Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Developmental Biology

גזירת ובידול של הכלבים השחלות בתאי גזע Mesenchymal

doi: 10.3791/58163 Published: December 16, 2018

Summary

במסמך זה, אנו מתארים שיטה עבור בידוד, הרחבה, הבידול של גזע mesenchymal מרקמות השחלה הכלביים.

Abstract

עניין גזע mesenchymal (MSCs) גדל בעשור האחרון בשל הקלות שלהם של בידוד, הרחבת והתרבות. לאחרונה, מחקרים הוכיחו יכולת התמיינות רחב שקיימים תאים אלה. השחלה מייצג מועמד מבטיח טיפולים מבוססי תאים בשל העובדה כי הוא עשיר ב MSCs וכי לעתים קרובות נמחקים לאחר ניתוחים ovariectomy כפסולת ביולוגית. מאמר זה מתאר נהלי הבידוד, הרחבה, ואת הבידול של MSCs נגזר מן השחלה הכלביים, ללא הצורך של מיון תא טכניקות. פרוטוקול זה מייצג כלי חשוב עבור רפואה רגנרטיבית בשל תחולתה רחבה של תאים אלה מאוד דיפרנציאבילית בניסויים קליניים, משתמש טיפולית.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

מספר מחקרים שפורסמו להתמקד בתאי גזע גדל באופן משמעותי בעשר השנים האחרונות, מאמץ המחקר כי הושגה על ידי המטרה הקולקטיבית של גילוי טיפולי רפואה רגנרטיבית עוצמה. תאי גזע יש שני סמנים המעצב הראשי: העצמי - שיפוץ ובידול. גזע mesenchymal אחראי על תחלופת רקמת רגיל, יש קיבולת מוגבלת יותר של בידול בהשוואה בתאי גזע עובריים1. לאחרונה, מחקרים רבים הראו מגוון רחב של הבידול של MSCs, נושא בדיון אם קיימים הבדלים בין תאי גזע עובריים והוא בוגר כל2.

Ovarium פני האפיתל היא uncommitted שכבה של תאים, יחסית פחות הבדיל, אשר מבטאת שני סמנים אפיתל, mesenchymal3, שמירה על היכולת להבדיל בין סוגים שונים של תאים בתגובה אותות סביבתיים4. המיקום המדויק של תאי גזע בשחלה אינה ידועה; עם זאת, שהוא הוצע כי אבות bipotential, albuginea tunica להצמיח בתאי הנבט5. מחקרים אימונולוגי יש שיערו כי תאים אלה יש מקור סטרומה6 או ממוקם או מקורב ביותר השחלה משטח7. מאז בתאי גזע mesenchymal אקספרס קולטנים רבים יש תפקיד חשוב ב תא אדהזיה8, תוכנן ניסוי כדי לבדוק את ההשערה כי בחירת אוכלוסיה של תאים עם הדבקה מהירה לבודד אוכלוסיה של תאים בבירור characterizable כמו mesenchymal בטבע. לאחרונה, הקבוצה שלנו דיווחו על ההטיה של MSCs מרקמות השחלה בהתבסס על הקיבולת של הדבקה על משטח הפלסטיק של המנה תרבות ב ה 3 הראשון של תרבות, על מנת לקבל אוכלוסייה מטוהרים של תאים מפגין הדבקה מהירה9. כאן נתאר שיטת שפותחו עבור בידוד תאי גזע mesenchymal של רקמת השחלה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

הניסוי בוצע עם השחלות של ארבעה כלבי תערובת הנשי, שנתרמו לאחר ניתוח אלקטיבי-תוכנית עיקור כלבים. ניסוי זה אושרה על ידי ועדת האתיקה על השימוש בבעלי חיים של UNESP-FCAV (פרוטוקול מס 026991/13).

1. הכנה ניסיוני

  1. להכין או לרכוש 500 מ"ל תמיסת סטרילית של Dulbecco באגירה פוספט (DPBS) ללא סידן או מגנזיום.
  2. להכין את collagenase אני מדמין פתרון על ידי ערבוב µg 40 של האנזים ב 1 מ"ל של DPBS. סינון באמצעות מסנן מזרק 0.2 µm ואחסן aliquots 2 מ"ל ב-20 ° C.
  3. להכין את התקשורת התרבות הנשר של Dulbecco ששונה בינוני (DMEM) גלוקוז נמוך עם סרום עוברית 10%, 1% של אנטיביוטיקה.
  4. לאסוף חומרים עקר: מנות מספריים, מלקחיים, בקבוקון תרביות רקמה, צינורות, פיפטות 10 מ ל ו מ ל.
  5. השימוש בציוד מעבדה תרבות תא רגיל: בטיחות ביולוגית cabinet (BSC), חממה תרבות תא שוכן בגובה 5% CO2 ו 38 ° C וצנטריפוגה.
  6. לנקות את BSC: עם ידיים בכפפות, לעקר אותה עם 70% EtOH, באמצעות נורות UV.

2. בידוד של גזע Mesenchymal מן השחלה

  1. לאחר הניתוח, שמור את השחלות PBS בקרח צינור חרוטי, עד להגעתם במעבדה.
  2. ממלאים שתי צלחות פטרי 100 מ מ 10 מ"ל ל- PBS.
  3. להסיר את השחלות מהצינור ולהעביר אותם הפטרי הראשון עם PBS. לשטוף אותם עם ערבוב תנועות.
  4. בעדינות לאחזר את השחלה ולמקם אותו לתוך תבשיל אחר. עם פינצטה סטרילי, מספריים, מינצ הרקמה לחתיכות קטנות מאוד, בערך בגודל של 1 מ מ בלבד.
  5. להעביר את רקמת השחלה 35 מ מ פטרי ולהוסיף 2 מ של collagenase. מינצ הרקמה קצת יותר.
  6. מניחים על צלחת פטרי בחממה ב 38 מעלות צלזיוס במשך 3 שעות ומנערים בעדינות את צלחת פטרי עם תנועות מעגליות בכל 20 דקות.
  7. לאחר 3 שעות, הסר את הפטרי של החממה.
  8. העבר את התוכן של המנה צינור 15 מ"ל. הוסף 5 מ של התרחבות המדיה.
  9. היפוך בעדינות את הצינור לפני צנטריפוגה. Centrifuge הצינור ב g 2100 x במשך 7 דקות להסיר את תגובת שיקוע, resuspend בגדר עם 3 מ"ל של התרחבות המדיה.
  10. העברה בגדר בקבוק T25. מקם את הבקבוק בתוך החממה עם 5% CO2 ב 38 מעלות צלזיוס במשך 3 שעות.
    הערה: החלק החשוב ביותר של ההליך היא לשנות את המדיה לאחר 3 שעות של דגירה.
  11. הסר את הבקבוק של החממה ולהסיר את התקשורת עם הרקמה הנותרת. להוסיף 3 מ"ל של התקשורת הרחבה טריים של הבקבוק.
  12. שינוי התקשורת כל 48 שעות, להתבונן בקבוק הנהרות הסלולר.
    הערה: השלבים העיקריים של ההליך יכול להיות שנצפו באיור1.

3. הרחבה של גזע Mesenchymal מן השחלה

  1. מעבר תא
    1. כאשר התאים להגיע למפגש, להסיר את המדיה מהבקבוק.
    2. לשטוף את הבקבוק עם 3 מ"ל של PBS. הסר את PBS.
    3. להוסיף 1.5 מ של טריפסין ולשים הבקבוק בחממה ב 38 מעלות צלזיוס במשך 3 דקות טפח בעדינות את הבקבוק כדי לסייע התאים כדי לנתק.
      הערה: תאים צריך להגיע למפגש כ 5 - 7 d לאחר ציפוי הראשונית.
    4. להוסיף 3 מ"ל של הרחבת מדיה ולהעביר את התוכן צינור חרוטי.
    5. Centrifuge הצינור ב x 2100 גרם במשך 7 דקות להסיר את תגובת שיקוע והוסף 1 מ"ל של התרחבות המדיה.
    6. Homogenize בעדינות את התוכן של הצינור.
    7. קח את aliquot של µL 10 המדגם לבצע תא ספירת להחזיר את הצינור עם תאי החממה.
    8. מקום 10 µL של המיקס לתוך hemocytometer.
  2. ספירת התאים
    1. להשתמש המטרה X 10 של המיקרוסקופ ולהתמקד קווי הרשת hemocytometer.
    2. לספור את התאים ב- 5 ריבועים קטנים (איור 2).
    3. הכפילו את המספר שנספרו ב- 50,000 כדי להעריך את מספר תאים למיליליטר.

4. הבידול של גזע Mesenchymal מן השחלה

הערה: מבחני בידול בוצעו על פי הנחיות נוסדה בשנת היל. et al. 9.

  1. זרע 1.0 x 104 תאים לכל טוב, שהפקידים, שימוש לצלחת תרבות 4-. טוב.
  2. להוסיף 1 מ"ל של התרחבות המדיה.
  3. בעדינות להתסיס את המנה עם תנועות מעגליות.
  4. לאחר 24 שעות, להחליף את המדיה תרבות התקשורת בידול רצוי.
  5. עבור osteogenic, adipogenic, chondrogenic בידול, דגירה התאים עם התקשורת אינדוקציה עבור 30 d, עם החלפת מדיה בכל ערכות התמיינות ספציפיים ד 3 שימשו עבור כל אחד מבחני אלה.
  6. על שושלת היוחסין neurogenic בידול, דגירה את התאים עבור 10 d בתקשורת אינדוקציה, עם החלפת מדיה בכל בתלת-ממד. התקשורת המשמש כאן הכילה DMEM גלוקוז נמוך, חומצה ולפרואית 2 מ מ, הידרוקורטיזון 1 מיקרומטר, 10 מיקרומטר forskolin, 5 מ מ אשלגן כלורי, 5 אינסולין µg/mL ומיקרומטר 200 butylated hydroxyanisole.
  7. עבור מבשרי האנדודרם, תקופת דגירה של 5 d בתקשורת האנדודרם לפי הוראות היצרן מגיב.
  8. עבור תא הנבט הקדמוני שושלת היוחסין בידול, דגירה התאים בתקשורת אינדוקציה עבור 14d, עם החלפת מדיה בכל בתלת-ממד. התקשורת המשמש כאן הכילה DMEM, 10% FBS, 1 מ מ נתרן פירובט, 10 ננוגרם למ"ל LIF, חומצות אמינו שאינן חיוניות 1 מ"מ, 2 מ מגלוטמין, 5 אינסולין µg/mL, 0.1 מ מ β-mercaptoethanol, putrescine מיקרומטר 60, transferrin µg/mL 20, 10 ננוגרם למ"ל העכבר גורם הגדילה באפידרמיס, 1 ng/mL אנושי בסיסי פיברובלסט גורם גידול, האדם ng/mL 40 גליה התא neurotrophic קו-derived factor פניצילין 15 מ ג/ליטר.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

בידוד תאי גזע mesenchymal מן השחלה הכלבים:

ההליך בידוד MSC השחלות מסוכם באיור1. לאחר הניתוח, רקמות הא, collagenase עיכול, שינוי מדיה 3 שעות לאחר תחילת התרבות, אוכלוסיה MSC בשם עם מאפיינים פלסטיק-דבק מהיר הופרדה בהצלחה מרקמות השחלה הכלביים. התאים שנקטפו במהירות דבקה משטח הפלסטיק של המנה תרבות וגדל בתרבות מורפולוגית הומוגנית חד שכבתי עם MSC דמוי טיפוסי מורפולוגיה (איור 3).

אפיון של השחלות MSC במבחנה

המטרה של אפיון MSC נועד להבטיח כי תאים מבודדים תואמים MSC הקריטריונים הסטנדרטיים. אלה כוללים את הדבקות מפלסטיק, של זיהוי חיובי של סמני פני השטח mesenchymal, היעדרות של סמני פני השטח hematopoietic, כמו גם את היכולת לעבור התמיינות mesodermal.

כפי שמוצג באיור3, השחלות-derived התאים היו חסיד את הפלסטיק הייצוגיים מורפולוגיה פיברובלסט דמוי, מגשים הקריטריון הראשון המגדיר MSCs. יתר על כן, מבודד התאים הראה את הביטוי של הפרוטוקולים עבור הסמנים MSC הכלבים CD44, CD90 ו- CD105. בנוסף, MSC ספציפי תא השטח אנטיגנים CD90 ו- CD44 התגלו על ידי ניתוח מוקדם של FACS מעבר immunocytochemistry. העדר של הסמנים CD45 ו- CD34, אשר אנטיגנים משטח ספציפי hematopoietic תא, אושר גם ע י אותן טכניקות (איור 4). זה עוד יותר אישר כי השחלה מכיל תאים המבטאים של פנוטיפ ספציפי MSC9. נוגדנים ששימשו בניסוי זה הכלבים MSC אפיון מפורטים טבלה של חומרים.

השלב הבא אפיון MSCs היא להשיג הוכחה יכולתם להבדיל לתוך mesodermal שושלות. לאחר 30 יום חשיפה והתרבות שושלת היוחסין הספציפי בידול בפרוטוקולים, צביעת בוצעה כדי לזהות מחויבות שושלות שונות (איור 5A). התחייבות השושלת osteogenic אושר דרך פון Kossa מכתים, אשר זיהו פיקדונות סידן. פרוטאוגליקן safranin O צביעת אישרה מחויבות chondrogenic, ואת שמן אדום O צביעת השומנים אישר adipogenic מחויבות. המשך החקירה של differentiability של תאים אלה, היו יכולים לעבור התמיינות לתוך השושלת ectodermic, כפי שהראה immunostaining עבור שני סמנים תאי גזע neuroectodermal: β-טובולין, Nestin, בעקבות חשיפת השחלה-derived MSCs בפרוטוקול בידול השושלת עצביים למשך 10 ימים (איור 5C). תעתיקים עבור SOX17 ו CD184, וכן תא מורפולוגיות ספיציפית השושלת endodermal, נצפו לאחר חשיפה פרוטוקולים בידול מסוים במשך 5 ימים (איור 5B). לבסוף, אחרי 14 ימי חשיפה של השחלות נגזר MSCs כדי נבט התא אינדוקציה מדיה, OCT 4 וזוהו DDX4 (איור 5D). יחד, תוצאות אלה תומכים חזקים ומגוונים קיבולת של בידול MSCs נגזר רקמת השחלה, כאשר הם נחשפים התמיינות ספציפיים פרוטוקולים9.

Figure 1
איור 1 : שלבים עיקריים של ההליך בידוד. (1) לאחר הניתוח, העברת השחלות צינורות סטרילי עם PBS, על קרח. (2) על מנת לשטוף את השחלות, הם צריכים להעביר צלחת 100 מ מ עם PBS. (3) מינצ הרקמה לחתיכות קטנות, בגודל של-1 מ. (4) על מנת לשחרר את התאים מן הרקמה, להעביר את פיסות רקמה 35 מ מ צלחות ולהוסיף collagenase לעיכול 3 h בחממה. (5) העברת התכנים של הצלחת צינור חרוטי עבור צנטריפוגה. (6) צלחת בגדר בבקבוק T25 תקופת דגירה של ה 3 (7) לאחר ה 3 הראשון של תרבות, לשנות את תרבות המדיה. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 2
איור 2 : Hemocytometer. הריבועים הקטנים חמש להיספר מסומנים באדום.

Figure 3
איור 3 : תא מורפולוגיה. כאשר התקשורת השתנה 3 שעות לאחר תחילת התרבות שזה הביא אוכלוסייה הומוגנית של תאים mesenchymal, אשר הציג מורפולוגיה, כמו פיברובלסט. להיפך, כאשר השינוי מדיה הראשון נעשה לאחר 48 שעות סוגי תאים אחרים חוץ תאי פיברובלסט דמוי יכול להיות שנצפו. סרגל קנה מידה = 1,000 מיקרומטר. איור זה שונה מהיל. et al. 9. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 4
איור 4 : הפרופיל המולקולרי של השחלות MSC. (א) מבודד התאים הציג פרופיל סמן MSC קלאסי, להיות חיובי עבור שלושה סמנים MSC באמצעות PCR בזמן אמת (CD90, CD105 ו- CD44). (B) על ידי חלבונים, CD44 היה חיובי בתאים אלה, ההצטיידות הביטוי של שני סמנים hematopoietic (CD34 ו- CD45). סרגל קנה מידה = 70 מיקרומטר. איור זה שונה מהיל. et al. 9. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 5
איור 5 : הבידול של השחלות MSC. התאים מבודד היו מסוגלים להתמיין שושלות mesodermal (A) (chondrogenic, osteogenic, ו adipogenic; סרגל קנה מידה = מיקרומטר 70). יתר על כן, התאים היו מסוגלים להתמיין שני מבשרי endodermal (B) (סרגל קנה מידה = 70 מיקרומטר) ו- (ג) neurogenic שושלות (סרגל קנה מידה = 50 מיקרומטר). מעניין, התאים עברה בידול תא הנבט הקדמוני (D), הוכחת קיבולת רחב של בידול על השחלות בתאי גזע mesenchymal. איור זה שונה מהיל. et al. 9. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

בזאת אנו מספקים ראיות כי MSCs ניתן לבודד מרקמות השחלה הכלביים, אשר נחשב פסולת ביולוגית לאחר ovariectomy. בשל העובדה כי ניתן למצוא סוגי תאים רבים בשחלה, הצענו פרוטוקול לבחירת MSCs בהתבסס על שדבקו מהירה פלסטיק, אשר בהצלחה נבחרים תאים שגדל טפט עם מורפולוגיה פיברובלסט דמוי.

הדוח הראשון של ההטיה של MSCs ממח העצם היה מבוסס על הקיבולת אדהזיה פלסטיק של MSCs במהלך ה 48 הראשון של תרבות11; עם זאת, דווח כי שיטה זו יש הפוטנציאל לבודד אוכלוסיה הטרוגנית, phenotypically והן מבחינה תפקודית, לפחות מח עצם12. השיטה המוצעת תרבות גם בוחר תאים על-ידי הדבקה פלסטיק קיבולת, מבודד mesenchymal תאים מרקמות כי יש סוגי תאים רבים, ללא הצורך של מיון תאי רצוי. בשל העובדה כי גזע mesenchymal אקספרס קולטנים רבים יש תפקיד חשוב ב תא אדהזיה8, זה היה שיערו כי אם אוכלוסיה של תאים עם הדבקה מהירה נבחרו, זה יגרום אוכלוסיה הומוגנית יותר- המעבר הראשון, עם פרופיל MSC אמין. התוצאות נציג לספק ראיות כי assay אדהזיה פלסטיק קצר יותר משך הזמן יכול לשמש כדי לבודד אוכלוסיה הומוגנית מורפולוגית של MSCs-המעבר הראשון, ללא צורך מחכה מעברים מתקדמים יותר או תא מיון.

שלב קריטי ב פרוטוקול זה היא לשנות את המדיה 3 h לאחר תחילת התרבות. כמתואר בסעיף התוצאות נציג, תאי גזע המתקבל השחלות הכלבי עמדו בקריטריונים שלוש הוקם עבור אפיון MSCs: הם הציגו מורפולוגיה פיברובלסט דמוי, היו חיוביות לנוכחות של סמנים MSC, היו היכולת להתמיין שושלות mesenchymal כזה כמו שושלות osteogenic, adipogenic ו- chondrogenic. תאים מבודדים בניסוי זה היו גם בהצלחה מובחן מבשרי endodermal ectodermal שושלות, שושלות הקדמוני תא הנבט. התאים אמורים להגיע למפגש כ 5-7 ימים לאחר ציפוי הראשונית. בתאים של בעלי חיים גיל מבוגר עשויים לגדול לאט יותר מאשר אלו של בעלי חיים צעירים, מאלה, פחות תאים עשויים לדבוק הפלסטיק. במקרים אלה, ניתן להגדיל את ריכוז FBS בתקשורת עד 15%.

לכן, הבחירה עבור MSCs המבוסס על התאים עם קיבולת הדבקות מהירה יותר מייצג הליך זול, יעיל, אפקטיבי. מנקודת מבט טיפולית, זה הכי חשוב להדגיש כי תאים אלה מייצגים כלי מבטיח עבור רפואה רגנרטיבית, במיוחד בגלל שלהם במגוון רחב של בידול.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

המחברים אין לחשוף.

Acknowledgments

המחברים להכיר התוכנית עיקור כלבים UNESP-FCAV מתבקשים לספק את השחלות. עבודה זו נתמכה על ידי מענקים FAPESP (תהליך מס 2013/14293-0), שכמיות.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
DPBS  Thermo Fisher 14190144
Collagenase I Thermo Fisher 17100017
Tissue flask Corning CLS3056
DMEM low glucose Thermo Fisher 11054020
FBS Thermo Fisher 12484-010
TrypLE express Thermo Fisher 12604021
StemPro Adipogenesis Differentiation Kit Thermo Fisher A1007001
StemPro Chondrogenesis Differentiation Kit Thermo Fisher A1007101
StemPro Osteogenesis Differentiation Kit Thermo Fisher A1007201
STEMdiff Definitive Endoderm Kit StemCell 5110
Penicillin-Streptomycin Thermo Fisher 15070063
CD45 AbD Serotec MCA 2035S
CD34 AbD Serotec MCA 2411GA
CD90 AbD Serotec MCA 1036G
CD44 AbD Serotec MCA 1041
Nestin Milipore MAB353
β-Tubulin  Milipore MAB1637
DDX4 Invitrogen PA5 -23378
IgG- FITC AbD Serotec STAR80F
IgG- FITC AbD Serotec STAR120F

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Gazit, Z., Pelled, G., Sheyn, D., Kimelman, N., Gazit, D. Mesenchymal stem cells. Handbook of Stem Cells (2nd Edition). Atala, A., Lanza, R. Academic Press. 513-527 (2013).
  2. Zipori, D. The nature of stem cells: state rather than entity. Nature Reviews Genetics. 5, (11), 873-878 (2004).
  3. Auersperg, N., Wong, A. S., Choi, K. C., Kang, S. K., Leung, P. C. Ovarian surface epithelium: biology, endocrinology, and pathology. Endocrine Reviews. 22, (2), 255-288 (2001).
  4. Ahmed, N., Thompson, E. W., Quinn, M. A. Epithelial-mesenchymal interconversions in normal ovarian surface epithelium and ovarian carcinomas: an exception to the norm. Journal of Cellular Physiology. 213, (3), 581-588 (2007).
  5. Bukovsky, A., Svetlikova, M., Caudle, M. R. Oogenesis in cultures derived from adult human ovaries. Reproductive Biology and Endocrinology. 3, (1), 17 (2005).
  6. Gong, S. P., et al. Embryonic stem cell-like cells established by culture of adult ovarian cells in mice. Fertility and Sterility. 93, (8), 2594-2601 (2010).
  7. Johnson, J., Canning, J., Kaneko, T., Pru, J. K., Tilly, J. L. Germline stem cells and follicular renewal in the postnatal mammalian ovary. Nature. 428, (6979), 145 (2004).
  8. Deans, R. J., Moseley, A. B. Mesenchymal stem cells: biology and potential clinical uses. Experimental Hematology. 28, (8), 875-884 (2000).
  9. Trinda Hill, A. B. T., Therrien, J., Garcia, J. M., Smith, L. C. Mesenchymal-like stem cells in canine ovary show high differentiation potential. Cell Proliferation. 50, (6), 12391 (2017).
  10. Dominici, M. L. B. K., et al. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement. Cytotherapy. 8, 4315-4317 (2006).
  11. Friedenstein, A. J., Piatetzky-Shapiro, I. I., Petrakova, K. V. Osteogenesis in transplants of bone marrow cells. Development. 16, (3), 381-390 (1966).
  12. Kuznetsov, S. A., et al. Single-colony derived strains of human marrow stromal fibroblasts form bone after transplantation in vivo. Journal of Bone and Mineral Research. 12, (9), 1335-1347 (1997).
גזירת ובידול של הכלבים השחלות בתאי גזע Mesenchymal
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Hill, A. B. T., Hill, J. E. B. T., Bressan, F. F., Miglino, M. A., Garcia, J. M. Derivation and Differentiation of Canine Ovarian Mesenchymal Stem Cells. J. Vis. Exp. (142), e58163, doi:10.3791/58163 (2018).More

Hill, A. B. T., Hill, J. E. B. T., Bressan, F. F., Miglino, M. A., Garcia, J. M. Derivation and Differentiation of Canine Ovarian Mesenchymal Stem Cells. J. Vis. Exp. (142), e58163, doi:10.3791/58163 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter