Summary
ב פרוטוקול זה, אנו מתארים שיטה micropipette ישירות להחיל כוח מבוקר את הגרעין בתא החי. Assay הזה מאפשר חקירת תכונות מכניות הגרעין בתא חי, חסיד.
Abstract
התכונות המכאניות של הגרעין לקבוע את תגובתה מכני הכוחות שנוצר בתאים. מכיוון הגרעין מולקולרי רציפה עם שלד התא, שיטות נחוצים כדי לחקור את התנהגותו מכני בתאים חסיד. כאן, אנו נדון החללית כוח ישיר ( DFP) ככלי להפעיל כוח באופן ישיר הגרעין בתא חסיד חי. אנחנו לצרף micropipette צרים על פני השטח גרעיני עם השאיבה. Micropipette מתורגמת הרחק מהגרעין, הגורמת הגרעין לעוות ולתרגם. כאשר הכוח שחזור שווה כוח יניקה, הגרעין לניתוק ונרגע elastically. בגלל הלחץ היניקה הוא ידוע במדויק, הכוח על פני הגרעין ידוע. שיטה זו חשפה כי בקנה מידה ננו כוחות מספיקים לעוות ולתרגם את הגרעין בתאים חסיד, זיהה רכיבים cytoskeletal המאפשרים את הגרעין להתנגד כוחות. DFP ניתן לנתח התרומות של רכיבים הסלולר וגרעיני תכונות מכניות הגרעין בתאים חיים.
Introduction
פתולוגיות כגון סרטן כרוך שינויים גרעיני צורה, מבנה1,2, אשר באופן כללי מלוות של "ריכוך" של גרעין3,4. התנגדות גרעיני דפורמציה מכאנית בדרך כלל התאפיין החלת כוח מבודדים גרעינים5.
הגרעין בתאים מחובר מולקולרי שלד התא על ידי מקשר של Nucleoskeleton שלד התא (לינק) מורכב6,7,8,9. כתוצאה מכך, הגרעין מכנית משולב עם שלד התא ודרכו תא-תשתית הדבקויות, מטריצות. מכנית חיטוט הגרעין בתוך תאים חסיד יכול לספק תובנה זו אינטגרציה מכנית. שיטות לטפל גרעין תאים חיים כוללים micropipette שאיפה10,11,13,12,מיקרוסקופ כוח אטומי14. אנחנו לאחרונה תיאר בדיקה ישירה כוח ( DFP) שחל כוחות מכני ישירות על גרעין תא חסיד חי15.
כאן, אנחנו חלוקה לרמות נוהל באמצעות מערכת microinjection זמין בדרך כלל במתקנים מיקרוסקופ כדי להחיל כוח מכני ידוע, בקנה מידה ננו ישירות על גרעין תא חסיד. Femtotip (0.5 מיקרומטר קוטר micropipette tip) רכוב, המחוברים למערכת microinjection באמצעות צינור. הטיפ, מוצבים בזווית של 45 מעלות ביחס השטח של המנה תרבות, היא יורדת עד סמוך אל פני השטח גרעינית. הצינור ואז מנותק ולאחר שנפתח לאווירה, אשר יוצרת לחץ שאיבה שלילי על פני הגרעין, חותמות את הטיפ micropipette נגד פני השטח גרעינית. באמצעות תרגום של קצה micropipette, הגרעין מעוותים, בסופו של דבר (בהתאם לגודל הכוח חלה), מנותקת את micropipette. בחבורה הזאת מתרחשת כאשר הכוחות (התנגדות) שחזור, המופעל על ידי גרעין התא, שווה את כוח היניקה שהחיל את micropipette. הניתוח יכול להתבצע על ידי מדידת הפיזור של הגרעין, המתח אורך (משוואה 1), או המתח באזור (איור 1 א').
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. מכינים את התאים עבור הדמיה
הערה: החללית כוח ישיר ( DFP) יכול לשמש עבור כל סוג התא חסיד. כאן, NIH 3T3 העכבר fibroblasts משמשים את שורת התאים מודל עבור פרוטוקול זה.
- תאי פיברובלסט 3T3 תרבות NIH בינוני (DMEM ששינה הנשר של Dulbecco) בתוספת 10% התורם שור סרום ו 1% פניצילין-סטרפטומיצין על 35 מ מ זכוכית התחתונה מגישים עד confluency הרצוי. לשמור על תאים-CO 37 ° C ו-5%2.
- הקפד מעיל כל המנות התחתון 35 מ מ זכוכית עם 5 µg/mL fibronectin (או חלבון ה-ECM דומה), לפני זריעה NIH 3T3 תאים עבור הדמיה.
הערה: התאים יש מלא למרוח, חסיד על המנה לניסוי. אין אילוצי במונחים של confluency עבור שיטת DFP לעבודה.
- הקפד מעיל כל המנות התחתון 35 מ מ זכוכית עם 5 µg/mL fibronectin (או חלבון ה-ECM דומה), לפני זריעה NIH 3T3 תאים עבור הדמיה.
- מיד לפני הניסוי, לשטוף את התאים פעמיים עם PBS ולאחריה שטיפה אחת עם מדיום הגידול מלאה.
- להוסיף 3 מ"ל של מדיום הגידול מלאה המנה קרקעית זכוכית.
2. מיקרוסקופ ורכישת תמונות
הערה: הפוכה פלורסצנטיות מיקרוסקופ (או שווה ערך) עם micromanipulator מותקן לזרוע בצד, על פי ההמלצות של היצרן. המיקרוסקופ צריך להיות מאובזר גם עם חדר סביבתיים לשמירה על הטמפרטורה ב 37 מעלות צלזיוס ורמת CO2 ב-5%. נדרש גם micromanipulator עם microinjector מחובר המיקרוסקופ. טבילה שמן x 40 / 1.3 נה או 60 x / 1.49 NA (או מטרות שוות ערך) מומלץ לקבל הניסויים. המיקרוסקופ צריך להיות מותקן על שולחן בידוד רטט.
איור 1 . דפורמציה גרעיני ומיקוד מיקרוסקופ
א דפורמציה מקסימלית גרעיני ורגיעה של דפורמציה גרעינית. לפני חישוב דפורמציה מקסימלית גרעינית, הקצוות האחורי של צורות גרעיני היו קודם בד בבד לתקן את התרגום של גרעין מעוותים. הצורה של הגרעין ברגע של ניתוק עצה micropipette ומצופה על-גבי צורת הגרעין הראשוני לפני שנעלם. ההבדל באזור בין שתי הצורות נמדדה כ Δ1. להרכב גרעיני מרבי מוגדר כδA1 מחולק באזור הגרעין המקורי. באופן דומה, פרמטר השני, ΔA2, עשויה להיות מוגדרת על-ידי השלכת צורת הגרעין מצב יציב הסופי לאחר ניתוק micropipette על-גבי צורת הגרעין המקורי. B. למקד את התא-A המטוס ולאחר מכן הזז את מטוס מוקד עד המטוס B כדי למצוא את הטיפ micropipette. במהלך דימות, micropipette היה לתרגם את הזכות (כיוון החץ הכתום). איור זה השתנה מ קיראן ואח. 15. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
- הפעל את microinjector לכל הפרוטוקול של היצרן.
- בעזרת טפטפת שמן של טבילה, להחיל טיפת שמן טבילה על גבי העדשה אובייקטיבי.
- תהדק את המנה בחוזקה לתוך בעל צלחת וטען בעל צלחת לבמה.
הערה: התאים חייב להישמר-37 מעלות צלזיוס ו-5% CO2 לאורך כל הניסוי. - להתאים את גובה המטרה להביא את התאים אל המוקד (A המטוס, איור 1B).
- הזז את הבמה מיקרוסקופ כדי למצוא תא עניין.
- לסובב את מוט ההיגוי על micromanipulator כדי לעבור על בעל pipet המיקום העליון. טען את micropipette עצה בקוטר 0.5 מיקרומטר על בעל pipet.
- כדי למנוע הידבקות תאים כדי micropipette, מראש לפנק את הטיפ micropipette עם 0.3 מ"ג/מ"ל PLL-g-יתד פתרון עבור 1 h בטמפרטורת החדר. מבחן הדבקה על ידי נגיעה את micropipette את הגרעין וללא לחץ היניקה, ולאחר מכן תרגום של micropipette הרחק מהגרעין. העדר אדהזיה וריחו מורגש חוסר מוחלט דפורמציה גרעיני ותרגום.
הערה: אנא עקוב אחר ייצור הצעות כדי לפתוח את החבילה.
- כדי למנוע הידבקות תאים כדי micropipette, מראש לפנק את הטיפ micropipette עם 0.3 מ"ג/מ"ל PLL-g-יתד פתרון עבור 1 h בטמפרטורת החדר. מבחן הדבקה על ידי נגיעה את micropipette את הגרעין וללא לחץ היניקה, ולאחר מכן תרגום של micropipette הרחק מהגרעין. העדר אדהזיה וריחו מורגש חוסר מוחלט דפורמציה גרעיני ותרגום.
- להעלות את המטוס מוקד אובייקטיבית מעל המטוס A והעליונה של התא על מטוס B על ידי התאמת הפקד בסדר (איור 1B, ראה שלב 2.4).
- הגדר את micromanipulator מחוספס בפקד. לאט לאט להביא את micropipette אל המטוס B על ידי צופה על הצללית של micropipette, עד micropipette מגיע באופן מלא אל המוקד.
- לאחר קצה micropipette בפוקוס, הגדר את micromanipulator שליטה טובה .
- להוריד את המטרה קו המשווה של התא (א המטוס, איור 1B) ולהוריד את micropipette בסביבות 15 מיקרומטר מעל המטוס א (איור 1B, micropipette מקווקו).
- להגדיר את הלחץ פיצוי (P.c) microinjector ללחץ הרצוי; המתן מספר שניות עד הלחץ עד שהוא יתייצב.
הערה: שנקבעה מראש הלחץ האופטימלי תלוי סוג התא והן את מטרותיה של הניסוי. ברוב המקרים, 300 hPa יהיה נקודת התחלה טובה. - ודא כי micropipette זה לא סתם באמצעות ההגדרה נקיים בלוח micromanipulator ו בודק כדי לוודא בועות אוויר מגיחים הטיפ micropipette.
- הכנס את הטיפ לתוך התא על-ידי הנמכת בהדרגה את micropipette עד הטיפ נוגעת בקלילות על פני הגרעין.
הערה: כאשר מורידים את micropipette, הצללית של קצה micropipette יתבהר כפי שהוא מגיע אל המוקד. לפני micropipette נוגע הגרעין, להעלות את המוקד אובייקטיבית, ליישר את הטיפ micropipette עם גרעין (באותו x-y רביע, z-מישור גבוה יותר). להחזיר את הפוקוס בחזרה קו המשווה של הגרעין (A המטוס, איור 1B) ולהוריד בהדרגה את הטיפ micropipette. - ליצור חותם בין קצה micropipette את קרום גרעיני על ידי ניתוק הצינור אספקת לחץ מן המערכת microinjection, ובכך פותח בסוף הצינור micropipette לאווירה. שלב זה יוצר לחץ שלילי שווה ל- Pc על פני הגרעין.
- לרכוש תמונות עם התוכנה אוסף תמונות מיקרוסקופ. הגדר של אבי-רכישה (וידאו) או nd-רכישה (תמונות) בתוכנה אוסף תמונות.
הערה: עבור כל רכישת תוכנת הדמיה, להגדיר הדמיה וידאו בזמן אמת או רכישות תמונות בצילום מואץ עם מרווח זמן קצר. - לעבור כדי פלורסנט התואם הדמיה ערוץ (קרי, ה-GFP, RFP, וכו) ולהתחיל הדמיה.
- לתרגם את הטיפ micropipette, והגוף של התא (מימין, איור 1B) עד לגרעין לניתוק מן micropipette.
הערה: משוך את הקצה לאורך הכיוון-x חיובי (מימין עם שדה הראייה). הקצב מושך יכול להיות מתוכנת, נשלט על-ידי מחשב או הג'ויסטיק ניתן להעביר באופן ידני. לא נמצא כל מתאם בין הוצאת גרעיני דפורמציה15 מציע מענה בעיקר אלסטי לכפות וקצב.
3. ניתוח נתונים
- לבצע ניתוח תמונות עם תוכנות עיבוד תמונה בסיסי זמינים. ניתן לכמת את מידת דפורמציה גרעיני על ידי המתח אורך (Ɛ) או המתח באזור (איור 1 א'). לכמת אורך המתח באמצעות משוואה 1, איפה L ו- L0 מייצג את המרחק של הגרעין-דפורמציה מקסימלית ואת המיקום הראשוני, בהתאמה.
(משוואת 1)
(משוואת 1)Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
איור 2A מראה שהאילוץ של גרעין פיברובלסט העכבר NIH 3T3. הטיפ micropipette מתורגם מימין, הגרעין מתעוות, בסופו של דבר לניתוק מהקצה micropipette. המתח אורך של הגרעין נתפסת להגדיל עם הגדלת כוח יניקה (איור 2B). הקצה הקדמי של הגרעין (micropipette משיכת הקצה) יוצר בליטה גרעינית, הקצה נגרר מעקורי ממיקומה המקורי. האורך של בליטה היא הרבה יותר גדולה מאשר העקירה בקצה (איור 2C), מציע שילוב הדוק בין הגרעין לבין הציטופלסמה שמסביב. המאזניים זמן הם קיצור של הרפיה של הקצה הקדמי גרעינית (< 1 s), לבין הקצה האחורי גרעינית (< 2 s) (איור דו-ממדי).
איור 2 . אפיון הגרעין להרכב
דפורמציה ותזוזה של גרעין תא חי, חסיד מאת DFP. גרעין פיברובלסט 3T3 NIH נמשך בכוח nN 6. התמונות להראות את הצורה גרעיני ברגע המתאים. סרגל קנה מידה: 5 מיקרומטר דפורמציה גרעיני ב' הייתה לכמת על ידי אורך המתח. להרכב גרעיני גדל עם כוחות יישומית. קווי שגיאה מציינים את שגיאת התקן של הממוצע (SEM); n > 6. ג. העקירה בחוד גדול יותר העקירה בקצה נגרר. ד. הרפיה זן אורך הוא הרבה יותר מהר מאשר הקצה האחורי הרפיה. P < 0.05; קווי שגיאה לציין SEM; n = 10. איור זה השתנה מ קיראן ואח. 15. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
השתמשנו בשיטת DFP כדי לקבוע כיצד cytoskeletal כוחות לתרום התנגדות גרעיני דפורמציה בתא. בעוד אין הבדלים משמעותיים דפורמציה גרעינית או תרגום נמצאו לאחר F-אקטין (על-ידי cytochalasin-D) או הפרעה microtubule (על-ידי nocodazole), הפחתת הביטוי vimentin מבוססי siRNA נוקאאוט, גרמו גדול משמעותית תרגום גרעינית, דפורמציה (איור 3). הדבר מצביע על כך vimentin ביניים ב fibroblasts זיריהם היסוד cytoskeletal העיקרי לסייע לגרעין להתנגד בכוח מקומי.
איור 3 . פלורסנט תמונות של גרעיני להרכב
DFP שימש כדי לקבוע את התרומה של כוחות cytoskeletal דפורמציה גרעינית. הגרעין הוכתם SYTO 59 צבע. תמונות פלורסנט להראות הכיסוי של הגרעין לפני (אדום, צבע מדומה) ואחרי (ירוק, צבע מדומה)-התנאי שצוין. CTRL, תאים שליטה; CYTO-D, תאים שטופלו cytochalasin-D; המבצעי, תאים שטופלו nocodazole; . תתחפף, תאים transfected עם ביצים מקושקשות siRNA; vim siRNA, תאים transfected עם siRNA מיקוד vimentin. איור זה השתנה מ קיראן ואח. 15. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
מדידת השילוב מכני של הגרעין עם שלד התא היא אתגר עבור שיטות העדכנית ביותר, כמו השאיפה micropipette16, כי הם דורשים גם גרעינים בודדים (הגרעין איפה decoupled מ שלד התא) או הגרעינים מושעה תאים (היכן כוחות חוץ-תאית, כמו כוחות המתיחה, נעדרים). כוח הוחל את הגרעין על-ידי החלת זן biaxial תאים ו"היסטוריון17,ממברנה18; עם זאת, טכניקה זו מוגבל על ידי העובדה כי הכוח על הגרעין אינו ידוע. כוח אטומי (AFM) מיקרוסקופיה הגששים שימשו כדי להסיט פנימה את הגרעין בתאים שלמים; אלה מציעים יתרון כי הם חושפים תכונות מכאניות של גרעין עוד זה משולב עם שלד התא. כדי להוסיף שיטות ויוו , קיימים עבור אפיון גרעין12,13,14, פיתחנו שיטה פשוטה חזקים כדי לחקור באופן מכני את הגרעין בתא חסיד חי בזמן זה נשאר משולב שלד התא שמסביב. תכונה מרכזית של טכניקה זו היא כי הכוח על הגרעין בדיוק ידוע, מבוקר.
על-ידי החלת את DFP, אנו מעריכים כי כוחות בקנה מידה ננו-ניוטון מספיקים לעוות ולתרגם את הגרעין בתאים חיים, חסיד. יתר על כן, דרך מחקרים שיטתיים של התרומות של אלמנטים cytoskeletal שונים, מצאנו כי vimentin מבוססי חוטים ביניים הם המרכיב העיקרי של שלד התא הסלולר אחראי stiffening לגרעין התא 15.
מספר האזהרות להחיל עם הניסויים. חשוב לבדוק באופן סדיר את עצת micropipette עבור סתימת או שבירה במהלך הניסויים, כמו שני סתימת micropipette או שבר של הקצה יגרום שינויים לא ידוע לחץ היניקה שהוחלו על התא. כדי לבדוק אם micropipette זה סתם, השתמש בהגדרה נקיים על manipulator הפעילו לחץ מירבי ולבדוק עבור בועות אוויר העולה מן הקצה micropipette. אם הקצה micropipette שבור או סדוק, להחליף את micropipette לפני תחילת הניסוי הבא. בנוסף, חשוב לוודא כי המתח הגרעיני משתנה עם הכוח, הוא אפס-אפס כוח (ראה קיראן. et al. 15)-זה לא נצפית בניסויים, אם זה אפשרי כי אדהזיה שאינם ספציפיים בין הטיפ micropipette פני השטח גרעינית (למרות טיפול עם PLL-יתד) עשוי להיות אחראי דפורמציה גרעינית. מגבלה נוספת של הטכניקה היא כי החדרת micropipette לתוך התא עצמו עלולה לגרום וייתכנו שיבושים המקומי של מבנים cytoskeletal.
זה שימושי לבדוק את מתאמים בין מידת דפורמציה גרעיני/תרגום קצב הטעינה. היעדרות של המתאם ירמוז התנגדות בעיקר אלסטי. ואכן, זה מה שמצאנו יהיה המקרה פיברובלסט גרעינים15. בעוד הכוח על הגרעין ידוע, השיטה אינה מאפשרת חישוב פרמטרים כמו האלסטיות. בעיקר השתמשנו בו כדי לנתח תרומות של מבנים הסלולר למחתרת דפורמציה גרעינית, התרגום בתא. בעוד אנו מדווחים על מימדי צורות גרעיני15,19, זה עשוי להיות שימושי כדי לכמת את צורת הגרעין תחת כוח מלא תלת-ממדי.
לחץ היניקה micropipette ידוע, אבל זה גדול יותר מאשר הלחץ בפועל חלה על תאריך היעד משטח גרעיני זרימה של מים דרך נקבוביות10. עם זאת, אנחנו הראו כי ההתנגדות לזרום דרך נקבוביות הגרעין היא הרבה יותר גדולה דרך micropipette (ראה מידע תמיכה לחישובי ב קיראן. et al. 15) עבור ממברנה סביר permeabilities ו- micropipette מידות. לכן, הלחץ על פני הממברנה החיצונית צריך להיות שווה תחת לחץ היניקה קיומן של זרימה.
לסיכום, DFP מאפשר למשתמש לכמת תגובת מכני משולב הגרעין-שלד התא תא חסיד כוח ידוע ומבוקר. ניתן להשתמש בשיטה זו כדי לנתח התרומות של ההרכב המולקולרי בגרעין, בציטופלסמה על ההתנהגות מכני של הגרעין בתוך התא.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
המחברים אין לחשוף.
Acknowledgments
עבודה זו נתמכה על ידי NIH R01 EB014869.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| FluoroDish | WPI | FD35 | |
| SYTO 59 | ThermoFisher Scientific | S11341 | |
| Femtotips | Eppendorf | 930000043 | |
| InjectMan NI2 | Eppendorf | NA | discontinued, current equivalent model: InjectMan 4 |
| FemtoJet | Eppendorf | NA | Current model FemtoJet 4i |
| Plan Fluor oil immersion 40x | Nikon | NA | |
| Apo TIRF oil immersion 60x | Nikon | NA | |
| Donor Bovine Serum (DBS) | ThermoFisher Scientific | 16030074 | NIH 3T3 serum |
| Dulbecco's Modification of Eagle's (DMEM) | Mediatech cellgro | MT10013CVRF | NIH 3T3 medium |
| Penicillin-Streptomycin | Mediatech | MT30004CIRF | NIH 3T3 medium supplement |
| Immersion Oil Type LDF Non-Fluorescing | Nikon | 77007 | Immersion oil for objective lens |
References
- Chow, K. H., Factor, R. E., Ullman, K. S. The nuclear envelope environment and its cancer connections. Nature Reviews Cancer. 12 (3), 196-209 (2012).
- Zink, D., Fischer, A. H., Nickerson, J. A. Nuclear structure in cancer cells. Nature Reviews Cancer. 4 (9), 677-687 (2004).
- Bank, E. M., Gruenbaum, Y. The nuclear lamina and heterochromatin: a complex relationship. Biochemical Society Transactions. 39 (6), 1705-1709 (2011).
- Lammerding, J., et al. Lamins A and C but not lamin B1 regulate nuclear mechanics. Journal of Biological Chemistry. 281 (35), 25768-25780 (2006).
- Dahl, K. N., Engler, A. J., Pajerowski, J. D., Discher, D. E. Power-law rheology of isolated nuclei with deformation mapping of nuclear substructures. Biophysical Journal. 89 (4), 2855-2864 (2005).
- Crisp, M., et al. Coupling of the nucleus and cytoplasm: role of the LINC complex. Journal of Cell Biology. 172 (1), 41-53 (2006).
- Sosa, B. A., Rothballer, A., Kutay, U., Schwartz, T. U. LINC complexes form by binding of three KASH peptides to domain interfaces of trimeric SUN proteins. Cell. 149 (5), 1035-1047 (2012).
- Tapley, E. C., Starr, D. A. Connecting the nucleus to the cytoskeleton by SUN-KASH bridges across the nuclear envelope. Current Opinion in Cell Biology. 25 (1), 57-62 (2013).
- Arsenovic, P. T., et al. Nesprin-2G, a Component of the Nuclear LINC Complex, Is Subject to Myosin-Dependent Tension. Biophysical Journal. 110 (1), 34-43 (2016).
- Rowat, A. C., Lammerding, J., Ipsen, J. H. Mechanical properties of the cell nucleus and the effect of emerin deficiency. Biophysical Journal. 91 (12), 4649-4664 (2006).
- Rowat, A. C., Foster, L. J., Nielsen, M. M., Weiss, M., Ipsen, J. H. Characterization of the elastic properties of the nuclear envelope. Journal of the Royal Society Interface. 2 (2), 63-69 (2005).
- Pagliara, S., et al. Auxetic nuclei in embryonic stem cells exiting pluripotency. Nature Materials. 13 (6), 638-644 (2014).
- Liu, H., et al. In situ mechanical characterization of the cell nucleus by atomic force microscopy. ACS Nanotechnology. 8 (4), 3821-3828 (2014).
- Krause, M., Te Riet, J., Wolf, K. Probing the compressibility of tumor cell nuclei by combined atomic force-confocal microscopy. Physical Biology. 10 (6), 065002 (2013).
- Neelam, S., et al. Direct force probe reveals the mechanics of nuclear homeostasis in the mammalian cell. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (18), 5720-5725 (2015).
- Pajerowski, J. D., Dahl, K. N., Zhong, F. L., Sammak, P. J., Discher, D. E. Physical plasticity of the nucleus in stem cell differentiation. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (40), 15619-15624 (2007).
- Lammerding, J., et al. Lamin A/C deficiency causes defective nuclear mechanics and mechanotransduction. Journal of Clinical Investigation. 113 (3), 370-378 (2004).
- Chancellor, T. J., Lee, J., Thodeti, C. K., Lele, T. Actomyosin tension exerted on the nucleus through nesprin-1 connections influences endothelial cell adhesion, migration, and cyclic strain-induced reorientation. Biophysical Journal. 99 (1), 115-123 (2010).
- Neelam, S., Dickinson, R. B., Lele, T. P. New approaches for understanding the nuclear force balance in living, adherent cells. Methods. 94, 27-32 (2016).
