Summary
Denne artikkelen beskriver i detalj en metode basert på silver nanopartikler for ameliorating biliær atresia syndrom i en eksperimentell biliær atresia musemodell. En solid forståelse av forberedelsesprosessen reagens og neonatal musen injeksjon teknikken vil hjelpe bli forskere med metoden som brukes i neonatal mus modell studier.
Abstract
Biliær atresia (BA) er en alvorlig kolangitt med høy dødelighet hos barn som etiologien er fortsatt ikke fullt ut forstått. Virusinfeksjoner kan være en mulig årsak. Den typiske dyr modellen som brukes for å studere BA er etablert av vaksinere neonatal mus med en rhesus rotavirus. Silver nanopartikler har vist seg å utøve antibakterielle og antiviral effekter; funksjoner i BA musemodell vurderes i denne studien. Foreløpig i BA dyreforsøk er metodene som brukes til å forbedre symptomer på BA mus generelt symptomatisk behandlinger gitt via mat eller andre rusmidler. Målet med denne studien er å demonstrere en ny metode for ameliorating BA syndrom i mus ved intraperitoneal injeksjon av silver nanopartikler og gi detaljert metoder for å forberede sølv hydrogenion gel formulering. Denne metoden er enkel og allment gjeldende og kan brukes til forskning mekanismen av BA og kliniske behandlinger. Basert på BA musemodell, når mus viser gulsott, injiseres forberedt sølv hydrogenion gel intraperitoneally på overflaten av lavere leveren. Den overlevelse statusen er observert, og biokjemiske indikatorer og leveren histopatologi er undersøkt. Denne metoden gir en mer intuitiv forståelse av både etablering av BA modellen og romanen BA behandlinger.
Introduction
BA er en form for cholestasis preget av vedvarende gulsott og har høy dødelighet i fravær av leveren transplantasjon. Virusinfeksjoner er nært forbundet med patogenesen av BA. Cytomegalovirus, reovirus og rotavirus har alle blitt foreslått som patogener i BA1,2,3. I nyfødte perioden, responsen av umodne immunsystemet til en virusinfeksjon resulterer i immune feilregulering mot ekstra- og intrahepatic galle kanaler, fører til biliær epithelial celle apoptose, inflammatorisk celle infiltrasjon i portal området, intrahepatic og extrahepatic galle duct obstruksjon, og til slutt, leveren fibrosis4,5,6.
Brukte animalske modell for BA studier innebærer inoculation neonatal museklikk med rhesus rotavirus (RRV). Musen utvikler vanligvis gulsott etter 5-6 dager, viser liten kroppsvekt og acholic avføring. Rollen av immunrespons i sykdommen prosessen er viktig, spesielt for naturlig killer (NK) celler. uttømming av disse cellene med anti-NKG2D antistoff reduserer BA-indusert skade7. Videre andre celler, inkludert CD4+ T celler, CD8+ T celler, dendrittiske celler og regulatoriske T-celler, har alle vist å spille roller i sykdom8,9,10,11. Alle data tyder uunnværlig natur immunsystemet i BA.
Silver nanopartikler (AgNPs) har vist for å ha gunstige effekter mot noen smittsomme sykdommer, inkludert bakterieinfeksjoner12 og virusinfeksjoner13,14,15. Men enn dermatologisk behandling, har noen studier brukt AgNPs en klinisk behandling, hovedsakelig på grunn av deres potensielle toksisitet. I dyreforsøk, har forskere generelt studert effekten av AgNPs administreres via muntlig16 eller intravenøs metoder17. Men har ingen andre forskere studert effekten av AgNPs administreres via en intraperitoneal (IP)-injeksjon i neonatal musen eksperimenter, som en enkel og rask metode fører til mer direkte innvirkning på leveren og galle kanaler samtidig redusere giftighet til andre systemer, for eksempel immunsystemet. AgNPs har blitt vist å påvirke NK celle aktivitet18; Derfor testet vi terapeutiske effekter av AgNPs administreres via IP injeksjon i BA musemodell.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle dyr eksperimentelle protokoller har blitt godkjent av institusjonelle Animal Care og bruk komiteen av Sun Yat-Sen universitetet Laboratorium dyr Center (#IACUC-DB-16-0602).
1. etablere biliær Atresia musemodell
- Opprettholde gravid BALB/c mus i en bestemt patogen-fritt miljø under en 12t mørke/lys syklus ved 25 ° C, med tilgang til autoklaveres chow annonsen libitum.
- For å forberede RRV belastningen MMU 18006, forsterke viruset i MA104 celler og måle de viral titers ved en plakett analysen19.
Merk: MA104 celler er kultivert i Dulbeccos endret Eagle's medium (DMEM) med 10% fosterets bovin serum (FBS) i en inkubator med en fuktet atmosfære som inneholder 5% CO2. Forsterkning trinnene er kort beskrevet nedenfor.- Infisere MA104 celler (1,5 x 107) i en 150 cm2 kultur bolle med trypsin-aktivert RRV [1,5 x 106 plakk-forming enheter (PFU)] i 30 mL av serum-free medium. Inkuber infiserte celler i 3 dager på en fuktet inkubator på 37 ° C med 5% CO2.
- Lyse infiserte celler i kultur flasken av tre fryse og tine sykluser, med 20 min i en-80 ° C fryser hver fryse fase og, deretter, tining cellene tilbake til romtemperatur; celle-assosiert virus partikkel slipper inn nedbryting. Deretter samle og overføre i cellen lysate og kultur supernatant til en 15 mL konisk rør.
- Fjerne store mobilnettet rusk fra den lysate ved lav hastighet sentrifugering (300 x g ved 4 ° C i 3 minutter). Deretter overføre nedbryting som inneholder viruset (ca 6 mL) i en ny 15 mL konisk tube for dyreforsøk.
Merk: RRV er da klar til å bli titered, aliquoted, og lagret eller brukt for flere runder med forsterkning. Langvarig eksponering til romtemperatur vil redusere virusinfeksjon kapasitet; viruset bør plasseres på isen og lagret ved-80 ° C eller i flytende nitrogen.
- Last RRV til et lite volum (1 mL) insulin sprøyte med en 29 G nål for neonatal musen injeksjon.
Merk: De tykke pinnene av volumetriske sprøyter lett føre til narkotika lekkasje. - Innen 24 timer av fødsel, administrere hver neonate 20 µL 1.2 x 105 PFU/mL RRV via IP rute; Bruk samme volum saltoppløsning som kontrollen.
Merk: Sprøyten i dette eksperimentet er en 1 mL insulinsprøyte. Infiserte mus som ikke ble lei av sine mødre døde innen 2 dager av andre grunner ble ikke inkludert i analysen. - Observerer alle neonatal mus nøye og veie dem daglig. Vanligvis på den sjette dagen etter RRV inoculation, gulsott vises på ørene og nakne hud, avføring blir leire-farget, og pelsen blir fet, foreslår etableringen av BA modellen; se etter disse symptomene.
Merk: BA kan bekreftes av en leveren vev delen undersøkelse med H & E og immunohistochemical sier. BA mus er så klar for AgNP behandling.
FORSIKTIG: Protokollen presentert er for bruk med moderne dyr og menneskelige RV stammer, som må håndteres under grad 2 (BSL-2) forhold.
2. sølv Nanoparticle syntese
- Forberede og karakteriserer AgNPs som beskrevet tidligere12,20.
Merk: Detaljer om forbereder og karakteriserer AgNPs er beskrevet i publikasjoner av C. M. Che team ved Institutt for kjemi, Universitetet i Hongkong12,20. Siste konsentrasjonen av løsningen var 1 mM. Mener diameteren på AgNPs var 10 nm (varierer 5 til 15 nm) og bekreftet av elektronmikroskop.
3. forberedelse av sølv Nanoparticle kollagen blandingen
Merk: AgNP kollagen blandingen er forberedt og som tidligere beskrevet21 og lagret på 4 ° C. Alle prosedyrer må utføres på is.
- Først legger du til 490 µL av kollagen forberedelse, type I kollagen (4 mg/mL) til en 1,5 mL tube og plassere den på is.
- Legg 100 µL fosfat-bufret saltoppløsning (PBS, 10 x) til kollagen og bland det med en pipette.
- For å forberede 1 L 10 x PBS buffer, kombinere 80 g NaCl, 2 g KCl og 35,8 g Na2HPO4. 12H2O 2.4 g KH2PO4 og store bufferen ved romtemperatur.
- Deretter legge 10 µL av NaOH (0,2 M) til ovenstående løsning.
- For å forberede 0,2 M NaOH, legge til 8 g NaOH pulver 1 L destillert vann.
- Endelig legge til 400 µL av AgNPs (1 mM) til kollagen og bland dem med en pipette.
Merk: Legg til AgNPs siste for en selv blande. AgNP kollagen blandingen skal lagres på 4 ° C; ellers, det lett stivner ved romtemperatur.
4. musen injeksjon metode
- Administrere infiserte neonatal mus i behandlet RRV gruppen med en IP-injeksjon av 50 µL av AgNP kollagen blandingen etter utseendet på gulsott; utføre en andre injeksjon 3 d senere.
Merk: Mus i kontrollgruppen RRV (infiserte kontroll) gis samme volum saltoppløsning, og mus i normal kontrollgruppen er ikke gitt behandling. - På begynnelsen av injeksjon, trykk musen er Ben med ringfingeren skrått over høyre lår, og introdusere nålen sakte i 15° vinkel (figur 1). På å nå overflaten av nedre kant av leveren (figur 2), ca 0,5 cm i, injisere AgNP kollagen blandingen; deretter trekke nålen sakte.
Merk: Pass på ikke å innføre noen luft i sprøyten som, da neonatal musen kan bli drept. I nyfødte mus, mage og milten er i venstre magen og magen er full av melk. Hvis injeksjon administreres fra denne siden, nålen kan enkelt skrive inn enten magen, forårsaker melk å strømme inn i bukhulen og milten, forårsaker blødninger.
FORSIKTIG: Vær oppmerksom på at nålen skal forhindre noen finger skader, og husk å erstatte hetten strikkes, fjerne nålen og plassere den i en beholder. - Etter alle injeksjoner, holde musene av deres burene for 10 min å tillate AgNP kollagen blandingen gel og forhindre at mor fra licking injeksjonsstedet. Deretter tilbake mus til deres burene.
- Observere og registrere fysiske opptredener av alle mus daglig, inkludert gulsott og kroppsvekt, samt overlevelse.
5. Blood prøve samling
Merk: Blodprøver av ca 120 µL samles inn ved å sette inn nålen inn i hjertet. Etter sentrifugering er serum samlet (ca 70 µL) til leveren funksjonstesting. Blod samling metoden er som følger.
- Bedøve musene på den niende og 12 dagen etter RRV inoculation (som er 3 dager etter AgNP behandling) med 0,5-2,5% desflurane.
- Nakkens lemmer av musen og sterilisere øvre og nedre magen med 75% alkohol.
- Utsette membranen ved å kutte musen hud, muskler og peritoneum langs midtlinjen til xiphoid med saks; Bruk en steril bomull swab for å fjerne fordøyelsessystemet å fullt avsløre membran muskelen.
- Sett inn nålen (med en 1 mL losset insulinsprøyte) i venstre ventrikkel hjertet og sakte trekke tilbake sprøytestempelet for å få maksimal blod volumet. Deretter overføre blodet til en 1,5 mL tube.
- La røret stå i 30 min ved romtemperatur og sentrifuge det etter 5 min på 400 x g. Deretter bruker en overføring pipette, samle inn og lagre serum for videre bruk.
Merk: Unngå skade av membran, som membran feil lett føre til pneumothorax, død og blodpropp, og dermed hindre blod prøve samlingen.
6. biokjemiske parameteren gjenkjenning
- Bruk serum samlet i trinn 5.5 for en biokjemisk parameteren oppdagelsen.
- Bruke en automatisert biokjemiske analyzer til å gjenkjenne følgende biokjemiske parametre: alanin aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), alkalisk fosfatase (ALP), totalt protein (TP), albumin (ALB), globulin (GLO), totalt bilirubin (TBIL), direkte bilirubin (DBIL), indirekte bilirubin (IBIL) og total gallesyrer (TBA).
7. extrahepatic Cholangiography å observere Extrahepatic galle Duct-Patency
Merk: Utføre hele prosessen under disseksjon mikroskop.
- Fullt utsette leveren, galleblæren, og extrahepatic galle kanaler med en bomullspinne.
- Observere og fotografere utseendet på leveren og galle kanaler under disseksjon mikroskop.
- Bruk ophthalmica tang til å hold bunnen av gallbladder.
- Laste inn en 1 mL sprøyte med methylene blåfarge løsning (0,05 wt.% i H2O). Langsomt inn sprøytenålen galleblæren hulrom; deretter forstå nålen med ophthalmica tang og sakte sette mot 10-20 µL av methylene blåfarge.
- Observere under et mikroskop om den blå fargen går gjennom extrahepatic galle kanaler til jejunum og ta et bilde.
8. samling av fersk leveren prøver for Hematoxylin og Eosin flekker
- Løse ferske musen leveren vev over natten i 10% formalin.
- Deretter bygge fast leveren vev i parafin og del dem.
- Dewax delene, rehydrate dem med en etanol-serien (som 100%, 95%, 80% og 70% etanol i destillert vann, hver for 5 min), beis delene vev med hematoxylin, gitt dem til en 1% saltsyre alkohol differensiering og endelig flekker på deler med eosin.
- Til slutt, observere histopatologi i leveren under 40 X mikroskop.
9. Immunohistochemical farging av Hematoxylin og Eosin-farget vev deler
- Etter dewaxing og rehydrating delene, utføre en antigen henting av submerging delene i Tris-EDTA buffer (10 mM Tris base, 1 mM EDTA løsning, pH 9.0) og varme dem i en mikrobølgeovn for 10 min på 95 ° C.
- Fjerne endogene peroxidase ved å utsette delene vev i 10 min 3% hydrogen peroxide løsninger.
- Behandle avsnittene med 5% geit serum, blokkere uspesifikke bindende.
- Legg til primære kanin-mus NKG2D (1: 100) delene, og Inkuber dem over natten på 4 ° C.
- Inkuber avsnittene med passende sekundære antistoffer (HRP-merket polymer anti-kanin system) i 30 min ved romtemperatur.
- Visualisere den immunohistochemical flekker med 3, 3-diaminobenzidine (DAB) som chromogen.
- Observere delene under 40 X mikroskop, hente bilder og fortsette å analysere dem som ønsket.
10. flyt Cytometric analyse
- Forsiktig hakke leveren vev, passere gjennom en 70 µm celle sil og sentrifuge det 2 x 270 x g ved 4 ° C i 4 min.
- Resuspend celle pellet i RPMI 1640 medium og analysere dem ved to farger immunofluorescence bruker monoklonale antistoffer.
- Utføre mobilnettet phenotyping bruker bestemt celle-overflate markører, inkludert fluorescein isothiocyanate - og phycoerythrin-konjugerte anti-NKp46 (NK lymfocytter, 1:1, 000) og anti-CD4 (T-celle undertypen, 1:1, 000), med en flyt cytometer og analysere dataene med flyt cytometri dataanalyse programvare.
- Velg celle populasjoner ifølge forover/side scatter, gate etter at isotype kontrollene for noen bakgrunn fluorescens, og underlagt dataene til en sekundær analyse basert på fluorescens signalene fra personlige antistoffer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Basert på etablerte BA musemodell, infiserte neonatal mus ble gitt IP injeksjon av forberedt AgNP kollagen blandingen 2 x etter viser gulsott. Musen overlevelse ble sjekket for daglig, og leveren funksjonstesting, lever patologi og flowcytometri ble utført. Sammenlignet med ubehandlet kontroll BA mus, mus AgNP-behandlet viste redusert gulsott og vedlikeholdes normal kroppsvekt (Figur 3). Nivåene av bilirubin metabolisme og hepatisk transaminase falt til normal kontrollverdier, noe som tyder på at AgNPs sterkt forbedret leveren funksjon (tabell 1). Extrahepatic cholangiography (Figur 4) med farging methylene blåfarge bekreftet galle duct-patency etter AgNP behandling. H & E flekker (figur 5) viste en betydelig redusert inflammatorisk celle infiltrasjon i den hepatic portalområde mus behandlet med AgNPs, sammenlignet med kontrollen musene. Flow cytometri resultatene viste mindre NK celler i lever etter AgNP behandlinger (både på 9 og 12) enn i RRV mus (figur 6). Immunohistochemical flekker avdekket et vesentlig redusert uttrykk av NK cellen merket NKG2D (figur 7) i portalen triaden av AgNP-behandlet mus, sammenlignet RRV mus.
Figur 1: første sprøyte penetrasjon posisjon. Den røde prikkede linjen angir linjen parallelt med magen P6 neonatal mus; den gule pilen viser nål poenget; den røde pilen viser nål vinkelen. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2: P nå overflaten av nedre kant av leveren. Den gule stiplede linjen angir nedre kant av en mus leveren; den røde pilen indikerer nål plasseringen under injeksjon. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3: effekten av AgNPs på BA syndrom i en eksperimentell BA musemodell. (A) dette panelet viser utseendet på neonatal mus på dager 9 og 12 etter injeksjon med RRV alene og 3 dager og 6 dager etter injeksjon med AgNPs (RRV + AgNPs). (B) dette panelet viser vekten av musene i hver gruppe på ulike tidspunkt; x-aksen viser antall dager etter at musen ble født og y-aksen angir fold-endring i kroppsvekt. P < 0,01 med Student t-test sammenligner RRV + AgNp gruppen til gruppen RRV kontroll; n = 16 i kontrollgruppen, n = 18 RRV grupper og n = 17 i RRV + AgNP gruppe. (C) dette panelet viser overlevelse av mus i hver gruppe. Dette tallet har blitt endret fra Zhang et al. 18. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 4: Extrahepatic cholangiography. En kontrast agent ble brukt til å gjenkjenne patency av extrahepatic galle kanaler og ta bilder. Den blå stiplede linjen angir det extrahepatic galle duct; den røde pilen viser en innsnevring av felles galle duct; svarte pilen viser BA. Skala bar = 1 mm. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 5: H & E farging. Leveren vev av mus i hver gruppe på dager 9 og 12 var samlet, fast, delt og farget med H & E. forkortelser: PV = portalen blodåre, BD = galle duct. Skala bar = 50 µm. Dette tallet har blitt endret fra Zhang et al. 18. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 6: prosentandel av NK celler i leveren vev. (A) lever av mus ble behandlet i cellen suspensjoner på dager 9 og 12, og andelen av NK celler ble oppdaget av flowcytometri. (B) dette panelet viser prosentandelen av NK celler (NKp46+CD4+) i hver gruppe på ulike tidspunkt etter AgNP injeksjon. Y-aksen angir fold-endring i prosentandelen av NK celler, som er beregnet i forhold til prosenter av kontrollgruppen på dag 9 og dag 12.* *P < 0,01 og *P < 0,05, med Student t-test sammenligner den RRV + AgNp gruppen til RRV kontrollgruppen, n = 10 i hver gruppe. Dette tallet har blitt endret fra Zhang et al. 18. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 7: Immunohistochemical flekker for NK cellen merket NKG2D i portalen området av mus i hver behandlingsgruppe. Uttrykket av NK cellen merket NKG2D i portalen området av mus i hver behandlingsgruppe ble oppdaget av immunohistochemical flekker. De lange pilene indikerer galle kanaler; kort pilene viser NK celler. Forkortelser: PV: portalen blodåre, BD: galle duct. Sscale bar = 50 µm. Dette tallet har blitt endret fra Zhang et al. 18. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Tabell 1: kliniske laboratoriet undersøkelse av leveren funksjon-relaterte molekyl serum nivåer. Perifert blod ble brukt til å måle leverfunksjon i mus i hver gruppe. ALT: alanin aminotransferase, AST: aspartate aminotransferase, ALP: alkalisk fosfatase, TP: totalt protein, ALB: albumin, GLO: globulin, TBIL: totalt bilirubin, DBIL: direkte bilirubin, IBIL: indirekte bilirubin og TBA = totalt gallesyrer. P < 0,05 og **P < 0,01, med Student t-test for hver kohort sammenlignet RRV alene gruppe, n = 10 i hver gruppe. Alle biokjemiske indikatordata vises som den gjennomsnittlig ± SD. Alle mus de tre gruppene var 12 dager gamle. Denne tabellen er endret fra Zhang et al. 18. Klikk her for å laste ned denne filen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
AgNPs utstilling potent bredspektret antibakterielle egenskaper og en sterk permeabilitet22; i tillegg brukes de til å produsere en rekke antibakterielle legemiddelverket23. Men kan AgNPs ta lang tid å fjerne når de akkumuleres i organer, og denne utholdenhet kan føre til toksiske effekter24,25. En tidligere studie undersøkte Akutt toksisitet og gentoksisitet av AgNPs etter en enkelt IV injeksjon i en rotte eksperiment, og resultatene viste at AgNPs kan forårsake akutt lever og nyreskader. AgNPs samlet i det viktigste immunsystem organ, inkludert thymus og milt17. I denne musen BA modellen ameliorated behandling med AgNPs BA syndrom, som våre data tyder er delvis formidlet av NK celle hemming. De langsiktige effektene av AgNPs krever imidlertid en videre undersøkelser, å vurdere den potensielle toksisitet til musen utvikling og immunsystemet regulering.
I metoden medvirkninger for en vellykket operasjon er som følger: (i) prosessen med å forberede AgNP kollagen blandingen må utføres på is fordi, i romtemperatur, AgNP kollagen blandingen blir raskt en halvfaste gel, som kan ikke brukes for injeksjoner. Etter utarbeidelse, skal AgNP kollagen blandingen lagres på 4 ° C. (ii) bare 1 mL insulin sprøyter bør brukes på grunn av liten diameter, som reduserer lekkasje av injiserte stoffet. (iii) forrige studier har generelt undersøkt effekten av AgNPs gis oralt16 eller via intravenøs injeksjon17. I vår dyreforsøk er eksperimentelle fagene neonatal mus; dermed intravenøs injeksjon er nesten umulig, og vi brukte IP injeksjon. Injeksjon av AgNPs forbedret symptomene på BA i mus. (iv) i begynnelsen av injeksjon, er beinlidelser museklikk fast for hånd å hindre musen flyttes. Denne metoden sikrer at rett mengde stoffet injiseres i bukhulen uten noen lekkasje og videre garanterer effekten av eksperimentet. (v) i neonatal mus, mage og milten er i venstre magen og magen er full av melk. For å injisere AgNP blandingen til overflaten av nedre kant av leveren, settes nålen fra over høyre lår av musen. Hvis nålen settes inn fra venstre, kan den enkelt punktering enten magen, forårsaker melk å strømme inn i bukhulen og milten, forårsaker blødninger. (vi) fordi bukveggen i neonatal mus er tynn, kan narkotika lekkasje forebygges ved å fremme diagonalt nålen i 15° vinkel nær bukveggen til nedre kant av leveren.
Vi har observert oppmuntrende effekten av AgNPs i denne RRV-indusert musen BA modell. Sammen med tidligere studier som brukes AgNPs i behandling av ulike virusinfeksjoner og sykdommer, tyder disse AgNP data på at en in vivo Application i anti-virus infeksjoner. Begrensningen av disse eksperimentene er at farmakokinetikken av AgNPs ikke er helt klart som skyldes manglende målemetoder for AgNPs, som gjør kontroll av AgNP doser vanskelig. Videre studier er også nødvendig for intracellulær målet for AgNPs, som vil hjelpe oss å forstå mekanismen og redusere bivirkninger i fremtidige behandlinger.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne ikke avsløre.
Acknowledgments
AgNPs brukt her var en gave fra C. M. Che Institutt for kjemi, Universitetet i Hongkong. Dette arbeidet ble finansiert av National Natural Science Foundation av Kina (nr. 81600399) og vitenskap og teknologi prosjektet Guangzhou (No.201707010014).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| BALB/c mouse | Guangdong Medical Experimental Animal Center | SYXK2017-0174 | Animal experiment |
| Rhesus rotavirus (RRV) | ATCC | ATCC VR-1739 | Establish biliary atresia mouse model |
| MA104 cells | ATCC | ATCC CRL-2378.1 | For laboratory use only |
| DMEM | Thermo Fisher | 10569010 | Mammalian Cell Culture |
| Fetal Bovine Serum | Thermo Fisher | 10099141 | Mammalian Cell Culture |
| collagen Type I | CORNING | 354236 | For research use only |
| PBS buffer | OXOID | BR0014G | For washing |
| NaOH | Sigma | 1310-73-2 | Adjust the PH value |
| AgNP | Antibacterial Note: The AgNps was a gift from Prof CM Che. in the Department of Chemistry, the University of Hong Kong. |
||
| Insulin syringe with integrated needle | BD | 9161635S | For medical use |
| 15 mL Centrifuge Tube | Corning | 430791 | For laboratory use only |
| 1.5 mL Microcentrifuge Tube | GEB | CT0200-B-N | For laboratory use only |
| Microscope | Nikon | ECLIPSE-Ci | For laboratory use |
| Dissecting/Intravital microscope | Nikon | SMZ 1000 | For laboratory use |
| anti-Mouse NKp46 FITC | eBioscience | 11-3351 | For research use only |
| anti-Mouse CD4 PE-Cyanine5 | eBioscience | 15-0041 | For research use only |
| Monoclonal Mouse Anti-Human CD4 | DAKO | 20001673 | For research use only |
| anti-NKG2D | RD | MAB1547 | For research use only |
| BD FACSCanto Flow Cytometer | BD Biosciences | FACS Canto Plus | For laboratory use only |
References
- Szavay, P. O., Leonhardt, J., Czechschmidt, G., Petersen, C. The role of reovirus type 3 infection in an established murine model for biliary atresia. European Journal of Pediatric Surgery. 12 (04), 248-250 (2002).
- Coots, A., et al. Rotavirus infection of human cholangiocytes parallels the murine model of biliary atresia. Journal of Surgical Research. 177 (2), 275-281 (2012).
- Shanmugam, N. P., Jayanthi, V. Biliary atresia with cytomegalovirus. Indian Pediatrics. 49 (2), 157 (2012).
- Mack, C. L., Feldman, A. G., Sokol, R. J. Clues to the Etiology of Bile Duct Injuryin Biliary Atresia. Seminars in Liver Disease. 32, 307-316 (2012).
- Muraji, T., Suskind, D. L., Irie, N. Biliary atresia: a new immunological insight into etiopathogenesis. Expert Review of Gastroenterology & Hepatology. 3 (6), 599-606 (2009).
- Sokol, R. J., Mack, C. Etiopathogenesis of Biliary Artesia. Seminars in Liver Disease. 21, 517-524 (2001).
- Shivakumar, P., Sabla, G. E., Whitington, P., Chougnet, C. A., Bezerra, J. A. Neonatal NK cells target the mouse duct epithelium via Nkg2d and drive tissue-specific injury in experimental biliary atresia. Journal of Clinical Investigation. 119 (8), 2281-2290 (2009).
- Mack, C. L., et al. Oligoclonal expansions of CD4+ and CD8+ T-cells in the target organ of patients with biliary atresia. Gastroenterology. 133 (1), 278-287 (2007).
- Shivakumar, P., et al. Effector Role of Neonatal Hepatic CD8 + Lymphocytes in Epithelial Injury and Autoimmunity in Experimental Biliary Atresia. Gastroenterology. 133 (1), 268-277 (2007).
- Saxena, V., et al. Dendritic Cells Regulate Natural Killer Cell Activation and Epithelial Injury in Experimental Biliary Atresia. Science Translational Medicine. 3 (102), 102ra194 (2011).
- Miethke, A. G., et al. Post-natal paucity of regulatory T cells and control of NK cell activation in experimental biliary atresia. Journal of Hepatology. 52 (5), 718-726 (2010).
- Tian, J., et al. Topical delivery of silver nanoparticles promotes wound healing. ChemMedChem. 2 (1), 129-136 (2010).
- Lu, L., et al. Silver nanoparticles inhibit hepatitis B virus replication. Antiviral Therapy. 13 (2), 253-262 (2008).
- Xiang, D., et al. Inhibition of A/Human/Hubei/3/2005 (H3N2) influenza virus infection by silver nanoparticles in vitro and in vivo. International Journal of Nanomedicine. 8 (Issue 1), 4103-4114 (2013).
- Elechiguerra, J. L., et al. Interaction of silver nanoparticles with HIV-1. Journal of Nanobiotechnology. 3 (1), 1-10 (2005).
- Nallanthighal, S., et al. Differential effects of silver nanoparticles on DNA damage and DNA repair gene expression in Ogg1-deficient and wild type mice. Nanotoxicology. 11 (8), 1-16 (2017).
- Wen, H., et al. Acute toxicity and genotoxicity of silver nanoparticle in rats. PLoS One. 12 (9), e0185554 (2017).
- Zhang, R., et al. Silver nanoparticle treatment ameliorates biliary atresia syndrome in rhesus rotavirus inoculated mice. Nanomedicine. 13 (3), 1041-1050 (2017).
- Arnold, M., Patton, J. T., McDonald, S. M. Culturing, Storage, and Quantification of Rotaviruses. Current Protocols in Microbiology. , Chapter 15 Unit 15C.13 (2009).
- Liu, X., et al. Silver nanoparticles mediate differential responses in keratinocytes and fibroblasts during skin wound healing. ChemMedChem. 5 (3), 468-475 (2010).
- Zhang, R., et al. Silver nanoparticles promote osteogenesis of mesenchymal stem cells and improve bone fracture healing in osteogenesis mechanism mouse model. Nanomedicine. 11 (8), 1949-1959 (2015).
- Wu, J., Hou, S., Ren, D., Mather, P. T. Antimicrobial properties of nanostructured hydrogel webs containing silver. Biomacromolecules. 10 (9), 2686-2693 (2009).
- Xu, L. Genotoxicity and molecular response of silver nanoparticle (NP)-based hydrogel. Journal of Nanobiotechnology. 10 (1), 16 (2012).
- Dobrzyńska, M. M., et al. Genotoxicity of silver and titanium dioxide nanoparticles in bone marrow cells of rats in vivo. Toxicology. 315 (1), 86-91 (2014).
- Mohamed, H. R. H. Estimation of TiO 2 nanoparticle-induced genotoxicity persistence and possible chronic gastritis-induction in mice. Food & Chemical Toxicology. 83 (9), 76-83 (2015).
