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Neuroscience

एक कृत्रिम तंत्रिका का उपयोग कुत्ते अवर वायुकोशीय तंत्रिका पुनर्जनन को बढ़ावा देने के लिए इथेनॉल प्रेरित ग्रीवा सहानुभूति नाड़ीग्रंथि ब्लॉक अनुप्रयोगों

Published: November 30, 2018 doi: 10.3791/58039
Automatic Translation
1, 2, 2, 3, 3
1Department of Dental Anesthesia, Nippon Dental University Hospital at Tokyo, 2Department of Dental Anesthesiology, Nippon Dental University School of Life Dentistry at Tokyo, 3Department of Bioartificial Organs, Institute for Frontier Medical Science, Kyoto University

Summary

हम कृत्रिम तंत्रिका नाली का उपयोग तंत्रिका की मरंमत पर ग्रीवा सहानुभूति नाड़ीग्रंथि ब्लॉक के प्रभाव का मूल्यांकन किया । पुरुष बीगल कुत्तों को छोड़ दिया अवर वायुकोशीय तंत्रिका में एक 10 मिमी अंतर भर में एक कृत्रिम तंत्रिका के साथ प्रत्यारोपित किया गया; वाम ग्रीवा सहानुभूति नाड़ीग्रंथि पार्श्व thoracotomy के माध्यम से ९९.५% इथेनॉल इंजेक्शन द्वारा अवरुद्ध किया गया था ।

Abstract

Polyglycolic एसिड कोलेजन (पीजीए-सी) ट्यूबों जैव अवशोषित तंत्रिका बहु चैंबर संरचना है, जो पतली कोलेजन फिल्मों से मिलकर के कोलेजन से भरा ट्यूबों रहे हैं । अनुकूल नैदानिक परिणाम जब क्षतिग्रस्त अवर वायुकोशीय तंत्रिका (इयान) के उपचार के लिए इन ट्यूबों का उपयोग कर प्राप्त किया गया है । एक महत्वपूर्ण कारक के लिए सफल तंत्रिका पुनर्जनन पीजीए-सी ट्यूबों का उपयोग आसपास के ऊतकों को रक्त की आपूर्ति है । ग्रीवा सहानुभूति नाड़ीग्रंथि ब्लॉक (CSGB) इस प्रकार क्षेत्र में रक्त के प्रवाह को बढ़ाने के सिर और गर्दन क्षेत्र में एक सहानुभूति नाकाबंदी बनाता है । एक पर्याप्त प्रभाव सुनिश्चित करने के लिए, नाकाबंदी स्थानीय निश्चेतक एक दिन में दो बार के लिए कई लगातार हफ्तों के लिए प्रशासित किया जाना चाहिए; यह एक चुनौती है जब इस तकनीक की जांच के लिए पशु मॉडल बनाने बन गया है । इस सीमा को संबोधित करने के लिए, हम orofacial क्षेत्र में रक्त के प्रवाह में दीर्घकालिक वृद्धि के एक कुत्ते मॉडल में एक इथेनॉल प्रेरित CSGB विकसित की है । हमने जांच की कि क्या पीजीए-सी ट्यूब आरोपण के जरिए इयान पुनर्जनन को इस मॉडल द्वारा बढ़ाया जा सकता है. चौदह बीगल एक पीजीए-सी ट्यूब के साथ एक 10 मिमी के अंतर में छोड़ दिया इयान के साथ प्रत्यारोपित किया गया । इयान mandibular हड्डी से घिरा नहर के भीतर स्थित है, इसलिए हम piezoelectric सर्जरी चुना, अल्ट्रासोनिक तरंगों से मिलकर, अस्थि प्रसंस्करण के लिए, तंत्रिका और पोत चोट के जोखिम को कम करने के लिए । एक अच्छा शल्य परिणाम इस दृष्टिकोण के साथ प्राप्त किया गया था । सर्जरी के बाद एक सप्ताह, इन कुत्तों के सात इथेनॉल के इंजेक्शन द्वारा छोड़ दिया CSGB के अधीन थे । इथेनॉल प्रेरित CSGB में सुधार तंत्रिका पुनर्जनन के परिणामस्वरूप, सुझाव है कि वृद्धि हुई रक्त प्रवाह को प्रभावी ढंग से इयान दोषों में तंत्रिका उत्थान को बढ़ावा देता है । इस कुत्ते मॉडल CSGB के दीर्घकालिक प्रभाव पर आगे अनुसंधान के लिए योगदान कर सकते हैं ।

Introduction

कई मामलों में, अवर वायुकोशीय तंत्रिका (इयान) के दर्दनाक चोट iatrogenic है, अक्सर तीसरे दाढ़ के निष्कर्षण या दंत प्रत्यारोपण1,2,3के स्थान की वजह से किया जा रहा है । इयान की चोट थर्मल और स्पर्श उत्तेजना के रूप में के रूप में अच्छी तरह से paresthesia, dysesthesia, hypoesthesia, और allodynia में घाटे के लिए नेतृत्व कर सकते हैं । तंत्रिका चोट न केवल रूढ़िवादी चिकित्सा द्वारा लेकिन यह भी suturing और भ्रष्टाचार प्लेसमेंट सहित अन्य तरीकों से, इलाज किया जाता है । हालांकि, इन तरीकों कमियां है, जो अक्सर दाता साइट4,5,6में लक्षण सुधार और स्नायविक दोषों की कमी शामिल हैं ।

कृत्रिम तंत्रिका-polyglycolic एसिड-कोलेजन (पीजीए-सी) ट्यूब मूल रूप से जापान में विकसित किया गया था । यह एक जैव है अपने भीतर एक spongiform कोलेजन7से भर लुमेन के साथ अवशोषित ट्यूब । पशु प्रयोगों में, इस ट्यूब peroneal तंत्रिका दोष के साथ बीगल कुत्तों में तंत्रिका पुनर्जनन बढ़ाने के लिए इस्तेमाल किया गया था, और ऑटोलॉगस तंत्रिका प्रत्यारोपण8से वसूली के उच्च स्तर को बढ़ावा देने के लिए दिखाया गया था । पीजीए-सी ट्यूब के नैदानिक आवेदन परिधीय तंत्रिका चोटों के साथ रोगियों में २००२ में शुरू हुआ । इसके अलावा, अनुकूल नैदानिक परिणाम (इयान और बहुभाषी तंत्रिका) के उपचार में प्राप्त किया गया है9,10,11। एक महत्वपूर्ण कारक के लिए सफल तंत्रिका पुनर्जनन पीजीए-सी ट्यूबों का उपयोग कर आसपास के ऊतकों को रक्त की आपूर्ति है8। ग्रीवा सहानुभूति नाड़ीग्रंथि ब्लॉक (CSGB) सिर और गर्दन क्षेत्र में एक सहानुभूति नाकाबंदी बनाता है और संबंधित innervated क्षेत्र में रक्त के प्रवाह को बढ़ाता है12; इस प्रकार, यह जटिल क्षेत्रीय दर्द सिंड्रोम और संचार की कमी के उपचार में इस्तेमाल किया गया है13,14,15। हालांकि, रक्त प्रवाह16,17को बढ़ाने में CSGB की प्रभावकारिता पर केवल कुछ प्रायोगिक जांच की गई हैं । पर्याप्त CSGB दक्षता सुनिश्चित करने के लिए, नाकाबंदी स्थानीय निश्चेतक के साथ एक या दो बार दैनिक कई हफ्तों के लिए लागू किया जाना चाहिए, इस प्रकार एक चुनौती खड़ी जब इस तकनीक की जांच करने के लिए पशु मॉडल पैदा । इस सीमा को संबोधित करने के लिए, एक पिछले अध्ययन में, हम orofacial क्षेत्र18में लंबे समय से वृद्धि हुई रक्त प्रवाह के एक कुत्ते मॉडल विकसित की है । मॉडल ९९.५% इथेनॉल इंजेक्शन द्वारा एक CSGB प्रदर्शन द्वारा उत्पंन किया गया था । हम लेजर डॉपलर flowmetry और अवरक्त थर्मोग्राफी द्वारा मौखिक श्लैष्मिक रक्त प्रवाह और नाक त्वचा तापमान प्रति सप्ताह एक बार 12 सप्ताह के लिए मूल्यांकन किया । हमने पाया कि इस मॉडल में orofacial क्षेत्र का रक्त प्रवाह ७-१० सप्ताह के लिए बढ़ गया था.

वर्तमान अध्ययन में, हम तंत्रिका पुनर्जनन पर इथेनॉल प्रेरित CSGB के प्रभाव का मूल्यांकन किया ।
पीजीए-सी ट्यूब बाएं इयान में एक 10 मिमी के अंतर के पार बीगल कुत्तों में प्रत्यारोपित किया गया । एक सप्ताह बाद CSGB ने इथेनॉल का इंजेक्शन लगाकर प्रदर्शन किया था. तीन महीने सर्जरी के बाद, हम electrophysiological, ऊतकवैज्ञानिक की एक किस्म का प्रदर्शन किया, और रूपात्मक अध्ययन तंत्रिका उत्थान पर CSGB के प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए । हम एक पीजीए-सी ट्यूब और इथेनॉल प्रेरित CSGB का उपयोग कर इयान पुनर्निर्माण के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं ।

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Protocol

यह अध्ययन जानवरों की देखभाल और उपयोग के लिए मार्गदर्शक सिद्धांतों के अनुसार आयोजित किया गया था और क्योटो विश्वविद्यालय के पशु अनुसंधान के लिए समिति द्वारा अनुमोदित (क्योटो, जापान; प्राधिकरण संख्या: आर-16-16). सभी प्रयास पशु दुख को कम करने के लिए किए गए थे, और इस रिपोर्ट के सभी वर्गों के आने का पालन (पशु अनुसंधान: Vivo प्रयोगों में की रिपोर्टिंग) दिशानिर्देश ।

1. पीजीए-सी ट्यूब का निर्माण

  1. एक अवशोषित polyglycolic एसिड (पीजीए) ट्यूब के माध्यम से कृत्रिम तंत्रिका नाली बनाना, एक ट्यूबलर ब्रैड ४८ धुरी और पांच पीजीए फाइबर, 26 रेशा (चित्रा 1)18के बंडलों के शामिल से सुसज्जित मशीन का उपयोग करें ।
  2. पीजीए ट्यूब सतह हाइड्रोफिलिक प्रदान करने के लिए, यह प्लाज्मा निर्वहन करने के लिए बेनकाब ।
  3. हाइडरोक्लॉराइड समाधान7में 1% v/w atelocollagen का उपयोग करें ।
    नोट: Atelocollagen एंजाइम उपचार के माध्यम से सुअर का त्वचा से निकाला जाता है और एक वायरस की जांच करने के लिए अधीन । यह मुख्य रूप से प्रकार मैं (70-80%) और प्रकार III कोलेजन के होते हैं, जो अनुपात विस्तार से कहीं7में वर्णित है । १०० मिलीलीटर हाइडरोक्लॉराइड समाधान में 1 जी कोलेजन को भंग करके कोलेजन समाधान तैयार (पीएच = ३.०) । के बाद से हाइडरोक्लॉराइड समाधान के घनत्व लगभग १.० है, w/w कोलेजन एकाग्रता लगभग 1% है ।
  4. कोट एक बार में यह 5% कोलेजन हाइडरोक्लॉराइड समाधान के लिए हर बार 1% में डूबा द्वारा कोलेजन परतों के साथ ट्यूब ।
    1. सूई के बाद, कमरे के तापमान पर एक साफ बेंच पर ट्यूब सूखी । अगली सूई ट्यूब सुनिश्चित करने के बाद पूरी तरह से शुष्क है (के बारे में 6 हवा के लिए एच-सुखाने) ।
    2. कोटिंग प्रक्रिया को 10 बार दोहराएं ।
  5. विषय पीजीए-सी ट्यूब के लिए १४० ° c के लिए 24 एच के तहत वैक्यूम (dehydrothermal उपचार), जैव अवशोषण और कोलेजन अणुओं के crosslinking को नियंत्रित करने के लिए. अपूतित शर्तों के तहत संपूर्ण प्रक्रिया निष्पादित करें ।
    नोट: यह प्रक्रिया 14 मिमी अंतिम लंबाई, 3 मिमी भीतरी व्यास, और ५०-माइक्रोन दीवार मोटाई की एक ट्यूब उत्पन्न करता है ।

2. सर्जिकल प्रक्रिया सेट अप

  1. फीमेल एडल्ट पुरुष बीगल वजनी ९.० से १३.० किग्रा.
    1. अलग पिंजरों में घर जानवरों, नियंत्रित kennel शर्तों के तहत (12-एच प्रकाश और अंधेरे चक्र) ।
    2. ठोस खाद्य और जल विज्ञापन libitumप्रदान करें ।
  2. बीगल तौलना ।
  3. सभी सर्जिकल यंत्रों को आटोक्लेव ।
  4. डॉन दस्ताने निष्फल और एक ८०% इथेनॉल समाधान के साथ ऑपरेटिंग सेटिंग के सभी सतहों को संक्रमित । इस्तेमाल किया दस्ताने त्यागें ।
  5. शल्य handwashing करते हैं ।
  6. एक ताजा मुखौटा, गाउन, और बाँझ दस्ताने पर रखो ।

3. संज्ञाहरण और त्वचा की तैयारी

  1. Anesthetize के मिश्रण से कुत्ते को 5 मिलीग्राम/केजी ketamine हाइडरोक्लॉराइड और 1 मिलीग्राम/xylazine एक इंट्रामस्क्युलर इंजेक्शन के द्वारा ।
  2. ७.५ मिमी व्यास और 25 सेमी लंबाई की एक सांस ट्यूब द्वारा Intubate ।
  3. सही पार्श्व स्थिति पर कुत्ते प्लेस । ऑक्सीजन के साथ ३.२% sevoflurane के साथ सामान्य संज्ञाहरण बनाए रखें (१.० L/
  4. ३७ डिग्री सेल्सियस पर शरीर का तापमान बनाए रखने के लिए एक हीटिंग पैड का प्रयोग करें ।
  5. corneal घर्षण से बचने के लिए आंखों की पूर्वकाल सतह पर एक नेत्र जेल लागू करें ।
  6. शल्य कतरनों का उपयोग कर सावधानी से शल्य क्षेत्र (बाईं ओर छाती क्षेत्र) दाढ़ी । ऑपरेटिव साइट पर मादक समाधान की एक पर्याप्त मात्रा में स्प्रे । न्यूनतम 15 सेकंड प्रतीक्षा करें. अनुप्रयोग को 3 बार दोहराएँ.
  7. दिल की दर और सर्जरी के दौरान ऑक्सीजन संतृप्ति रिकॉर्ड ।

4. अवर वायुकोशीय तंत्रिका पुनर्निर्माण पीजीए-सी ट्यूब का उपयोग: पुनर्निर्माण केवल मॉडल का विकास

  1. एक स्थानीय संवेदनाहारी और एनाल्जेसिक के रूप में वाम mandibular gingiva के लिए एक 27 जी सुई का उपयोग कर 1% lidocaine के 3 मिलीलीटर सुई ।
  2. mandibular gingiva में एक संख्या 15 स्केलपेल ब्लेड के साथ एक 5 सेमी अनुप्रस्थ चीरा प्रदर्शन, पशु के mandibles को बेनकाब करने के लिए ।
  3. piezoelectric अल्ट्रासोनिक कंपन का प्रयोग करें mandible के समीपस्थ पहलू एक 3 सेमी × 8 मिमी आयत में पीछे मानसिक फोरमेन के माध्यम से पीसने के लिए ।
    नोट: कंपन आवृत्ति 28 \u2012 ३२ kHz था.
  4. mandibular हड्डी की थाली के ललाट भाग (आयाम, 3 सेमी × 8 मिमी) को छोड़ इयान (चित्रा 2a)18बेनकाब निकालें ।
    नोट: पुनर्निर्माण साइट पहले दाढ़ के रूट शीर्ष करने के लिए संगत
  5. Transect एक स्केलपेल के साथ इयान एक 10 मिमी खंड को दूर करने के लिए ।
  6. 2 मिमी की गहराई के लिए तंत्रिका ट्यूब में गंभीर तंत्रिका के समीपस्थ और बाहर का स्टंप डालें ।
  7. 8-0 नायलॉन टांके और समीपस्थ और बाहर की तंत्रिका समाप्त होता है (चित्रा बी1) 18के लिए ट्यूब टांका करने के लिए एक सर्जिकल माइक्रोस्कोप पर x इज़ाफ़ा का उपयोग करें ।
  8. mandible में अपनी मूल साइट के लिए अस्थि प्लेट लौटें ।
  9. 4-0 नायलॉन टांके के साथ घाव बंद करें ।
  10. सर्जरी के बाद एक दिन, पुष्टि करें कि mandibular हड्डी की थाली अपनी उचित स्थिति में है ।
    1. 4.10.1 संज्ञाहरण के तहत चेहरे की हड्डी की गणना टोमोग्राफी (सीटी) इमेजिंग प्रदर्शन । सीटी पैरामीटर निम्नानुसार सेट करें: १२० kVp, २०० mAs, ०.५ mm/एस, ०.५-mm स्लाइस मोटाई ।
      1. 5 मिलीग्राम/kg ketamine हाइडरोक्लॉराइड और 1 मिलीग्राम/किलो xylazine (चित्रा 3) के एक मिश्रण का उपयोग कर संज्ञाहरण प्रशासन ।
  11. प्रशासन एम्पीसिलीन (१०० मिलीग्राम/दिन) एक एंटीबायोटिक और एसिटामिनोफेन के रूप में (१०० मिलीग्राम/दिन) सर्जरी के बाद एक सप्ताह के लिए एक एनाल्जेसिक के रूप में ।

5. इथेनॉल प्रेरित CSGB: पुनर्निर्माण का विकास + CSGB मॉडल

  1. खंड 4 में वर्णित के रूप में इयान पुनर्निर्माण प्रदर्शन और वसूली के लिए एक सप्ताह की अनुमति ।
  2. Anesthetize में १.५% sevoflurane के साथ पशु को ऑक्सीजन (4 l/मिनट) और हवा (6 l/ दाढ़ी और इरादा सर्जिकल क्षेत्र साफ, के रूप में 3 खंड में वर्णित है ।
  3. बाईं ओर छाती क्षेत्र पर एक लाइन ड्राइंग द्वारा एक शल्य त्वचा मार्कर के साथ चीरा लाइन मार्क (चित्रा 4, चीरा लाइन लंबाई में 20 सेमी है).
  4. एक स्थानीय संवेदनाहारी और एनाल्जेसिक के रूप में बाईं ओर छाती क्षेत्र के लिए एक 21 जी सुई का उपयोग कर 1% lidocaine के 5 मिलीलीटर इंजेक्षन.
  5. एक नंबर 10 स्केलपेल ब्लेड के साथ बाईं ओर छाती त्वचा Incise ।
  6. मांसपेशी प्रावरणी को बेनकाब करने के लिए एक इलेक्ट्रिक स्केलपेल के साथ फैट लेयर Incise ।
  7. अग्रस्थ सेराटस ventralis मांसपेशी और scalenus मांसपेशी बेनकाब ।
  8. अग्रस्थ सेराटस ventralis मांसपेशियों और ventral से scalenus मांसपेशी उठाने पृष्ठीय करने के लिए दूसरी और तीसरी पसलियों (चित्रा 5) बेनकाब ।
  9. वाम ग्रीवा सहानुभूति नाड़ीग्रंथि (चित्रा 6) को बेनकाब करने के लिए दूसरे और तीसरे पसलियों के बीच अंतरिक्ष में एक वाम पार्श्व thoracotomy प्रदर्शन.
  10. प्रत्यक्ष दृश्य (चित्रा 7) के तहत एक 30 जी सुई का उपयोग कर ग्रीवा सहानुभूति नाड़ीग्रंथि में ९९.५% इथेनॉल के ०.२ मिलीलीटर सुई ।
  11. बाधित 1-0 अवशोषित टांके के साथ पसलियों के बीच अंतरिक्ष बंद करो ।
  12. बाधित 3-0 नायलॉन टांके के साथ त्वचा बंद करो ।
  13. प्रशासन एम्पीसिलीन (१०० मिलीग्राम/दिन) एक एंटीबायोटिक और एसिटामिनोफेन के रूप में (१०० मिलीग्राम/दिन) सर्जरी के बाद एक सप्ताह के लिए एक एनाल्जेसिक के रूप में ।
  14. CSGB के बाद 1 सप्ताह में, अवरक्त थर्मोग्राफी के साथ चेहरे की त्वचा के तापमान को मापने के लिए CSGB की पुष्टि करें ।

6. Electrophysiological रिकॉर्डिंग

  1. संवेदी तंत्रिका कार्रवाई क्षमता (स्नैप) और संवेदी तंत्रिका चालन वेग (SCV) इयान तीन महीने के पुनर्निर्माण के बाद मापने के लिए, anesthetize जानवरों के रूप में खंड 3 में वर्णित है ।
    नोट: स्नैप और SCV दोनों उपचार समूहों में प्रत्येक कुत्ते के लिए प्रयोगात्मक और सामान्य नियंत्रण पक्षों पर मापा जाना चाहिए.
  2. एक संख्या 10 स्केलपेल ब्लेड के साथ छोड़ दिया mandibular gingiva में एक चीरा बनाओ ।
  3. शारीरिक रूप से पुनर्जीवित तंत्रिका को नुकसान से बचने के लिए mandibular बोन प्लेट को सावधानीपूर्वक निकालें ।
  4. इयान सुई इलेक्ट्रोड की एक जोड़ी का उपयोग कर, स्नैप और SCV रिकॉर्ड करने के लिए उत्तेजित ।
    1. तंत्रिका नाली के लिए समीपस्थ इलेक्ट्रोड डालें.
    2. 10-kHz विद्युत उत्तेजना 20 बार लागू करें ।
  5. परिणामों का विश्लेषण करें ।
    1. बिजली उत्तेजना के लिए औसत प्रतिक्रिया आयाम की गणना करके तस्वीर का निर्धारण ।
    2. चार्ट रिकॉर्डिंग से पीक लेटेंसी और पीक आयाम को मापने ।
    3. निंनलिखित समीकरण के साथ वसूली सूचकांक की गणना: पुनर्निर्माण के बाएं इयान के चोटी आयाम केवल या पुनर्निर्माण + CSGB समूह/सामांय नियंत्रण (पुनर्निर्माण में सही इयान के केंद्रीय खंड केवल समूह) के चोटी के आयाम है19 ,20.

7. ऊतकवैज्ञानिक विश्लेषण

  1. विभागात तयारी
    1. पुनर्निर्माण के तीन महीने बाद, फसल को खंगाला साइट के दोनों ओर तंत्रिका के 1 सेमी सहित छोड़ दिया इयान ।
    2. फसल के बाईं ओर पर फसल साइट के लिए इसी स्तर पर सही इयान हार्वेस्ट ।
    3. एक ०.१ मीटर cacodylate बफर समाधान में २.५% glutaraldehyde में विसर्जन द्वारा काटा नसों उपसर्ग (पीएच ७.४, ४८ ° c, 24 एच) ।
    4. पोस्टफिक्स के साथ 2% आज़मियम tetroxide समाधान (४८ डिग्री सेल्सियस, 4 एच) और ०.१ मीटर फॉस्फेट बफर समाधान (पीएच ७.४, 2 एच) में पोटेशियम ferrocyanide.
    5. वर्गीकृत इथेनॉल समाधान की एक श्रृंखला के साथ नसों निर्जलीकरण ।
    6. epoxy राल (आयल) में एंबेड ।
    7. धारा ०.५ \u2012 १.० माइक्रोन की मोटाई पर नमूनों ।
  2. Toluidine ब्लू धुंधला और रूपात्मक विश्लेषण
    1. toluidine नीले समाधान के साथ दाग वर्गों ।
    2. नमूने के साथ निम्नलिखित क्षेत्रों में 400X आवर्धन पर, एक ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप का उपयोग कर माइक्रोस्कोपी छवियों को प्राप्त करें: बाएँ इयान, पुनर्जीवित खंड के केंद्र और स्टंप करने के लिए 2 मिमी लंबा; सही इयान, इयान खंड के केंद्र बाईं ओर फसल साइट के लिए इसी ।
    3. पुनर्जीवित तंत्रिका तंतुओं के साथ सभी क्षेत्रों की छवियों का चयन करें ।
      1. बेतरतीब ढंग से चुनें 8 \u2012 के 10 क्षेत्रों १०० माइक्रोन × १०० माइक्रोन पुनर्जीवित तंत्रिका फाइबर युक्त.
      2. रूपात्मक विश्लेषण करने के लिए एक उपयुक्त सॉफ्टवेयर का उपयोग करने के लिए निम्नलिखित मापदंडों को मापने: myelinated तंत्रिका फाइबर व्यास (माइक्रोन) और घनत्व (गणना/क्षेत्र), तंत्रिका ऊतक प्रतिशत, और जी अनुपात (myelinated axon व्यास/myelinated तंत्रिका फाइबर व्यास ).
  3. Immunostaining
    1. आयल धारा धुंधला के लिए मानक प्रोटोकॉल का पालन करें ।
    2. 25 डिग्री सेल्सियस पर 30 मिनट के लिए प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ मशीन ।
    3. 25 डिग्री सेल्सियस पर फॉस्फेट-बफर खारा 3 बार के साथ धो लें ।
    4. 25 डिग्री सेल्सियस पर 30 मिनट के लिए सहिजन-peroxidase के साथ लेबल माध्यमिक एंटीबॉडी के साथ मशीन ।
    5. एक प्रकाश माइक्रोस्कोप का उपयोग कर छवियों को प्राप्त करें ।
  4. ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (उनि)
    1. चरण ७.१ में बताए गए अनुसार तंत्रिकाएँ तैयार करें.
    2. ७० \u2012 ९० माइक्रोन की एक मोटाई पर खंड नसों एक ultramicrotome का उपयोग कर ।
    3. Reynold का नेतृत्व साइट्रेट और uranyl के साथ दाग वर्गों ।
    4. जांच और संचरण इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी द्वारा छवि ।

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Representative Results

हम अवरुद्ध पक्ष 1 सप्ताह के चेहरे की त्वचा के तापमान में वृद्धि के बाद छोड़ दिया CSGB (8 चित्रा) मनाया ।

3 महीने के बाद पुनर्निर्माण के क्षेत्र में पीजीए-सी ट्यूब पुनर्निर्माण में लीन था और अवर वायुकोशीय तंत्रिका के उत्थान में मनाया गया था पुनर्निर्माण-केवल और पुनर्निर्माण + CSGB समूहों (चित्रा 9A, बी)18।

स्नैप पुनर्निर्माण के दोनों पुनर्निर्माण पक्षों में मध्यम श्रेणी का था + CSGB और पुनर्निर्माण केवल समूहों । electrophysiological मूल्यांकन के परिणाम तालिका 118में संक्षेप हैं । पुनर्प्राप्ति अनुक्रमणिका और SCV के पुनर्निर्माण में काफी अधिक थे + CSGB केवल पुनर्निर्माण समूह में ।

हम मध्य और पुनर्निर्माण में पुनर्जीवित इयान के बाहर के क्षेत्रों में myelinated तंत्रिका फाइबर मनाया केवल और पुनर्निर्माण + CSGB समूहों (चित्रा 10A, ख)18। पुनर्निर्माण केवल और पुनर्निर्माण + CSGB समूहों के रूप में सामांय नियंत्रण समूह की तुलना में छोटे पुनर्जीवित myelinated तंत्रिका व्यास दिखाया (पुनर्निर्माण समूह में सही इयान के केंद्रीय खंड, चित्र 10C) । अपरिपक्व myelinated तंत्रिका तंतुओं को भी मनाया गया ।

पुनर्निर्माण की परीक्षा-केवल, पुनर्निर्माण + CSGB समूह का उपयोग कर उनि दिखाया पुनर्जीवित myelinated तंत्रिका तंतुओं और Schwann कोशिकाओं (चित्रा 10D, ई). चित्रा 10F सामांय नियंत्रण समूह (पुनर्निर्माण समूह में सही इयान के मध्य खंड) के लिए उनि के इन परिणामों से पता चलता है ।

पुनर्जीवित axons और Schwann कोशिकाओं की उपस्थिति की पुष्टि की केंद्रीय और बाहर के क्षेत्रों में पुनर्निर्माण के केवल और पुनर्निर्माण + CSGB समूहों, विरोधी neurofilament (NF) और विरोधी S100 एंटीबॉडी के साथ दाग से, क्रमशः (11 चित्र के लिए )18.

रूपात्मक मूल्यांकन परिणाम तालिका 218में संक्षेप हैं । पुनर्जीवित बाएँ इयान खंड के केंद्र में myelinated तंत्रिका फाइबर व्यास के पुनर्निर्माण समूह में ४.२७ ± १.५ µm और ५.११ ± १.९८ µm CSGB समूह में था, जबकि पुनर्जीवित छोड़ दिया इयान व्यास के बाहर के क्षेत्र में ३.४७ ± १.२१ µm में reconstruc था... tion समूह और CSGB समूह में ४.५३ ± १.३६ µm । दोनों ही मामलों में, व्यास CSGB समूह है, जो भी एक काफी उच्च myelinated तंत्रिका फाइबर घनत्व और दोनों केंद्र और पुनर्जीवित छोड़ इयान के बाहर के क्षेत्र में तंत्रिका ऊतक प्रतिशत का प्रदर्शन में काफी बड़ा था । पुनः पुनर्जीवित के केंद्र में जी अनुपात इयान के पुनर्निर्माण समूह में ०.७५ ± ०.०४ और CSGB समूह में ०.६८ ± ०.०५ था, जबकि बाहर के हिस्से में यह पुनर्निर्माण समूह में ०.७४ ± ०.०४ था और CSGB समूह में ०.६९ ± ०.०४ था. ' ' इस प्रकार, दोनों ही मामलों में, जी अनुपात CSGB समूह में काफी छोटा था ।

पुनर्निर्माण के लिए नमूना आकार केवल और पुनर्निर्माण + CSGB समूहों n = 7 थे । myelinated तंत्रिका फाइबर व्यास और घनत्व के लिए सांख्यिकीय विश्लेषण, जी अनुपात, और SCV Dunnett परीक्षण का उपयोग किया गया. वसूली सूचकांक के विश्लेषण एक ख़राब छात्र टीपरीक्षण का उपयोग किया गया था । सांख्यिकीय महत्व का स्तर 5% (p < ०.०५) पर सेट किया गया था ।

Figure 1
चित्रा 1: Polyglycolic एसिड कोलेजन स्पंज से भरा ट्यूब । एक) ट्यूब की सकल छवि । तंत्रिका नाली के अंतिम आयाम 14 मिमी लंबाई, 3 मिमी भीतरी व्यास, और ५० µm दीवार मोटाई थे । ख) ट्यूब के स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन micrograph. यह आंकड़ा पहले Shionoya एट अल द्वारा प्रकाशित किया गया था । 18 और अनुमति के साथ पुनर्मुद्रित है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 2
चित्रा 2: वाम अवर वायुकोशीय तंत्रिका (इयान) पूर्व और पुनर्निर्माण के बाद । एक) हड्डी को हटाने के द्वारा उजागर होने के बाद छोड़ दिया इयान की पूर्व पुनर्निर्माण छवि । ख) के बाद पुनर्निर्माण छवि छोड़ दिया इयान एक polyglycolic एसिड-कोलेजन ट्यूब का उपयोग कर खंगाला । यह आंकड़ा पहले Shionoya एट अल द्वारा प्रकाशित किया गया था । 18 और अनुमति के साथ पुनर्मुद्रित है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 3
चित्रा 3: वाम अवर वायुकोशीय तंत्रिका पुनर्निर्माण के बाद चेहरे की हड्डी की गणना टोमोग्राफी इमेजिंग । छवि को पता चलता है कि mandibular बोन प्लेट उचित स्थिति में है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 4
चित्रा 4: शल्य चिकित्सा से पहले बाईं ओर छाती क्षेत्र पर पूर्व ऑपरेटिव त्वचा चिह्नों । ग्रीवा सहानुभूति नाड़ीग्रंथि ब्लॉक प्रदर्शन करने से पहले त्वचा चिह्नों दिखा तस्वीर । चीरा लाइन लंबाई में 20 सेमी है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 5
चित्रा 5: गर्भाशय ग्रीवा सहानुभूति नाड़ीग्रंथि ब्लॉक के ऑपरेटिंग दृश्य: पूर्व thoracotomy । छवि अग्रस्थ सेराटस ventralis और scalenus मांसपेशियों को जुटाने के बाद दूसरी और तीसरी पसलियों से पता चलता है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 6
चित्रा 6: गर्भाशय ग्रीवा सहानुभूति नाड़ीग्रंथि ब्लॉक के ऑपरेटिंग दृश्य: पोस्ट-thoracotomy । छवि दूसरे और तीसरे पसलियों के बीच अंतरिक्ष में पार्श्व thoracotomy के बाद छोड़ दिया ग्रीवा सहानुभूति नाड़ीग्रंथि से पता चलता है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 7
चित्रा 7: ग्रीवा सहानुभूति नाड़ीग्रंथि पूर्व और बाद इथेनॉल एक 30 जी सुई का उपयोग इंजेक्शन । क) बाएं ग्रीवा सहानुभूति नाड़ीग्रंथि के पूर्व इथेनॉल इंजेक्शन छवि । ख) छोड़ दिया ग्रीवा सहानुभूति नाड़ीग्रंथि के बाद इथेनॉल इंजेक्शन छवि । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 8
चित्रा 8: Thermogram के बाद छोड़ दिया ग्रीवा सहानुभूति नाड़ीग्रंथि ब्लॉक (CSGB) । thermogram इथेनॉल इंजेक्शन द्वारा CSGB के बाद एक सप्ताह का अधिग्रहण किया गया था । ध्यान दें कि बाईं ओर चेहरे की त्वचा का तापमान contralateral ओर की तुलना में अधिक है । रंग पट्टी डिग्री सेल्सियस में तापमान को इंगित करता है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 9
चित्रा 9: पुनर्जीवित अवर वायुकोशीय तंत्रिका (इयान) । एक) पुनर्निर्माण केवल समूह में इयान की छवि । ख) पुनर्निर्माण में इयान की छवि + CSGB (ग्रीवा सहानुभूति नाड़ीग्रंथि ब्लॉक) समूह । तंत्रिका पुनर्जनन (सफेद ऐरोहेड के बीच क्षेत्र) दोनों समूहों में मनाया जाता है । यह आंकड़ा पहले Shionoya एट अल द्वारा प्रकाशित किया गया था । 18 और अनुमति के साथ पुनर्मुद्रित है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 10
चित्र 10: पुनर्जीवित अवर वायुकोशीय तंत्रिका (इयान) का Toluidine नीला और संचरण इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी विश्लेषण । एक - सी) अर्द्ध 3 महीने में इयान के पतले अनुप्रस्थ वर्गों के बाद पुनर्निर्माण toluidine नीले रंग के साथ दाग । छवियां प्रत्येक समूह में पुनः जनरेटेड बाएं इयान के बाहर के सेगमेंट दिखाती हैं, जैसा कि संकेत दिया गया है । D - F) myelinated और गैर-myelinated तंत्रिका तंतुओं (काले और सफेद ऐरोहेड, क्रमशः) दिखा अर्द्ध पतले वर्गों से संचरण इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी छवियों । स्केल पट्टियां (A)-(C) और 5 µm (D)-(F) में ५० µm का प्रतिनिधित्व करते हैं । सामांय नियंत्रण: दाएं इयान के मध्य खंड केवल पुनर्निर्माण समूह में । यह आंकड़ा पहले Shionoya एट अल द्वारा प्रकाशित किया गया था । 18 और अनुमति के साथ पुनर्मुद्रित है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 11
चित्र 11: पुनर्जीवित वाम अवर वायुकोशीय तंत्रिका (इयान) के बाहर के क्षेत्रों के Immunohistochemical विश्लेषण । A, B) 3 महीने में पुनर्जीवित इयान के खंड-पुनर्निर्माण के लिए एक एंटी-neurofilament (NF) एंटीबॉडी के साथ दाग पुनर्निर्माण केवल समूह (एक) और पुनर्निर्माण + ग्रीवा सहानुभूति नाड़ीग्रंथि ब्लॉक (CSGB; ख) समूह । काले ऐरोहेड संकेत पुनर्जीवित axons । सी, डी) 3 महीने के बाद पुनर्निर्माण इयान के वर्गों-पुनर्निर्माण केवल समूह (ग) और पुनर्निर्माण + CSGB (डी) समूहों के लिए एक विरोधी एस-१०० एंटीबॉडी के साथ दाग का निर्माण । सफ़ेद ऐरोहेड Schwann कक्षों को इंगित करता है । स्केल बार्स, ५० µm । यह आंकड़ा पहले Shionoya एट अल द्वारा प्रकाशित किया गया था । 18 और अनुमति के साथ पुनर्मुद्रित है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

संवेदी तंत्रिका चालन (मी/ पुनर्प्राप्ति अनुक्रमणिका
सामांय नियंत्रण ४८.५ ± २.८ －
पुनर्निर्माण केवल समूह ३६.८ ± २.९ * ०.२२ ± ०.०४
पुनर्निर्माण + CSGB समूह ४२.० ± २.४ *# ०.३५ ± ०.०६#

तालिका 1: Electrophysiological निष्कर्षों में शल्य चिकित्सा के बाद 3 महीने में अवर वायुकोशीय तंत्रिका (इयान) । डेटा मतलब ± मानक विचलन (n = 7) के रूप में प्रस्तुत कर रहे हैं । तुलना एक ख़राब छात्र टीपरीक्षण का उपयोग कर बनाया गया था । इयान, अवर वायुकोशीय तंत्रिका; CSGB, ग्रीवा सहानुभूति नाड़ीग्रंथि ब्लॉक । *, सामान्य नियंत्रण समूह के साथ तुलना में p < ०.०५; #, p < ०.०५ केवल-पुनर्निर्माण समूह के साथ तुलना में । सामांय नियंत्रण: पुनर्निर्माण केवल समूह में सही इयान के केंद्रीय खंड; वसूली सूचकांक: पुनर्निर्माण के बाएं इयान के चोटी आयाम का अनुपात केवल या पुनर्निर्माण + CSGB समूह सामांय नियंत्रण के शिखर आयाम के लिए । यह टेबल पहले Shionoya एट अल द्वारा प्रकाशित किया गया था । 18 और अनुमति के साथ पुनर्मुद्रित है ।

Myelinated तंत्रिका फाइबर व्यास (माइक्रोन) Myelinated तंत्रिका फाइबर घनत्व (गणना 100 माइक्रोन2) तंत्रिका ऊतक के अनुपात (%) छ अनुपात
सामांय नियंत्रण केंद्र ८.८३ ± ३.११ १०३ ± 8 ४१.३ ± ३.९ ०.६२ ± ०.०३
पुनर्निर्माण केवल समूह केंद्र ४.२७ ± १.५ * १२६ ± 20 * ११.६ ± २.१ * ०.७५ ± ०.०४ *
डिजटल ३.४७ ± १.२१ * १०९ ± 17 * ७.३ ± २.० * ०.७४ ± ०.०४ *
पुनर्निर्माण + CSGB समूह केंद्र ५.११ ± १.९८ *# १४० ± 22 *# १५.९ ± ३.० *# ०.६८ ± ०.०५ *#
डिजटल ४.५३ ± १.३६ *$ १२३ ± 15 *$ १२.५ ± २.१ *$ ०.६९ ± ०.०४ *$

तालिका 2: रूपात्मक अवर वायुकोशीय तंत्रिका (इयान) में 3 महीने में सर्जरी के बाद निष्कर्षों । डेटा मतलब ± मानक विचलन (n = 7) के रूप में प्रस्तुत कर रहे हैं । तुलना Dunnett के परीक्षण का उपयोग कर बनाया गया था । इयान, अवर वायुकोशीय तंत्रिका; CSGB, ग्रीवा सहानुभूति नाड़ीग्रंथि ब्लॉक । *, सामान्य नियंत्रण समूह के साथ तुलना में p < ०.०५; * #, p < ०.०५ केवल पुनर्निर्माण समूह में बाएँ इयान के मध्य खंड के साथ तुलना में; * $,p < ०.०५ केवल पुनर्निर्माण समूह में बाएं इयान के बाहर के छोर के साथ तुलना में । सामांय नियंत्रण: पुनर्निर्माण केवल समूह में सही इयान के केंद्रीय खंड; जी अनुपात myelinated axon व्यास के कुल myelinated फाइबर व्यास का अनुपात है. यह टेबल पहले Shionoya एट अल द्वारा प्रकाशित किया गया था । 18 और अनुमति के साथ पुनर्मुद्रित है ।

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Discussion

हम एक कुशल विधि इयान पुनर्जनन इथेनॉल प्रेरित CSGB के साथ संयोजन में एक अवशोषित तंत्रिका ट्यूब का उपयोग करके के लिए प्रस्तुत करते हैं । इस अध्ययन के लिए हम कुत्तों का इस्तेमाल किया, के बाद से अन्य पशु मॉडल, चूहों की तरह, चूहों, और खरगोश, एक लघु जीवन प्रत्याशा और छोटे शरीर का आकार है, और इसलिए सटीक शल्य चिकित्सा प्रक्रियाओं प्रदर्शन करने के लिए इस्तेमाल नहीं किया जा सकता. के रूप में इयान mandibular हड्डी से घिरा नहर के भीतर स्थित है, एक शल्य चिकित्सा तकनीक तंत्रिका और रक्त वाहिका क्षति से बचने के लिए आवश्यक है जब तंत्रिका पुनर्निर्माण प्रदर्शन । प्रक्रिया के लिए एक महत्वपूर्ण तकनीकी टिप को ध्यान से mandibular हड्डी प्लेट हटाने के लिए है ताकि तंत्रिका और पोत चोट के जोखिम को कम करने के लिए । पारंपरिक बरों और सूक्ष्म आरी मुश्किल और कोमल ऊतक21के बीच भेद नहीं कर सकते । इसके अतिरिक्त, इन उपकरणों के आसन्न ऊतक, विशेष रूप से इयान, आकस्मिक संपर्क22द्वारा हानिकारक कारण पर्ची करने के लिए करते हैं । इसलिए हम अस्थि प्रसंस्करण कदम के लिए piezoelectric शल्य चिकित्सा उपकरणों का इस्तेमाल किया । यह एक नया और अभिनव हड्डी सर्जरी तकनीक है कि विशेष नश्तर के अल्ट्रासोनिक microvibrations का उपयोग करता है । इसलिए, नरम ऊतक भी काटने युक्तियां23,24के साथ आकस्मिक संपर्क पर क्षतिग्रस्त नहीं कर रहे हैं । Microvibrations of ६०-२०० µm/एस 24-29 kHz पर लोचदार कोमल ऊतक बख्शते समय लोचदार खनिज ऊतक काटने के लिए इष्टतम हैं; यह ५० kHz25से ऊपर आवृत्तियों पर संभव नहीं है. इसके अलावा, रोटेशन बरों या दोलन आरी एक बल रोटेशन या साधन के कंपन प्रतिक्रिया करने के लिए की आवश्यकता है । इन उपकरणों की तुलना में, piezoelectric शल्य चिकित्सा उपकरण अतिरिक्त बल के आवेदन की जरूरत नहीं है और इतना सुरक्षित और सटीक अस्थि प्रसंस्करण संभव है26. यह एक उपंयास उपयोगकर्ता के हाथ में विशेष रूप से महत्वपूर्ण है ।

हमारी विधि में एक अन्य महत्वपूर्ण पहलू यह है कि धातु की प्लेटों का उपयोग करते हुए बोन प्लेट तय नहीं की गई थी लेकिन पीजीए-सी ट्यूब के प्लेसमेंट के बाद mandible में अपनी मूल स्थिति में रखा गया था । इस के लिए कारण मौखिक श्लैष्मिक परिगलन, जो उठता है जब निर्धारण के लिए धातु प्लेटों का उपयोग करने के लिए प्लेट के जोखिम के जोखिम से बचने के लिए किया गया था । हालांकि, कुछ मामलों में अस्थि प्लेट मूल साइट से किंचित । इसलिए, यह mandibular हड्डी की थाली सर्जरी के बाद उचित स्थिति में है कि पुष्टि करने के लिए चेहरे की हड्डी का एक सीटी स्कैन करने के लिए महत्वपूर्ण है । जब निर्धारण के लिए एक धातु प्लेट का उपयोग कर, तंग suturing से बचना चाहिए क्योंकि यह रक्त प्रवाह गड़बड़ी के कारण मौखिक श्लैष्मिक परिगलन कारण हो सकता है ।

CSGB परिधीय संवहनी रोगों और चेहरे और गर्दन के दर्द सिंड्रोम के लिए एक प्रभावी उपचार है13,14,15. हालांकि, इसके उपचारात्मक प्रभाव अंतर्निहित तंत्र अस्पष्ट रहते हैं । CSGB के उपचारात्मक प्रभाव पर अनुसंधान की कमी के लिए एक कारण एक सुसंगत और समान sympatholytic प्रभाव प्राप्त करने में कठिनाई है । उदाहरण के लिए, percutaneous CSGB के बाद सहानुभूति नाकाबंदी के प्रसार27,28वर्दी नहीं है । Mullenheim एट अल. एक पॉलीथीन कैथेटर के साथ 29 प्रत्यारोपित कुत्तों, thoracotomy के बाद, प्रावरणी के तहत और ऊपरी सहानुभूति श्रृंखला के साथ, और कैथेटर के माध्यम से lidocaine इंजेक्शन द्वारा CSGB प्रदर्शन किया । हालांकि इस दृष्टिकोण लक्षित क्षेत्रों में सहानुभूति नाकाबंदी फैल सकता है, यह कैथेटर रोड़ा या अव्यवस्था के जोखिम, साथ ही संक्रमण, विशेष रूप से दीर्घकालिक प्रयोगों में किया जाता है । CSGB के हमारे कुत्ते मॉडल में, ९९.५% इथेनॉल के प्रत्यक्ष इंजेक्शन ipsilateral orofacial क्षेत्र के लिए रक्त के प्रवाह में दीर्घकालिक वृद्धि का उत्पादन किया । हमारे दृष्टिकोण में, ब्लॉक इंजेक्शन प्रत्यक्ष दृश्य के तहत प्रशासित किया गया था, इसलिए CSGB परिशुद्धता के साथ किया जा सकता है. इसलिए, हमारे दृष्टिकोण sympatholytic प्रभाव और सहानुभूति नाकाबंदी के असमान प्रसार के जोखिम को कम कर देता है । यह विशेष रूप से दीर्घकालिक प्रयोगों में लाभप्रद माना जाता है । इसके अलावा, हम CSGB की सफलता की पुष्टि करने के लिए थर्मोग्राफी इस्तेमाल किया, के बाद से चेहरे की त्वचा का तापमान सफल CSGB पर ब्लॉक पक्ष पर बढ़ जाती है । इस मामले में, थर्मोग्राफी उपयोगी है, क्योंकि यह सरल और इनवेसिव है । महत्वपूर्ण बात, नाक और नहीं चेहरे की त्वचा का तापमान मापा जाना चाहिए, क्योंकि यह कुत्ते के बालों से प्रभावित नहीं है । हमारे मॉडल CSGB के उपचारात्मक प्रभाव पर आगे अनुसंधान के लिए योगदान कर सकता है । हमारे पिछले अध्ययन में, orofacial क्षेत्र में रक्त प्रवाह ग्रीवा सहानुभूति ganglionectomy के बाद 6-11 सप्ताह के लिए वृद्धि हुई । यदि चाहें तो शोधकर्ताओं ने इस वैकल्पिक विधि30 चुन सकते हैं ।

इस अध्ययन की सीमा है कि इथेनॉल प्रेरित CSGB स्थाई Horner सिंड्रोम (ptosis और miosis)31के विकास का खतरा बन गया है । sympathectomies प्रदर्शन के लिए रेडियोफ्रीक्वेंसी पृथक, phenol, और सहानुभूति ganglionectomy सहित अन्य विधियों का उपयोग किया गया है; हालांकि, विशेष रूप से ग्रीवा सहानुभूति नाड़ीग्रंथि के sympathectomy के लिए, केवल रेडियोफ्रीक्वेंसी पृथक नैदानिक अभ्यास३२,३३,३४,३५में नियोजित किया गया है । इसलिए, रेडियोफ्रीक्वेंसी पृथक और स्थानीय निश्चेतक इथेनॉल प्रेरित CSGB के लिए एक वैकल्पिक पद्धति के रूप में माना जा सकता है । भविष्य के अध्ययन के लिए कैसे तंत्रिका पुनर्जनन एक अवशोषित तंत्रिका ट्यूब द्वारा मध्यस्थता एक स्थानीय संवेदनाहारी या रेडियोफ्रीक्वेंसी पृथक के साथ CSGB द्वारा बढ़ाया जा सकता है मांय करने के लिए आवश्यक होगा ।

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Disclosures

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

यह काम क्योटो यूनिवर्सिटी इंस्टीट्यूट फॉर फ्रंटियर मेडिकल साइंस में जैव कृत्रिम अंगों के विभाग द्वारा समर्थित किया गया. हम सीमांत चिकित्सा विज्ञान के लिए संस्थान के पशु चिकित्सा कर्मचारियों का शुक्रिया अदा करना चाहूंगा ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
NMP Collagen PS Nippon Meatpackers 301-84621 Atelocollagen extracted from young porcine skin by enzyme treatment
Surgical clippers Roboz Surgical Instrument Company RC-5903
Disposable scalpel (No.15) Kai medical 219ABBZX00073000
VarioSurg3 Nakanishi VS3-LED-HPSC, E1133 Piezoelectric surgery for bone processing
4-0 nylon sutures Ethicon 8881H
8-0 nylon sutures Ethicon 2775G
Isepamicin sulfate Nichi-Iko 620005641
Disposable scalpel (No.10) Kai medical 219ABBZX00073000
30-gauge needle Nipro 1134
1-0 absorbable stitches Ethicon J347H
3-0 Nylon stitches Ethicon 8872H
Neo Thermo NEC Avio TVS-700 Infrared thermography 
Neuropack Σ NIHON KOHDEN MEB-5504 Orthodromic recorder for electrophysiological recording
Toluidine Blue Sigma-Aldrich T3260-5G
Light microscope Keyence BZ-9000
Mouse anti-human neurofilament protein monoclonal antibody DAKO N1591
Polyclonal rabbit anti-S100 antibody DAKO Z0311
Transmission electron microscopy Hitachi High Technologies Hitachi H-7000
Dynamic cell count Keyence BZ-H1C Software for morphological evaluation

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References

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Shionoya, Y., Sunada, K., Tsujimoto, G., Shigeno, K., Nakamura, T. Ethanol-Induced Cervical Sympathetic Ganglion Block Applications for Promoting Canine Inferior Alveolar Nerve Regeneration Using an Artificial Nerve. J. Vis. Exp. (141), e58039, doi:10.3791/58039 (2018).

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