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Neuroscience

कॉकलियर प्रत्यारोपण सर्जरी और विद्युत-C57BL/6 चूहों में Brainstem प्रतिक्रिया रिकॉर्डिंग पैदा

Published: January 9, 2019 doi: 10.3791/58073
Automatic Translation
1,2, 1, 2
1Hearing Systems Group, Department of Electrical Engineering, Technical University of Denmark, 2Brain and Sound Lab, Department of Biomedicine, Basel University

Summary

कॉकलियर प्रत्यारोपण के पशु मॉडल विद्युत उत्तेजना के साथ स्थाई sensorineural सुनवाई हानि के इलाज के तकनीकी ठिकानों के ज्ञान अग्रिम कर सकते हैं । इस अध्ययन में एक इलेक्ट्रोड सरणी के तीव्र गगनभेदी और कॉकलियर आरोपण के लिए एक शल्य चिकित्सा प्रोटोकॉल प्रस्तुत करता है और साथ ही श्रवण brainstem प्रतिक्रिया के साथ कार्यात्मक मूल्यांकन.

Abstract

कॉकलियर प्रत्यारोपण (सीआईएस) neuroprosthetic डिवाइस हैं जो बधिर लोगों को सुनने की भावना प्रदान कर सकते हैं । हालांकि, एक CI सुनवाई के सभी पहलुओं को बहाल नहीं कर सकता । प्रत्यारोपण प्रौद्योगिकी के सुधार की जरूरत है अगर CI उपयोगकर्ताओं संगीत अनुभव करने के लिए कर रहे हैं और अधिक प्राकृतिक वातावरण में प्रदर्शन, इस तरह के बाहर प्रतिस्पर्धा टॉकीज के साथ एक आवाज सुनने के रूप में, प्रतिबिंब, और अन्य ध्वनियों. इस तरह के सुधार के लिए प्रयोगात्मक पशुओं को बेहतर कोक्लीअ में बिजली की उत्तेजना और पूरे श्रवण प्रणाली में अपनी प्रतिक्रियाओं के तंत्र को समझने की आवश्यकता है । माउस एक तेजी से आकर्षक कई आनुवंशिक मॉडल उपलब्ध होने के कारण मॉडल है । हालांकि, एक CI मॉडल के रूप में इस प्रजाति का सीमित उपयोग मुख्य रूप से छोटे इलेक्ट्रोड arrays प्रत्यारोपित की कठिनाई की वजह से है । शल्य प्रक्रिया के बारे में अधिक जानकारी के लिए बहुत रुचि के है इसलिए CI अनुसंधान में चूहों के उपयोग का विस्तार कर रहे हैं ।

इस रिपोर्ट में, हम विस्तार में वर्णन तीव्र फरियाद और कॉकलियर C57BL/6 माउस तनाव में एक इलेक्ट्रोड सरणी के आरोपण के लिए प्रोटोकॉल. हम विद्युत के साथ इस प्रक्रिया के कार्यात्मक प्रभावकारिता प्रदर्शित-श्रवण brainstem प्रतिक्रिया (eABR) और चेहरे तंत्रिका उत्तेजना के उदाहरण दिखाते हैं । अंत में, हम भी एक गगनभेदी प्रक्रिया जब एक सामांय रूप से सुनने के जानवर का उपयोग सहित के महत्व पर चर्चा । इस माउस मॉडल आनुवंशिक और neurobiological तंत्र है कि CI उपयोगकर्ताओं के लिए प्रासंगिकता का होगा अध्ययन करने के लिए एक शक्तिशाली अवसर प्रदान करता है ।

Introduction

कॉकलियर प्रत्यारोपण (सीआईएस) इलेक्ट्रॉनिक उपकरणों है कि गंभीर और गहरा सुनवाई हानि के साथ लोगों को सुनवाई की भावना प्रदान कर सकते हैं । यह शल्य चिकित्सा के भीतरी कान के कोक्लीअ में प्रत्यारोपित इलेक्ट्रोड का उपयोग करता है सीधे श्रवण तंत्रिका उत्तेजित । तारीख करने के लिए, CI सबसे सफल संवेदी कृत्रिम अंग अंग है और ६००,००० से अधिक लोगों को दुनिया भर में1मदद की है । हालांकि, डिवाइस में कमियों है । सबसे पहले, उपकरण द्वारा प्रदान लाभ प्राप्तकर्ताओं के बीच काफी भिंनता है । दूसरा, शोर वातावरण और संगीत में भाषण अभी भी खराब सबसे CI उपयोगकर्ताओं द्वारा माना जाता है ।

कई वर्षों के लिए, पशु मॉडल बेहतर CI अनुसंधान में इन मुद्दों को समझने के लिए और लगातार सुरक्षा और उपकरणों की प्रभावकारिता में सुधार करने के लिए इस्तेमाल किया गया है । मॉडल कई घटनाएं में मूल्यवान अंतर्दृष्टि दिया है, ऐसे मस्तिष्क में प्लास्टिक परिवर्तन के रूप में जगह ले सीआई आरोपण2के बाद, जीन थेरेपी लागू करने के लिए अवशिष्ट सुनवाई3को बनाए रखने के प्रभाव, और के भौतिक गुण विद्युत श्रवण तंत्रिका4प्रेरित, कई अंय उदाहरणों के बीच ।

चूहों एक शक्तिशाली मॉडल जीव है बहरापन के आनुवंशिक मॉडल की बड़ी उपलब्धता के कारण । अंय लाभों के लिए माउस जीनोम में हेरफेर करने की क्षमता शामिल है (जैसे, CRISPR-कैस प्रणाली के माध्यम से), उंनत इमेजिंग तकनीक का उपयोग करने के लिए तंत्र का अध्ययन, विशेष रूप से मस्तिष्क में, उच्च प्रजनन दर, तेजी से विकास का अवसर और आसान प्रजनन और हैंडलिंग । चूहों में CI सर्जरी प्रदर्शन में मुख्य तकनीकी चुनौतियों कोक्लीअ के छोटे आकार और एक बड़ी stapedial धमनी (एसए) की उपस्थिति कर रहे हैं । एसए आमतौर पर मानव में भ्रूण के विकास के दौरान गायब हो जाता है, लेकिन चूहों, चूहों, और gerbils सहित कुतर के एक नंबर में जीवन भर में बनी रहती है । एसए दौर खिड़की आला, जो कोक्लीअ के लिए उपयोग पेचीदा हो जाता है और शल्य चिकित्सा जोखिम से नीचे चलाता है ।

पिछले अध्ययनों से चूहों5,6,7में CI आरोपण की व्यवहार्यता दिखाया गया है । Irving एट अल । प्रदर्शन किया है कि जीर्ण intracochlear विद्युत उत्तेजना एक महीने के लिए प्राप्त किया जा सकता है । तीव्र उत्तेजना भी प्रदर्शन किया गया था लेकिन रिकॉर्डिंग प्रस्तुत नहीं किया गया । उंहोंने दिखाया है कि cauterizing stapedial धमनी सुनवाई दहलीज या सर्पिल नाड़ीग्रंथि ंयूरॉंस की संख्या पर कोई महत्वपूर्ण प्रभाव था और aminoglycoside निओमायसिन, एक ototoxic दवा के सामयिक आवेदन, में एक प्रभावी गगनभेदी प्रक्रिया थी चूहे5. Soken एट अल । बेहतर सुनवाई स्थिति6संरक्षित करने के लिए गोल विंडो के माध्यम से माउस कोक्लीअ के लिए एक संशोधित पृष्ठीय दृष्टिकोण वर्णित है । एक प्लेटिनम-इरिडियम तार के सम्मिलन के बाद, पर्याप्त अवशिष्ट सुनवाई 28 डीबी की एक बढ़ी हुई श्रवण brainstem प्रतिक्रिया (ABR) दहलीज के साथ मनाया गया था. एमिशन उत्सर्जन (OAE) जानवरों में बड़े ABR दहलीज पाली6के साथ खो गए थे । मिस्त्री एट अल. परीक्षण कार्यात्मक और विद्युत उत्तेजना के अभाव में आरोपण के histopathological प्रभाव7। हालांकि सुनवाई दोनों 3 और 6 महीने में संरक्षित किया गया था कम आवृत्तियों पर प्रत्यारोपित चूहों, प्रत्यारोपण और bullostomy7के आसपास osteoneogenesis चारों ओर फाइब्रोसिस की तरह ऊतक के परिणामस्वरूप ।

संक्षेप में, सीआईएस पर चूहों में तीन अध्ययनों से बाहर, केवल एक सीआई उत्तेजना के कार्यात्मक रिकॉर्डिंग को दर्शाता है । Irving और सहकर्मियों दोनों तीव्र और जीर्ण eABR रिकॉर्डिंग प्रदर्शन किया, लेकिन केवल जीर्ण CI उत्तेजना5से डेटा दिखाया । हालांकि, Irving एट अल द्वारा विकसित एक पूरी तरह से प्रत्यारोपित उपकरण के साथ जीर्ण मॉडल तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण है । यह अभी तक अगर तीव्र CI उत्तेजना, दोनों कम चुनौतीपूर्ण और तेजी से ज्ञात नहीं है, इसी तरह के परिणाम प्राप्त कर सकते हैं ।

सीआईएस गंभीर और गहरा सुनवाई नुकसान जो अब सुनवाई एड्स से लाभ के साथ लोगों द्वारा उपयोग किया जाता है । CI उपयोगकर्ताओं के लिए पशु मॉडल इसलिए एक गगनभेदी प्रक्रिया शामिल होना चाहिए जब आम तौर पर सुनवाई जानवरों का उपयोग किया जाता है । पशुओं को सुनने के deafen करने के लिए एक और कारण यह है कि एक बहरा या सुनवाई कोक्लीअ के विद्युत उत्तेजना अलग तंत्रिका प्रतिक्रियाओं का उत्पादन4,8,9,10,11, 12. एक बहरे कोक्लीअ की विद्युत उत्तेजना सीधे श्रवण तंत्रिका तंतुओं को सक्रिय करती है और एक electroneural प्रतिक्रिया (α) उत्पन्न करती है. यह कम विलंबता और8,10परिधि में एक छोटे से गतिशील रेंज की विशेषता है । दूसरी ओर, एक सुनवाई कोक्लीअ के विद्युत उत्तेजना भी एक electrophonic प्रतिक्रिया (β) है कि अब विलंब और बड़ा गतिशील रेंज4,11की विशेषता है में बाल कोशिकाओं उत्तेजित । electrophonic प्रतिक्रिया आंतरिक बाल कोशिकाओं द्वारा तंत्रिका तंतुओं के सामांय उत्तेजना के लिए जिंमेदार ठहराया है, बाहरी बाल कोशिकाओं के विद्युत प्रेरित संकुचन, और एक यात्रा4लहर की पीढ़ी । Electroneural और electrophonic प्रतिसाद भी केंद्रीय तंत्रिका तंत्र9में दो अलग गतिविधि पैटर्न में परिणाम है । सातो एट अल. दर्ज की midbrain न्यूरॉन्स एक CI प्रत्यारोपित गिनी पिग से पहले और बाद निओमायसिन के साथ फरियाद, जो electrophonic योगदान समाप्त. उन्हें पता चला कि दर-स्तर समारोह की ढलान पर खड़ी और गोलीबारी की दर deafened हालत में सुनवाई की हालत९की तुलना में अधिक थी. इसलिए, शोध प्रश्न के आधार पर कहा गया है, यह करने के लिए electrophonic और श्रवण तंत्रिका के विद्युत उत्तेजना पर electroneural प्रतिक्रियाओं अलग फरियाद सहित विचार महत्वपूर्ण है ।

यहां, हम तीव्र गगनभेदी और एक माउस में एक इलेक्ट्रोड सरणी के कॉकलियर आरोपण के रूप में के रूप में अच्छी तरह से बिजली के साथ intracochlear विद्युत उत्तेजना के कार्यात्मक रिकॉर्डिंग-पैदा श्रवण brainstem प्रतिक्रिया (eABR) के लिए प्रक्रिया का वर्णन ।

Protocol

सभी प्रक्रियाओं को बेसल विश्वविद्यालय, स्विट्जरलैंड, पशु देखभाल और दिशा निर्देशों के अनुसार किया गया । वे बेसल, स्विट्जरलैंड के गुआंगज़ौ के पशु चिकित्सा कार्यालय द्वारा लाइसेंस प्राप्त थे ।

नोट: C57BL/6 वयस्क चूहों, उंर 8-12 सप्ताह (वजन 20-30 ग्राम), इस अध्ययन में इस्तेमाल किया गया ।
बाएँ कान प्रयोगात्मक कान के रूप में प्रयोग किया जाता है । सही कान एक अंतर पशु नियंत्रण के रूप में कार्य करता है और शल्य चिकित्सा बदल नहीं है ।

1. ऑपरेटिव प्रक्रियाओं

  1. Anaesthetize पशु 30 मिनट इंट्रा पेरिटोनियल (आईएफसआई) ketamine/xylazine के इंजेक्शन के माध्यम से सर्जरी से पहले (८० मिलीग्राम/किग्रा ketamine, 16 मिलीग्राम/किलो xylazine, आईएफसआई, मात्रा 10 μL/जी शरीर के वजन पर इंजेक्ट) ।
    1. आवश्यक के रूप में पूरक संज्ञाहरण, एक सकारात्मक पेडल और palpebral (पैर की अंगुली चुटकी) पलटा और मूंछ के आंदोलन द्वारा ंयाय के रूप में, ketamine की एक कम खुराक के साथ (४५ मिलीग्राम/किलोग्राम, आईएफसआई, 10 μL/जी शरीर के वजन पर इंजेक्शन) । एजेंटों और खुराक शासन संस्थागत दिशा निर्देशों के अनुसार प्रतिस्थापित किया जा सकता है ।
      नोट: सामांय में, पशु एक इंजेक्शन की आवश्यकता होगी हर 45-इस एजेंट और खुराक शासन के साथ 60 मिनट । प्रत्यारोपित इलेक्ट्रोड सरणी के आसपास बंद करने के लिए प्रारंभिक चीरा से औसत समय आम तौर पर 1-1.5 घंटे है.
  2. एक नियमित रूप से श्वास दर और पैर की अंगुली चुटकी सजगता की कमी के द्वारा चिह्नित जानवर के पूर्ण बेहोश करने की जांच करें । संज्ञाहरण के इस स्तर को बनाए रखें ।
  3. एक बंद पाश हीटिंग पैड के साथ ३६.६ ° c पर पशु के शरीर का तापमान बनाए रखें । कॉर्निया के निर्जलीकरण से बचने के लिए आंख मरहम लागू करें । इससे जानवरों की पलक पलटा भी दबी रहेगी, जो शोर को रिकोडिंग में जोड़ सकती है ।
  4. bupivacaine/Lidocaine (०.१ मिलीग्राम/एमएल bupivacaine और ०.४ mg/एमएल Lidocaine, ०.१ मिलीलीटर एस॰सी॰) के उपचर्म इंजेक्शन (एस॰सी॰) के माध्यम से स्थानीय एनाल्जेसिक प्रशासन किसी भी शल्य चिकित्सा असुविधा को कम करने के लिए इरादा चीरा लाइन के साथ । एजेंटों और खुराक शासन संस्थागत दिशा निर्देशों के अनुसार प्रतिस्थापित किया जा सकता है ।
  5. प्रशासन मस्करीनिक विरोधी atropine (atropinesulfate अमीनो, ०.१ मिलीग्राम/एमएल, 20 μL प्रशासित एस॰सी॰, पंजाब में भंग) गर्दन में बलगम स्राव को कम करने और सांस लेने की सुविधा के लिए । एजेंटों और खुराक शासन संस्थागत दिशा निर्देशों के अनुसार प्रतिस्थापित किया जा सकता है ।

2. पूर्व फरियाद ध्वनिक श्रवण Brainstem प्रतिक्रिया (aABR)

नोट: aABR से पहले और बाद में फरियाद सुनने की स्थिति मापने के लिए प्रयोग किया जाता है । परीक्षण बाएँ कान पर और एक ध्वनि रहित विद्युत शील्ड बूथ में किया जाता है. हम परीक्षण और बाद में एक सही हाथ व्यक्ति के लिए छोड़ दिया कान प्रत्यारोपण करने के लिए सलाह देते हैं । चूहों में ABR पर अधिक जानकारी13,14में पाया जा सकता है । टकर डेविस टेक्नोलॉजीज (TDT) हार्डवेयर और सॉफ्टवेयर (BioSig) ABR रिकॉर्ड करने के लिए उपयोग किया जाता है लेकिन अन्य प्रणालियों इस्तेमाल किया जा सकता है ।

  1. ipsilateral (बाएं) कान से ABR प्रतिक्रिया को अलग करने के लिए ध्वनिक फोम के साथ contralateral (दाएं) कान को ब्लॉक करें । एक 1 मिलीलीटर सिरिंज में फोम रखो और यह माउस के दाहिने कान नहर में इंजेक्शन के लिए फोम के साथ पूरे कान नहर कवर (0.1-फोम के 0.2 मिलीलीटर) । सुनिश्चित करें कि सिरिंज के जवानों को बारीकी से कान के लिए इतना है कि फोम कान नहर में सभी तरह से हो जाता है ।
  2. बाएं कान से स्पीकर 10 सेमी रखें ।
    नोट: इस सेटअप के लिए स्पीकर refefence15में बताए गए अनुसार पीसीबी माइक्रोफ़ोन का उपयोग करने पर तुले हुए थे ।
  3. ७०% इथेनॉल समाधान के साथ ABR इलेक्ट्रोड साफ । त्वचा के नीचे इलेक्ट्रोड प्लेस: सक्रिय (Ch1) शिखर पर, संदर्भ (-) ipsilateral कान के pinna के नीचे, और हिंद पैर में जमीन (चित्रा 1) ।
  4. ऑप्टिक फाइबर बंदरगाह के माध्यम से सिर-चरण और पूर्व एम्पलीफायर श्रवण प्रोसेसर के लिए कनेक्ट करें ।
  5. सक्रिय और संदर्भ इलेक्ट्रोड के प्रतिबाधा की जाँच करें.
    1. प्रतिबाधा 3 ओम से अधिक है, तो उन्हें फिर से व्यवस्थित और माप ले. इलेक्ट्रोड एक ही प्रतिबाधा है जब सबसे अच्छा रिकॉर्डिंग प्राप्त कर रहे हैं. साउंड प्रूफ बूथ बंद करें ।
  6. वर्तमान क्लिक उत्तेजना और एक जटिल श्रवण प्रोसेसर और सॉफ्टवेयर के साथ एक मुक्त क्षेत्र की हालत में रिकॉर्ड ABR । सॉफ्टवेयर में क्लिक करें उत्तेजना का मानकीकरण: ०.१ ms एकल चैनल monophasic क्लिकों 21 हर्ट्ज पर प्रस्तुत कर रहे हैं; 10 db चरणों में 10 डीबी spl करने के लिए ९० db spl से स्तर घटाता है पर क्लिक करें; 10 ms रिकॉर्डिंग विंडो । प्रत्येक dB स्तर पर ५१२ प्रतिक्रियाओं का औसत कुल ।
  7. एक २,००० हर्ट्ज lowpass फिल्टर और एक ३०० हर्ट्ज सबकुछ पार फिल्टर एक कस्टम निर्मित Matlab स्क्रिप्ट का उपयोग कर रिकॉर्डिंग में शोर को कम करने के लिए ऑफ़लाइन लागू करें ।
  8. एक पहचानने ABR लहर प्रतिक्रिया (चित्रा 2, चित्रा 3) के साथ सबसे कम dB स्तर के रूप में ABR थ्रेशोल्ड निर्धारित करें ।

3. सर्जरी

नोट: ठेठ उपकरणों का इस्तेमाल किया एक कैंची, एक स्केलपेल, सीधे या घुमावदार सुझावों के साथ धातु संदंश की एक जोड़ी, एक ऊतक ट्रैक्टर उपकरण, कई सक्शन कील और अवशोषित कागज अंक शामिल हैं । सर्जरी बाएं कान पर किया जाता है ।

  1. इसके दाईं ओर माउस रखो । ग्रीवा कशेरुकाओं पर अनुचित मरोड़ तनाव से बचें । वायुमार्ग को खुला रखने के लिए शरीर को सीधा रखना सुनिश्चित करें ।
  2. एक कैंची के साथ छोड़ दिया कान के पीछे फर कट (या यह एक शेविंग के साथ दाढ़ी) के लिए त्वचा का पर्दाफाश । ७०% इथेनॉल समाधान और betadine (povidone/आयोडीन) के साथ त्वचा को निष्फल ।
  3. सूक्ष्म आवर्धन (16x) के तहत, एक 1-1.5 सेमी के बाद स्केलपेल के साथ auricular चीरा बनाओ ।
  4. उच्च सूक्ष्म आवर्धन (25x) पर स्विच करें ।
  5. चमड़े के नीचे वसा परत के माध्यम से कुंद विच्छेदन, जो चर मोटाई का हो सकता है, संदंश के साथ प्रदर्शन ।
    नोट: बाह्य jugular शिरा के रूप में विदारक होने पर सावधान रहें इस क्षेत्र को ट्रैवर्स. इस संरचना को नुकसान अत्यधिक रक्तस्राव पैदा कर सकता है ।
  6. कान bulla periosteum प्रकट करने के लिए sternocleidomastoid मांसपेशी को वापस लेना. श्रवण bulla की पहचान की सहायता के लिए एक महत्वपूर्ण संरचनात्मक मील का पत्थर के रूप में चेहरे तंत्रिका का प्रयोग करें । चेहरे की तंत्रिका पीछे के आसपास wraps/sternocleidomastoid मांसपेशी और pinna की ओर कान नहर के साथ rostrally रन के पृष्ठीय एज । धीरे bulla (चित्रा 4) के लिए उपयोग को कम करने के लिए चीरा में स्वयं को बनाए रखने के ट्रैक्टर उपकरण जगह.
  7. bulla के medio पृष्ठीय क्षेत्र को दूर करने के लिए bulla और mastoid प्रक्रिया के बीच रिज के स्पष्ट दृश्य की अनुमति ऊतक निकालें ।
  8. धीरे bulla पियर्स करने के लिए एक 30 जी सुई घुमाएँ और पीछे-रिज के बेहतर पक्ष पर एक छेद (bullostomy) बनाने (हड्डी इस तरफ पतली है) । वैकल्पिक रूप से, एक दंत शल्य चिकित्सा ड्रिल का उपयोग करें ।
    नोट: यह और निंनलिखित कदम भी उच्च सूक्ष्म आवर्धन (40x) अगर पसंद के साथ किया जा सकता है । इसके अलावा, अगर जरूरत माइक्रोस्कोप की स्थिति बदल जाते हैं । यह मध्य कान अंतरिक्ष के सर्जिकल दृश्य को अधिकतम करने के लिए महत्वपूर्ण है ।
  9. छोटे हड्डी के टुकड़ों का उपयोग करके bullostomy को चौड़ा करना ठीक इत्तला दे दी संदंश मध्य कान गुहा बेनकाब । mastoid प्रक्रिया की ओर पृष्ठीय bullostomy विस्तार जब तक दौर खिड़की आला हड्डी के स्पष्ट है । stapedial धमनी, आंतरिक मन्या धमनी की एक शाखा, गोल खिड़की आला करने के लिए ventral चलाता है.
    1. अत्यधिक रक्तस्राव घातक हो सकता है के रूप में पोत को नुकसान नहीं सावधान रहना । छोटे ब्ली spongostan का एक छोटा टुकड़ा भीतरी कान की गुहार में दबाकर रोका जा सकता है ।
    2. stapes, मध्य कान की हड्डी अंडाकार खिड़की से जुड़े कल्पना करने के लिए पूर्वकाल बेहतर दिशा की ओर bullostomy का विस्तार ।
  10. ओवल विंडो को बेनकाब करने के लिए संदंश के साथ stapes निकालें.

4. Ototoxic एजेंट के दौर विंडो आवेदन

  1. धीरे गोल खिड़की और अंडाकार खिड़की झिल्ली एक कुंद 30 जी सुई का उपयोग कर छिद्रित । जांच करें कि perilymph बाहर चलाता है ।
  2. धीरे perfuse ०.०५% वजन/निओमायसिन में विलीन हो जाती है (पीएच ७.४ के लिए) ओवल विंडो के माध्यम से समायोजित । तरल गोल खिड़की से बाहर फ्लश करना चाहिए । राउंड विंडो पर एक ही कार्यविधि को दोहराएँ । perfuse करने के लिए इस्तेमाल किया सुई के साथ खिड़की के अस्थि संरचनाओं को नुकसान नहीं सावधान रहना ।
  3. एक छोटा सा टुकड़ा (1 मिमी2) spongostan के गोल खिड़की और अंडाकार खिड़की आला के भीतर निओमायसिन में लथपथ प्लेस ।
  4. retractor उपकरण निकालें, चीरा बंद करो और 30 मिनट रुको ।

5. पोस्ट-फरियाद ध्वनिक ABR

  1. रिकॉर्ड aABR एक समान तरीके से पहले के रूप में फरियाद (कदम २.२ से २.८) (चित्रा 2 बी, चित्रा 3) ।

6. CI इलेक्ट्रोड सरणी की प्रविष्टि

नोट: intracochlear इलेक्ट्रोड सरणी चार प्लैटिनम बैंड के होते हैं (ø ०.२ mm) प्लैटिनम के साथ/स्केल्पल parylene अछूता तार एक सिलिकॉन ट्यूब में परिरक्षण (चित्रा 5).

  1. फिर से bulla का उपयोग करने के लिए चीरा में retractor उपकरण रखें.
  2. गोल विंडो में इलेक्ट्रोड सरणी डालें (scala tympani) एक गहराई पर जहां 4th प्लेटिनम अंगूठी बस दौर खिड़की के अंदर स्थित है । यह ~ 30 kHz16पर एक intracochlear स्थिति के संगत ~ 2 मिमी, के एक प्रविष्टि गहराई देता है.
  3. bulla के अंदर सीसा तार का तार और bulla के ऊपर ऊतक को तार गोंद । तार का तार का प्रयोग भर में जगह में सरणी रखने में मदद करता है ।
  4. ध्यान से ट्रैक्टर निकालें और ऊतक गोंद के साथ सम्मिलन बंद करें ।
  5. जहां सक्रिय और संदर्भ ABR इलेक्ट्रोड एक ऊतक कैंची का उपयोग किया जाएगा के बीच लाइन को सीधा गर्दन में एक छोटा सा चीरा (०.५ मिमी) बनाओ । चमड़े के नीचे की जेब में प्लैटिनम जमीन गेंद प्लेस और ऊतक गोंद (6 चित्रा) के साथ छोटे चीरा बंद ।
  6. इलेक्ट्रोड सरणी बोर्ड को पशु उत्तेजित करने वाले प्लेटफ़ॉर्म से कनेक्ट करें ।

7. विद्युत श्रवण Brainstem प्रतिसाद (eABR)

नोट: एक पशु उत्तेजक मंच (एएसपी) को बिजली के लिए इलेक्ट्रोड सरणी उत्तेजित किया जाता है । अंय वर्तमान स्रोतों और सॉफ्टवेयर प्रणालियों का इस्तेमाल किया जा सकता है ।

  1. ABR इलेक्ट्रोड पहले के रूप में रखें (चरण २.३ से २.५) (चित्रा 6).
  2. एएसपी सॉफ्टवेयर खोलें और बिजली पल्स उत्तेजना प्रतिमान को परिभाषित । हम ५० μs/चरण के साथ एक चार्ज संतुलित biphasic दालों का उपयोग करें और प्रति सेकंड २३.३ दालों पर प्रस्तुत 10 μs दौर गैप (पीपीएस). विद्युत उत्तेजना वर्तमान स्तर में वृद्धि के साथ monopolar इलेक्ट्रोड विन्यास में दिया जाता है. प्रत्येक वर्तमान स्तर पर ४०० प्रतिक्रियाओं का कुल औसत है ।
  3. बिजली पल्स गाड़ियों वर्तमान और TDT headstage, पूर्व एम्पलीफायर और श्रवण प्रोसेसर के माध्यम से लगातार पैदा की eABR प्रतिक्रिया रिकॉर्ड.
  4. प्लॉट और एक कस्टम निर्मित matlab स्क्रिप्ट (चित्रा 7) के माध्यम से eABR डेटा का विश्लेषण । स्क्रिप्ट और एक रिकॉर्डिंग का एक उदाहरण अनुपूरक में प्रदान की जाती हैं ।

8. प्रयोग का अंत

  1. प्रयोग के अंत में, संस्थागत दिशानिर्देशों के अनुसार पशु euthanize ।
  2. ध्यान से चीरा खोलो और प्रत्यारोपण हटा दें ।
  3. अल्ट्रा sonicate 10 मिनट के लिए आसुत पानी में इलेक्ट्रोड सरणी ऊतक मलबे को हटाने के लिए ।
    नोट: प्रत्यारोपण कई बार reused किया जा सकता है अगर इलेक्ट्रोड बरकरार है और ठीक से आयोजित कर रहे हैं । यह जांच करने के लिए, एक बहु मीटर के साथ इलेक्ट्रोड के प्रतिबाधा को मापने जब सरणी शुष्क है.
  4. इलेक्ट्रोड सरणी को किसी सूखी जगह पर संग्रहीत करना.

Representative Results

इस अध्ययन का उद्देश्य deafened माउस में तीव्र CI उत्तेजना के लिए एक विश्वसनीय मॉडल का वर्णन था । पूर्व और बाद सर्जिकल सुनवाई थ्रेसहोल्ड गगनभेदी प्रक्रिया के एक कार्यात्मक readout के रूप में कार्य किया । अंडाकार और गोल खिड़की में ०.०५% निओमायसिन के सामयिक आवेदन काफी वृद्धि हुई क्लिक करें सुनवाई थ्रेसहोल्ड द्वारा ४६ डीबी ± 6 (पूर्व बनाम पोस्ट-निओमायसिन: ३०.० db ± ३.८ बनाम ७५.७ db ± ३.७, पी = ०.०००३, युग्मित टी परीक्षण, n = 7) (चित्रा 3) । माउस के आकार इलेक्ट्रोड सरणी के बाद दौर खिड़की (चित्रा 4, चित्रा 5) में डाला गया था । एक intracochlear इलेक्ट्रोड के विद्युत सिमुलेशन मज़बूती से eABR गतिविधि उत्पन्न कर सकता है. (चित्रा 7). कुछ मामलों में, CI उत्तेजना चेहरे तंत्रिका सक्रिय है और या तो कम या लंबे विलंबता (चित्रा 8A और चित्रा 8B, क्रमशः) के साथ एक उच्च आयाम तरंग का उत्पादन किया । कम विलंबता प्रतिक्रिया 3 एमएस के आसपास लहर चतुर्थ के एक तेजी से प्रवर्धन द्वारा विशेषता थी और चेहरे तंत्रिका की एक सीधी प्रतिक्रिया होने की संभावना है । लंबी विलंबता प्रतिक्रिया 5 के आसपास दिखाई दिया-6 एमएस और एक गैर श्रवण मांसपेशी (myogenic) प्रतिक्रिया चेहरे की तंत्रिका द्वारा परोक्ष रूप से पैदा होने की संभावना है । चेहरे तंत्रिका प्रतिक्रियाओं शायद ही कभी साहित्य में पशु अध्ययन में सूचित कर रहे हैं, लेकिन मानव CI उपयोगकर्ताओं17,18,19में एक प्रसिद्ध जटिलता है । चित्रा 8में, चेहरे तंत्रिका उत्तेजना अपेक्षाकृत मध्यम वर्तमान स्तर पर दिखाई दिया (150-200 μA) और दो अलग जानवरों में । अंय मामलों में, दोनों प्रतिक्रियाओं बहुत उच्च वर्तमान स्तर पर एक ही जानवर में प्रकट हो सकता है (नहीं दिखाया गया है) । हम चेहरे तंत्रिका उत्तेजना की उपस्थिति के नीचे के स्तर तक मौजूदा स्तर को सीमित करने की सलाह देते हैं ।

Figure 1
चित्र 1: श्रवण Brainstem प्रतिसाद (ABR) सेटअप. चमड़े के नीचे इलेक्ट्रोड शीर्ष पर रखा जाता है (सक्रिय/चैनल 1 [Ch1]), ipsilateral कान के पीछे (संदर्भ [रेफरी]) और हिंद पैर पर (जमीन [Gnd] anesthetized माउस के) । इलेक्ट्रोड संकेतों को परिवर्धित और फिर एक TDT प्रणाली द्वारा दर्ज की गई हैं । ध्वनिक और बिजली की उत्तेजना क्रमशः एक माइक्रोफोन और एक पशु उत्तेजक मंच के माध्यम से प्रस्तुत कर रहे हैं । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 2
चित्रा 2: प्रतिनिधि aABR तरंगों को क्लिक करने के लिए एक जंगली प्रकार माउस से उत्तेजना से पहले और बाद ०.०५% निओमायसिन के साथ फरियाद । (क) सामांय-सुनवाई aABR पैटर्न लहरों की विशेषता है I-V और कम सुनवाई दहलीज, यहां 30 डीबी SPL (तीर) । (ख) deafened aABR पैटर्न एक वृद्धि की सुनवाई सीमा से पता चलता है, यहां ७० dB SPL (तीर) । लहरों एक लंबा विलंबता और अधिक लौकिक घबराना है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 3
चित्रा 3: aABR दहलीज से पहले और बाद में फरियाद । निओमायसिन के आवेदन काफी aABR थ्रेसहोल्ड ४६ डीबी ± 6 से वृद्धि हुई है । पूर्व बनाम पोस्ट-निओमायसिन: ३०.० db ± ३.८ बनाम ७५.७ db ± ३.७, पी = ०.०००३, युग्मित टी परीक्षण, n = 7 । त्रुटियों का अर्थ है मानक त्रुटि । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 4
चित्रा 4: सर्जरी । (क) श्रवण bulla को एक्सपोजर. bullostomy (सफेद बिंदीदार सर्कल) कान bulla (काले बिंदीदार रेखा) पर रिज साथ प्रदर्शन किया है । (ख) bullostomy दौर खिड़की, stapedial धमनी, और अंडाकार खिड़की के दृश्य की अनुमति देता है । निओमायसिन धीरे पहले अंडाकार खिड़की के माध्यम से निकाली है, तो दौर खिड़की । (ग) इलेक्ट्रोड सरणी 4वें इलेक्ट्रोड बस दौर खिड़की आला अंदर स्थित है जब तक डाला जाता है. इलेक्ट्रोड तार चीरा बंद हो जाता है पहले जगह में सरणी रखने के लिए bulla के अंदर कुंडलित है. CN सातवीं = कपालीय तंत्रिका सातवीं (चेहरे तंत्रिका), = अंडाकार खिड़की, आरडब्ल्यू = दौर खिड़की, सा = stapedial धमनी, SCM = sternocleidomastoid मांसपेशी, टीबी = कान bulla । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 5
चित्रा 5: माउस कॉकलियर प्रत्यारोपण । (क) intracochlear इलेक्ट्रोड सरणी चार प्लेटिनम बैंड एक व्यास डीके साथ एक ०.४ mm अंतराल पर स्थान के होते हैं: 0 [टिप] (डी = 0.21), 1 (डी = 0.23), 2 (डी = 0.25), 3 (डी = 0.27) । प्रत्येक इलेक्ट्रोड की चौड़ाई ०.२ मिमी है. चार प्लैटिनम/इरिडियम (90/10) parylene अछूता तारों एक सिलिकॉन ट्यूब में ढाल रहे हैं । (ख) इलेक्ट्रोड सरणी टिप (लाल बिंदीदार वर्ग) का इज़ाफ़ा । इलेक्ट्रोड सरणी और एक प्लैटिनम संदर्भ गेंद एक प्रिंट बोर्ड से जुड़े हुए हैं. स्केल बार = 1 मिमी. कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 6
चित्रा 6: विद्युत पैदा ABR (eABR) सेटअप । सीआई प्लेटिनम ग्राउंड बॉल (Gnd, रेड) माउस की गर्दन में एक चमड़े के नीचे की जेब में रखा जाता है । सक्रिय के बीच की रेखा (Ch1 (+) शीर्ष पर) और संदर्भ (रेफरी (-) ipsilateral कान पर) ABR इलेक्ट्रोड सबसे अच्छा eABR प्रतिक्रिया प्राप्त करने के क्रम में इलेक्ट्रोड सरणी और जमीन के बीच की रेखा के लिए सीधा है. eABR जमीन इलेक्ट्रोड (Gnd, काले) हिंद पैर में रखा गया है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 7
चित्रा 7: प्रतिनिधि eABR तरंगों को एक deafened माउस में CI उत्तेजना के लिए । एक biphasic पल्स ट्रेन monopolar विंयास में इलेक्ट्रोड #1 करने के लिए ४०० पुनरावृत्तियों के साथ प्रति सेकंड (पीपीएस) २३.३ दालों पर प्रस्तुत किया जाता है । उत्तेजनाओं स्तर 0-175 μA 25 μA चरणों में दिखाया गया है (चरण ७.२ में उत्तेजना विवरण देखें) । रोमन अंकों eABR वेव संख्या निरूपित । तरंग आयाम और विलंबता वृद्धि और कमी, क्रमशः, वर्तमान स्तर में वृद्धि के साथ । इस उदाहरण में, वेव द्वितीय चारों ओर दिखाई दिया 1 ms, वेव iii के आसपास 2 ms, वेव IV लगभग 3 ms, वेव वीके आसपास 4 ms. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 8
चित्रा 8: चेहरे तंत्रिका उत्तेजना का उदाहरण । कुछ मामलों में, CI उत्तेजना चेहरे तंत्रिका को सक्रिय करने और कम विलंबता (एक) (तीर) या लंबे समय विलंबता (ख) (तीर) के साथ अप्रत्यक्ष प्रतिक्रिया के साथ एक सीधा प्रतिक्रिया पैदा कर सकते हैं । दिखाया उदाहरण दो CI-प्रत्यारोपित पशुओं से कर रहे है एक biphasic पल्स 0-300 μA में ५० μA चरणों का उपयोग कर ट्रेन के साथ उत्तेजित (चरण ७.२ में उत्तेजना विवरण देखें) । रोमन अंकों eABR वेव संख्या निरूपित । * एम्पलीफायर के संतृप्ति के कारण eABR लहर की कतरन का अर्थ है. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Discussion

इस पांडुलिपि तीव्र फरियाद और माउस में कॉकलियर आरोपण के लिए शल्य चिकित्सा दृष्टिकोण का वर्णन, साथ ही साथ CI उत्तेजना के कार्यात्मक मूल्यांकन श्रवण brainstem प्रतिक्रिया के साथ । हालांकि माउस कोक्लीअ छोटे और शल्य चिकित्सा चुनौतीपूर्ण है, CI माउस मॉडल संभव है और श्रवण अनुसंधान में एक महत्वपूर्ण उपकरण के रूप में कार्य करता है ।

stapedial धमनी माउस के मध्य कान में मौजूद है । धमनी bulla पीछे प्रवेश करती है-औसत दर्जे का, और दौर खिड़की आला को हीन और फिर बेहतर अंडाकार खिड़की आला करने के लिए चलाता है । माउस मॉडल के प्रारंभिक विकास में, हम stapedial धमनी को आघात के बाद घातक अंतर ऑपरेटिव रक्तस्राव का अनुभव, मुख्य रूप से जबकि bulla तक पहुंचने । एक परिणाम के रूप में, हम एक अधिक सीमित दृष्टिकोण अनुकूलित और छोटे, परिष्कृत विच्छेदन चरणों में bulla पहुंचा । इसके बाद रक्तस्राव के कारण आगे की जटिलताओं को नहीं देखा गया । तथ्य यह है कि stapedial धमनी दाग़ना5चूहों में सुनवाई दहलीज या सर्पिल नाड़ीग्रंथि न्यूरॉन्स की संख्या पर कोई महत्वपूर्ण प्रभाव पड़ता है के बावजूद, हमारी राय में, यह अनावश्यक है इतनी देर के रूप में महान देखभाल और ध्यान सर्जरी के दौरान लिया जाता है । हम समय के लिए ठीक मनोप्रेरणा कौशल विकसित करने और तकनीकी प्रवीणता तक पहुंचने की जरूरत लेने का सुझाव देते हैं । प्रत्यारोपित इलेक्ट्रोड सरणी के आसपास बंद करने के लिए प्रारंभिक चीरा से औसत समय आम तौर पर है 1 – 1.5 h.

चूहों में वर्णित तीव्र CI सर्जरी चूहों और gerbils20,21,22सहित अन्य कुतर में इस्तेमाल किया "ventral" प्रक्रिया और गोल खिड़की प्रविष्टि के समान है । अंय कुतर अध्ययन एक बेसल बारी cochleostomy के बजाय एक दौर खिड़की प्रविष्टि के साथ "पृष्ठीय दृष्टिकोण" का इस्तेमाल किया है, SA पूरी तरह से परहेज और सरणी और अधिक गहराई से डालने6,23,24। चूहों में एक पुरानी उत्तेजना विधानसभा के आरोपण प्रत्यारोपण और पश्चात की देखभाल को ठीक करने के लिए एक Dacron मेष के अलावा के साथ इस प्रोटोकॉल में वर्णित के रूप में एक ही कदम पालन5.

मुख्य तकनीकी चुनौतियां जब चूहों में CI सर्जरी प्रदर्शन कर रहे हैं कोक्लीअ के छोटे आकार चूहों और gerbils के कोक्लीअ की तुलना में, और एक बड़े एसए की उपस्थिति. एसए भी चूहों में नहीं बल्कि gerbils में मौजूद है. इसके अलावा, चूहों चूहों और gerbils से छोटे हैं के बाद से, वे शल्य चिकित्सा प्रक्रियाओं के लिए अधिक संवेदनशील हैं.

eABR रिकॉर्डिंग में electrophonic प्रतिक्रियाओं को खत्म करने और सबसे ci उपयोगकर्ताओं में पाया बाल कोशिका हानि की नकल करने के लिए, हम CI प्रविष्टि से पहले जानवरों deafened । चूहों के लिए मुश्किल है vivo25 में ototoxically deafen क्योंकि एमिनोग्लीकोसाइड्स के प्रणालीगत सांद्रता ototoxicity कारण के लिए आवश्यक एक संकीर्ण खुराक खिड़की है: कम खुराक में कई दिनों के परिणाम पर एक भी इंजेक्शन जबकि कोई बाल कोशिका हानि में दिया एक उच्च खुराक के26घातक हो सकता है । इसके अलावा, एमिनोग्लीकोसाइड्स को संवेदनशीलता तनाव26निर्भर है । हालांकि, यह दिखाया गया है कि एक लूप मूत्रवर्धक के साथ संयोजन में एमिनोग्लीकोसाइड्स की एक खुराक घातक परिणाम27बिना CBA/CaJ चूहों में अत्यधिक बाहरी बाल कोशिका हानि का उत्पादन कर सकते हैं । देरी इनर बाल कोशिका मौत सभी cochleae की छमाही में सूचित किया गया था27की जांच की ।

इस पांडुलिपि में, हम हाल ही में C57BL/6 चूहों5के लिए स्थापित प्रोटोकॉल से प्रेरित एमिनोग्लीकोसाइड्स निओमायसिन के सामयिक आवेदन का इस्तेमाल किया । निओमायसिन के तीव्र आवेदन काफी क्लिक-४६ डीबी ± ६.१ द्वारा पैदा सुनवाई दहलीज बढ़ जाती है । हालांकि इस वृद्धि Irving एट अल द्वारा रिपोर्ट ३५ dB वृद्धि से बड़ा है । (पूर्व बनाम पोस्ट सर्जरी: ४१.६ db ± ३.३ बनाम ७६.६ db ± ४.४, पी = ०.०२, एन = 3) 5, हम एक ही पद-गगनभेदी दहलीज (७५.७ db ± ३.७ बनाम ७६.६ db ± ४.४) हासिल किया । ०.०५% निओमायसिन सुनवाई के एक आंशिक नुकसान का कारण माना जाता है, मुख्य रूप से तेजी से बाहरी बाल कोशिका मृत्यु द्वारा, भीतरी बाल कोशिका हानि के रूप में अब27घटित करने के लिए लेता है । इसलिए यह संभव है कि electrophonic प्रतिक्रिया, जो दोनों भीतरी और बाहरी बाल कोशिकाओं द्वारा उत्पन्न होता है4,8,9,10,11,12, केवल अवशिष्ट सुनवाई के साथ deafened पशुओं में आंशिक रूप से समाप्त । हालांकि ०.०५% (वजन/निओमायसिन सर्पिल नाड़ीग्रंथि न्यूरॉन्स की संख्या 4 सप्ताह के बाद कम नहीं करता है-फरियाद5, यह अभी तक अज्ञात है अगर निओमायसिन हमारे तीव्र सेटअप में श्रवण तंत्रिका तंतुओं को प्रभावित करता है या synaptopathy को बढ़ावा देता है (synapses का नुकसान आंतरिक बाल कोशिकाओं और प्रकार मैं श्रवण तंत्रिका तंतुओं के बीच). एक और अनिश्चितता है कि सामयिक निओमायसिन उपचार कोक्लीअ की लंबाई के साथ बाल कोशिका हानि का एक समान वितरण का उत्पादन नहीं हो सकता है । भविष्य के अध्ययन के लिए इन सवालों के जवाब की आवश्यकता है ।

सारांश में, मानव बहरापन और जैव रासायनिक उपकरण उपलब्ध के लिए आनुवंशिक मॉडल की बढ़ती संख्या माउस को श्रवण अनुसंधान के लिए एक आकर्षक पशु मॉडल बनाने, सीआईएस के क्षेत्र सहित ।

Disclosures

कोई प्रतिस्पर्धा वित्तीय हितों । लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

लेखकों को पशु उत्तेजना मंच और उत्तेजना मानदंड पर सलाह प्रदान करने के लिए पियरे Stahl, Oticon चिकित्सा, अच्छा, फ्रांस, शुक्रिया अदा करना चाहूंगा, और जेंस बी Fallon और एंड्रयू कश्मीर बुद्धिमान जैव एनआईसी संस्थान, मेलबोर्न, ऑस्ट्रेलिया से, शल्य चिकित्सा सलाह के लिए . यह काम स्विस नेशनल साइंस फाउंडेशन (ईआरसी ट्रांसफर ग्रांट टू T.R.B.) से अनुदान द्वारा समर्थित था ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Hardware
Sound-proof booth IAC Acoustics, Winchester, UK Mac-2 Enclosure RF Shielded Box 2A
MF1 Speaker Tucker Davis Technologies (TDT), FL, USA
PCB microphone PCB Piezotronics, Inc, NY, USA Model 378C01
Low impedance headstage TDT, FL, USA RA4LI
Medusa pre-amplifier TDT, FL, USA RA4PA
RZ6 auditory processor TDT, FL, USA
Animal Stimulator Platform ASP, Oticon Medical, Nice, France
Multimeter Fluks #115
Surgical equipment
Closed-loop heating pad FHC, Inc. ME, USA
Eye ointment Alcon, CH Lacrinorm Augengel
Acoustic foam Otoform Ak, Dreve Otoplastik GmbH #464
Disposable subdermal needle electrodes Horizon, Rochester Electro-Medical Inc. S83018-R9, 27G
Self-retaining retractor tool (Mini Collibri Retractor) Fine Science Tools #17000-01
Suction wedges Agnthos, SE #42-886-460
Absorbable paper point (Medium) WPI, FL, USA #504182
Intracochlear electrode array Bionics Institute, Melbourne, Australia 4 channel
Spongostan Standard Ferrosan Medical Devices #MS0002
Tissue glue. Loctite 4161 Superbond Henkel Part No 19743
Animal Stimulator Platform (ASP) Oticon Medical, Nice, France
Drugs/chemicals
Ketamine (Narketan) Provet AG, CH 100mg/mL, #VQ_320265
Xylazine (Rompun) Provet AG, CH Inj Diss 2%, # 1315
Bupivacaine Compendium, CH Bupivacain Sintetica inj Diss 0.5%
Atropine (Atropinesulfat Amino) Amino AG, CH 1 mg/mL
Betadine (Povidone/iodine) Provedic, CH
Neomycin (Neomycin trisulfate salt) Sigma N1876-25G, Lot#WXBB7516V
Software
BioSigRZ TDT, FL, USA
Matlab MathWorks, MA, USA
ASP software Oticon Medical, Nice, France

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References

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तंत्रिका विज्ञान १४३ अंक कॉकलियर प्रत्यारोपण माउस मॉडल श्रवण तंत्रिका विद्युत श्रवण brainstem प्रतिक्रिया C57B माउस ototoxic फरियाद निओमायसिन दौर विंडो
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Navntoft, C. A., Marozeau, J.,… More

Navntoft, C. A., Marozeau, J., Barkat, T. R. Cochlear Implant Surgery and Electrically-evoked Auditory Brainstem Response Recordings in C57BL/6 Mice. J. Vis. Exp. (143), e58073, doi:10.3791/58073 (2019).

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