Summary
Hier beschrijven we een minimaal invasieve syngeneic orthotopic transplantatie model van muis Long adenocarcinoom cellen als een tijd - en kostenbesparende model om te studeren niet-kleincellige longkanker.
Abstract
Het gebruik van Muismodellen is onmisbaar voor het bestuderen van de pathofysiologie van verschillende ziekten. Met betrekking tot longkanker, verschillende modellen zijn beschikbaar, met inbegrip van genetisch gemanipuleerde modellen, alsmede modellen van de transplantatie. Echter zijn genetisch gemodificeerde Muismodellen tijdrovend en duur, terwijl sommige orthotopic transplantatie modellen moeilijk zijn te reproduceren. Hier is een niet-invasieve intratracheale leveringsmethode van longkanker tumorcellen als een alternatieve orthotopic transplantatie model beschreven. Het gebruik van muis Long adenocarcinoom cellen en syngeneic transplantaat ontvangers kunnen studeren tumorvorming onder de aanwezigheid van een volledig actief immuunsysteem. Bovendien, genetische manipulaties van tumor cellen voor transplantatie maakt dit model een aantrekkelijke tijdbesparende aanpak te bestuderen van de invloed van genetische factoren op de tumorgroei en tumor cel genexpressie profielen onder fysiologische omstandigheden. Met behulp van dit model, laten we zien dat Long adenocarcinoom cellen uitdrukkelijke verhoogde niveaus van de suppressor T-cel dood-ligand 1 (PD-L1) geprogrammeerd als volwassen in hun natuurlijke omgeving in vergelijking met de teelt in vitro.
Introduction
Longkanker is nog steeds veruit de grootste kanker-gerelateerde moordenaar in zowel mannen als vrouwen1. Sterker nog, volgens de American Cancer Society, jaarlijks meer mensen sterven aan longkanker dan van borst-, prostaat- en dikke darm kanker samen1. Tot voor kort, werden de meerderheid van de patiënten die lijden aan niet-kleincellige longkanker (NKCLK), die het meest voorkomende subtype van longkanker is, behandeld met platina gebaseerde chemotherapie in een eerstelijns-omgeving, meestal met de toevoeging van angiogenese remmers2. Alleen een subset van patiënten havens oncogene mutaties in de epidermale groeifactor receptor (EGFR), in anaplastic lymfoom kinase (ALK) of in ROS1, en kan worden behandeld met beschikbare targeting drugs3,4. Met de komst van immuun checkpoint-remmers ontstaan nieuwe hoop voor longkankerpatiënten, hoewel tot op heden slechts 20-40% van de patiënten reageren op immuun therapie5. Vandaar, verder onderzoek moet dit resultaat verbeteren door "fine-tuning"-immuun checkpoint therapie en combinatorische behandelingsopties onderzoeken.
Studeren longkanker, een breed scala van preklinische modellen zijn beschikbaar, met inbegrip van spontane modellen veroorzaakt door chemische stoffen en kankerverwekkende stoffen en genetisch gemanipuleerde muis modellen (GEMM) waar autochtone tumoren ontstaan naar aanleiding van de voorwaardelijke activering van oncogenen en/of de inactivering van tumor suppressor genen6,7,8. Deze modellen zijn van bijzondere waarde voor het onderzoeken van fundamentele processen in de ontwikkeling van de tumor van de longen, maar ze vereisen ook uitgebreide muizen fokken en experimenten zijn tijdrovend. Daarom profiteren veel studies die evaluatie van potentiële remmers van subcutane (patiënt-afgeleid) xenograft modellen waar menselijke long kanker cellijnen worden subcutaan ingespoten in immunodeficiëntie muizen9.
In deze modellen, is de micromilieu van tumoren niet vertegenwoordigd daarvan in kennis; Vandaar, onderzoekers ook gebruiken orthotopic transplantatie modellen, waar zijn tumorcellen intraveneus, intrabronchially, of direct geïnjecteerd in de Long parenchym10,11,12,13, 14,,15,16,17,18,19,20. Sommige van deze methoden zijn technisch uitdagende en moeilijk te worden gereproduceerd, en vereist intensieve training van de onderzoekers. 21 hier aangepast we een niet-invasieve orthotopic, intratracheale transplantatie methode in immunocompetent muizen, waar tumoren ontwikkelen binnen 3-5 weken en vertonen veel gelijkenissen met menselijke tumoren, voor het opwekken van de expressie van de T-cel suppressor geprogrammeerd dood-ligand 1 (PD-L1) op tumorcellen. 11 , 12 , 20 het gebruik van de muis tumorcellen afgeleid van GEMM modellen en syngeneic ontvangende muizen maakt goede studie van de communicatie van de tumor met inbegrip van immuuncellen. Bovendien kan gene bewerkingsgereedschappen zoals CRISPR/Cas9 technologie22 in vitro voor transplantatie die het onderzoek naar de invloed van genetische factoren in Long tumorvorming vergemakkelijkt worden gebruikt.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle experimentele protocollen als overzicht hieronder volgen ethische richtsnoeren en goedgekeurd door de Oostenrijkse federale ministerie van wetenschap en onderzoek, economie.
Opmerking: Het protocol hier beschrijft een model van de transplantatie orthotopic van muis Long adenocarcinoom cellen in syngeneic ontvangers. Cellen kunnen worden geïsoleerd van tumor-dragende longen van KrasLSL-G12D: p53fl/fl (KP) muizen7,18, indien beschikbaar in-house en getransplanteerde in muizen van dezelfde achtergrond en seks. Als cellen van andere onderzoeksgroepen werden verstrekt en de exacte achtergrond onbekend blijft, raden wij het gebruik van de F1-generatie van een kruising tussen C57BL/6 en 129S muizen zoals transplantatie ontvangers te garanderen maximale tolerantie.
1. cel voorbereiding
- Zaad KP cellen 24u voor transplantatie bij ongeveer 50% confluentie in RPMI aangevuld met 10% foetaal kalfsserum (FCS), glutamine, en 100 U/mL penicilline en 100 μg/mL streptomycine (hierna te noemen de standaard kweekmedium). Incubeer de celculturen bij 37° C, 5% CO2, en ongeveer 95% relatieve vochtigheid.
- Op de volgende dag, oogsten van cellen met behulp van 1 mL trypsine-EDTA (0.05% in een met fosfaat gebufferde zoutoplossing [PBS]) voor 5 min per 10 cm plaat en vervolgens resuspendeer vrijstaande cellen met 9 mL van de standaard kweekmedium.
- De cellen in een hemocytometer tellen en breng het aantal cellen die nodig zijn voor de experimenten in een conische centrifugebuis van 50 mL.
Opmerking: Wij raden verplanten tussen 2,5 x 10-5 en 1 x 106 KP cellen per muis, maar dit kan worden aangepast op basis van de behoeften van de onderzoeker. - Vervolgens de cellen gedurende 5 minuten bij 300 x gcentrifugeren, gecombineerd het supernatant en, met behulp van een precisiepipet, resuspendeer de cellen bij een dichtheid van 2 x 107/mL (voor de inhalatie van 1 x 106 KP cellen per muis) in serum en antibioticum-vrije RPMI , aangevuld met 0,01 M ethyleendiamminetetra azijnzuuroplossing (NA2EDTA).
- Houd de cellen op het ijs tot transplantatie.
2. Orthotopic transplantatie via intratracheale levering
- Het verdoven van een muis (8-12 weken oud) door een subcutane injectie van een mengsel van ketamine (100 mg/kg lichaamsgewicht) en xylazine (10 mg/kg lichaamsgewicht).
- Terwijl de narcose wordt ingesteld, voorbereiden op de katheter intubatie. Daarom, botte de naald van een katheter door gewoon het einde knippen met een schaar. Daarna duw de katheter helemaal op het einde van de naald.
- Bevestig het passende niveau van verdoving door pedaal reflex via stevige teen knijpen en oogheelkundige zalf van toepassing op de ogen.
- Oplossen van de muis op het platform van de intubatie (figuur 1A) door zijn bovenste snijtanden aansluiten via een hechtdraad en bevestigen dat de borst verticale onder de hechtdraad is.
- Plaats een optische glasvezelkabel tussen de voorpoten voor het verlichten van de borst (figuur 1B).
- Zorgvuldig openen van de mond van de muis en de tong gebruik van ontsmet platte pincet uitlichten. Kijk voor de uitstoot van wit licht om te zoeken van het strottenhoofd en visualiseren van het strotklepje en arytenoid kraakbeen (Figuur 1 c).
- Zodra de opening van de luchtpijp duidelijk zichtbaar is, schuif zachtjes de katheter in de luchtpijp (Figuur 1 d). De lengte van de katheter moet worden ingevoegd is afhankelijk van de leeftijd en de grootte van het dier, aangezien het zou moeten niet gaan hieronder de bifurcatie te garanderen een gelijkmatige verdeling van de Long adenocarcinoom cellen in de longen. Snel de naald uit de katheter verwijderen.
- De juiste plaatsing van de katheter in de luchtpijp wordt aangegeven door het witte licht schijnt door de katheter (figuur 1E). Om te bevestigen dat de plaatsing van de katheter in de luchtpijp, een spuit van 1 mL met water om de katheter worden nagekomen. Het water in de spuit wordt snel omhoog en omlaag overeenkomstig de ademhaling (figuur 1F).
Opmerking: Deze stap kan worden weggelaten door ervaren onderzoekers. - Opwarmen van de celsuspensie door de buis in de hand te houden en daarna Pipetteer 50 µL van de ophanging met 1 x 106 cellen (het aantal cellen mogelijk variabele) in het midden van de katheter-hub. De opschorting zal onmiddellijk worden aanzuiging. Vervolgens koppelt u een spuit van 1 mL en afzien van 300 µL van lucht naar het verzekeren van een consistente distributie in de longen.
- Zachtjes verwijderen van de katheter, verwijder de muis uit de intubatie platform en zet het op een warmte pad totdat het herstelt van de narcose.
3. lung voorbereiding voor stroom Cytometry
- Bij het gewenste eindpunt van experimentele, verdoven de muis door een subcutane injectie van een mengsel van ketamine (100 mg/kg lichaamsgewicht) en xylazine (10 mg/kg lichaamsgewicht) en het door cervicale dislocatie euthanaseren.
- Geniet van het karkas in 70% ethanol en beveiligen van de muis op een bord van de dissectie met behulp van tape.
- Maak een incisie ventral midline en voorzichtig het omkeren van de huid om de muur van de thoracale spieren en de buikorganen bloot te stellen. Aanprikken van het middenrif en de ribben knippen met een schaar de borstholte bloot te stellen.
- Perfuse van de longen 3 x met 6-8 mL ijskoud PBS via de rechterventrikel met behulp van een 27 G naald na het snijden van een kleine opening in het linkerventrikel om bloed te verlaten. De longen moeten worden gewist van bloed en beurt volledig wit.
- Neem uit de longen en de lobben gehakt in kleine stukjes met behulp van schaar. De Long stukken overbrengen in een tube van 2 mL microcentrifuge en Incubeer het in 1,5 mL Long spijsvertering buffer (RPMI, 5% FCS, 150 U/mL collagenase ik 50 U/mL DNase en ik).
- Incubeer de Long stukken 30-60 minuten bij 37 ° C en met constante schudden.
- Breng de celsuspensie longkanker door een 70 µm cel zeef in een tube van 50 mL. Schakel de zeef met de achterkant van een steriele 10 mL spuit en spoel de zeef met 15 mL PBS met 2% FCS.
- Centrifugeer de cellen bij 300 x g gedurende 5 min bij 4 ° C en het supernatant gecombineerd. Resuspendeer de cellen in 1 mL ammonium-chloride-kalium (ACK) lysing buffer en hen gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur voor de lysis van residuele erytrocyten uit te broeden.
- Centrifugeer de cellen bij 300 x g gedurende 5 min bij 4 ° C en resuspendeer de cellen in 1 mL PBS met 2% FCS en ga verder met het gewenste kleuring protocol voor stroom cytometry23.
Opmerking: U kunt ook de cellen kunnen worden resuspended in RPMI met 30% FCS en 10% DMSO en bevroren met een bevriezing container voor latere analyse.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
We gebruikten de orthotopic transplantatie model via intratracheale tumor cel levering om te testen of de tumor communicatie PD-L1 expressie stimuleert. Dus we geïsoleerd muis AC longkanker cellen uit de autochtone KP model (KP cellen), 10 weken na tumor-inductie via Cre-recombinase-uiting adenovirus (Ad.Cre) levering24. Daarna, we de Long gelabeld AC cellen met behulp van een groen fluorescente proteïne (GFP)-uiten lentivirus25 en orthotopically hen in immunocompetent, syngeneic muizen via intratracheale levering geaccepteerd. Voor het valideren van het model, wij getransplanteerde verschillende hoeveelheden tumorcellen en survival analyse uitgevoerd. Zoals verwacht, het voortbestaan van geadresseerden muizen was gecorreleerd aan het aantal werk cellen, en de overlevingstijd was tussen 2 weken voor ontvangers van 2 x 106 cellen en ongeveer 10 weken voor ontvangers van 2.5 x 105 cellen (figuur 2A). Toen de longen werden ontleed na de dood van de muizen gebruikt voor analyse van de overleving, merkte we een gelijkmatige verdeling van tumor knobbeltjes gedurende alle lobben van de longen (figuur 2B). Met betrekking tot de morfologie van de tumoren, vergeleken we getransplanteerde tumoren met autochtone KRASG12D-gedreven tumoren7 en heb niet gemerkt geen duidelijk verschil (figuur 2C).
Studeren de PD-L1 uitdrukking van getransplanteerde tumorcellen, wij euthanized ontvangende muizen 3 weken na de transplantatie van 1 x 106 cellen en de longen voorbereid flow cytometrische analyse. Indringende voor PD-L1 expressie en gating voor GFP+ cellen, we een belangrijke verschuiving in de positieve cellen PD-L1+ in vergelijking met gekweekte cellen geïdentificeerd in vitro (figuur 2D). Vandaar we dit model gevalideerd als een tijdbesparende model om te testen voor gen expressie veranderingen in tumorcellen onder fysiologische omstandigheden, die bijvoorbeeld kunnen worden gebruikt voor het onderzoeken van de gevolgen van genetische wijzigingen of farmacologische behandelingen op de PD-L1 expressie in Long AC cellen.
Figuur 1 : Intratracheale tumor cel longtransplantatie. (A) dit paneel toont de huisgemaakte intubatie platform met behulp van een polystyreen deksel, twee buizen van 15 mL en een 6.0 zijde hechtdraad. (B) de fiber optic draad is gericht op de borst van de muis en (C) na het zachtjes te trekken uit de tong, witte licht van de opening van de luchtpijp kan worden gezien. (D en E) juiste plaatsing van de muis wordt aangegeven door licht schijnt door de katheter en kan worden gecontroleerd (F) door de en neergaande beweging van water geplaatst in een 1 mL spuit. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 2 : Morfologie van muis longen na de syngeneic, intratracheale transplantatie van cellen longkanker AC. (A) dit paneel toont een Kaplan Meier-analyse van de ontvangende muizen na de transplantatie orthotopic van verschillende hoeveelheden van tumorcellen. De hoeveelheid tumorcellen gebruikt voor intratracheale bezorging worden aangegeven in de legenda van de. (B) Dit is een representatief beeld van een Long van een tumor-cel ontvangende muis. De longen van een muis die ontvangen van 5 x 10,5 cellen en overleden 43 dagen na de transplantatie wordt getoond. (C) dit paneel toont een haematoxyline en eosine-kleuring van het gedeelte van de Long van autochtone tumoren 10 weken na levering van de Ad.Cre (linker paneel) en 6 weken na de transplantatie orthotopic van 5 x 105 tumorcellen (juiste paneel), inclusief een hogere vergroting van de aangegeven gebieden (onder). (D) de PD-L1 expressie werd gemeten door stroom cytometry in GFP+ KP cellen na de teelt in vitro onder standaardomstandigheden (voor transplantatie, rood) en na transplantatie van de orthotopic en isolatie van muis longen 3 weken volgende engraftment (na de transplantatie, blauw). Rat IgG2a PE-Cyanine7 werd gebruikt als een isotype-besturingselement. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Studeren Long fysiologische en pathologische gebeurtenissen in de Long, zijn invasieve en niet-invasieve intratracheale intubatie methoden voor de toediening van verschillende reagentia gebruikte26,27,28,29 ,30,31,32. Op het gebied van kanker, gebruiken onderzoekers de intratracheale (en intranasale) instillation van Cre-recombinase-uiting van virussen in te voeren van somatische mutaties in Long epitheliale cellen. De administratie van een Ad.Cre of een lentivirus zorgt de voorwaardelijke activering van oncogene K-ras in KRAS-LSL-G12D muizen, gelijktijdig met de knockout van p53 in de getransduceerde cellen, bij muizen zijn gefokt met p53-floxed muizen7. De mogelijkheid te bestuderen van longkanker tumorvorming vanaf het vroegste stadium tot de dood van het dier, alsmede een hoge gelijkenis tussen muis tumoren en menselijke tumoren, maakt deze modellen zeer populair. Echter vanuit een praktische oogpunt, dit model vereist uitgebreide muis fokken tot het bestuderen van verschillende genotypen, en bij sommige genotypes, experimenten kunnen duren tot een jaar van tumor-inductie tot het experimentele eindpunt. Dit vereist grotere muis ruimte en, vandaar, kosten voor huisvesting muis.
De mogelijkheid om eenvoudig tumorcellen in vitro te manipuleren met behulp van CRISPR-Cas9 technologie22 maakt orthotopic transplantatie modellen een snel alternatief voor het bestuderen van de impact van geselecteerde genen op de tumorgroei en tumor expressieprofielen. De codering van de tumorcellen kan worden gebruikt voor de real-time bewaking van tumorgroei met behulp van levende cellen imagers of te sorteren van tumorcellen volgens hun tags. Dit zorgt ook voor een eenvoudige kwantificering van tumorcellen (dat wil zeggen, tumor last) volgens hun etiketten. Zodra vastgesteld, wordt deze methode van tumor cel levering zeer reproduceerbaar is. In vergelijking met orthotopic transplantatie via staart ader levering, de tumorcellen worden rechtstreeks geleverd aan hun natuurlijk milieu in de longen, overwegende dat blootstelling aan bloed en bloedbestanddelen kan het wijzigen van eigenschappen van de cel van de tumor. Verder, de effecten van gemanipuleerde genen op de overleving van de cel van de tumor in de bloedbaan en de extravasation naar de longen zijn onduidelijk en kunnen resulteren in genotype-afhankelijke wijzigingen in de hoeveelheid van de geleverde aan de longen cellen.
In het model hier beschreven, verspreid tumoren symmetrisch over de longen. Hierdoor kan de afzonderlijke oogsten en analyse van verschillende letsels, bijvoorbeeld één kwab kan worden onderworpen aan stroom cytometry analyse zoals hierboven beschreven, terwijl een andere kwab kan worden gebruikt voor de analyse van immunohistochemical, Long lysate voorbereiding, enz. Groeien tumoren resultaat in de dood van de ontvangende muis binnen 3-10 weken na intratracheale levering, afhankelijk van het aantal cellen die worden gebruikt. Hierdoor kan de onderzoeker aan te passen van het aantal getransplanteerde cellen op individuele behoeften, en kleinere aantallen van de cel laat langer tumorgroei en tumor cel blootstelling aan de communicatie. Aan de andere kant, kan een hogere celaantal wenselijk voor farmacologische studies aan het verkorten van de periode van levering van de drug.
Zodra vastgesteld, is de intratracheale administratie van tumorcellen zeer reproduceerbaar. Sommige kritische punten moeten echter worden overwogen wanneer u deze procedure uitvoert. Eerst, moet voorzichtigheid worden genomen om te voorkomen dat weefselschade wanneer verdringt de tong met de pincet en, in het bijzonder wanneer de katheter wordt geplaatst. Voor de plaatsing van de katheter is het essentieel dat de onderzoeker de wit licht om te zoeken van de opening van de luchtpijp duidelijk kan zien. Toch, per ongeluk, de katheter kan gemakkelijk ingelast in de naast elkaar geplaatste slokdarm. Daarom raden we altijd zoeken naar de juiste plaatsing van de katheter in de luchtpijp zoals hierboven beschreven. Het is ook essentieel om te voorkomen dat de katheter te plaatsen tot diep (dat wil zeggen, de katheter mogen niet worden gebracht onder de bronchiale bifurcatie). Dit garandeert een gelijkmatige verdeling van longkanker cellen en, vandaar, tumoren in de longen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs hebben niets te onthullen.
Acknowledgments
De auteurs bedank Safia Zahma voor haar hulp bij de voorbereiding van weefselsecties.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| mouse lung adenocarcinoma cell line | isolated in house | ||
| C57Bl/6 mice | F1 of the cross of the two backgrounds may be used (8-12 weeks) | ||
| 129S mice | |||
| RPMI 1640 Medium | Life Technologies | 11544446 | |
| Fetal Calf Serum | Life Technologies | 11573397 | |
| Penicillin/Streptomycin Solution | Life Technologies | 11548876 | |
| L-Glutamine | Life Technologies | 11539876 | |
| Trypsin, 0.25% (1x) with EDTA | Life Technologies | 11560626 | |
| UltraPure 0.5 M EDTA, pH 8.0 | Thermo Fisher Scientific | 15575020 | |
| Ketasol (100 mg/mL Ketamine) | Ogris Pharma | 8-00173 | |
| Xylasol (20 mg/mL Xylazine) | Ogris Pharma | 8-00178 | |
| BD Insyste (22 GA 1.00 IN) | BD | 381223 | |
| Blunt forceps | Roboz | RS8260 | |
| Leica CLS150 LED | Leica | 30250004 | Fibre Light Illuminator |
| Student Iris Scissors | Fine Science Tools | 91460-11 | |
| DNase I (RNase-Free) | New England Biolabs | M0303S | |
| Collagenase Type I | Life Technologies | 17100017 | |
| ACK Lysing Buffer | Lonza | 10-548E | |
| CD274 (PD-L1, B7-H1) Monoclonal Antibody (MIH5), PE-Cyanine7 | eBioscience | 25-5982-82 | |
| Rat IgG2a kappa Isotype Control, PE-Cyanine7 | eBioscience | 25-4321-82 |
References
- Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer statistics, 2018. CA: A Cancer Journal for Clinicians. 68 (1), 7-30 (2018).
- Zappa, C., Mousa, S. A. Non-small cell lung cancer: current treatment and future advances. Translational Lung Cancer Research. 5 (3), 288-300 (2016).
- Dolly, S. O., Collins, D. C., Sundar, R., Popat, S., Yap, T. A. Advances in the Development of Molecularly Targeted Agents in Non-Small-Cell Lung. Drugs. 77 (8), 813-827 (2017).
- Stinchcombe, T. E. Targeted Therapies for Lung Cancer. Cancer Treatment Research. 170, 165-182 (2016).
- Brody, R., et al. PD-L1 expression in advanced NSCLC: Insights into risk stratification and treatment selection from a systematic literature review. Lung Cancer. 112, 200-215 (2017).
- Safari, R., Meuwissen, R. Practical use of advanced mouse models for lung cancer. Methods in Molecular Biology. 1267, 93-124 (2015).
- DuPage, M., Dooley, A. L., Jacks, T. Conditional mouse lung cancer models using adenoviral or lentiviral delivery of Cre recombinase. Nature Protocols. 4 (7), 1064-1072 (2009).
- Kwon, M. C., Berns, A. Mouse models for lung cancer. Molecular Oncology. 7 (2), 165-177 (2013).
- Hidalgo, M., et al. Patient-derived xenograft models: an emerging platform for translational cancer research. Cancer Discovery. 4 (9), 998-1013 (2014).
- Chen, X., et al. An orthotopic model of lung cancer to analyze primary and metastatic NSCLC growth in integrin alpha1-null mice. Clinical & Experiment Metastasis. 22 (2), 185-193 (2005).
- Kang, Y., et al. Development of an orthotopic transplantation model in nude mice that simulates the clinical features of human lung cancer. Cancer Science. 97 (10), 996-1001 (2006).
- Kang, Y., et al. Proliferation of human lung cancer in an orthotopic transplantation mouse model. Experimental and Therapeutic. 1 (3), 471-475 (2010).
- Kuo, T. H., et al. Orthotopic reconstitution of human small-cell lung carcinoma after intravenous transplantation in SCID mice. Anticancer Research. 12 (5), 1407-1410 (1992).
- Li, B., et al. A novel bioluminescence orthotopic mouse model for advanced lung cancer. Radiation Research. 176 (4), 486-493 (2011).
- Mase, K., et al. Intrabronchial orthotopic propagation of human lung adenocarcinoma--characterizations of tumorigenicity, invasion and metastasis. Lung Cancer. 36 (3), 271-276 (2002).
- McLemore, T. L., et al. Novel intrapulmonary model for orthotopic propagation of human lung cancers in athymic nude mice. Cancer Research. 47 (19), 5132-5140 (1987).
- Tsai, L. H., et al. The MZF1/c-MYC axis mediates lung adenocarcinoma progression caused by wild-type lkb1 loss. Oncogene. 34 (13), 1641-1649 (2015).
- Winslow, M. M., et al. Suppression of lung adenocarcinoma progression by Nkx2-1. Nature. 473 (7345), 101-104 (2011).
- Zou, Y., Fu, H., Ghosh, S., Farquhar, D., Klostergaard, J. Antitumor activity of hydrophilic Paclitaxel copolymer prodrug using locoregional delivery in human orthotopic non-small cell lung cancer xenograft models. Clinical Cancer Research. 10 (21), 7382-7391 (2004).
- Buckle, T., van Leeuwen, F. W. Validation of intratracheal instillation of lung tumour cells in mice using single photon emission computed tomography/computed tomography imaging. Lab Animal. 44 (1), 40-45 (2010).
- Berry-Pusey, B. N., et al. A semi-automated vascular access system for preclinical models. Physics in Medicine & Biology. 58 (16), 5351-5362 (2013).
- Ran, F. A., et al. Genome engineering using the CRISPR-Cas9 system. Nature Protocols. 8 (11), 2281-2308 (2013).
- Singer, B. D., et al. Flow-cytometric method for simultaneous analysis of mouse lung epithelial, endothelial, and hematopoietic lineage cells. American Journal of Physiology - Lung Cellular and Molecular Physiology. 310 (9), L796-L801 (2016).
- Moll, H. P., et al. Afatinib restrains K-RAS-driven lung tumorigenesis. Science Translational Medicine. 10 (446), (2018).
- Campeau, E., et al. A versatile viral system for expression and depletion of proteins in mammalian cells. PLoS One. 4 (8), e6529 (2009).
- Gui, L., Qian, H., Rocco, K. A., Grecu, L., Niklason, L. E. Efficient intratracheal delivery of airway epithelial cells in mice and pigs. American Journal of Physiology - Lung Cellular and Molecular Physiology. 308 (2), L221-L228 (2015).
- Helms, M. N., Torres-Gonzalez, E., Goodson, P., Rojas, M. Direct tracheal instillation of solutes into mouse lung. Journal of Visualized Experiments. (42), e1941 (2010).
- Lin, Y. W., et al. Pharmacokinetics/Pharmacodynamics of Pulmonary Delivery of Colistin against Pseudomonas aeruginosa in a Mouse Lung Infection Model. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 61 (3), (2017).
- Wegesser, T. C., Last, J. A. Lung response to coarse PM: bioassay in mice. Toxicology and Applied Pharmacology. 230 (2), 159-166 (2008).
- Cai, Y., Kimura, S. Noninvasive intratracheal intubation to study the pathology and physiology of mouse lung. Journal of Visualized Experiments. (81), e50601 (2013).
- Lawrenz, M. B., Fodah, R. A., Gutierrez, M. G., Warawa, J. Intubation-mediated intratracheal (IMIT) instillation: a noninvasive, lung-specific delivery system. Journal of Visualized Experiments. (93), e52261 (2014).
- Vandivort, T. C., An, D., Parks, W. C. An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice. Journal of Visualized Experiments. (108), e53771 (2016).
