Summary
Ett steg protokoll för icke-förstörande och lång period övervaka processen för vaskulär remodeling och byggnadsställning nedbrytning i realtid kultur av biologiskt nedbrytbart polymera byggnadsställning-baserade vävnadstekniska blodkärl med pulserande stimulering med hjälp av optisk koherenstomografi beskrivs här.
Abstract
Bakåtkompilerade vaskulär grafter med strukturella och mekaniska egenskaper som liknar naturliga blodkärl förväntas möta den växande efterfrågan på arteriell bypass. Karakterisering av tillväxtdynamiken och remodeling process av nedbrytbar polymer byggnadsställning-baserade vävnadstekniska blodkärl (TEBVs) med pulserande stimulering är avgörande för kärlvävnad engineering. Optiska bildteknik sticker ut som kraftfulla verktyg för att övervaka vaskularisering av bakåtkompilerade vävnad möjliggör högupplöst imaging i realtid kultur. Detta papper visar en icke-förstörande och snabbt realtid imaging strategi för att övervaka tillväxten och ombyggnad av TEBVs i långsiktiga kultur med hjälp av optisk koherenstomografi (OCT). Geometriska morfologi utvärderas, inklusive vaskulär remodeling process, väggtjocklek och jämförelse av TEBV tjocklek i olika kultur tidpunkter och förekomsten av pulserande stimulering. Slutligen, ULT erbjuder praktiska möjligheter för realtid observation av nedbrytning av polymeren i rekonstruktionen vävnader under pulserande stimulering eller inte och i varje fartyg-segmentet, med jämfört med bedömningen av polymer nedbrytning med hjälp scanning electron microscopic(SEM) och polariserande Mikroskop.
Introduction
Vävnadstekniska blodkärl (TEBVs) är de mest lovande material som en idealisk vaskulär transplantat1. För att utveckla transplantat för att vara kliniskt användbar med liknande strukturella och funktionella egenskaper som infödda fartyg, har flera tekniker utformats för att upprätthålla vaskulär funktion2,3. Även om det har varit konstruerade fartyg med acceptabel patency priser under implantation och i FASIII kliniska studie4, visar långtidsodling och hög kostnad också nödvändigheten av att övervaka utvecklingen av TEBVs. Förståelse av extracellulära matrix(ECM) tillväxt, ombyggnad och anpassning processer i TEBVs i biomimetiska kemo-mekanisk miljö kan ge avgörande information för utveckling av kärlvävnad engineering.
Den perfekta strategin att spåra utvecklingen av liten diameter konstruerade fartyg5 bör vara icke-förstörande, steril, längsgående, tredimensionella och kvantitativa. TEBVs annan kultur villkor kunde bedömas av denna bildframställning modalitet, även inklusive förändringar före och efter vaskulär transplantation. Strategier för att beskriva funktioner levande konstruerade fartyg behövs. Optiska bildteknik tillåta visualisering och kvantifiering av vävnad nedfall och biomaterial. Andra fördelar är möjligheten att aktivera djup vävnad och etikett-fri avbildning med hög upplösning6,7. Bild-specifika molekyler och mindre lättillgängligt optisk utrustning för realtidsövervakning är dock ett betydande praktiska hinder, som har begränsad den omfattande tillämpningen av ickelinjär optisk mikroskopi. Optisk koherenstomografi (OCT) är en optisk metod med intravaskulär bildgivande modalitet som utbredda kliniska verktyg att vägleda hjärt interventionell terapi8. Metoden i OCT rapporterades i litteraturen som ett sätt att bedöma väggtjocklek av TEBVs9,10, tillsammans med jakande avbildningsmetoder för kärlvävnad engineering forskning. Medan, dynamiken i konstruerad vaskulär observerades tillväxt och remodeling inte.
I detta manuskript detalj vi utarbetandet av biologiskt nedbrytbart polymera byggnadsställning-baserade TEBVs för fyra veckor kultur. Mänskliga navelsträngen artärer vaskulära glatta muskelceller (HUASMCs) är expanderat och seedade i en porös nedbrytbara polyglycolic syra (PGA) ställningar i bioreaktor. Biologiskt nedbrytbara polymerer spela rollen i en tillfällig substrat för vävnadsteknik och har en viss nedbrytning kurs11. För att säkerställa en lämplig matchning mellan byggnadsställning nedbrytning och neo-vävnad formation, är ECM och PGA ställningar avgörande faktorer för effektiv vaskulär remodeling. Perfusion systemet simulerar den biomekaniska mikromiljö infödda fartyg och upprätthåller en konsekvent deformation under trycket stimulering.
Syftet med protokollet presenterade är att beskriva en relativt enkel och icke-förstörande strategi för TEBVs imaging och långsiktig övervakning av kultur. Detta protokoll kan utnyttjas för visualisering av morfologiska förändringar och tjocklek mätningar av bakåtkompilerade fartyg under olika odlingsbetingelser. Dessutom kan analyser av polymerbaserade material nedbrytning i den Vävnadsrekonstruktion ställningar utföras för identifiering. Genom att kombinera metoder av scanning electron microscopic(SEM) och polariserande Mikroskop används i detta protokoll, korrelation och kvantifiering av extracellulärmatrix distribution och PGA nedbrytning kan göras, vilket kan underlätta bedömningen av byggnadsställning nedbrytning i kombination med OCT imaging.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. nedbrytbara PGA byggnadsställning baserat vävnadstekniska fartyg kultur
- PGA byggnadsställning Fabrication
- Sy PGA mesh (diameter 19 mm och 1 mm tjock) runt silikon slangar steriliserad med etylenoxid (17 cm längd 5,0 mm i diameter och 0,3 mm tjock) med 5-0 sutur.
- Sy polytetrafluoreten (ePTFE, 1cm längd) med 4-0 sutur på varje ände av PGA mesh och överlappas av 2 mm.
- Doppa PGA ställningar med handen i 1 mol/L NaOH för 1 min att justera det rumsliga strukturerar av mesh och njuta med vävnadsodling grade vatten tre gånger för 2 min varje. Försiktigt klappa torrt ställningen med ett läskpapper varje gång. Sedan torka upp ställningar i en huv med en fläkt för 1 h.
- Montering av bioreaktor och Y-korsningen för OCT imaging
- Blötlägg den egenutvecklade glas cylindriska bioreaktor (10 cm i diameter och 11,7 cm i höjd med fyra läppar inuti och fyra sida-armar utanför reaktorn som visas i figur 1), PGA ställningar, silikon tub (yttre diameter 5 mm, tjocklek 0,3 mm), biokompatibel rör, kopplingar, rör bar och utrustning för montering i en 95% etanol tank för 2 h.
- Dra PGA byggnadsställning genom sida-armar av den bioreaktor ansluten till ena sidan med en kontakt samt en annan sida med Y-korsningen används för att leverera OCT ledaren. Montera en annan PGA byggnadsställning i bioreaktor på samma sätt. Se figur 1.
- Passar ePTFE till bioreaktor läppar av åtdragning med 4-0 suturer.
- Sätta bioreaktor i etanol tanken igen för 1 h och torka upp övernattning i huva med fläkten på.
- Sådd av HUASMCs och statiska bioreaktor luftkonditionering
- Isolera HUASMCs från mänskliga navelsträngen artärer genom standard explant tekniker.
- Expandera och underhålla celler i smidig muskel cell odlingsmedium består av DMEM medium, 20% fetalt bovint serum, 2,36 promille HEPES, 100 U/mL penicillin G, 50 µg/mL prolin, 20 µg/mL alanin, 50 µg/mL glycin, 1,5 µg/mL CuSO4, 50 µg/mL askorbinsyra , 10 ng/mL basic fibroblast tillväxtfaktor och 10 ng/mL trombocyt-härrör tillväxtfaktor.
- Frö HUASMCs med en koncentration på 5 × 106 celler/mL i ovanstående odlingssubstratet på de PGA ställningar.
- Sätta en uppståndelse bar (1,5 cm längd) i bioreaktor. Infoga en inmatningsröret (5 mm i diameter, 15 cm längd) och tre korta slangar segment (5 mm i diameter, 7 cm längd) för gasutbyte genom silikon propp locket.
- Bifogas varje förändring luftslangen och en heparin cap till inmatningsröret på PTFE 0,22 µm filter. Justera den uppståndelse bar med en omrörningsanordning hastighet av 13 omgångar per minut. Montera glas bioreaktor, propp silikonlocket och PGA byggnadsställning i kultur systemet.
- Tillåta HUASMCs att ansluta sig för 45 min av lutar bioreaktor varje 15 min med stativ, till vänster och höger. Reaktorn hamnar och lederna är alla förseglade med paraffin film.
- Anslut Luo-ni pump, PBS väska, föraren med biokompatibel rör som perfusion systemet. Öppna enheten att fylla rören med PBS.
- Placera den övergripande bioreaktor i en fuktad inkubator med 5% CO2 vid 37 ° C. Fyll kultur kammaren med 450 mL HUASMCs odlingssubstrat.
- Tryck på stoppknappen och slå av strömmen till enheten enheten. Växa de seedade ställningar under statisk kultur för en vecka.
- Ändra odlingssubstratet varje 3-4 dagar genom att aspirera hälften av gamla medium genom inmatningsrör och påfyllning reaktorn med motsvarande mängd färska odlingsmedium.
- Beredning av perfusion systemet för OCT imaging
- Pumpa vätskor i PBS påsen att cirkulera genom biokompatibla rör och tillbaka till påsen.
- Öppna kraften i drivrutinen och reglera pump inställning med en frekvens på 60 slag per minut och output systoliskt blodtryck på 120 mmHg. Justera mekaniska parametrar enligt behoven hos tissue engineering vaskulär kultur.
- Klicka på knappen Kör för att göra perfusion systemet att fungera. Ge ovan fast pulserande stimulering till fartyg i 3 veckor genom iterativt tryckförvaring biokompatibla rör10,12 efter 1 vecka av statisk kultur.
2. Utför optisk Imaging med okt
- Använda en ljuskälla för 10-20 mikroM axiella upplösning och bilddjup av 1-2 mm för att identifiera strukturen för TEBV baserat på frekvens-domain OCT intravaskulär imaging system9.
- Slå på strömbrytaren och öppna programvaran image capture.
- Ansluta fiber optic avbildningskatetern till drive-motor och optiska styrenheten (DOC) med kateter automatisk retreat funktion.
- Ange parametrar för bild förvärv ränta till 10 bildrutor per sekund med en automatisk pullback hastighet av 10 mm/s.
- Tillmäter avbildningskatetern Y-korsningen via heparin cap med en 18G nål.
- Placera katetern i silikon röret och identifiera suturen täthet PGA mesh före lastning PGA byggnadsställning på bioreaktor.
- Placera kateterspetsen över regionen av intresse. Justera pullback enheten och kontrollera för bild kvalitet8.
- Skaffa bilder på 1, 4, 7, 10, 14, 17, 21, 28 dagar i kulturen för varje enskild TEBV och spara sekventiellt med realtid observationen av TEBV mikrostruktur, inklusive ytan morfologi, interna struktur och sammansättning.
- Upprepa mätningen för 3 gånger för att få tillförlitlig mätning av bakåtkompilerade fartyg varje gång. Fånga en serie bilder i hela testning med programvaran image capture.
3. imaging analys
- Använd bild analys programvara för att mäta TEBV väggtjocklek. Välj bilden som ska analyseras. Klicka på verktyget spårning för att identifiera den inre sidan av TEBV av programvaran automatiskt och manuellt skissa den yttre sidan. Ett diagram över tjocklek visas på skärmen.
- Upprepa mätningen för 5 gånger för att få tillförlitlig mätning av konstruktioner. OCT analysen utfördes av två oberoende utredare förblindade till den erhållna informationen.
4. skörd av TEBV och vävnad behandling
- Öppna silikon propp locket placeras över bioreaktor när kulturen är klar och kassera odlingssubstratet. Lossa ePTFE från bioreaktor läppar och klipp silikon rören från utsidan av ePTFE med sax. Skörda TEBVs från bioreaktor och skär i sektioner för scanning electron microscopy undersökning.
- Ta ut resten av TEBVs och skär i 4 µm tjocka sektioner. Dra ut stödjande silikon röret och fixa avsnitt med 4% PARAFORMALDEHYD. Utföra rutinmässig histologiska färgning av Massons trikrom och Sirius röda att undersöka morfologi av kollagen och PGA10,13,14.
- För att bedöma PGA innehåll och kollagen komponent, iaktta histologiska prover med Sirius röda färgning av polariserande Mikroskop. PGA resterna är klart avgränsade genom Dubbelbrytning och området kvarleva kan kvantifieras baserat på tvärsnittsarean10.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Tredimensionella kultur systemet bestod av en kultur kammare i bioreaktor och perfusion systemet med en sluten vätska cykel10,13 (figur 1). OCT avbildningskatetern var insatt i den distala änden av Y-korsningen och drog tillbaka i silikon röret för avbildning. OCT imaging användes först att avgränsa strukturella karakterisering av biologiskt nedbrytbart polymera byggnadsställning-baserade TEBVs bioreaktor odlingen.
Figur 2 visade processen av bakåtkompilerade vaskulär remodeling genom dessa tvärsnittsdata imaging vävnad mikrostruktur i realtid. Geometriska morfologi utvärderades, inklusive väggtjocklek, nedbrytbara PGA innehåll och jämförelse av TEBV tjocklek i olika kultur tidpunkter samt förekomsten av pulserande stimulering. En trend av minskande tjocklek och dramatiskt förändringar av bakåtkompilerade vävnad inom de första två veckorna av kultur sågs, vilket tyder på signalera-rikt PGA gradvis nedbrytning och strukturera av ny vävnad från lös för hårt. 21 dagar i kultur, hade vaskulatur bildat en slät struktur med extracellulära matrix jämnt fördelade och hög signal komponenter mestadels skingras. Väggtjocklek av TEBVs med jämn signal ökade gradvis efter tre veckor av kultur. Denna ombyggnad inträffade tidigare och de morfologiska förändringarna manifesteras mer självklart i den dynamiska gruppen (figur 3). Därmed möjliggör OCT avbildning av bakåtkompilerade vaskulär morfologi till visualiseras på plats och i realtid under långvariga kultur.
Figur 4 jämfört OCT bilder med histopatologiska fynd av TEBV efter 4 veckor av kultur. Massons trikrom färgning visar kollagenfibrer som distribueras i en viss riktning tillsammans med PGA resterna i media lager av bakåtkompilerade fartyg (figur 4B). Sirius röda färgning avslöjade PGA resterna och kollagen-komponenten med hjälp av ett polariserande Mikroskop (figur 4 c). Scanning elektronmikrografier konstruerade fartyg med kompakta mikrostruktur jämfördes med histologisk utvärdering (figur 4 d). Sammantaget visade OCT bilder PGA var med olika storlekar och porösa nätverksstruktur. PGA byggnadsställning struktur har ingen uppenbar förändring och svullen av direktkontakten med odlingsmedium i tidigt skede av kultur. Men signalintensitet av PGA minskade. PGA komponenter var upplöstes och ersattes med celler och extracellulära matrix. Färre fragment sågs fyraveckorsperiod. SEM-bilder av tvärsnittsdata konstruerade fartyg visade fiber bristning förlängning av inkubationstiden. Material- och extracellular matris kompositer var i honeycomb-liknande struktur med mer kompakt och mindre öppenhet.
Figur 1 . Schematisk av Vävnadsrekonstruktion vaskulär kultur system, som bestod av en kultur kammare i bioreaktor och perfusion systemet för OCT imaging. Pulserande pumpen som en stabil vätskeflöde simulera den biomekaniska mikromiljö. OCT avbildningskatetern drogs tillbaka i silikon röret i kultur kammaren. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2 . Mikrostrukturen i tissue engineered blodkärl under kultur. Kultur med tiden signalera-rikt PGA försämras gradvis och strukturera av ny vävnad från lös för hårt. TEBVs hade en slät yta och riklig extracellulär matrix jämnt fördelade efter fyra veckor av kultur. Det visade processen av bakåtkompilerade vaskulär remodeling genom tvärsnittsdata bilder i realtid. Denna siffra har ändrats från Chen, W. et al. 10 tjockleken på silikon slang som används här är 0,8 mm. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3 . Jämförelse av TEBV vägg tjocklek förändring under vaskulär remodeling i dynamiska och statiska grupper erhålls av OCT mätningar. Felstaplar visar standardfel. Denna siffra har ändrats från Chen, W. et al. 10 Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 4 . Avbildning av biologiskt nedbrytbar polymer-baserade vävnadstekniska blodkärl. (A) OCT bild av TEBV efter fyra veckor av kultur. M: odlingsmedium; S: silikon röret; tjockleken på silikon slang som används här är 0,8 mm. Vit pil anges TEBV. Röd pil anges PGA fragment. (B) Massons trikrom färgning visade välorganiserad kollagenfibrer tillsammans med resthalten av PGA i media lager av bakåtkompilerade fartyg. Skalstapeln = 100 µm. (C) Sirius röda färgning avslöjade PGA rester med hjälp av ett polariserande Mikroskop. Grön pil anger PGA fragment. Skalstapeln: 100 µm. (D) Scanning elektronmikrografier konstruerade fartyg med kompakta mikrostruktur var visade att jämföra med histologisk utvärdering. Skalstapeln = 50 µm. vänligen klicka här för att visa en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Att generera konstruerade fartyg med strukturella och mekaniska egenskaper liknar dem av infödda blodkärl kan leda till att förkorta tiden för klinisk användning och är det yttersta målet för vaskulär engineering. Optiska bildteknik tillåta visualisering av vävnadstekniska vaskulär specifika komponenter, som inte kan övervaka enskilda konstruktioner i hela kultur och exponering ympkvistar till en kultur miljö utan att äventyra sterilitet7. I denna artikel, är kultur kammaren separerad från perfusion systemet. Relativt oberoende perfusion systemet garanterar minskar risken för förorening under kultur och placeringen av OCT ledaren. Under tiden detta intraluminal imaging modalitet antogs lätt och säkerhetsövervakning av TEBVs i situs med hög upplösning närmar sig det av histopatologi, som gjort bedömningen av TEBV tillväxt status mer praktisk och var även förväntas användas före eller efter implantatets placering.
Det nuvarande protokollet anger en lättillgänglig, snabbt i realtid och icke-förstörande tänkbar strategi för att utvärdera nedbrytbar polymer-baserade konstruerade fartyg utveckling med hjälp av kateter-baserade OCT. Genom observation av den dynamiska processen, kan några huvudfaktorer som påverkar vaskulär engineering, såsom förorening eller omatchade cell-material samspel lett till att vävnad, särskiljas med tidig upptäckt. Kritiska steg för att säkerställa effekten av protokollet omfatta tillverkning av NaOH-modifierade PGA schavotten, lyckad sådd av HUASMCs i byggnadsställning, sterila kultur separationssystem från övervakningssystemet, snabb och skicklig katetern operation förlopp .
Denna teknik kan utnyttjas för att bedöma nedbrytning staterna och komplex struktur av PGA ställningar blandas in med ny vävnad. Den polymera Rullställning med porös struktur bryts ned successivt och dominerar processen av vaskulär remodeling i de första tre veckorna, som är viktiga för celladhesion och extracellulär matrix nedfall med en tre-dimensionerad struktur för näringsämne exchange och som en signal carrier15,16. För kvantifiering av PGA resterna i konstruerade fartyg tydligt identifieras av Sirius röd-färgade bilder, användning av polariserade Mikroskop17 i nedbrytbar byggnadsställning-baserade vaskulär engineering har potential att bli standard utvärderingen efter odling. OCT imaging kombinerat med polariserande Mikroskop kan därmed fungera som kvalitativa och kvantitativa metoder för att bedöma PGA nedbrytning i vaskulär engineering.
En begränsning av denna teknik är upplösningen gränsen att bedöma cell spridning, distribution, cell-cell och cell-ECM interaktion under bakåtkompilerade vaskulär remodeling. Vi hoppas att hitta lämplig metod att undersöka TEBVs mikrostruktur cellular eller subcellulär nivå18 och kvantifiera tillväxten kinetik. Kvantitativ analys av genomsnittliga optiska signaler OCT Imaging, skulle vi vara mer medvetna om mekanismen av materiella nedbrytning i vaskulär engineering. Sådana experiment övervägs för våra framtida studier.
Våra resultat visar sammantaget att OCT är en lättillgänglig, snabbt i realtid och icke-förstörande imaging strategi för att övervaka tillväxten och ombyggnad av TEBVs. Det används för att karakterisera strukturella arkitektoniska särdrag och den långsiktiga remodeling processen konstruerade fartyg. Tillämpningen av polariserande Mikroskop som kompletterande bevisning för kvantifiering av Polymera resterna i konstruerade fartyg kan vara användbart för att bedöma byggnadsställning nedbrytning kombinerat med OCT imaging. Sammantaget håller det nuvarande protokollet lovande värde av OCT för dess tillämpning i kärlvävnad engineering.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna förklarar de har inga konkurrerande finansiella intressen.
Acknowledgments
Vi skulle vilja erkänna vetenskaps- och teknikprojekt för planering av Guangdong provinsen i Kina (2016B070701007) för att stödja detta arbete.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| PGA mesh | Synthecon | ||
| silicone tube | Cole Parmer | ||
| connector | Cole Parmer | ||
| intravascular OCT system | St. Jude Medical, Inc | ILUMIEN™ OPTIS™ SYSTEM | |
| scanning electron microscopic | Philips | FEI Philips XL-30 | |
| polarized microscope | Olympus | Olympus BX51 | |
| sutures | Johnson & Johnson | ||
| pulsatile pump | Guangdong Cardiovascular Institute | ||
| LightLab Imaging software | St. Jude Medical, Inc |
References
- Chan-Park, M. B., et al. Biomimetic control of vascular smooth muscle cell morphology and phenotype for functional tissue-engineered small-diameter blood vessels. Journal of Biomedical Materials Research Part A. 88, 1104-1121 (2009).
- Ballyns, J. J., Bonassar, L. J. Image-guided tissue engineering. Journal of Cellular & Molecular Medicine. 13, 1428-1436 (2009).
- Smith, L. E., et al. A comparison of imaging methodologies for 3D tissue engineering. Microscopy Research & Technique. 73, 1123-1133 (2010).
- Chang, W. G., Niklason, L. E. A short discourse on vascular tissue engineering. NPJ Regenerative Medicine. 2, (2017).
- Appel, A. A., Anastasio, M. A., Larson, J. C., Brey, E. M. Imaging challenges in biomaterials and tissue engineering. Biomaterials. 34, 6615-6630 (2013).
- Rice, W. L., et al. Non-invasive characterization of structure and morphology of silk fibroin biomaterials using non-linear microscopy. Biomaterials. 29, 2015-2024 (2008).
- Niklason, L. E., et al. Enabling tools for engineering collagenous tissues integrating bioreactors, intravital imaging, and biomechanical modeling. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. , 3335-3339 (2010).
- Zheng, K., Rupnick, M. A., Liu, B., Brezinski, M. E. Three Dimensional OCT in the Engineering of Tissue Constructs: A Potentially Powerful Tool for Assessing Optimal Scaffold Structure. Open Tissue Engineering & Regenerative Medicine Journal. 2, 8-13 (2009).
- Gurjarpadhye, A. A., et al. Imaging and characterization of bioengineered blood vessels within a bioreactor using free-space and catheter-based OCT. Lasers in Surgery and Medicine. 45, 391-400 (2013).
- Chen, W., et al. In vitro remodeling and structural characterization of degradable polymer scaffold-based tissue-engineered vascular grafts using optical coherence tomography. Cell & Tissue Research. 370, 417-426 (2017).
- Naito, Y., et al. Characterization of the natural history of extracellular matrix production in tissue-engineered vascular grafts during neovessel formation. Cells Tissues Organs. 195, 60-72 (2012).
- Ye, C., et al. The design conception and realization of pulsatile ventricular assist devices-from Spiral-Vortex pump to Luo-Ye pump. Chinese Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 9, 35-40 (2002).
- Chen, W., et al. Application of optical coherence tomography in tissue engineered blood vessel culture based on Luo-Ye pump. Chinese Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 31, 687-690 (2015).
- Pickering, J. G., Boughner, D. R., et al. Quantitative assessment of the age of fibrotic lesions using polarized light microscopy and digital image analysis. American Journal of Pathology. 138, 1225-1231 (1991).
- Martinho, J. A., et al. Dependence of optical attenuation coefficient and mechanical tension of irradiated human cartilage measured by optical coherence tomography. Cell Tissue Bank. 16, 47-53 (2015).
- Poirierquinot, M., et al. High-resolution 1.5-Tesla magnetic resonance imaging for tissue-engineered constructs: a noninvasive tool to assess three-dimensional scaffold architecture and cell seeding. Tissue Engineering Part C Methods. 16, 185-200 (2010).
- Naito, Y., et al. Beyond burst pressure: initial evaluation of the natural history of the biaxial mechanical properties of tissue-engineered vascular grafts in the venous circulation using a murine model. Tissue Engineering Part A. 20, 346-355 (2014).
- Smart, N., Dube, K. N., Riley, P. R. Coronary vessel development and insight towards neovascular therapy. International Journal of Clinical and Experimental Pathology. 90, 262-283 (2009).
