Summary
En trinnvis protokoll for ikke-ødeleggende og lang-tid avlytting vaskulær remodeling og stillaset fornedrelse i sanntid kultur av biologisk nedbrytbart polymere stillaset-baserte vev-konstruert blodkar med pulsatile stimulering bruke optical coherence tomografi beskrives her.
Abstract
Foretatt vaskulær graftene med strukturelle og mekaniske egenskaper som ligner på naturlige blodkar er forventet å møte den økende etterspørselen etter arteriell omkjøringsvei. Karakteristikk av vekst dynamikken og remodeling prosessen av nedbrytbart polymer stillaset-baserte vev-konstruert blodkar (TEBVs) med pulsatile stimulering er avgjørende for vaskulær tissue engineering. Optisk Bildeteknikker fremstå som kraftig verktøy for å overvåke endometrial blodkar av konstruert vev aktivere høyoppløselige bilder i sanntid kultur. Dette dokumentet beskriver en ikke-ødeleggende og raskt sanntids imaging strategi for å overvåke vekst og remodeling av TEBVs i langsiktig kultur ved å bruke optical coherence tomografi (OCT). Geometriske morfologi evalueres, inkludert vaskulær remodeling prosessen, veggtykkelse og sammenligning av TEBV tykkelse i ulike kultur tidspunkt og tilstedeværelsen av pulsatile stimulering. Endelig OCT gir praktiske muligheter for sanntids observasjon av degradering av polymer i gjenoppbygging vev under pulsatile stimulering eller ikke, og i hver fartøyet segmentet, av sammenlignet med vurdering av polymer fornedrelse bruker skanning elektron microscopic(SEM) og polarisert mikroskop.
Introduction
Vev-konstruert blodkar (TEBVs) er den mest lovende materiale som en ideell vaskulær pode1. For å utvikle grafts være klinisk nyttig med lignende strukturelle og funksjonelle egenskaper som innfødt fartøy, er flere teknikker utformet for å opprettholde vaskulær funksjon2,3. Selv om det har vært foretatt fartøy med akseptabel patency priser under implantasjon som fase III klinisk studie4, viser langsiktig kultur og høye kostnader også nødvendigheten av å overvåke utviklingen av TEBVs. Forståelse av ekstracellulære matrix(ECM) vekst, ombygging og tilpasning prosesser i TEBVs i biomimetic chemo-mekanisk miljøet kan gi viktig informasjon for utvikling av vaskulær tissue engineering.
Den ideelle strategien å følge med utviklingen av liten diameter utviklet fartøy5 skal ikke-ødeleggende, sterile, langsgående, tredimensjonale og kvantitative. TEBVs under annen kultur forhold kan vurderes av denne imaging modalitet, selv inkludert endringer før og etter vaskulær transplantasjon. Strategier for å beskrive funksjoner av levende utvikling er nødvendig. Optisk Bildeteknikker tillate visualisering og kvantifisering av vev avsettelse og biologisk materiale. Andre fordeler er muligheten til å aktivere dype vev og etikett-fri bildebehandling med høy oppløsning6,7. Spesifikke molekyler og mindre lett tilgjengelig optisk utstyr for sanntids overvåking er imidlertid et betydelig praktisk hinder, som har begrenset omfattende bruk av lineære optisk mikroskopi. Optical coherence tomografi (OCT) er en optisk tilnærming med intravascular tenkelig modalitet som brukte klinisk verktøy å veilede cardiac intervensjonsradiologi terapi8. I litteraturen ble metoden OCT rapportert som en måte å vurdere veggtykkelse TEBVs9,10, kombinert med bekreftende tenkelig modaliteter for vaskulær tissue engineering research. Mens, dynamikken i konstruert vaskulær ble vekst og remodeling ikke observert.
I dette manuskriptet detalj vi utarbeidelse av biologisk nedbrytbart polymere stillaset-baserte TEBVs for fire uker kultur. Menneskelige umbilical arterier vaskulær glatt muskelceller (HUASMCs) er utvidet og sådd i en porøs nedbrytbar polyglycolic syre (PGA) stillaser i bioreactor. Biologisk nedbrytbart polymerer spille rollen i en midlertidig substrat for vev engineering og har en viss fornedrelse rate11. For å sikre et passende samsvar mellom stillaset fornedrelse og neo-vev formasjonen, er ECM og PGA stillasene avgjørende faktorer for effektiv vaskulær remodeling. Perfusjon systemet simulerer den biomekaniske microenvironment av innfødte fartøy og opprettholder en konsekvent deformasjon under press stimulering.
Målet med presentert protokollen er å beskrive en relativt enkel og destruktiv strategi for TEBVs imaging og langsiktig overvåking av kultur. Denne protokollen kan benyttes for visualisering av morfologiske endringer og tykkelsen av utviklet under annen kultur forhold. I tillegg kan analyser av polymer-baserte materialer fornedrelse i vevet engineering stillaser utføres for identifikasjon. Ved å kombinere metoder for scanning elektron microscopic(SEM) og polarisert mikroskop brukes i denne protokollen, korrelasjon og kvantifisering av ekstracellulær matrix distribusjon og PGA fornedrelse kan gjøres, som kan lette vurdering stillaset fornedrelse kombinert med OCT bildebehandling.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. nedbrytbart PGA stillaset basert vev-konstruert fartøy kultur
- PGA stillaset fabrikasjon
- Sy PGA mesh (19 mm diameter og 1 mm tykk) rundt silikon rør sterilisert med etylenoksid (17 cm lengde, 5.0 mm i diameter og 0,3 mm tykk) med 5-0 Sutur.
- Sy polytetrafluoroethylene (ePTFE, 1cm lengde) med 4-0 Sutur på i hver ende av PGA mesh og overlappes av 2 mm.
- Dypp PGA stillaser med hånden i 1 mol/L NaOH for 1 min å justere romlig strukturen på nettet og suge med vev kultur klasse vann tre ganger i 2 minutter hver. Mildt klapp tørr stillaset med en papir hver gang. Tørk opp stillaser i hette med en blåser 1t.
- Montering av bioreactor og Y-krysset for OCT bildebehandling
- Nyt egenutviklet glass sylindriske bioreactor (10 cm diameter og 11,7 cm i høyden med fire lepper inne og fire pistoler utenfor reaktoren som vist i figur 1), PGA stillaser, silikon tube (ytre diameter 5 mm tykkelse 0.3 mm), biokompatible rør, kontakter, rør bar og utstyr for montering i en 95% etanol tank for 2T.
- Trekk PGA stillaset gjennom side-riksvåpen bioreactor koblet til en side med en kontakt, i tillegg til en annen side med Y-krysset brukes til å levere OCT guidewire. Sett sammen en annen PGA stillaset i bioreactor på samme måte. Se figur 1.
- Passer ePTFE til bioreactor lepper ved å stramme med 4-0 suturer.
- Bioreactor innlegge etanol tanken igjen 1 h og tørke opp over natten i hette med blåser på.
- Såing av HUASMCs og statisk Bioreactor condition
- Isolere HUASMCs fra menneskelige umbilical arterier av standard explant teknikker.
- Utvide og vedlikeholde celler i glatt muskel celle vekst medium består av DMEM medium 20% fosterets bovin serum 2,36 mg/mL HEPES, 100 U/mL penicillin G, 50 µg/mL proline, 20 µg/mL alanin, 50 µg/mL glysin, 1,5 µg/mL CuSO4, 50 µg/mL askorbinsyre , 10 ng/mL grunnleggende fibroblast vekstfaktor og 10 ng/mL blodplater-avledet vekstfaktor.
- Frø HUASMCs i en konsentrasjon av 5 × 106 celler/mL i over kultur medium på PGA stillasene.
- Innlegge bioreactor oppsikt bar (1,5 cm lengde). Sette inn en fôring rør (5 mm diameter, 15 cm lengde) og tre kort rør segmenter (5 mm diameter, 7 cm lengde) for gassutveksling gjennom silikon disables lokket.
- Fest PTFE 0.22 µm filtre til hver luft endre rør og en heparin cap å materøret. Justere rør baren med en omrøring hastigheten på 13 runder per minutt. Montere glass bioreactor, silikon disables lokket og PGA stillaset i kultur-systemet.
- Tillate HUASMCs å følge for 45 min ved å lene bioreactor hvert 15 min med stativ, til venstre og høyre. Reaktoren porter og leddene er forseglet med parafin film.
- Koble Luo-dere pumpe, PBS bag, driveren med biokompatible rør som perfusjon systemet. Åpne stasjonen fylle rør med PBS.
- Plass den samlede bioreactor i en fuktet inkubator med 5% CO2 på 37 ° C. Fyll kultur kammeret med 450 mL HUASMCs kultur medium.
- Trykk stoppknappen og slå av strømmen på enheten stasjonen. Vokse seeded stillasene under statisk kultur for en uke.
- Endre kultur medium hver 3-4 dager ved aspirating halvparten av gamle mediet gjennom materør og påfylling reaktoren med en tilsvarende mengde frisk kultur medium.
- Utarbeidelse av perfusjon systemet for OCT bildebehandling
- Pumpe væsker i PBS posen å sirkulere gjennom biokompatible rør og tilbake til posen.
- Åpne kraften i driveren og regulere pumpe miljø med en frekvens på 60 slag per minutt og utgang systolisk trykk av 120 mmHg. Justere parameterne mekanisk behovene til vev engineering vaskulær kultur.
- Klikk på Kjør-knappen for å gjøre perfusjon systemet fungerer. Gi over fast pulsatile stimulering til fartøyene i 3 uker ved iterativt pressurizing biokompatible rør10,12 etter en uke med statisk kultur.
2. utfører optisk bildebehandling med oktober
- Bruk en lyskilde for å sikre aksial oppløsning på 10-20µm og bildedybde på 1-2 mm for å identifisere strukturen av TEBV basert på det frekvens-domene OCT intravascular imaging system9.
- Slå på strømbryteren og åpne bildet fange programvare.
- Koble fiber optisk tenkelig kateter til drive-motor og optisk kontrolleren (DOC) med kateter automatisk retrett funksjon.
- Angi parametere av bilde oppkjøpet hastighet til 10 bilder per sekund med en automatisk pullback hastighet på 10 mm/s.
- Fest tenkelig kateter til Y-krysset via heparin cap med en 18G nål.
- Plasser kateter inn i silikon røret og identifisere Sutur tetthet av PGA mesh før lasting PGA stillaset på bioreactor.
- Plassere kateter over regionen rundt. Justere pullback enhet og se etter bilde kvalitet8.
- Hente bilder på 1, 4, 7, 10, 14, 17, 21, 28 dager i kultur for hver individuelle TEBV og lagre sekvensielt med sanntid observasjon av TEBV mikrostruktur, inkludert overflaten morfologi, intern struktur og sammensetning.
- Gjenta målingen for 3 timene å få pålitelig måling av konstruert fartøy hver gang. Ta en rekke bilder gjennom testing ved bruk av image fange programvare.
3. imaging analyse
- Bruk image analyseprogramvare for å måle TEBV veggtykkelse. Velg bildet som skal analyseres. Klikk verktøyet sporing innsiden av TEBV av programvaren automatisk og manuelt skisse yttersiden. Et diagram av tykkelse vises på skjermen.
- Gjenta målingen for 5 ganger å få pålitelig måling av sammensetningene. OCT analyse var utført av to uavhengige etterforskere blindet til innhentet informasjon.
4. høsting av TEBV og vev behandling
- Åpne silikon disables lokket plassert over bioreactor når kulturen er ferdig og kast kultur medium. Løsne ePTFE fra bioreactor lepper og klippe silikon rørene fra yttersiden av ePTFE med saks. Høste TEBVs fra bioreactor og kuttet i seksjoner for skanning elektronmikroskop eksamen.
- Ta ut resten av TEBVs og skjær i 4 µm tykke snitt. Trekk ut støtte silikon røret og fikse delene med 4% paraformaldehyde. Utfør rutinemessig histologiske farging av Masson's trichrome og Sirius røde undersøke morfologi av kollagen og PGA10,13,14.
- For å vurdere PGA innhold og kollagen komponent, observere histologic prøver med Sirius røde flekker av polarisert mikroskop. PGA restene tydelig grenser gjennom birefringence og rest området kan kvantifiseres basert på tverrsnitt10.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Tredimensjonale kultur systemet bestod av en kultur kammer i bioreactor og perfusjon systemet med en lukket væske syklus10,13 (figur 1). OCT tenkelig kateter ble satt inn i distale Y-krysset og trukket tilbake i silikon røret for bildebehandling. OCT imaging ble først brukt til å avgrense strukturelle karakterisering av biologisk nedbrytbart polymere stillaset-baserte TEBVs under bioreactor dyrking.
Figur 2 viste prosessen med utvikling vaskulær remodeling gjennom disse cross-sectional imaging av vev mikrostruktur i sanntid. Geometriske morfologi ble evaluert, inkludert veggtykkelse nedbrytbart PGA innhold og sammenligning av TEBV tykkelse i ulike kultur tidspunkt samt tilstedeværelsen av pulsatile stimulering. En trend av synkende tykkelse og dramatisk endringer foretatt vev i de to første ukene av kultur ble sett, antyder signal-rik PGA gradvis nedbrytning og strukturen til nytt vev fra løs stramt. På 21 dager i kultur, hadde er blodkar dannet en glatt struktur med ekstracellulær matrix jevnt fordelt og høy signal komponenter det meste utsvevende. Dybden av TEBVs med selv signal økte gradvis etter tre uker med kultur. Dette skjedde tidligere og de morfologiske endringene manifesterte mer åpenbart i gruppen dynamisk (Figur 3). OCT gir dermed bildebehandling utvikling vaskulær morfologi å bli visualisert på stedet og i sanntid i langvarige kultur.
Figur 4 sammenlignet OCT bilder med histopathological funn av TEBV etter 4 uker kultur. Masson's trichrome flekker demonstrerer kollagenfibre distribuert i en bestemt retning med PGA rester i media-laget av utvikling (figur 4B). Sirius røde flekker avslørte PGA rester og kollagen komponenten ved hjelp av en polarisert mikroskop (figur 4C). Skanning elektron micrographs av konstruert med kompakt mikrostruktur ble sammenlignet med histologiske vurdering (Figur 4 d). Samlet viste OCT bildene PGA var med forskjellige størrelser og porøs nettverksstruktur. Strukturen i PGA stillaset har ingen åpenbare endringen og hoven ved direkte kontakt med kultur medium i tidlige stadier av kultur. Men signal intensiteten av PGA ble redusert. PGA komponenter ble oppløst og erstattet med celler og ekstracellulær matrix. Færre fragmenter ble sett fire ukers periode. SEM bilder av cross-sectional utviklet vist fiber brudd med forlengelsen av inkubasjonstiden. Materiale og ekstracellulær matrix kompositter var i honeycomb-lignende struktur mer kompakt og mindre gjennomsiktig.
Figur 1 . Skjematisk av tissue engineering vaskulær kultur-systemet, som besto av en kultur kammer i bioreactor og perfusjon systemet for OCT bildebehandling. Pulsatile pumpen gitt en stabil væske flyt simulering biomekaniske microenvironment. OCT tenkelig kateter ble trukket tilbake i silikon røret i kultur kammeret. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2 . Mikrostruktur av vev utvikling blodkar under kultur. Over kultur tid, signal-rik PGA forringes gradvis og strukturen til nytt vev var fra løs stramt. TEBVs hadde en glatt overflate og rikelig ekstracellulær matrix jevnt fordelt etter fire uker av kultur. Det viste prosessen med utvikling vaskulær remodeling gjennom cross-sectional bilder i sanntid. Dette tallet er endret fra Chen, W. et al. 10 tykkelsen av silikon her er 0,8 mm. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3 . Sammenligning av TEBV veggen tykkelse endring under vaskulær remodeling i dynamiske og statiske grupper innhentet fra OCT målinger. Feilfelt viser standardfeil. Dette tallet er endret fra Chen, W. et al. 10 Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 4 . Imaging av biologisk nedbrytbart polymer-baserte vev-konstruert blod fartøy. (A) OCT bilde av TEBV etter fire uker av kultur. M: kultur medium; S: silikon rør; tykkelsen av silikon rør brukes her er 0,8 mm. Hvit pil angitt TEBV. Rød pil angitt PGA fragment. (B) Masson's trichrome flekker vist velorganisert kollagen fibrene sammen med gjenværende innholdet i PGA i media-laget av utvikling. Skala bar = 100 µm. (C) Sirius røde flekker avdekket PGA rester ved hjelp av en polarisert mikroskop. Grønn pil viser PGA fragment. Skala bar: 100 µm. (D) Scanning elektron micrographs foretatt fartøy med kompakt mikrostruktur var viste sammenlignes med histologiske vurdering. Skala bar = 50 µm. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Generere konstruert fartøy med strukturelle og mekaniske egenskaper ligner de av innfødte blodkar kan føre til forkorte tiden for klinisk bruk og er det ultimate mål for vaskulær engineering. Optisk Bildeteknikker tillater visualisering av vev utvikling vaskulær bestemte komponenter, som ikke kan overvåke enkelte konstruksjoner hele kultur og eksponering grafts til en kultur miljø uten å svekke sterilitet7. I denne artikkelen, er kultur kammeret separert fra perfusjon systemet. Relativt uavhengig perfusjon systemet garanterer nedgang risikoen for forurensing under kultur og plassering av OCT guidewire. I mellomtiden denne intraluminal imaging modalitet vedtatt lett og sikkerhet overvåking av TEBVs i situs med høy oppløsning nærmer seg at av histopatologi, som laget av TEBV vekst status mer praktisk og var ventet å bli brukt før eller etter implant plassering.
Gjeldende protokollen angir en lett tilgjengelig, fast sanntid og destruktiv tenkelig strategi for å evaluere nedbrytbart polymer-baserte utviklet fartøyet utvikling med kateter-baserte OCT. Gjennom observasjon av dynamisk prosess, kan noen viktigste faktorene som påvirker vaskulær engineering, som forurensning eller umatchede celle-materiell samhandling førte til vev tap, skilles med tidlig oppdagelse. Viktige skritt for å sikre effekten av protokollen inkluderer fabrikasjon av NaOH endret PGA skafottet, vellykket såing av HUASMCs i stillaset, separasjon steril kultur-systemet fra overvåking system, raskt og dyktige kateter operasjonen prosessen .
Denne teknikken kan benyttes for å vurdere fornedrelse stater og komplekse strukturen i PGA stillaser blandet nytt vev. Polymere stillaset med porøse nettverksstruktur forringer gradvis og dominerer prosessen med vaskulær remodeling i de første tre ukene, som er viktig for celleadhesjon og ekstracellulær matrix avsetning med en tre-dimensjonert for næringsstoffer exchange og en signal carrier15,16. For kvantifisering av PGA restene i utvikling fartøy tydelig identifisert av Sirius rød-farget bilder, bruk av polarisert mikroskop17 i nedbrytbart stillaset-baserte vaskulær engineering har potensial til å bli standard evalueringen etter dyrking. Dermed kan OCT imaging kombinert med polarisert mikroskop tjene som kvalitative og kvantitative metoder for å vurdere PGA degradering av vaskulær engineering.
En begrensning av denne teknikken er oppløsning grensen å vurdere celle spredning, distribusjon, celle-celle og celle-ECM interaksjon under utvikling vaskulær remodeling. Vi håper å finne egnet metode for å undersøke TEBVs mikrostruktur mobilnettet eller subcellular nivå18 og kvantifisere vekst kinetics. Med kvantitativ analyse av gjennomsnittlig optisk signalene OCT bildebehandling, kan vi være mer bevisst på mekanismen av materielle degradering av vaskulær engineering. Slike eksperimenter blir vurdert for vår fremtidige studier.
Samlet viser våre resultater at OCT er lett tilgjengelig, fast sanntid og destruktiv imaging strategi for å overvåke vekst og remodeling av TEBVs. Det benyttes betegner strukturelle arkitekturdetaljer og langsiktig remodeling prosessen med utvikling fartøy. Anvendelsen av polarisert mikroskop som supplerende bevis for kvantifisering av polymere restene i utvikling fartøyer kan være nyttig for å vurdere stillaset fornedrelse kombinert med OCT bildebehandling. Samlet har gjeldende protokollen lovende verdien av OCT for sin søknad i vaskulær tissue engineering.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne erklærer de har ingen konkurrerende økonomiske interesser.
Acknowledgments
Vi ønsker å erkjenne vitenskap og teknologi planlegging prosjektet i Guangdong-provinsen i Kina (2016B070701007) for å støtte dette arbeidet.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| PGA mesh | Synthecon | ||
| silicone tube | Cole Parmer | ||
| connector | Cole Parmer | ||
| intravascular OCT system | St. Jude Medical, Inc | ILUMIEN™ OPTIS™ SYSTEM | |
| scanning electron microscopic | Philips | FEI Philips XL-30 | |
| polarized microscope | Olympus | Olympus BX51 | |
| sutures | Johnson & Johnson | ||
| pulsatile pump | Guangdong Cardiovascular Institute | ||
| LightLab Imaging software | St. Jude Medical, Inc |
References
- Chan-Park, M. B., et al. Biomimetic control of vascular smooth muscle cell morphology and phenotype for functional tissue-engineered small-diameter blood vessels. Journal of Biomedical Materials Research Part A. 88, 1104-1121 (2009).
- Ballyns, J. J., Bonassar, L. J. Image-guided tissue engineering. Journal of Cellular & Molecular Medicine. 13, 1428-1436 (2009).
- Smith, L. E., et al. A comparison of imaging methodologies for 3D tissue engineering. Microscopy Research & Technique. 73, 1123-1133 (2010).
- Chang, W. G., Niklason, L. E. A short discourse on vascular tissue engineering. NPJ Regenerative Medicine. 2, (2017).
- Appel, A. A., Anastasio, M. A., Larson, J. C., Brey, E. M. Imaging challenges in biomaterials and tissue engineering. Biomaterials. 34, 6615-6630 (2013).
- Rice, W. L., et al. Non-invasive characterization of structure and morphology of silk fibroin biomaterials using non-linear microscopy. Biomaterials. 29, 2015-2024 (2008).
- Niklason, L. E., et al. Enabling tools for engineering collagenous tissues integrating bioreactors, intravital imaging, and biomechanical modeling. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. , 3335-3339 (2010).
- Zheng, K., Rupnick, M. A., Liu, B., Brezinski, M. E. Three Dimensional OCT in the Engineering of Tissue Constructs: A Potentially Powerful Tool for Assessing Optimal Scaffold Structure. Open Tissue Engineering & Regenerative Medicine Journal. 2, 8-13 (2009).
- Gurjarpadhye, A. A., et al. Imaging and characterization of bioengineered blood vessels within a bioreactor using free-space and catheter-based OCT. Lasers in Surgery and Medicine. 45, 391-400 (2013).
- Chen, W., et al. In vitro remodeling and structural characterization of degradable polymer scaffold-based tissue-engineered vascular grafts using optical coherence tomography. Cell & Tissue Research. 370, 417-426 (2017).
- Naito, Y., et al. Characterization of the natural history of extracellular matrix production in tissue-engineered vascular grafts during neovessel formation. Cells Tissues Organs. 195, 60-72 (2012).
- Ye, C., et al. The design conception and realization of pulsatile ventricular assist devices-from Spiral-Vortex pump to Luo-Ye pump. Chinese Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 9, 35-40 (2002).
- Chen, W., et al. Application of optical coherence tomography in tissue engineered blood vessel culture based on Luo-Ye pump. Chinese Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 31, 687-690 (2015).
- Pickering, J. G., Boughner, D. R., et al. Quantitative assessment of the age of fibrotic lesions using polarized light microscopy and digital image analysis. American Journal of Pathology. 138, 1225-1231 (1991).
- Martinho, J. A., et al. Dependence of optical attenuation coefficient and mechanical tension of irradiated human cartilage measured by optical coherence tomography. Cell Tissue Bank. 16, 47-53 (2015).
- Poirierquinot, M., et al. High-resolution 1.5-Tesla magnetic resonance imaging for tissue-engineered constructs: a noninvasive tool to assess three-dimensional scaffold architecture and cell seeding. Tissue Engineering Part C Methods. 16, 185-200 (2010).
- Naito, Y., et al. Beyond burst pressure: initial evaluation of the natural history of the biaxial mechanical properties of tissue-engineered vascular grafts in the venous circulation using a murine model. Tissue Engineering Part A. 20, 346-355 (2014).
- Smart, N., Dube, K. N., Riley, P. R. Coronary vessel development and insight towards neovascular therapy. International Journal of Clinical and Experimental Pathology. 90, 262-283 (2009).
