овец (которая отображается как один из вариантов в этом документе).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Примечание: В этом исследовании, кролики были сохранены в стандартные корпуса с пищей и водой предложил ad libitum на французского агентства для производства продуктов питания, окружающей среды и охраны здоровья и безопасности (НУСО) аккредитованных животных зал в Мезон-Альфор, Франция. Животные были под наблюдением дважды ежедневно два опытных техников для любой ненормальной кожные реакции, проблемы со здоровьем или осложнений. Экспериментальная комната была обеспечена путем разработки внутренних дверях с двухсторонней ленты, чтобы избежать случайного побег тиков. Этот метод лучше всего работает, если два человека работают в команде, но это возможно для завершения одной рукой на один опытный человек. Хотя большинство кроликов, послушный и спокойные, признаки стресса может произойти во время манипуляции. Чтобы убедиться, что кролик не травмировать себя, изо всех сил, может быть достигнуто ручной сдержанность, нежно, удерживая из загривок шеи в одной руке, другой его поддерживает задние четверти. Шесть месяц старый, Рамбуйе, женский овец находился в центре для биомедицинских исследований (CRBM) зал в Национальной ветеринарной школы Alfort (ENVA), где вода и еда были предоставленного ad libitum, и он был возвращен два раза в день.
Примечание: Наша лаборатория получила разрешение на использование кроликов и овец для деления, кормления, Комитет по этике для животных эксперименты ComEth АНСЕС/ENVA/УПЭК, разрешение на 01741.01 номера и 11/10/16-5B, соответственно. Так как мы использовали только возбудителя свободный клещей в наших экспериментах, все кролики, используемые в данном исследовании были предложены для принятия через белый кролик ассоциации, Париж, Франция.
1. Подготовка капсулы
- Вырежьте нужный размер капсулы из EVA пены листа (рис. 1А). Вокруг внешнего углов (рис. 1Б) капсулы для сведения к минимуму случайных отряд при приклеивании к коже кролика.
Примечание: Толщина рамы капсула должна быть около 8 мм. Использование листа пенопласта толщиной 5 мм для личинок, нимф и малые деления взрослых видов, таких как Ixodes. Лист пенопласта толщиной 1 см подходит для большого размера взрослых клещей Amblyomma sp., Hyalomma sp., и т.д. , когда меняется размер капсулы на основе экспериментальных требований. Например для 20 пар взрослых Ixodes , 200 нимфы или 1000 личинки, мы используем внутренний капсулы размер 5 x 5 см2, 6 x 7 cm2 или 7 x 9 см2, соответственно. - Вырезать полосы шириной 8 мм Крючок самоклеющийся ленты (см. Таблицу материалы) и наклеить их на подготовленный EVA пены кадр (рис. 1C).
- Вырезать же размер полосы из самоклеющейся цикла ленты (см. Таблицу материалы) и связать их со стороны крюк крепится к раме EVA пены (рис. 1D).
- Вырезать соответствующий размер штрафа москитные сетки (размер ячеи менее 50 мкм) с размером кадра EVA пены и придерживаться самоклеящиеся цикла (Рисунок 1E и 1F). Вырежьте свесы, при необходимости.
Примечание: Этот тип капсулы может использоваться кормить нимф и взрослых видов твердых тик, в то время как различные системы опломбирования капсулы необходима для личинок кормления (дополнительная цифра 1) для предотвращения случайного бежать через крепится личинок крюк и петля сторона.
2. Подготовка кролика перед клеща заражения
- Бритье области кролик спине и боках использоваться с Клипперс (рисA).
- Не раздражает латекса клей наносится на всю поверхность, подготовленную капсулы и подождите 1 мин (рис. 2B).
- Клей капсулы, нажав на кожу (особенно в углах) с пальцами около 3 минут (рис. 2 c и 2D).
Примечание: При приклеивании более чем одну капсулу, не забудьте сохранить по крайней мере 5 мм пространство между ними (рис. 2е и 2F). Мы обычно избежать область позвоночника, но он может использоваться при необходимости. - Слегка приподнимите капсулы визуально проверить их привязанность к коже. Если не вложенные регионы будут найдены, применять клей, с помощью шпателя и нажмите для еще 3 минуты.
- Применять защитные ленты для задних лап кролика для предотвращения повреждения куртка (рис. 2G).
Примечание: Этот шаг является необязательным и в основном для предотвращения повреждения куртка, не повреждения капсулы клеща. - Положите на кролика куртка, поместив передние ноги через отверстия и подтяжка шеи, что делает уверен кролика, дыхание остается комфортно. Не место задние ноги через эластичный корпуса на этот шаг и оставить открытой молнию (рис. 2H).
3. клеща заражения
- Место клещей в пластиковый шприц (1 или 5 мл в зависимости от числа лиц) с конца иглы вырезать и подключено с хлопком (рис. 1G). Если небольшое количество тиков, чтобы быть заражены, используйте пинцет.
Примечание: Тик колонии обслуживания позволяют наполненный клещ female(s) откладывают яйца с последующей штриховки внутри шприца (5 или 10 мл), охватываемых москитной сетки, завернутые на резинку12 , чтобы избежать трудоемкой манипуляции личинок в то время они являются применяется к хост (Рисунок 1H). Кроме того, полностью наполненный личинок может быть позволено линьки в шприц (дополнительная цифра 1I; 5 или 10 мл) для прямого заражения кролика с нимфами. - Поместите шприц глубоко в капсуле через открытый угол и прививать клещей, нажимая на поршень шприца. Медленно твист поршень к коже кролика удалить оставшиеся клещи, придает поршень и одновременно вытяните его с капсулой(рисунок 2-я).
Примечание: Если некоторые из лиц, выползают из капсулы, вернуть их с помощью щипцов. - Закройте капсулу, refastening крюк и петля ленты.
- Поместите задние ноги кролика в задней упругой ограждения куртку и zip закрыты.
Примечание: Убедитесь, что перст индекса может поместиться между шеи куртку и кролика для обеспечения комфорта, а также чтобы избежать жевать на куртке. - Возвращение кролика в клетке (Рисунок 2J).
Примечание: Время от заражения до коллекции изобилует клещей разных видов различных клещей и стадии развития. Например для Черноногий клещ Ixodes ricinus, длительности кормления для взрослых, нимф и личинки являются 6 – 9, 3-4 и 2 – 3 дня, соответственно. Список ссылок для 29 различных твердых тик жизненных циклов в лабораторных условиях могут быть найдены в Левин и Шумахера (2016)9.
4. сбор и мониторинг клещей
- Возьмите кролика от клетки к скамейке и распакуйте куртку.
- Нежно сдерживать кролика с вашими руками. Откройте капсулу, раскрепление крюк и петля ленты (рис. 2 K и 2 Л) и собирать клещей чистки наполненный личинки (Дополнительные рис. 1) или нимфы в пластиковых блюдо или с помощью щипцов для взрослых (рис. 2L ). Если частично кормили (не изобилует) клещей не требуется, используйте клеща торнадо или щипцы для отсоединения их.
Примечание: Если поддержание клеща колоний, пожалуйста, смотрите в примечании к пункту 3.1. Поддерживать наполненный клещей в соответствующие влажный и температурных условий в зависимости от вида конкретной клеща. - При необходимости, refasten ленты крюк и петля закрытия капсулы.
5. Восстановление кролика
- Полностью удалить москитной сетки из капсулы и оставить куртку на кролика (рис. 2M).
- Подождать 3-4 недели и попытаться удалить капсула, нежно обрезки один из углов (рис. 2N). Если по-прежнему твердо прилагается капсула, повторите этот шаг спустя одну неделю.
- Удаление куртку и пусть восстановить кролика в клетке.
Примечание: После того, как капсула не горит, проверьте кожи кролика для ненормальных реакций. Хотя обычно лечение не требуется, смягчающий лосьон может использоваться в случае раздражения. - Если протокол и экспериментов позволяют, восстановленные кролик (Рисунок 2O) может быть повторно или предложены для принятия.
Примечание: Кролики было показано приобрести клеща сопротивления раз подвергается неоднократные клеща заражения13; Таким образом reinfestations не рекомендуются, если эксперимент требует.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Здесь мы предлагаем в первый раз подробно шаг за шагом метод твердых тик кормления в EVA пены капсулы, применяется к бритая кролика обратно, охватываемых пиджак (рис. 1 и рис. 2). Этот протокол подходит для различных типов экспериментов, когда различные клеща групп на том же узле требуются и может также использоваться для массового выращивания жесткий клещей. Клещ кормления успех в лаборатории в основном опирается на фитнес клеща лиц и пригодности кролик хоста для видов конкретной клещей, а не сама техника. Наша система, с помощью EVA пены капсулы на приклеены к кролика обратно было доказано быть весьма успешным, когда питание различные этапы развития различных твердых тик видов (Таблица 1) и может также быть адаптированы для других типов узлов лаборатории, таких как овцы ( Рисунок 3).
Основными преимуществами этого метода являются простота, легко доступных материалов (Таблица материалов) и, самое главное, удобной системой открывания закрывания, позволяя легко мониторинг импульсов во время кормления. Кроме того, этот универсальный метод дает возможность целого ряда различных экспериментальных параметров, основанных на изменяемые номер, форму и состав капсул на хост (Рисунок 2-D-F), на вызовы исследование. Использование весьма эффективным, быстро сохнет и не раздражает латекса клей обеспечивает капсула прочно склеены в течение трех минут и остается прикрепленным для по крайней мере три недели. Эта процедура также позволяет полное восстановление кролика хосты после экспериментов (Рисунок 2O).
Рисунок 1 : Подготовка EVA пены капсулу и клещи. (A, B) Резка капсулы из EVA пены. (C) размещения полосы ленты самоклеющиеся крюк к капсуле. (D) обязательного цикла стороне полосы и пилинг ленты от крепления. (E, F) Заклеивание москитной сетки клейкие полоски. (G) пример взрослого жесткий тиков внутри шприца (5 мл) с разреза конце иглы, охватываемых хлопка. (H) пример свежезаваренным вылупления личинок внутри шприца с среза иглы конце охватываемых москитной сетки удерживается на месте резинкой. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 2 : Приклеивание капсула для кролика, отметьте заражения/восстановления и капсула удаление. (A) бритая кролика обратно. (B) Применение клея для подготовленных EVA пены капсулы. (C, D) Вложение различных размеров капсул для кролика. (E, F) Дорсальная вид кролика показаны два или несколько палат к спине, соответственно. (G) ленты располагается вокруг задних ног. (H) куртка применяется начиная с передней ноги и шею, а задняя часть остается открытым. Также показано открытие углу капсулы. (я) размещение клещей к капсуле через открытым углом, с помощью шприца. (J) куртка молнии полностью и кролик переехал в клетке. (K) мониторинг клещей во время их кормления, открыв капсулы. (L) сбор изобилует клещей, используя пинцет. (M) пустой капсулы после удаления клеща. (N) отряд капсулы (после 3-4 недель) от кролика. (O) полностью восстановился кролик пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 3 : EVA пены системы, адаптированные к овцам. (A) приверженность пены капсул побрился и очищаемой области на боковой стороне овец обратно. (B) после заражения, прилагаемый капсулы покрыты повязку (ортопедические stockinette), вместо куртку. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
| Видов клещей | Количество зараженных клещей/количество наполненный клещей (%) | ||
| Личинки | Нимфы | Женщины | |
| Собачий клещ | - | 692/557 (80.49%) | 670/592 (88.35%) |
| Черноногий клещ | - | - | 40/34 (85%) |
| Dermacentor сетчатый | 3550/3255 (91,7%) | 900/803 (89.22%) | 323/305 (94.42%) |
| Rhipicephalus девичий | 3300/2822 (85.52%) | 490/421 (85,91%) | 370/362 (97.83%) |
| Rhipicephalus pulchelus | - | 1920/1831 (95.36%) | 282/257 (91.13%) |
| Amblyomma variegatum | 332/225 (67,77%) | 404/308 (76,24%) | 207/146 (70.53%) |
| Amblyomma американский | - | 140/134 (95.71%) | 31/27 (87,1%) |
| Hyalomma excavatum | 1000 * | 510 * (58,8%) | 380/313 (82.36%) |
Таблица 1: Скорость нагрубание различные этапы развития видов твердых клещей питаются кролики внутри капсулы EVA пены. * Благодаря процессу быстрого линьки незрелых стадий H. excavatum наполненный личинки (данные не показаны) остались линьки в нимф, которые впоследствии engorged в том же капсулу.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Наиболее важным шагом в этом весь протокол является клей капсула твердо к бритой кожи. По этой причине постоянное давление для по крайней мере 3 минут имеет решающее значение, особенно в углах. Когда прививки клещей в капсулу, важно применять их глубоко в противоположный угол от открытых один, чтобы избежать клеща побега во время уплотнения. При планировании эксперименты, убедитесь, что все капсулы охватываются куртку, чтобы избежать ущерба путем жевания или царапин. Убедитесь, что области шеи куртка является достаточно жесткой, чтобы предотвратить, но достаточно свободно жевания, что кролик по-прежнему комфортно.
Одним из главных преимуществ описанных техники является его простота и что изменения с точки зрения размера и количество капсулы могут быть использованы. Во время наших экспериментов отряд капсул из кожи не наблюдалось. Однако возможны случайные повреждения куртка (но не капсула), кролика.
В кроликов мы отмечаем, что в капсуле, полностью наполненный отдельностоящий клещей (главным образом незрелых стадий как личинки и нимфы) забираются быстрее из-за температуры кролика. По этой причине мы предлагаем оценить продолжительность периода кормления видов конкретных клещей и стадии, наметить наполненный клеща коллекции сразу же после их отряд. Хотя наша система была протестирована для кормления различных видов твердых тик (Таблица 1), кролик не является естественным хост для всех видов твердых тик14. Это ограничение можно преодолеть путем адаптации этой системы для других животных хостов, подходит для видов конкретной жесткий клещей. Здесь мы сообщили об использовании системы EVA пены, адаптированной к овец, чтобы прокормить все этапы развития I. ricinus (рис. 3). В данном конкретном случае овец необходимо побриться и промывают ватой, пропитанной 70% этанола для устранения масла на поверхности кожи. Впоследствии было следовать той же процедуре, описанной для кроликов, но вместо куртку, повязку хлопок был использован вокруг задней, как показано на рисунке 3.
При разработке этой системы, мы уделили особое внимание к минимуму количество используемых материалов и этапы процедуры. По сравнению с другими методами, мы не используем анестезии, кролик воротники, носки ухо или мешать задние ноги5,6,,78,9,10. Кроме того Настоящий Протокол не является трудоемким, и нет интенсивного обучения требуется ознакомиться с этой техникой. EVA пены на основе делений, подробно изложены в настоящем исследовании системы кормления, как ожидается, будет использоваться для целого ряда различных экспериментов, при изучении клеща биологии, хост вектор возбудитель взаимодействий, или оценки различных контрольных мер как акарициды или вакцины. Наше будущее направление будет адаптации EVA пены капсула, системы кормления модель мыши кормить незрелых стадий жесткий тиков.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы не имеют ничего сообщать.
Acknowledgments
Мы признаем технической помощи Эвелин Ле Naour, французский Национальный институт сельскохозяйственных исследований (ИНРА), Ален Бернье (ИНРА) и Océane Le Bidel (НУСО). Консуэло Almazán была поддержана стипендии от лаборатории передового опыта, интегративной биологии возникающих инфекционных заболеваний (LabEx IBEID), Институт Пастера. Кролики и овцы были приобретены АНСЕС. Часть этой работы была финансируется национальными институтами здравоохранения грант RO1AI090062 Y. парк. Д-р Джеффри л Блэр признается за рассмотрение рукописи.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| New Zealand Rabbits (2.5-3.5 kg) | Charles River | Strain Code 571 | |
| Rambouillet sheep | Local provider-tick free farm | Female 6 months old | |
| EVA foam 5 mm thick | Cosplay Shop | EVA-PE451kg (950mm x 450mm) | 10 mm PE45 kg foam from the Cosplay Shop may be used for the large adult tick species |
| Foam Sheet 9" X 12" 6 mm-White | Amazon | FOAMSHT6-20 | 6 mm-EVA foam ca be ordered via Amazon as an alternative to the foam from Cosplay Shop |
| Full length rabbit jackets | Harvard Apparatus, Inc. | 620077- medium, 6270078 - large | |
| Non-toxic latex glue | Tear mender | Fabric & Leather Adhesive | |
| Tubular cotton orthopedic stockinette | BSN Medical | 9076 (12-15 cm wide) | |
| Mosquito mesh | Loisirs Creatifs | Very fine filter nylon mesh fabric | Any mosquito mesh, or curtain material with the mesh size less than 50 μm is suitable. |
| Leukoplast | BSN medical S.A.S | LF 72361-02 | |
| Adhesive hook-and-loop tape | AIEX store | AIEX 39.37 Feet/12m Hook and Loop Self Adhesive Tape Roll, 20 mm width, white colour | Fullfiled by Amazon |
| Fast drying glue | Fixtout | Superglue |
References
- Sonenshine, D. E., Roe, M. Ticks, People and Animals. Biology of Ticks, Vol I. , Oxford University Press. (2014).
- Kröber, T., Guerin, P. M. In vitro feeding assays for hard ticks. Trends in Parasitology. 23 (9), 445-449 (2007).
- Bonnet, S., Jouglin, M., Malandrin, L., Becker, C., Agoulon, A., L'hostis, M., Chauvin, A. Transstadial and transovarial persistence of Babesia divergens DNA in Ixodes ricinus.ticks fed on infected blood in a new skin-feeding technique. Parasitology. 134 (2), 197-207 (2007).
- Bonnet, S., Liu, X. Laboratory artificial infection of hard ticks: A tool for the analysis of tick-borne pathogen transmission. Acarologia. 52 (4), 453-464 (2012).
- Khols, G. M. Tick rearing methods with special reference to the Rocky Mountain Wood Tick, Dermacentor andersoni Stiles. Culture methods for invertebrate animals. , Dover Pubs. New York. (1937).
- Faccini, J. L. H., Chacon, S. C., Labruna, M. B. Rabbits (Oryctolagus cuniculus) as experimental hosts for Amblyomma dubitatum Neumann (Acari: Ixodidae) [Coelhos (Oryctolagus cuniculus) como hospedeiros experimentais de Amblyomma dubitatum Neumann (Acari: Ixodidae). Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia. 58 (6), 1236-1239 (2006).
- Chacon, S. C., Freitas, L. H. T., Barbieri, F. S. Relationship between weight and number of engorged Amblyomma cooperi. Nuttal (sic) and Warburton, 1908 (Acari: Ixodidae) larvae and nymphs and eggs from experimental infestations on domestic rabbits. Brazilian Journal of Veterinary Parasitology. 13, 6-12 (2004).
- Sonenshine, D. E. Maintenance of ticks in the laboratory. Maintenance of Human, Animal, and Plant Pathogen Vectors. , Science Publishers Inc. Enfield. (1999).
- Levin, M. L., Schumacher, L. B. M. Manual for maintenance of multi-host ixodid ticks in the laboratory. Experimental and Applied Acarology. 70 (3), 343-367 (2016).
- Bouchard, K. R., et al. Maintenance and experimental infestation of ticks in the laboratory setting. Biology of Disease Vectors. , Elsevier. San Diego. (2005).
- Jones, L. D., Davies, C. R., Steele, G. M., Nutall, P. A. The rearing and maintenance of ixodid and argasid ticks in the laboratory. Animal Technology. 39, 99-106 (1988).
- Slovák, M., Labuda, M., Marley, S. E. Mass laboratory rearing of Dermacentor reticulatus ticks (Acarina, Ixodidae). Biologia, Bratislava. 57 (2), 261-266 (2002).
- Rechav, Y., Dauth, J. Development of resistance in rabbits to immature stages of the Ixodid tick Rhipicephalus appendiculatus. Medical and Veterinary Entomology. 1, 177-183 (1987).
- Zacarias do Amaral, M. A., Azevedo Prata, M. C., Daemon, E., Furlong, J. Biological parameters of cattle ticks fed on rabbits. Brazilian Journal of Veterinary Parasitology. 21 (1), 22-27 (2012).
