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Bioengineering

내 시경 Submucosal 주입 재료 성능 평가 대 한 새로운 Ex Vivo 모델

Published: October 19, 2018 doi: 10.3791/58029

Summary

우리는 새로운 비보 전 모델을 돼지 위 견본에 적용 되는 일정 한 긴장을 개발 했다. 이 개발 다양 한 심즈의 성능 (높이 및 submucosal 상승의 기간)를 정확 하 게 평가 하는 게 가능 했다.  이 새로운 모델의 자세한 설정 방법을 설명 합니다.

Abstract

Submucosal 주입 재료 (SIMs)의 성능을 향상 하는 것이 조기 위 암의 내 시경 치료에 대 한 중요 합니다. 설정 비보 전 모델 심즈 높은-성능 개발을 위한 SIM 성능을 정확 하 게 평가할 수 있는 필수적 이다. 우리의 이전 연구에서 우리는 견본의 끝에 일정 한 긴장을 적용 하 여 세부 사항에 다양 한 심즈의 성능을 평가 하는 데 사용할 수 모델 비보 전 새로운 개발. 우리는 또한 제안 된 새로운 ex vivo 모델 유니폼 조건과 심즈의 다양 한 종류의 공연의 자세한 비교에서 정확한 submucosal 상승 높이 (SEH) 측정을 사용 하면 확인 했다. 여기, 우리는 새로운 비보 전 기술 모델 및이 모델의 자세한 설치 방법 설명. 새로운 모델의 모든 부분 쉽게 얻을 했기 때문에, 새로운 모델의 설치는 신속 하 게 완료 될 수 있습니다. SEH 다양 한 심즈의 새로운 모델을 사용 하 여 더 정확 하 게 측정 될 수 있습니다. SIM 성능을 결정 하는 중요 한 요소는 새 모델을 사용 하 여 확인할 수 있습니다. 요소를 식별 한 후 SIM 개발 속도 대폭 증가.

Introduction

내 시경 submucosal 해 부 (ESD) 및 내 시경 점 막 절제술 (EMR)는 초기 단계의 위 암1,2현재 일반적인 치료법입니다. submucosa submucosal 주입 재료 (SIM) 주입 EMR과 ESD 절차2,3에 대 한 가장 중요 한 단계 중 하나입니다. 높은 submucosal 상승 및 submucosal 상승의 유지 보수는 EMR/ESD를 안전 하 게 실시 하기 위한 중요 한 기준입니다.

비록 정상적인 염 분 (NS) 내 시경 치료4,5, 나트륨 hyaluronate (HA)의 발명 이후 SIM으로 사용 되었습니다 최근 몇 년 동안6,7에 치료로 도입 되었다. 하는 고성능8,9,,1011인해 우수한 SIM로 내 시경 치료에 널리 이용 되었다. 현재, 기존 심즈 간의 성능 비교를 실시 했다 및 높은-성능 심즈 다른 우수한 SIM5,12,,1314, 식별 하기 위해 개발 되었다 15,,1617,18.

인간의 위장 요로에 SIM 성능 평가 매우 어려운19,,2021 때문에 ex vivo 모델 돼지 위 견본을 사용 하 여 SIM 성능을 평가 하기 위해 사용 되었습니다. , 그러나 22.,이 기존의 비보 전 모델은 매우 간단 합니다, 그리고 개선 위한 범위. 인간의 위장 점 막에 가까이 있는 환경을 재현 심 성과의 정확한 평가 수 있게 된다.

우리의 이전 연구에서 우리는 견본의 끝에 일정 한 긴장을 적용 하 여 세부 사항에 다양 한 심즈의 성능을 평가 하는 데 사용할 수 모델 비보 전 새로운 개발. 우리는 또한 제안 된 새로운 ex vivo 모델 유니폼 조건과 심즈23의 다양 한 종류의 공연의 자세한 비교에서 정확 하 게 그녀가 측정 수 확인 했다.

이 연구에서 선물이 새로운 비보 전 모델의 완전 한 모습을 하 고 새로운 비보 전 모델의 자세한 설정 방법론은 영상 및 그림을 사용 하 여 자세히 설명 합니다. 새로운 비보 전 모델 쉽게 사용할 수 있는 부품 구성 하 고 신속 하 게 설정할 수 있습니다. 자세한 설치 방법에 대 한 설명은 새로운 모델의 보급에 기여할 것입니다.

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Protocol

다음 프로토콜 교토 현 대학 의학의 동물 보호 지침을 따릅니다.

1. 돼지 위를 사용 하 여 견본의 준비

참고: 첫 번째 단계는 비보 전 모델 (그림 1)에 사용 되는 견본을 준비 하는. 돼지 위 벽의 두께 복 부의 여러 영역에서 다릅니다. 상대적으로 인간의 위장 비슷한 돼지 복 부의 상단 세번째를 사용 합니다. 부적절 한 표본 submucosal 상승 섬유 증으로 인해 발견 하지를 제외 합니다.

  1. 위 표본 6 × 6 cm의 대략적인 크기와 사각형으로 잘라.
  2. -30 ° c.의 온도에 즉시 위 견본 저장
  3. 냉동된 위 표본을 측정 절차 앞 균일 한 측정 조건 녹여

2. 자세한 설치 새로운 Ex Vivo 모델의 방법론

참고: 두 가지 방법으로 보드에 해 동된 견본 밖으로 스트레칭. 기존의 비보 전 모델에서 표본 핀 (그림 1A)19,20,,2122수정. 다른 한편으로, 새로운 ex vivo 모델에서 수정 또는 일정 한 긴장 (그림 1B, C)를 생산 하기 위해 클립 견본의 양쪽 끝을 스트레칭. 새로운 모델의 모든 부품은 쉽게 얻을, 그리고 새 모델의 설치를 신속 하 게 완료 될 수 있다 (그림 2). 새로운 모델의 절차는 다음과 같습니다 (그림 3).

  1. 스테인리스 스틸 클립 및 키 와이어와 S 모양의 갈고리 (그림 3A)를 연결 합니다.
  2. 연결 철사와 S 모양의 갈고리와 무게 (그림 3A).
  3. 와이어의 다른 쪽 끝에 후크를 연결 합니다. 견인 장치 (그림 3B) 위의 과정에서 완료 됩니다.
  4. 자료 (그림 3C)의 양쪽 끝에 폴 리 (그림 2b) 수정.
  5. 고무 격판덮개 (6 x 6 cm) 자료 (그림 3C)의 중앙에 놓습니다.
  6. 고무 격판덮개 및 견인 장치의 클립 끝나는 표본 핀치에 위 견본을 놓습니다.
  7. 도르래 (양쪽)을 통해 무게를 끊지. 따라서, 일정 한 긴장 (그림 4) 견본에 적용할 수 있습니다.
  8. SEH, 측정을 시작 하는 때문에 새로운 모델의 설치가 완전히 끝난 후 (참조 3 단계 아래).

3입니다. SIM 성능 평가

참고:이 연구에서 우리 사용 정상적인 염 분 (NS) 및 0.4% 나트륨 hyaluronate (HA) 심즈로 테스트 하 고 두 심즈의 SEH를 측정. 3 개의 독립적인 측정을 수행 합니다. 취득된 데이터는 평균 및 표준 편차 (사 우 스 다코타)으로 표시 됩니다. 통계 분석은 통계 분석 소프트웨어 (GraphPad Prism 7)를 사용 하 여 수행 되었다. 연속 변수 (SEH) 분석 < 0.05 스튜던트 t-검정와 P로 크기가 중요 한 고려 되었다. SEH의 측정은 다음과 같습니다 (그림 5).

  1. Submucosal 상승 절차 전에 점 막의 높이에 따라 높이 게이지의 0 점 조정을 수행 합니다. 자세히 점 막 표면의 높이에 선 침 고정 후 사전 버튼을 누르면 영점 조정을 수행 합니다.
  2. Submucosa submucosal 상승 절차 (그림 5A-C)를 2.5 mL 주사기와 23 게이지 바늘을 사용 하 여 견본 여백에서에 수평 각 솔루션의 2.0 mL를 주입 수 있습니다.
  3. SEH 즉시 사용 하 여 디지털 높이 게이지 0, 2.5, 5, 7.5, 10, 12.5, 15, 17.5, 20, 30, 45, 및 60 분에 주사 (그림 5D) 후 측정 합니다. 자세하게에서 submucosal 상승의 정상에 선 침 고정 높이 게이지에 표시 된 높이 기록 합니다.
  4. 3 개의 독립적인 측정을 수행 하 고 얻은 결과 평균 및 표준 편차로 표현.
  5. 적절 한 통계 소프트웨어를 사용 하 여 얻은 데이터를 분석 하 고 심즈 (성능을 각 SIM 사이 비교할 수 있습니다.)의 성능 평가

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Representative Results

SEH 새로운 비보 전 모델 또는 기존 비보 전 모델에서 시간이 지남에 따라 측정 했다. 값의 SEH (NS) [NS는 주입 핀 (0.0 N) 고정 표본 submucosa] 기존의 모델을 사용 하 여 측정 했다 5.7 m m (0 분), 3.6 m m (5 분), 3.0 m m (10 분), 그리고 2.2 m m (30 분). 이 방법에서는, SEH 값 게시물 사출 시간 증가 함께 감소. 유사한 분석은 0.4%를 사용 하 여 수행한 NS 대신 하. SEH의 값 (0.4 %HA)은 6.5 m m (0 분), 5.2 m m (5 분), 4.8 m m (10 분), 그리고 4.1 m m (30 분). 0.4%의 결과 SEHs HA 포스트 주입 시간에 NS의 그들 보다는 더 했다. SEHs (NS 및 0.4 %HA) 전시 (적용 된 긴장의 부재)에 기존의 모델 상대적으로 큰 변화를 사용 하 여 얻은 (다른 말로 하면, 그들의 표준 편차 높았습니다) (그림 6A).

다음, 값의 SEH (NS) [NS는 일정 한 긴장 (1.5 N)에서 뻗어 견본 submucosa에 주입 했다] 기존의 모델을 사용 하 여 측정 했다 4.8 m m (0 분), 3.0 m m (5 분), 2.4 m m (10 분), 그리고 1.8 m m (30 분). 3.0 N 동일한 조건 하에서 긴장 증가, SEH (NS)의 값은 4.5 m m (0 분), 2.3 m m (5 분), 1.5 m m (10 분), 1.3 m m (30 분). SEH 긴장 증가 함께 감소 하는 다양 한 포스트 주입 시간에 측정 합니다. 새로운 모델 전시 작은 변화를 사용 하 여 얻은 SEHs (즉, 그들의 표준 편차는 낮은) (그림 6B, C).

SEH와 표본에 적용 하는 긴장 관계를 평가 대 한 우리 SEH 다른 긴장에서 측정 비교 (0.0-3.0 N). 새로운 모델 분석, 3.0 N의 긴장에서 SEH은 1.5 N의 긴장에서 SEH 보다 훨씬 낮은 (모든 경우에, 조건 P < 0.001 만족 했다). 대조적으로, 표준 편차는 기존 모델 (0.0 N)를 사용 하 여 얻은 SEHs의 높은 했기 때문에, 없었다 SEHs 기존 모델 (0.0 N)와 새 모델 (1.5 N)를 사용 하 여 얻은 사이의 큰 차이 (그림 6D, E).

Figure 1
그림 1입니다. 새로운 비보 전 모델 하 고 기존의 비보 전 모델. 기존의 비보 전 모델에서 돼지 표본 핀 (A)수정 되었습니다. 다른 한편으로, 새로운 비보 전 모델에는 시료의 양 끝 클립 (B)일정 한 긴장을 생성 하 기지개 했다. 이 모델은 무게를 사용 하 여 균일 하 게 tensioned 수 그리고 긴장은 무게 (C)를변경 하 여 배열 될 수 있다. 각 SIM submucosal 상승 (D)로 이어지는 견본 submucosa에 주입 했다. 이 그림 히로세 에서 수정 되었습니다. 23. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

Figure 2
그림 2입니다. 새 모델에 사용 되는 모든 파트가. 쉽게 사용할 수 있는 부품이 새로운 비보 전 모델에 의하여 이루어져 있다. 새로운 비보 전 모델에 사용 되는 모든 부품: (a) 약 50-300 g의 무게 (무게 바뀔 수 있다 적절 하 게 적용 된 긴장에 따라서); (b) 고정 타입 도르래 도르래 직경 25 mm; (c) 스테인리스 와이어 직경 0.45 mm; (d) 스테인리스 클립 폭의 147 m m; (e) 스테인리스 키 와이어 길이가 12 cm; ((f)) 스테인레스 스틸 S 모양의 갈고리; (g) 잠금 스테인레스 스틸 S 모양의 훅. (이 그림에는에서 수정 된 히로세 외. 23). 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

Figure 3
그림 3입니다. 새로운 비보 전 모델의 자세한 설치 방법. 새로운 비보 전 모델을 신속 하 게 설정할 수 있습니다. (A) 연결 스테인리스 클립 (그림 2)와 (그림 2e) 키 와이어와 S 모양의 연결 (그림 2 g). 다음에 연결 와이어 (그림 2c), S 모양의 갈고리 (그림 2f)와 무게 (그림 2a). (B) 마지막으로, 와이어 (그림 2c)의 다른 쪽 끝을 연결 (그림 2 g)을 연결 합니다. 견인 장치는 위의 과정에서 완료 됩니다. (C) 자료 [직사각형 나무로 되는 기초 (45 x 60cm) 모델을 조립]의 양쪽 끝에 폴 리 (그림 2b) 수정. 다음으로, 기지의 중심에 고무 격판덮개 (6 x 6 cm)를 배치 합니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

Figure 4
그림 4입니다. 새로운 비보 전 모델의 완전 한 모양입니다. 그녀의 정확한 측정을 수행할 수 있습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

Figure 5
그림 5입니다. 새로운 비보 전 모델을 사용 하 여 측정 절차. SIM 성능을 평가 하기 위해 SEH의 크기는 디지털 높이 게이지 (A)에 의해 측정 되었다. 23 게이지 바늘으로 2.5 mL 주사기를 사용 하 여, 각 SIM의 2.0 mL submucosal 상승 (B, C)를만드는 견본 여백에서 submucosa에 주입 했다. 디지털 높이 게이지 submucosal 상승의 높이의 측정 하는 데 사용 되었다 (., SEH 값) (D). 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

Figure 6
그림 6입니다. SEH 사용 하 여 새 또는 기존 모델의 측정. 주사 후 NS 또는 0.4% 하는 시료의 submucosa에 고정 핀 (0.0 N) (A) 또는 일정 한 긴장 (1.5 N 또는 3.0 N)에서 뻗어 (B, C), SEH 측정 했다 높이 게이지를 사용 하 여. 다음으로, 우리는 SEH NS (D) 또는 0.4%의 submucosal 주입 후 다른 긴장 (0.0, 1.5, 및 3.0 N)에서 측정 된 값 비교 하 (E). 데이터는 3 개 이상의 독립적인 실험의 평균 ± 사 우 스 다코타로 표현 됩니다. (이 그림에는에서 수정 된 히로세 외. 23) 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

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Discussion

새로운 모델에 사용 되는 돼지 위장 절제술, 후 즉시 냉장고에 저장 한다 그리고 동결, 돼지 위장의 신선도 SEH 측정을 위해 필수적 이므로 후 몇 개월 이내에 사용. (우리 SEH 모두 고정 영역과 위 표본를 사용 하 여 측정 하 고 SEH 측정의 결과에 차이가 있었다는 것을 확인 했다.)

위 표본의 품질은 돼지 위장의 개별 차이 의해 크게 좌우 된다. 따라서, 분명 두꺼운 표본 또는 측정 하기 전에 많은 주름과 표본 제외 하는 것이 좋습니다. 또한, 일부 표본 섬유 증 때문 SEH 측정에 대 한 부적절 한 표본 수 있습니다. 부적절 한 표본 submucosal 상승 섬유 증으로 인해 발견 하지를 제외 하는 것이 좋습니다.

소화 관 내 시경 치료에 의해 확장 되 고 있기 때문에, 어떤 긴장 위장 점 막에 적용 됩니다. 그것은 SIM 성능 (SEH의 값을 측정 하 여 평가)는 견본에 적용 하는 긴장의 값을 증가 함께 감소 밝혀졌다. 따라서, 긴장은 SIM 성능에 영향을 미치는 중요 한 요소 (., SEH 값)23. 1.5-3.0 N의 긴장의 응용 프로그램 환경 인간의 위장 점 막에 가까이 재현할 수 있습니다. 그러나,이 방법의 한계는 최적의 긴장 견본 분석을 위한 사용의 차이에 따라 달라질 수 있습니다.

기존의 모델에서 긴장에 적용 이후 각 견본 견본 고정의 정도 따라, 측정된 SEH의 변이 큰 (는 SEH의 높은 표준 편차에 대응). 따라서, 이러한 높은 표준 편차 어렵게 자세히 각 SEH를 비교 하 여 통계 분석을 수행. 다른 한편으로, 때문에 SEH 새 모델에서 측정의 작은 변화, SIM 성능을 비교할 수 있습니다 정확 하 게 비보 전 및 정확한 통계 분석 수행 됩니다.

결론적으로, 새로운 ex vivo 모델 정확한 SEH 측정 및 SIM 성능의 상세한 비교 수 있습니다. 자세한 설치 방법에 대 한 설명은 새로운 모델의 보급 및 높은-성능 자료의 개발에 기여할 것입니다.

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Disclosures

저자는 공개 없다.

Acknowledgments

이 작품은 지원 되는 교토 혁신적인 의료 기술 연구 개발 지원 시스템에 의해 및 변환 연구 프로그램; 의료 연구 및 개발 (아메드) 일본 기관에서 혁신적인 의료 기술 (TR-스 프린트)의 실제적 적용에 대 한 전략적 추진.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
weight (153.1 g)
fixed type pulley H.H.H. MANUFACTURING VS25
stainless steel wire with a diameter of 0.45 mm Nissa Chain Cut wire Y-5
stainless steel clip of width 147 mm KOKUYO none
stainless steel key wire with a length of 12 cm Nissa Chain P-702
stainless steel S shaped hook TRUSCO NAKAYAMA TCS1.2
lockable stainless steel S-shaped hook Mizumoto Machine Mfg B2054
rectangular wooden base (45 x 60 cm) none none
rubber plate (5 x 5 cm) none none
digital height gage Mitutoyo HDS-20C
2.5-mL syringe Terumo SS-02SZ
23-gauge needle Terumo NN-2332R
MucoUp Boston Scientific none 0.4% sodium hyaluronate (HA)
saline (20 mL) Otsuka Pharmaceutical none normal saline (NS)
GraphPad Prism 7 software GraphPad Inc none

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References

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생명 공학 문제 140 내 시경 점 막 절제술 내 시경 submucosal 해 부 submucosal 사출 소재 ex vivo 모델 위장 신생 submucosal 상승 높이
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Hirose, R., Daidoji, T., Naito, Y.,More

Hirose, R., Daidoji, T., Naito, Y., Dohi, O., Yoshida, N., Yasuda, H., Konishi, H., Nakaya, T., Itoh, Y. A New Ex Vivo Model for the Evaluation of Endoscopic Submucosal Injection Material Performance. J. Vis. Exp. (140), e58029, doi:10.3791/58029 (2018).

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