Summary
En anjon utbyta resin-baserade metod, anpassat till vätska impingement-baserade bioaerosol provtagning av virus kan påvisas. När tillsammans med nedströms molekylär identifiering, kan metoden för lättköpt och känslig detektion av virus från bioaerosoler.
Abstract
Detta protokoll visar anpassade bioaerosol provtagningsmetod för virus. I detta system, är exchange anjonharts tillsammans med flytande impingement-baserade air provtagning enheter för effektiv koncentration av negativt laddade virus från bioaerosoler. Kådan fungerar således som en ytterligare koncentration steget i arbetsflödet bioaerosol provtagning. Nukleinsyra utvinning av viral partiklarna utförs sedan direkt från den exchange anjonharts, med resulterande provet passar molekylära analyser. Ytterligare, det här protokollet beskriver en specialbyggd bioaerosol kammare kan generera virus-lastad bioaerosoler under olika miljöförhållanden och möjliggör kontinuerlig övervakning av miljömässiga variabler såsom temperatur, vindhastighet och aerosol masskoncentrationen. Den största fördelen med detta protokoll är ökad känslighet för virus upptäckt, bedömning via direkt jämförelse till en omodifierad konventionella flytande impinger. Andra fördelar inkluderar potential att koncentrera olika negativt laddade virus, den låga kostnaden för exchange anjonharts (~$0.14 per prov), och användarvänlighet. Nackdelarna inkluderar detta protokoll oförmåga att bedöma smittsamhet av harts-adsorberat viruspartiklar, och potentiellt behov av optimering av flytande provtagning bufferten används inom impinger.
Introduction
Syftet med denna metod är att ge en mycket känslig bioaerosol provtagning plattform för att underlätta molekylär detektion av negativt laddade virus från bioaerosoler. Mikroorganismer, inklusive viruspartiklar, kan överleva i bioaerosoler under längre tid1. Bioaerosoler kan resa över relativt långa avstånd och upprätthålla livsduglighet och smittsamhet, vilket framgår av ett utbrott av legionärssjuka som härstammar från industriella kyltorn som ligger på ett avstånd av 6 km från de drabbade individerna och resulterade i 18 dödsfall2. Indirekt överföring av virus till människor som medieras av bioaerosoler kan förekomma i flera inställningar och har visats för norovirus utbrott i skolor och restauranger3,4. Likaså kan bioaerosol överföring av virus förekomma i jordbruket inställningar såsom i svin och fjäderfä gårdar, med denna överföring rutten betraktas som en viktig faktor i rörelsen av virus mellan produktions faciliteter5, 6 , 7 , 8 , 9.
Effektivt urval av virus-lastad bioaerosoler möjliggör förbättring av snabb diagnostik och beredskapen för utbrott förebyggande, som visas i demonstrationer i vilken H5 influensa ett virus upptäcktes från bioaerosoler i levande djur marknaderna i Kina och USA10,11. Nuvarande teknik för provtagning av bioaerosol involverar ett antal olika partikel fånga principer, och i stort sett kan delas in i impingers, cykloner, slagkvarnar och filter12. Det är bortom räckvidden av detta protokoll att uttömmande täcka alla fördelar och nackdelar med dessa plattformar för provtagning av virus från bioaerosoler; Det kan dock konstateras att majoriteten av enheterna provtagning inte har optimerats för insamling av virus och bakteriofager13. Dessutom påverkas smittsamhet av viruspartiklar ofta negativt, med flytande impingers som anses upprätthålla viral smittsamhet mer effektivt än provtagning enheter såsom fast slagkvarnar eller filter14. En nackdel med flytande impingement är dock målet utspädningseffekten, vilket beror på att virus är insamlade i relativt stora volymer (vanligtvis ≥20 mL) av vätska i uppsamlingskärlet. En annan viktig nackdel innebär suboptimala effektiviteten i flytande impingers att koncentrera partiklar < 0.5 µM i storlek15. Uppsamlingskapacitet av dessa enheter kan dock förbättras genom immobilisering på fasta matriser, som immobilisering kan förbättra bevarandet av viral nukleinsyror och viral smittsamhet16,17.
Vi har tidigare visat att anjonharts exchange är ett effektivt verktyg för avskiljning och koncentrationen av virus från flytande matriser, inklusive F-RNA bakteriofager, hepatit A-virus, humant adenovirus och rotavirus18,19 ,20. Enligt definitionen av tillverkaren, är den anjonharts för exchange som utnyttjas i detta arbete en macroreticular polystyren stark bas anjon exchange harts där functionalized Kvartära amine grupper medla attraktion och fånga av anjoner i ett flytande medium21 . Följaktligen, den exchange anjonharts förväntas fånga virus med net-negativa ytladdningar, inklusive många enterovirus, influensavirus och andra virus som är relevanta för människors och djurs hälsa.
Det nuvarande protokollet innebär tillägg av anjonharts exchange till en flytande impinger. I detta system fungerar kådan som en sekundär koncentration steg för viruspartiklar fångade i impinger vätskan. Nukleinsyror kan sedan vara direkt elueras i små volymer, som ger ett koncentrerat urval för molekylära analyser. Den största fördelen med denna metod är således förbättringen i viral upptäckt känslighet, främst genom minskning av provvolymen. Dessutom, på grund av den inneboende ospecifika fångst av negativt laddade virus, metoden sannolikt gäller för detektion av ett stort antal virus av intresse. Här demonstreras metoden för vaccinstammar av typ A och typ B influensavirus och den FRNA coliphage MS2 (MS2). Dessa virus upptäcks därefter med standard qRT-PCR-analyser som tidigare beskrivits22. Slutpunkten användaren bör inte räkna med att stöta på svårigheter i att utföra denna metod, eftersom ändringar av befintliga utrustning utgör inte stora störningar konventionella flödet av bioaerosol provtagning och analys.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. inställning av Bioaerosol kammare (se figur 2)
-
Pre-load de flytande impingers med 20 mL 0,01 M fosfatbuffrad koksaltlösning, pH 7,5 (PBS).
- Tillsätt 0,5 g exchange anjonharts och förbjuda inom PBS av en av de flytande impingers, med en annan flytande impinger tjänstgör som en kontroll.
- Ställning flytande impingers i parallell inne i bioaerosol kammaren med klämman står med aerosol vikar inför nebulisatorn.
Obs: Se figur 2 för ytterligare information. - Samlokalisera en direct-Läs aerosol monitor nära de flytande impingers att mäta massa koncentration (mg/m3) av bioaerosol.
- Samlokalisera ytterligare direkt-Läs instrumentation (inomhusluftens kvalitet bildskärm och termiska vindmätaren) nära de flytande impingers att övervaka miljövariabler, till exempel temperatur, relativ luftfuktighet och vind hastighet, inom bioaerosol kammaren.
- Kör axialfläktar i hörnen av bioaerosol kammaren att underlätta blandning av aerosol.
Obs: Axialfläktar köras med en fast hastighet och blandar inte inställbar.
2. modell Bioaerosolization experiment (se figur 3)
- Utföra seriell, 10-faldig utspädningar av MS2 bacteriophage och influensa vaccin till önskad koncentrationer i fosfatbuffrad saltlösning (PBS).
Obs: för att demonstrera metoden här, 103,5 FFU/mL av typ A och B stammar av influensavirus vaccin och 105 PFU/mL av den MS2 bacteriophage utnyttjas. För att avgöra titrarna för inokulat, bakteriofager förökade i Escherichia coli HS (pFamp) R och räknas upp som tidigare beskrivits20. Kommersiella vaccinet innehåller kända mängder fyra levande försvagade stammar av influensavirus, två typ en influensa och två typ B influensavirus, uttryckt i fluorescerande fokus enheter eller FFU. - Förbereda inokulat inom glas fartyget av en 6-jet kollision nebulisatorn genom att skapa suspensioner av önskad koncentrationer av viruspartiklar i 100 mL PBS och installera i anpassade bioaerosol kammaren.
- Initiera instrumentering för att mäta variabler inom bioaerosol kammaren, såsom temperatur, % relativ luftfuktighet, koldioxid koncentration, och vindhastighet (genereras med hjälp av en axialfläkt). Använd en direkt-Läs aerosol monitor att spåra masskoncentration i bioaerosol kammaren och fastställa samstämmigheten inom och mellan prövningar.
- Försegla bioaerosol kammaren och rensa i 10 min med HEPA-filtrerad luft.
- Leverera filtrerad och torkad luft till nebulisatorn på 6,9 kPa.
- Generera en målkoncentration av viral bioaerosoler (via nebulisator) i varje bioaerosol kammare rättegång. För denna demonstration genereras bioaerosoler med en koncentration på 5 mg/m3 .
- När den mål masskoncentrationen av Aerosolen har nåtts, stoppa nebulisering.
- Driva en luftpump för provtagning för varje flytande impinger som har kalibrerats till ett flöde av 12,5 L/min. beteende kalibrering med hjälp av en primär flöde standard före och efter varje provtagning händelse för att säkerställa konsekvens i provtagning volym. Leverans utspädning air använder en HEPA-filtrerad rad belägna nära nebulisatorn och upprätthålla konstant tryck i kammaren.
- Aktivt prova bioaerosol kammare atmosfären för en period av 40 min att uppnå en provtagning volym av 500 L per prov.
Obs: Provtagning för 40 min vid 12,5 L/min med två pumpar parallellt tillåter för provtagning av 1000 L av bioaerosol. Således, vid slutförandet av experimentet, det förväntas att majoriteten av luften här i bioaerosol kammaren har provtagits och släpps ut i miljön via ett HEPA-filtrerad system. Detta framgår av minskningen i partikel koncentration. Efter experimentet, ytor är dekontamineras med 10% hushålls blekmedel och 70% etanol. Indikatorer används i denna demonstration; dock om kända sjukdomsalstrande organismer som används i detta system, ytterligare biosäkerhet åtgärderna kan genomföras vid behov.
3. nukleinsyra utvinning och qRT-PCR-detektion
-
Isolera nukleinsyror direkt från exchange anjonharts och, för jämförande ändamål, från den vätska som används inom de flytande impingers. I det här exemplet en RNA isolering beskrivs, men en liknande protokoll skulle kunna användas för DNA virus.
- Nukleinsyra isolering från den exchange anjonharts.
- Överför all anjon exchange harts-innehållande vätska av den flytande impinger till en steril 50 mL koniska tub.
- Låt jonbytaren sedimentera och långsamt Häll flytande provet från den exchange anjonharts. Använd en 1 mL pipettspetsen för att ta bort alla återstående vätskan från den exchange anjonharts.
- Från en viral RNA isolering kit, tillsätt 560 µL av viral lyseringsbuffert innehållande carrier RNA direkt till exchange anjonharts och inkubera i 10 minuter vid rumstemperatur med periodiska blandning.
- Använda en 1 mL pipettspetsen, överföra den virala lysat (den virala lyseringsbuffert) till en steril 1,5 mL koniska tube och fortsätt med RNA isolering använder en viral RNA isolering kit (se Tabell för material) i enlighet med tillverkarens instruktioner, utom att elueras RNA i en total volym på 60 µL eluering buffert.
- Nukleinsyra isolering från flytande impingers.
- Pipettera 140 µL av flytande provet i en steril 1,5 mL koniska rör och utföra RNA isolering med hjälp av viral RNA isolering kit i enlighet med tillverkarens instruktioner, med undantag för eluering RNA i en total volym på 60 µL eluering buffert.
Obs: 140 µL är den maximala provvolymen som kan bearbetas med den specifika viral RNA isolering kit anställd här i ett enda steg preparat.
- Pipettera 140 µL av flytande provet i en steril 1,5 mL koniska rör och utföra RNA isolering med hjälp av viral RNA isolering kit i enlighet med tillverkarens instruktioner, med undantag för eluering RNA i en total volym på 60 µL eluering buffert.
- Nukleinsyra isolering från den exchange anjonharts.
- Utföra qRT-PCR för detektion av MS2 och influensa A och B virus som tidigare beskrivits23,24. I denna demonstration, 5 µL av nukleinsyra eluat används för qRT-PCR.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Figur 1 visar principen bakom kostnad-baserade fånga virus från bioaerosoler via integration av harts i vätska-baserade impingers. Figur 2 visar inställningen av specialbyggda bioaerosol kammaren. Figur 3 beskriver de olika stegen i Konfigurera aerosolization experiment och åtgärder för att säkerställa kvalitetskontroll. Figur 4 visar förstärkning kurvor för qRT-PCR-detektion av negativt laddade virus fångas från bioaerosoler. Tabell 1 visar primers och sonder används för qRT-PCR för de exempel virus som används i denna studie.
Använda MS2 och influensa virus som finns i influensa vaccinet som modeller i anpassade bioaerosol kammaren, de flytande impingers modifierad med exchange anjonharts tillåtet för cirka 3 x 9 x förbättring av viral upptäckt, beroende på specifikt virus, jämfört med direkt testning av impingement flytande22. Som visas i representativa qRT-PCR amplifiering kurvor (figur 4), upptäckt av typ ett influensavirus kan uppnås upp till 3,26 cykler förr när exchange anjonharts användes jämfört med direkt testning av impingement vätskan. Med tanke på att en vinst på en Ct i en qRT-PCR som är 100% effektiv, motsvarar en 2-faldig ökning av målkoncentration, motsvarar denna skillnad en förbättring av 9,58 x upptäckt.
Figur 1: flytande impingement tillsammans med exchange anjonharts. Var och en av de modifierade bioaerosol provtagning enheterna införlivar en anjonharts för exchange i sin design. Varje harts pärla är en 0,5 till 1,0 mm sfär med en porös yta, en egenskap som ökar anjon exchange yta. Funktionella kvaternära ammoniumsalter grupper tillåta för fångst av joner i flytande media, medla tillfångatagandet av virus med net-negativa ytladdningar, inklusive MS2 coliphages och influensa virus, som används i detta protokoll som modellorganismer (en stjärt bacteriophage dras här som ett exempel för fångade virus). Nukleinsyra isolering utförs sedan direkt från kådan (med kommersiellt tillgängliga Kit), med provet passar mest molekylär identifiering strategier (qRT-PCR anställd här). Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2: Custom bioaerosol kammare Schematisk. A: 6-jet nebulisatorn levereras med filtrerad och torkad luft vid genererar trycket 6,9 kPa; B: axialfläktar att underlätta enhetlig bioaaerosol blandning; C: aerosol monitor att identifiera de relativa bioaerosol koncentrationerna. D: flytande impinger med harts; E: flytande impinger utan harts; F: termisk vindmätaren att mäta vindhastighet; G: luft kvalitet bildskärm att mäta andra miljövariabler inklusive temperatur, koldioxid och procent relativ luftfuktighet; H: aktiv provtagning pumpar kalibrerad till 12,5 L/min; I: pneumatiskt förseglade handske portar för positionering provtagningsutrustning inom bioaerosol kammaren. J: observationsfönster. Denna siffra återanvändes från tidigare arbete med tillåtelse av utgivaren22. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3: arbetsflöde för bioaerosolization experimentet. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 4: exchange anjonharts förbättrar qRT-PCR-baserad detektion av negativt laddade virus i bioaerosoler. I det här exemplet var typ A influensavirus med ett inokulum koncentration på 103,5 FFU/mL sprids in i anpassade bioaerosol kammaren tills den bioaerosol masskoncentrationen nådde 5 mg/m3. Flytande impingers med och utan harts var samtidigt engagerade till varje prov (500 L) av bioaerosol. Virus-RNA var erhållits från anjonharts för exchange eller från flytanden av impinger och analyseras av qRT-PCR. Experimentet upprepades i tre exemplar. Nukleinsyror som erhållits från harts upptäcktes på en genomsnittliga Ct av 26.76, medan impinger flytande prov upptäcktes på en genomsnittliga Ct av 30.02 (ΔCt av 3.26). Denna skillnad i Ct är likvärdigt till en 9,58 x förbättrad detektering med exchange anjonharts. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
| Virus | Primer namn | Primer sekvens | Referens | |
| MS2 | GI Fwd | 5'-ATCCATTTTGGTAACGCCG-3' | 23 | |
| GI sond | 5'-(6-FAM)-TAGGCATCTACGGGGACGA-(BBQ)-3' | |||
| GI Rev | 5'-TGCAATCTCACTGGGACATAT-3' | |||
| IAC Fwd (46F) | 5'-GACATCGATATGGGTGCCG-3' | |||
| IAC sond | 5'-(Cy5) - CACATTCACCAGGGAGACGCATGAGA-(BBQ) -3 ' | |||
| IAC Rev (186R) | 5'-CGAGACGATGCAGCCATTC-3' | |||
| typ A influensavirus | CDC universal influensa A virus framåt primer | 5'-GAC CRA TCC TGT CAC CTC TGA C-3 ' | 24 | |
| CDC universal influensavirus A reverse primer | 5'-AGG GCA TTY TGG ACA AAK CGT CTA-3' | |||
| CDC universal influensa A virus sond | 5'-(FAM) - TGC AGT CCT CGC TCA CTG GGC ACG-(BHQ1) -3 ' | |||
| typ B influensavirus | CDC universal influensa B-virus framåt primer | 5'-TCCTCAACTCACTCTTCGAGCG-3' | 24 | |
| CDC universal influensa B-virus reverse primer | 5'-CGGTGCTCTTGACCAAATTGG-3' | |||
| CDC universal influensa B-virus sond | 5'-(JOE) - CCAATTCGAGCAGCTGAAACTGCGGTG-(BHQ1) -3 ' | |||
Tabell 1: Primers och sonder används i denna studie. Alla primers och sonder var från Friedman et al. 201123 och Leona & Selvarangan 201024.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Detta protokoll beskriver en metod för känsliga viral fånga från bioaerosoler använder modifierade flytande impingers. Metoden är optimerad för detektion och kvantifiering av virusmängd i bioaerosoler. Den specifika ändringen visat här innebär tillägg av exchange anjonharts till vätska som ingår i en gemensam flytande impinger. Denna metod utvecklades för sin enkelhet i nedströms prov bearbetning, medan andra prov bearbetning tekniker såsom centrifugering, filtrering och nederbörd-baserade metoder inte erbjuder denna fördel. Utvinning av nukleinsyror utförs direkt från kådan, undanröja behovet av hög volym elutions och flera provberedningssteg, i slutändan bidrar till förbättrad upptäckt känslighet för metoden via minskad effektiv provet volym. Dessutom har man visat att immobilisering av viruspartiklar på fasta ytor kan bidra till ökad stabilitet av viral nukleinsyra eller kvarhållande av viral smittsamhet17,25. Immobilisering kan ytterligare bidra till ökad uppsamlingskapacitet genom att minska förluster på grund av reaerosolization16. Metoden kan enkelt kopplas till nedströms molekylära analyser (qRT-PCR visat här). Anjonharts för exchange kan fältet-extraherade och skickat till ett referenslaboratorium för analys, medan luft-provtagningsutrustning kan bo tillägnad övervakning i provtagningsområdet. Eftersom principen bakom förfarandet innebär att icke-specifik fånga virus bär en net-negativ ytladdning, förväntas metoden vara mottagliga för detektion av flera patogena virus av betydelse för människors hälsa och veterinärmedicin. Som granskas av Michen och Graule26, har ett stort antal virus viktigt att människors och djurs hälsa net-negativa ytladdningar, med få kända undantag, såsom vissa stammar av rotavirus och poliovirus.
Detta protokoll utvärderas inte direkt effekten av miljöförhållandena på känsligheten för upptäckt; När luft provtagning sker i Fältinställningar, är det dock tänkbart att variabler såsom relativ fuktighet och temperatur kan påverka samling effektivitetsvinster över flera typer av air sampler12. Således modifieras villkorar i bioaerosol kammaren för att passa dessa miljöparametrar som behövs. Anjon exchange harts metoden har visat sig effektivt koncentrera flera virus från vattenprover med ett brett utbud av fysikalisk-kemiska egenskaper, som visar att störningar från partiklar, bakterier och andra miljömässiga föroreningar förväntas vara minimal18. Dessutom kan samling buffertar kräver optimering för specifika virus, som i vissa fall har man visat att optimera samling bufferten kan leda till förbättrad lagring av viral stabilitet27. En största nackdelen med metoden som presenteras är det faktum att den inte kan avgöra viral smittsamhet. En annan nackdel med detta protokoll är en oförmåga att bedöma potentiellt negativa effekterna av nebulisering och luft provtagning på viral stabilitet, inklusive uttorkning, klippning och icke-specifik adsorption till bioaerosol kammare ytor22.
De modifierade bioaerosol provtagning enheterna kunde vara mottagliga för fältbaserade provtagning i flera inställningar, inklusive sjukhus, skolor, jordbruks operationer och andra handelsplatser. Eftersom ändringar görs på befintliga air provtagningsutrustning, förväntas de modifierade enheterna skulle vara enkelt adoptable av operatörer som för närvarande provtagning bioaerosoler för virus. I protokollet framgår här i en specialbyggd bioaerosol kammare med MS2 och influensa virus, som är användbara mål för metodutveckling på grund av att de utgör exempel på icke-höljeförsedda och höljeförsedda virus, MS2 är erkänd som en surrogat av enterovirus och är allmänt används i utvärdering av impingers22,26,27,28,29.
Framtida arbete kommer att innebära optimering av provtagning förhållanden (dvs lufthastigheten provtagning, insamling buffertar) och införandet av ytterligare relevanta virus i testprotokoll.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har något att avslöja.
Acknowledgments
Detta arbete stöds av finansiering från CDC/NIOSH High Plains Intermountain centrum för jordbruket hälsa och säkerhet (5U54OH008085) och Colorado Bioscience utvärdering Grant Discoveryprogrammet (14BGF-16).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Escherichia coli bacteriophage MS2 (ATCC 15597-B1) | American Type Culture Collection | ATCC 15597-B1 | |
| FluMist Quadrivalent | AstraZeneca | Contact manufacturer | Viral constitutents of this vaccine are subject to change on an annual basis |
| CFX96 Touch Real-Time PCR Detection System | Bio-Rad | 1855195 | |
| Primers and probes | Integrated DNA Technologies | NA | |
| 0.2 µM sterile filter | NA | NA | |
| 1 L pyrex bottles or equivalent | NA | NA | |
| 1 mL pipet tips | NA | NA | |
| 1 mL pipettor | NA | NA | |
| 50 mL serological pipet | NA | NA | |
| PCR tubes | NA | NA | |
| Pipet-aid or equivalent | NA | NA | |
| QIAamp Viral RNA Mini Kit | Qiagen | 52904 | |
| QuantiTect Probe RT-PCR Kit | Qiagen | 204443 | |
| Amberlite IRA-900 chloride form | Sigma-Aldrich | 216585-500G | |
| Phosphate buffered saline | Sigma-Aldrich | P5368-10PAK | |
| Water (molecular biology grade) | Sigma-Aldrich | W4502-1L | |
| Eppendorf DNA LoBind Microcentrifuge Tubes | ThermoFisher | 13-698-791 | |
| Falcon 50 mL Conical Centrifuge Tubes | ThermoFisher | 14-432-22 | |
| Falcon Polypropylene Centrifuge Tubes | ThermoFisher | 05-538-62 | |
| SuperScript III Platinum One-Step qRT-PCR Kit w/ROX | ThermoFisher | 11745100 | |
| SKC Biosampler 20 mL, 3-piece glass set | SKC Inc. | 225-9593 | |
| Vac-u-Go sample pumps | SKC Inc. | 228-9695 | |
| Collison nebulizer (6-jet) | BGI Inc. | NA | |
| HEPA capsule | PALL | 12144 | |
| Q-TRAK indoor air quality monitor 8554 | TSI Inc. | NA | |
| Alnor velometer thermal anemometer AVM440-A | TSI Inc. | NA | |
| SidePak AM510 personal aerosol monitor | TSI Inc. | NA | |
| Bioaerosol chamber | NA | NA |
References
- Pirtle, E. C., Beran, G. W. Virus survival in the environment. Revue scientifique et technique (International Office of Epizootics). 10 (3), 733-748 (1991).
- Nguyen, T. M., et al. A community-wide outbreak of legionnaires disease linked to industrial cooling towers--how far can contaminated aerosols spread? The Journal of Infectious Diseases. 193 (1), 102-111 (2006).
- Marks, P. J., et al. Evidence for airborne transmission of Norwalk-like virus (NLV) in a hotel restaurant. Epidemiology and Infection. 124 (3), 481-487 (2000).
- Marks, P. J., et al. A school outbreak of Norwalk-like virus: Evidence for airborne transmission. Epidemiology and Infection. 131 (1), 727-736 (2003).
- Corzo, C. A., Culhane, M., Dee, S., Morrison, R. B., Torremorell, M. Airborne detection and quantification of swine influenza a virus in air samples collected inside, outside and downwind from swine barns. PLoS One. 8 (8), e71444 (2013).
- Anderson, B. D., et al. Bioaerosol sampling in modern agriculture: A novel approach for emerging pathogen surveillance. The Journal of Infectious Diseases. 214 (4), 537-545 (2016).
- Hietala, S. K., Hullinger, P. J., Crossley, B. M., Kinde, H., Ardans, A. A. Environmental air sampling to detect exotic Newcastle disease virus in two California commercial poultry flocks. Journal of Veterinary Diagnostic Investigation. 17 (2), 198-200 (2005).
- Jonges, M., et al. Wind-mediated spread of low-pathogenic avian influenza virus into the environment during outbreaks at commercial poultry farms. PLoS One. 10 (5), e0125401 (2015).
- Otake, S., Dee, S. A., Jacobson, L., Torremorell, M., Pijoan, C. Evaluation of aerosol transmission of porcine reproductive and respiratory syndrome virus under controlled field conditions. The Veterinary Record. 150 (26), 804-808 (2002).
- Wu, Y., et al. Aerosolized avian influenza A (H5N6) virus isolated from a live poultry market, China. The Journal of Infection. 74 (1), 89-91 (2017).
- Choi, M. J., et al. Live animal markets in Minnesota: A potential source for emergence of novel influenza A viruses and interspecies transmission. Clinical Infectious Diseases. 61 (9), 1355-1362 (2015).
- Haig, C. W., Mackay, W. G., Walker, J. T., Williams, C. Bioaerosol sampling: Sampling mechanisms, bioefficiency and field studies. The Journal of Hospical Infection. 93 (3), 242-255 (2016).
- Anderson, B. D., Lednicky, J. A., Torremorell, M., Gray, G. C. The use of bioaerosol aampling for airborne virus surveillance in swine production facilities: A mini review. Frontiers in Veterinary Science. 4, 121 (2017).
- Verreault, D., Moineau, S., Duchaine, C. Methods for sampling of airborne viruses. Microbiology and Molecular Biology Reviews. 72 (3), 413-444 (2008).
- Hogan, C. J. Jr Sampling methodologies and dosage assessment techniques for submicrometre and ultrafine virus aerosol particles. Journal of Applied Microbiology. 99 (6), 1422-1434 (2005).
- Yu, K. -P., Chen, Y. -P., Gong, J. -Y., Chen, Y. -C., Cheng, C. -C. Improving the collection efficiency of the liquid impinger for ultrafine particles and viral aerosols by applying granular bed filtration. Journal of Aerosol Science. 101, 133-143 (2016).
- Perez-Mendez, A., et al. Evaluation of a simple and cost effective filter paper-based shipping and storage medium for environmental sampling of F-RNA coliphages. J Virol Methods. 194 (1-2), 60-66 (2013).
- Chandler, J. C., et al. Field-based evaluation of a male-specific (F+) RNA coliphage concentration method. Journal of Virological Methods. 239, 9-16 (2017).
- Perez-Mendez, A., Chandler, J. C., Bisha, B., Goodridge, L. D. Concentration of enteric viruses from tap water using an anion exchange resin-based method. Journal of Virological Methods. 206, 95-98 (2014).
- Perez-Mendez, A., Chandler, J. C., Bisha, B., Goodridge, L. D. Evaluation of an anion exchange resin-based method for concentration of F-RNA coliphages (enteric virus indicators) from water samples. Journal of Virological Methods. 204, 109-115 (2014).
- Kammerer, J., Carle, R., Kammerer, D. R. Adsorption and ion exchange: Basic principles and their application in food processing. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 59 (1), 22-42 (2011).
- Chandler, J. C., et al. A method for the improved detection of aerosolized influenza viruses and the male-specific (F+) RNA coliphage MS2. Journal of Virological Methods. 246, 38-41 (2017).
- Friedman, S. D., Cooper, E. M., Calci, K. R., Genthner, F. J. Design and assessment of a real time reverse transcription-PCR method to genotype single-stranded RNA male-specific coliphages (Family Leviviridae). Journal of Virological Methods. 173 (2), 196-202 (2011).
- Selvaraju, S. B., Selvarangan, R. Evaluation of three influenza A and B real-time reverse transcription-PCR assays and a new 2009 H1N1 assay for detection of influenza viruses. Journal of Clinical Microbiology. 48 (11), 3870-3875 (2010).
- Cademartiri, R., et al. Immobilization of bacteriophages on modified silica particles. Biomaterials. 31 (7), 1904-1910 (2010).
- Michen, B., Graule, T. Isoelectric points of viruses. Journal of Appled Microbiology. 109 (2), 388-397 (2010).
- Turgeon, N., Toulouse, M. J., Martel, B., Moineau, S., Duchaine, C. Comparison of five bacteriophages as models for viral aerosol studies. Applied and Environmental Microbiology. 80 (14), 4242-4250 (2014).
- Vergara, G. G., et al. Evaluation of FRNA coliphages as indicators of human enteric viruses in a tropical urban freshwater catchment. Water Research. 79, 39-47 (2015).
- Tung-Thompson, G., Libera, D. A., Koch, K. L., de Los Reyes, F. L. 3rd, Jaykus, L. A. Aerosolization of a human norovirus surrogate, bacteriophage MS2, during simulated vomiting. PLoS One. 10 (8), e0134277 (2015).
