Summary
Een doorstroom apparaat voor het gebruik van de biodeposition-methode te kwantificeren filtratie en voeding gedrag van tweekleppige weekdieren is bewerkt voor gebruik aan boord. Een tabel van de tweedimensionale gimbal gebouwd rond het apparaat isoleert het apparaat van de beweging van de boot, waardoor de nauwkeurige kwantificering van tweekleppige filtratie variabelen op offshore schelpdieren aquacultuurinstallaties.
Abstract
Naarmate schelpdieren aquacultuur van embayments van de kust en estuaria naar offshore locaties, presenteert de noodzaak te kwantificeren ecosysteem interacties van gekweekte tweekleppigen (d.w.z., mosselen, oesters en kokkels) nieuwe uitdagingen. Kwantitatieve gegevens over de voeding gedrag van weekdieren schorsing-voeding is nodig om belangrijke ecosysteem interacties van offshore schelpdieren boerderijen, met inbegrip van hun draagkracht, de concurrentie met de zoöplankton Gemeenschap, de beschikbaarheid van de trofische middelen op verschillende diepten, en de afzetting aan het benthos. De biodeposition-methode wordt gebruikt om te kwantificeren voeding variabelen in tweekleppigen schorsing-voeding in een natuurlijke omgeving en vertegenwoordigt een meer realistisch proxy dan laboratoriumexperimenten. Deze methode is echter afhankelijk van een stabiel platform om te voldoen aan de eisen die water debiet geleverd voor de schaaldieren constant blijven en de tweekleppigen zijn ongestoord. Een doorstroom apparaat en het proces voor het gebruik van de biodeposition-methode te kwantificeren het voederen van tweekleppige weekdieren werden gewijzigd vanuit de grond-indeling voor gebruik aan boord door het bouwen van een twee-dimensionale gimbal tabel rond het apparaat. Planimeter gegevens onthullen een minimale pitch en yaw van de kamers met de test schelpdieren ondanks boot beweging, de stroomsnelheid binnen de kamers constant blijven en exploitanten zijn in staat om het verzamelen van de biodeposits (ontlasting en pseudofeces) met voldoende consistentie in het verkrijgen van nauwkeurige metingen van het tweekleppige klaring, filtratie, selectie, inslikken, afwijzing en absorptie bij offshore schelpdieren aquacultuurinstallaties.
Introduction
Wild-vangst visserij zijn wereldwijd1afneemt. Dienovereenkomstig, de toekomstige groei van zeevruchten levering moet afkomstig zijn van een uitbreiding van de aquacultuur. De aquacultuurproductie van zeevruchten is groeiende en blijft groeien snel via 2025, aquatische landbouw de snelst stijgende voedsel-productie systeem2maken. De kweek van schorsing-voeding tweekleppige weekdieren (mosselen, oesters, mosselen en kokkels) wordt beschouwd als onder de meest milieuvriendelijke vormen van aquacultuur, omdat deze organismen, geen extra voeding vereisen maar in plaats daarvan, het verkrijgen van voeding vanuit de natuurlijke fytoplankton uit productie en de overdracht organische benthische organismen3,4. Inderdaad, schelpdieren aquacultuur wordt overwogen als een legitiem instrument ter verbetering van de kwaliteit van het water en de trofische structuur in voedselrijke estuaria5,6. Ondanks de over het algemeen gunstige vooruitzichten voor de uitbreiding van schelpdieren aquacultuur in embayments van de kust en estuaria, conflicten met andere kustgebieden Oceaan belangen zoals commerciële en recreatieve visserij, recreatieve activiteiten en de esthetiek verlangens van de kustgebieden van de grondbezitters-maatschappelijke beperkingen samengevoegd onder de term "sociale draagkracht"-sommige om te kijken naar de "open oceaan" voor de grootschalige uitbreiding van schaaldierkwekerij7hebben geleid.
Verplaatsen van schelpdieren landbouw offshore, in open water, biedt grote mogelijkheden voor schelpdieren aquacultuur uitbreiding maar ook ongekende uitdagingen aan de organismen in het ecosysteem van de oceanische8. Eerste, meest gekweekt, schorsing-voeding tweekleppige soorten zijn estuariene organismen die geëvolueerd zijn in omgevingen die in veel opzichten van de open oceaan ecosysteem9 verschillen. Seizoens- en dagverloop temporele variaties in zoutgehalte, temperatuur, en water chemie en de intense biologische activiteit gestimuleerd door de hoge en veranderlijke nutriënten beschikbaarheid in kustwateren hebt geselecteerd voor de gedrags- en fysiologische kenmerken in mosselen, oesters, mosselen en kokkels die weinig voordeel in de relatief constant verlenen kunnen, Verdun oceaan omgeving10. Tweekleppigen zijn bekend om te reageren op deze veranderingen in het milieu door het reguleren van hun filtratie om te profiteren van perioden van goede waterkwaliteit en voor het optimaliseren van hun voedsel overname11,12. In een constanter omgeving, zoals open water, is het onduidelijk als tweekleppigen zal regelen hun pompen en filtratie tarieven effectief te handhaven van een positieve energiebalans voor snelle groei. De tweede uitdaging van offshore schelpdieren landbouw is ook gerelateerd aan de beschikbaarheid van de relatief lage seston-voedsel in de Oceaan. Met fytoplankton dichtheden worden veel lager offshore dan zal in de riviermondingen moet de tweekleppige soorten momenteel gekweekt met succes in estuaria zoeken genoeg te eten om zowel de metabolisme en de groei? Huidige praktijken met streepjes, resulteren sokken, kooien of andere bijlagen te houden van schaal-en schelpdieren in estuaria in driedimensionale filters die fytoplankton lokaal zelfs in kustgebieden voedselrijke wateren13,14kunnen afbreken. Veronderstellingen over cultuur vistuig ontwerp, bezettingsgraad, de afstand van regels, en gewas cyclustijd mogelijk moet worden heroverwogen in de open oceaan om zowel de draagkracht van de productie van de boerderij en de ecologische draagkracht van de lokale mariene ecosysteem te beheren 15 , 16. intensieve schelpdieren landbouw zoals beoefend nearshore worden aangepast moet mogelijk om compatibel met de verdunde omgeving van de Oceaan.
Om ons begrip van hoe kust schelpdieren landbouw praktijken worden gewijzigd om te slagen in de offshore, kwantitatieve gegevens moet mogelijk over de wisselwerking tussen schelpdieren en de seston aanwezig in offshore locaties voorgesteld als potentiële boerderij locaties zijn van essentieel belang. Een aantal technieken voor de kwantificering filtratie, goedkeuring, inslikken, afwijzing en absorptie van deeltjes door schorsing-voeding tweekleppige weekdieren geweest ontwikkelde17,18. Enkele van deze methoden die zijn geoptimaliseerd voor het detecteren van variaties op de zeer korte termijnen, de keuze tussen verschillende partikeltypen of fysiologische reacties op verschillende milieu variaties19,20,21 . Onlangs, verfijningen van wat de biodeposition methode heet hebben geleid tot de aanvaarding van deze aanpak als een legitiem instrument te kwantificeren van de meeste van de belangrijke filtratie en voederen van variabelen in mosselen, oesters en kokkels17,22 .
De biodeposition methode, in het algemeen, gebruik een benadering van de massa-evenwicht, met de anorganische seston component zoals een tracer, te kwantificeren de verdelen door afzonderlijke schaaldieren van organische en anorganische seston componenten in verhoudingen gevangen, verworpen, ingenomen, en geabsorbeerd over een tijdsbestek van uren17. Voor deze aanpak nauwkeurig te zijn, is het uitermate belangrijk dat de stroomsnelheid van het water geleverd aan individuele schelpdieren zijn constante en precies bekend en dat de schaal-en schelpdieren niet gestoord fysiek zodat ze hun constante filtratie gedrag behouden. Het is ook noodzakelijk om te synchroniseren van het verzamelen van water monsters ten tijde van de tweekleppige inname met ontlasting monsters geproduceerd na vertering (dat wil zeggen, egestion). Deze twee processen (inname en egestion) worden gecompenseerd door de lengte van de tijd die op voor een zwevende deeltjes voor doorvoer door de tweekleppige darm neemt. De darm doorvoer tijd vertegenwoordigt de tijd die is verstreken tussen de opname van voedsel en de vrijlating van onverteerd materiaal in de vorm van ontlasting. Verder vanuit een praktische oogpunt moet biodeposits kwantitatief worden verzameld door de onderzoeker voordat ze worden uitgesplitst naar water beweging. Om deze redenen, apparatuur en procedures voor het kwantificeren van tweekleppige filtratie met behulp van de methode biodeposition zijn beperkt tot zeer nearshore locaties waar een stabiel platform-droge of een vaste pier-is dicht genoeg bij de schelpdieren bevolking wordt onderzocht. Biodeposition de methode offshore gebruikt worden, moest een manier vinden om te voldoen aan de eisen van de methode voor een stabiel platform aan boord van een boot.
Eeuwen geleden, ontwikkelde zeelieden willen hetzelfde fundamentele probleem van hoe te isoleren aan boord artikelen uit de beweging van het schip lossen de gimbal. Een gimbal introduceert een of meer pivots tussen het platform aangesloten op het schip en het artikel wordt geïsoleerd, waardoor het geïsoleerde artikel meer inspelen op zwaartekracht dan aan de beweging van het schip. We misschien de eenvoudigste gimbal ontwerp-pins draait 90 ° hoeken-in het ontwerp van een apparaat aangepast ten opzichte van degene die zijn gemeld door Galimany en collega's22in dienst. In dit verslag, de effectieve functie van de apparatuur wordt gevalideerd door het meten van: 1) de beweging van de tabel met schelpdieren chambers in vergelijking met de beweging van de boot, 2) de consistentie van de stroomsnelheid tot en met 20 repliceren chambers terwijl op zee, en 3) de filtratie gegevens uit mosselen getest op drie offshore locaties aan boord van drie verschillende schepen.
Protocol
1. gimbal tabel en voeding apparaat
- Construeren en monteren van de gimbal tabel bestaat uit twee frames, een gimbal-tabel en een ballasttank, zoals weergegeven in Figuur 1a.
- Bouw het buitenste frame 130 cm lang, 92 cm breed en 90 cm hoog 0.65 cm PVC (polyvinylchloride) papier. Roestvrij stalen bouten en moeren gebruiken om te vormen van het frame.
- Het bouwen van de binnenste frame (125 cm lang en 80 cm breed) van 4 x 10 cm polyvinylchloride (PVC) voorraad. De zwaar versterkte secties aan de bovenkant van de korte zijden van het frame te ontvangen van het innerlijke gimbal frame passen. Permanent bevestigen roestvrij-stalen pinnen zodat het binnenste frame te zwaaien vrij binnen het buitenste frame.
- Evenzo bevatten versterkte secties aan de lange zijden van de binnenste frame voor roestvrij-stalen pinnen gemonteerd in de gimbal tabel, zodat het vrij swing.
- Voorraad de PVC kubus met een verwisselbare ballast. De ballasttank vullen met 85 kg van zeewater en een gewicht van 50 kg zink naar de onderkant van de ballasttank; invoegen het fungeert als een tegenwicht te temperen, maar niet beperken, de swing van de tabel.
Opmerking: De ballasttank is gekoppeld aan de tabel gimbal door roestvrijstalen bouten en moeren.
Figuur 1: Gimbal tabel en voeding apparaten ontwikkeld voor het kwantificeren van tweekleppige schorsing voeding met behulp van de methode biodeposition aan boord van een boot. (een) dit deelvenster bevat een afbeelding van de geassembleerde gimbal tabel met de voeding apparaat. (b) dit paneel toont een schematische voorstelling van het geassembleerde voeding apparaat. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
- Construeren en monteren van de voeding apparaat, die bestaat uit een hoofd tank en 2 sets van 10 kamers (Figuur 1b) voeding.
- Bouw het hoofd tank met 6.5 mm PVC 70 cm in lengte x 30 cm in breedte x 12 cm in hoogte (Figuur 2a). Boor een gat van 25-mm-diameter in het midden van de linker kant van de 30 cm op 3 cm van de bovenkant.
- Boorgaten 10 van 13 mm in diameter door elk van de 70-cm PVC stukken van de rechthoek zodat het midden van elke hole 2,5 cm vanaf de basis is. Boor de eerste hole 40 mm uit de kant van het hoofd tank; vervolgens zijn de centra van de opeenvolgende gaten 69 mm naast elkaar.
- Kunststof schotconnectoren van 7 mm in inwendige diameter schroefdraad in elk gat te water te laten de hoofd tank laten plaatsen. Silicone slangen van 6,5 mm in binnendiameter op de connectoren past. In het midden van elke buis, tussen de hoofd tank en de voeding chambers, verbinden met verstelbare kleppen de buis voor de transportbesturing invoeren van de voeding kamers.
Opmerking: Om ervoor te zorgen dat de deeltjes blijven geschorst in het hoofd tank water en gelijkmatig verdeeld over de voeding kamers, toevoegen van beluchting in de tank met behulp van lucht stenen of air buis. - 17,5 cm in lengte x 6 cm in breedte x 6 cm in hoogte (Figuur 2b) zijn innerlijke waarden voor elke voeding kamer. Boor een 13-mm-diameter gat in het midden van één van de 6-cm zijkanten, zodat het midden van het gat 15 mm van de bodem is. Aan de andere kant van de 6-cm van elke kamer, boor een gat van 13-mm-diameter 45 mm vanaf de onderkant.
- Omvatten een klankbord binnen elke voeding kamer; het klankbord is een PVC-stuk dat is 3 cm hoog en 6 cm breed en 3,5 cm vanaf de kant van de 6 cm van de voeding kamer die het gat geboord 15 mm van de bodem heeft worden geplaatst. Lijm de klankbord aan de bodem van de kamer zodat water overheen stroomt.
- Omvatten een tweede klankbord stuk thats roerende, 50 mm lang en T-vormige stuk (58 mm breed aan de onderkant van de T, op 15 mm van de bovenkant; het verruimt tot een breedte van 72 mm). De shape kan het klankbord om uit te rusten op de top van de voeding muren van de kamer en voor water stromen onder de klankbord in de zaal (Figuur 2 c). Plaats de movable baffle 1-2 cm voor de tweekleppige, waardoor de waterstroom rechtstreeks op de tweekleppige op de bodem van de kamer.
- De hoofd kamer en voeding apparaat op de top van de gimbal tabel passen en houden hen op hun plaats met antislip matten. Het systeem is ontworpen op deze modulaire manier om verpakking, verplaatsen en opslag.
Figuur 2: gedetailleerde metingen van de hoofd tank en voederen van chambers. (een) Dit is een tekening van de hoofd tank met gedetailleerde metingen. (b) Dit is een tekening van een voeding kamer met gedetailleerde metingen. De gestreepte lijn geeft de locatie van het vaste klankbord. (c) Dit is een tekening en de metingen van de roerende klankbord. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
2. stroom kalibratie voor het voederen van Chambers
- Afgestudeerd cilinder bij de uitgang van een voeding kamer om te kalibreren van debiet, plaatst een 100 mL glas of kunststof. Onmiddellijk beginnen met het opnemen van de tijd met een stopwatch.
- Na 30 s, verwijderen van de gegradueerde cilinder en controleer het volume van het water verzameld. In het ideale geval verzamelen 100 mL water, die gelijk is aan een stroom uit de hoofd tank aan de voeding kamers van 12 L h-1.
Opmerking: Het debiet van 12 L h-1 werd bepaald door eerdere laboratoriumexperimenten opleveren van een homogene verdeling van de deeltjes tussen aquaria zonder water recirculatie.- Als de hoeveelheid water verzameld niet binnen 5 mL van het streefcijfer van 100 mL, past u de stroom door te sluiten of te openen van de klep bevindt zich tussen de hoofd tank en de voeding kamer. Controleer de nieuwe debiet opnieuw door het verzamelen van water voor 30 s en herhaal deze stap totdat het gewenste debiet wordt verkregen.
- Herhaal dezelfde kalibratieprocedure voor elke voeding kamer, met inbegrip van de controle kamers, vóór het begin van het verzamelen van gegevens.
3. voorbereiding van de Filters voor de Biodeposition-methode
Opmerking: De bepaling van de totale organische en anorganische deeltjes in het water, pseudofeces en ontlasting wordt gedaan met behulp van 25-mm-diameter GF/C glasvezel filters. Voordat de sample collectie, ervoor zorgen dat de filters worden gewassen, gedroogd, verbrand en preweighed. Gebruik altijd flat-tip pincet om de filters tijdens alle processen. Als een filter een gat heeft of breekt, gooi het zonder het gebruik ervan.
- Om te wassen de filters, eerst ongeveer 10 filters toevoegen aan een bekerglas met 200 mL gedestilleerd water en roer ze handmatig. Na 15 s, merk op dat het voorheen heldere water witte vezels heeft; Dit zijn losse stof-achtige glasvezel uitgebracht door de filters. Stoppen met roeren.
- Het water in het bekerglas decanteren en voeg 200 mL gedestilleerd water weer. Wassen van de filters 3 x in totaal. Herhaal het wasproces totdat voldoende filters zijn beschikbaar om uit te voeren een volledige voeding experimenteren, dat wil zeggen ongeveer 48 filters voor water filtratie als het experiment 2 uur duurt en water is verzameld elke 15 min, en 32 filters voor de ontlasting en pseudofeces van 16 tweekleppigen .
- Droog de filters bij 60 ° C voor ten minste 1 h. branden de gedroogde filters in een moffeloven oven bij 450 ° C gedurende 4 uur om eventuele contaminerende organisch materiaal. Verwijder de filters uit de oven, hen overbrengen in een exsiccator en de filters om te komen tot kamertemperatuur toestaan.
- Wegen van de filters op een analytische balans en neem de gewichten. Twee mogelijke methoden voor het bijhouden van de gewichten van de filter zijn als volgt.
- Het nummer van elk filter op de eigenlijke rand, buiten het gebied dat het monster tijdens de filtratie ontvangt, met een zacht potlood. Wegen van de filter na de nummering van het, het aantal en het gewicht in een notitieblok opnemen en opslaan van de filters na weging hen in hun originele doos van de filter.
- Elk filter afzonderlijk wegen en vervolgens wikkel het in een stuk van doffe aluminiumfolie en opnemen van het overeenkomstige gewicht op de folie. Bewaar de verpakte filters totdat in het veld en noteer het gewicht in een notitieblok gebruikt na het verzamelen van een steekproef.
4. darm transittijd
- De vijf tweekleppigen plaats individueel in glas of plastic bekers gevuld met 300 mL ambient, ongefilterde zeewater.
- Voeg 2 mL Tetraselmis sp. monocultuur in elk bekerglas en neem de tijd elke individuele tweekleppige wordt geopend, die wordt gesignaleerd door een shell-gape.
Opmerking: Tetraselmis sp. wordt gebruikt voor de bepaling van de darm transittijd omdat het gemakkelijk door tweekleppige soorten ingenomen wordt, en de resulterende uitwerpselen donkergroen van kleur zijn, hen te differentiëren van bruine ontlasting geproduceerd na de vertering van een natuurlijke plankton Gemeenschap. - Controleer elk bekerglas elke 3-5 min om ervoor te zorgen dat de tweekleppigen open en produceren ontlasting blijven.
- Controleer of de uitwerpselen zijn dichtbevolkte boordevol, strakke tekenreeksen als gevolg van het spijsverteringsproces van de tweekleppigen (Figuur 3) en de structuur wanneer afgepipetteerde gehandhaafd blijft.
- Ervoor zorgen dat de verzamelde deposito's zijn ontlasting en niet pseudofeces (Figuur 3), die als geproduceerd, onmiddellijk worden geproduceerd als gevolg van een overmaat van Tetraselmis sp; pseudofeces zijn licht boordevol, wolk-achtige deposito's van niet-geconsumeerd deeltjes die snel resuspendeer wanneer verzameld met een pipet.
Figuur 3: illustratie van de visuele verschillen tussen tweekleppige ontlasting en pseudofeces. Het linker paneel toont een geribde Mossel (Geukensia demissa), met pijlen die de geproduceerde uitwerpselen en pseudofeces aangeeft. Het rechter paneel toont in detail de groene ontlasting en pseudofeces geproduceerd na een filtratie van Tetraselmis sp. monocultuur, en de bruine ontlasting en pseudofeces geproduceerd na een filtratie van een natuurlijke fytoplankton Gemeenschap. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
- Wanneer groene ontlasting verschijnen, neem de tijd voor elke individuele tweekleppige. De tijdsduur tussen de opening van het tweekleppige en de productie van groene ontlasting is haar darm transittijd. Gemiddelde de darm transittijden van alle vijf tweekleppige worden gerepliceerd om te verkrijgen van de gemiddelde darm transittijd te gebruiken in de timing van de offset tussen de collectie van watermonsters en fecale monsters.
Opmerking: Gebruik vijf wordt gerepliceerd in het geval dat een of meer tweekleppigen mislukken te openen of te produceren van ontlasting. Idealiter zal de gemiddelde darm transittijd zijn gebaseerd op meer dan drie wordt gerepliceerd.
5. sample collectie
- Het verzamelen van monsters van water vol uit de hoofd tank, van water uit de controle kamers, die lege hulzen van dezelfde tweekleppige soorten gebruikt in de experimenten (twee per kant), en van ontlasting en pseudofeces geproduceerd door elke tweekleppige bevatten. Schoon de tweekleppigen van epibionts en andere encrusting organismen te vermijden filtratie door andere fauna alvorens de tweekleppigen in de voeding kamers.
Opmerking: Tweekleppigen geplaatst in de voeding kamers kunnen bewegen, dus om de ontlasting en pseudofeces collectie, corrigeren in plaats binnen elke kamer met behulp van bevestigingsmiddelen (bijvoorbeeld, Velcro).- 300 mL water elke 15 min voor 2 h. afzonderlijk filter het water van de overloop en het water van de twee sets van controle kamers verzamelen via preweighed filters (dat wil zeggen, 3 filters per tijdstip). Spoel de filters met ~ 5 mL isotone ammonium formate terwijl de filters nog steeds op de filtratie-variëteit zijn.
- Het vertragen van het begin van de collectie van de biodeposit uit de collectie van water door de lengte van de gemiddelde darm transittijd die werd vastgesteld zoals beschreven in sectie 4 van het protocol. Bijvoorbeeld, als de gemiddelde darm transittijd 1 h was, beginnen de waterwinning zodra de tweekleppigen in de voeding kamers openen. Na 1 h, schakelt u de kamers van alle ontlasting en pseudofeces die zijn vervaardigd en vervolgens beginnen met het verzamelen van alle daaropvolgende ontlasting en pseudofeces.
- Schaduw de tweekleppigen in zowel de voeding kamers en de darm transit containers te verhogen van het aantal tweekleppigen die open om te voeden.
- Verzamel de ontlasting en pseudofeces apart verder met een glazen pipet en houden de biodeposits in een aparte container (kolf of buis) voor elke tweekleppige gedurende de 2-h-collectie. De biodeposits in elke container individueel op een preweighed filter filteren en spoel ze af met 5 mL isotone ammonium formate.
Opmerking: Aan het einde van de 2-h-collectie, er zullen 16 containers met ontlasting verzameld en 16 containers met pseudofeces verzameld, voor een totaal van 32 containers om te filteren. - De filters worden opgeslagen in petrischalen of doffe aluminiumfolie voor het vervoer naar het laboratorium. Als aluminiumfolie gedempt is voor het vervoer gebruikt, vouwt u eerst de filters doormidden, gefilterd met de filtermateriaal aan de binnenkant van de klep, ter voorkoming van verlies van materiaal door middel van contact met de folie. Bewaar alle filters in een koelbox met ijs.
- In het laboratorium, alle filters in de oven op 60 ° C gedurende ten minste 24 uur te drogen.
- Weeg elke filter door middel van een analytische balans. Aftrekken van het begingewicht van het uiteindelijke gewicht om te bepalen van de totale deeltjes.
- Alle filters branden in de oven moffeloven bij 450 ° C, voor 4 h. de filters verwijdert uit de oven, hen overbrengen in een exsiccator en de filters om te komen tot kamertemperatuur toestaan. Wegen van de filters opnieuw op een analytische balans. Het gewicht van de verbrande filter van het gewicht van de gedroogde filter om te bepalen van de anorganische deeltjes aftrekken.
Opmerking: De organische deeltjes is het verschil tussen de totale deeltjes en de anorganische deeltjes.
Representative Results
De biodeposition methode te kwantificeren tweekleppige voeding goed is ingeburgerd en voorziet in een mechanisme om te verkrijgen van uitvoerige gegevens over de filtratie en voeding prestaties van tweekleppigen met behulp van natuurlijke seston in een gebied omgeving. Eerdere toepassingen van de biodeposition-methode kunnen alleen op locaties vanaf de wal opererende plaatsvinden omdat de methode een stabiel platform vereist. De studie van tweekleppige filtratie en voederen in de wateren van de offshore-vereist schip gebaseerde metingen, en schepen zijn niet stabiel genoeg, zelfs de voorwaarden rustigst. We hebben ontworpen en getest de toevoeging van een gimbal tafel aan bestaande filter-voeding apparatuur, het creëren van de gestage platform moet correct gebruik van de biodeposition-methode.
Samen met de stabiele platform voor de tweekleppigen te filteren, we rapportgegevens aan te tonen een zelfs deeltje distributie over afzonderlijke ruimten binnen de voeding apparatuur (p = 0.997 van een generalisatie van Welch's test voor 20% getrimd betekent23 ; Figuur 4). Zelfs bij de verdeling van de zwevende vaste deeltjes geeft aan dat de levering van deeltjes uit de hoofd tank aan afzonderlijke ruimten strookt; Dus, alle tweekleppigen zijn blootgesteld aan de dezelfde hoeveelheid voedsel en de kwaliteit en kunnen worden beschouwd als true wordt gerepliceerd.
Figuur 4: gemiddelde cel overvloed in elke voeding zaal tijdens de proeven van de verdeling van de deeltjesgrootte van lege kamers. Dit paneel toont het gemiddelde aantal fytoplankton cellen/mL (± SD) in het zeewater verzameld uit de buis van de afrit van elke voeding kamer (met het label 1-20) tijdens kwaliteit verzekering proeven om een gelijkmatige verdeling van deeltjes in het systeem doorstroming. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Vier aan boord proeven zijn uitgevoerd met drie Mossel-soorten in drie locaties met zeer verschillende seston hoeveelheid en samenstelling (Figuur 5). De verschillende soorten studeerde kan potentieel, of zijn momenteel, gekweekte offshore; wij meerdere soorten gebruikt voor het testen van de algemene toepasbaarheid van het apparaat. Blauwe mosselen (Mytilus edulis) werden gebruikt bij het eerste experiment van de Connecticut (CT) en in Massachusetts (MA). Geribde mosselen (Geukensia demissa) werden gebruikt in de tweede CT-experiment. Mediterrane mosselen (Mytilus galloprovincialis) werden gebruikt in het experiment van Californië (CA). Twee experimenten werden uitgevoerd in kustgebieden CT, in Long Island Sound, 1,5 km van Milford op 12 juni 2013, en 19 juni 2013. Het derde experiment werd uitgevoerd in kustgebieden MA, wijngaard geluid, 1 km off van Menemsha op 23 juli 2013. Het vierde experiment werd uitgevoerd in offshore CA, 10 km off van Long Beach op 20 augustus 2013.
De omstandigheden op deze drie locaties span het bereik van wat kan worden verwacht in offshore omgevingen onder evaluatie voor schelpdieren aquacultuur. Totale deeltjes van het water was het hoogst in CT, lager in MA, en het laagst in CA (alle p≤ 0.001 van een generalisatie van de Dunnett T3 procedure voor bijgesneden middelen en een bootstrap -t techniek23). In tegenstelling, was het gehalte aan organische van de seston het hoogst in CA, lager in MA, en het laagst in CT (alle p≤ 0,01 van een veralgemening van de Dunnett T3 procedure voor bijgesneden middelen en een bootstrap -t techniek23; Figuur 5).
Figuur 5: samenstelling en hoeveelheid van de zwevende deeltjes in het water op de drie locaties van de experimentele. Dit paneel toont de gemiddelde organische deeltjes (POM) (± SD; gegevens en foutbalken in grijs) en het gemiddelde anorganische deeltjes (PIM) (± SD; gegevens in wit en foutbalken in zwart-wit) uit het water verzameld op 3 verschillende experimentele locaties. De volledige bar (grijs + wit) geeft de totale deeltjes (TPM). CT-1 = Connecticut experiment 1; CT-2 = Connecticut experiment 2; MA = Massachusetts experiment; CA = Californië experiment. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Voeden van gedrag in tweekleppigen is zowel afhankelijk van de soorten en afhankelijk van de milieuomstandigheden. Mensen passen hun voeding gedrag volgens verschillen in de hoeveelheid en soort (organische en anorganische) deeltjes in het water. Dus, weerspiegelen de resultaten van de vier filter voeren experimenten van de drie locaties zowel de kunststof fysiologische reactie op voedsel hoeveelheid en kwaliteit, evenals de soorten verschillen over drie van de vier experimenten. Mossel absorptie efficiëntie was significant hoger in de eerste CT-experiment dan in de tweede inning, en hoger bij het eerste experiment van CT dan in CA, maar alle andere paarsgewijze vergelijkingen waren niet significant, waarschijnlijk een gevolg van hoge variabiliteit waargenomen in zowel de MA en de CA-metingen (de betekenis getest bij α = 0,05, aangepast aan controle voor meerdere tests; van een generalisatie van de Dunnett T3 procedure voor bijgesneden middelen en een bootstrap -t techniek; 23Figuur 6). Het aandeel van de gefilterde materiaal dat werd verworpen was hoogst in CT, lager in MA, en nul in CA (alle p≤ 0.005 uit een veralgemening van de Dunnett T3 procedure voor bijgesneden middelen en een bootstrap -t techniek23).
Figuur 6: verwerping totaal zwevende deeltjes en absorptie van organisch materiaal door de mosselen in de aan boord proeven. Dit paneel toont het percentage afwijzing en absorptie (± SD) door mosselen op drie locaties, experimentele. CT-1 = Connecticut experiment 1; CT-2 = Connecticut experiment 2; MA = Massachusetts experiment; CA = Californië experiment. Blauwe mosselen (Mytilus edulis) werden gebruikt in de CT-1 en in MA. Geribde mosselen (Geukensia demissa) werden gebruikt in de CT-2. Mediterrane mosselen (Mytilus galloprovincialis) werden gebruikt in CA. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
De experimenten in MA en CA geïllustreerd gemeenschappelijke problemen die zich voordoen kunnen tijdens de veranderlijke omgevingsomstandigheden. De hoge zee staat resulteerde in een hoge relatieve variabiliteit in de gemeten gehalte aan organische van pseudofeces in MA.
Figuur 7: gehalte aan organische van water, ontlasting en pseudofeces op de drie locaties van de experimentele. Dit paneel toont het gemiddelde percentage van organisch materiaal (± SD) in het water en de ontlasting en de pseudofeces van drie Mossel soorten in vier verschillende experimenten uitgevoerd op 3 locaties. CT-1 = Connecticut experiment 1 met blauwe mosselen (Mytilus edulis); CT-2 = Connecticut experiment 2 met geribde mosselen (Geukensia demissa); MA = Massachusetts experiment met blauwe mosselen; CA = Californië experiment met mediterrane mosselen (Mytilus galloprovincialis). Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Analytische problemen met gebieden van lage zwevende deeltjes geassocieerd werden geïllustreerd in het voederen van gedrag resultaten van CA, waar sommige kleine pseudofeces in eerste instantie voor ontlasting vergist.
Figuur 8: effecten van de foutieve identificatie van biodeposits op de voeding gedrag-gegevens van de mosselen in de aan boord proeven. Dit paneel toont de voorbeeldgegevens uit Californië, toont het effect van kleine ontlasting misidentifying als pseudofeces in een lage totaal-deeltjes-zaak (TPM) omgeving. In dit geval de TPM te laag was om leiden tot een pseudofeces productie, maar de ontlasting waren zo klein dat sommige werden verward met pseudofeces. De gegevens werden gecorrigeerd door het combineren van de gewichten van de ontlasting en "pseudofeces" en het inslikken traject alleen te berekenen. CR = Clearance veerconstante, de hoeveelheid water die circuleert door de kieuwen van de mosselen (L/h); FR = filtratie Rate, de hoeveelheid deeltjes bewaard in de kieuwen (mg/h); AR = Absorption Rate, de hoeveelheid geconsumeerde deeltjes die wordt geabsorbeerd in de mosselen spijsverteringsstelsel (mg/h). Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Casestudy's getoond in Figuur 7 en Figuur 8 worden toegelicht in meer detail in de sectie discussie .
Discussion
Verschillende benaderingen zijn gebruikt om het bestuderen van de filtratie en het voederen van tweekleppigen in zowel het laboratorium als het veld. Metingen die worden uitgevoerd wanneer gebruik van de natuurlijke seston voeding opleveren zal tarieven meest vergelijkbaar met die in de natuurlijke omgeving24. Bestaande draagbare apparaten van de voeding voor meten tweekleppige voeding25,26 zijn afhankelijk van een stabiel platform, zoals grond of een vaste dok; Dus, kwantificeren tweekleppige filtratie en voederen in het veld heeft tot nu toe beperkt tot zeer dicht bij de wal wateren. De nieuwe inrichting en werkwijze gepresenteerd hier vertegenwoordigen een betrouwbaar hulpmiddel te kwantificeren van de voeding prestaties van tweekleppigen in offshore wateren waar interacties tussen tweekleppigen en milieu eerder al slecht beschreven.
De kritische stappen binnen de offshore toepassing van de biodeposition-methode omvatten het volgende: (1) de beluchting van de hoofd tank en de kalibratie van het debiet over alle voeding kamers om ervoor te zorgen een zelfs deeltje distributie naar de tweekleppigen; (2) een nauwkeurige bepaling van de experimentele darm transittijd vóór het verzamelen van biodeposits; (3) de identificatie, scheiding en complete collectie van alle ontlasting en pseudofeces geproduceerd door de tweekleppigen, inclusief het innen van voldoende biodeposits te overschrijden de detectiegrens voor organische en anorganische zwevende deeltjes. Hoge stroomsnelheid zijn essentieel om te voorkomen dat water recirculatie in de voeding kamers, die het fenomeen van de vermindering van de concentratie van voedsel als gevolg van refiltration18,25,27,28kan verhogen.
De nauwkeurige identificatie en scheiding van ontlasting en pseudofeces kunnen uitdagende in offshore omgevingen. Het verzamelen van ontlasting en pseudofeces in Massachusetts wateren was waarschijnlijk beïnvloed door zware zee tijdens het laatste uur van de meting. Metingen met behulp van deze methode zal worden beperkt door de staat van de zee, waardoor het vermogen van de plukkers netjes scheiden en nauwkeurig onderscheid tussen ontlasting, pseudofeces en andere deeltjes (d.w.z., slib of deeltjes) gedeponeerd materiaal in de voeding kamers. Deze experimentele probleem kan worden waargenomen in de resulterende gegevens, waar het gehalte aan organische van de pseudofeces een grotere variabiliteit in de resultaten van Massachusetts dan van de andere twee locaties (Figuur 7 heeft).
Locaties met weinig deeltjes, zoals Californië, presenteert een analytische uitdaging, omdat de deeltjes verzameld in dit experiment zeer dicht bij de grens van detectie, was hoewel 2 L water werd gefilterd voor elke watermonster. De methode voor de kwantificering van de organische en anorganische bijdragen aan de totale deeltjes is gebaseerd op de massabalans; Dus, kleine analytische fouten in de buurt van de grens van detectie kunnen resulteren in fysiologisch onmogelijk schelpdieren voederen van resultaten, zoals negatieve verwerping of goedkeuring tarieven. Gegevens als gevolg van dit soort fout, en de juiste correctie, worden geïllustreerd in Figuur 8, die de gemiddelde waarde voor het tarief van de goedkeuring, de filtratie-tarief en het absorptievermogen van de California experiment percelen. De hoeveelheden ontlasting waren zo klein in deze locatie dat sommige werden verward met pseudofeces door de biodeposit-plukkers. De zeer kleine hoeveelheden van "pseudofeces" verzameld waren zeer dicht bij de grens van detectie van het gewicht, en de resulterende gegevens opgeleverd negatieve schelpdieren filtratie en voederen van gegevens voor verschillende replicaten, die fysiologisch onmogelijk en dus Uiteraard is onjuist. Zwevende deeltjes dicht bij de grens van detectie leverde ook een hoge variabiliteit geheel voor deze meting. Deze resultaten kunnen worden veroorzaakt door een fout in de wegen van de filters, maar meer waarschijnlijk, als gevolg van de onjuiste identificatie van pseudofeces was. De laatste mogelijkheid werd verder ondersteund door de observatie dat totale deeltjes van het water te laag om te activeren pseudofeces productie22,23was. De gegevens werden gecorrigeerd door de onjuiste pseudofeces gegevens te verwijderen en alleen het inslikken traject (Figuur 8) te berekenen.
Het toestel voor het kwantificeren van tweekleppige schorsing voeding met behulp van de methode biodeposition aan boord van een boot kan worden gewijzigd en aangepast aan verschillende tweekleppige soorten. De grootte van de voeding kamers kan verschillen zodat breder of smaller tweekleppige schelpen. Het is belangrijk op te merken, echter dat het wijzigen van de afmetingen van de voeding kamers van degenen die hier worden beschreven vereisen dat het zelfs deeltje distributie via de voeding kamers wordt vastgesteld vóór het uitvoeren van alle metingen. De hoeveelheid water gefilterd moet worden aangepast op basis van de plaatselijke omstandigheden. Lage-seston omgevingen zoals Californië vereisen een grotere hoeveelheid water gefilterd, zodat er meer bedragen dan de detectiegrens voor de analyse op basis van gewicht. Op hetzelfde moment, als te veel water wordt gefiltreerd, dan de filters verstoppen en de droogtijd (niet voor temperatuur) in de oven moet worden verhoogd. De biodeposit collectie wellicht ook worden verlengd in lage-seston omgevingen voor het verzamelen van genoeg materiaal om de analytische aantoonbaarheidsgrens te overtreffen. Een andere indicator van een problematische biodeposit collectie is de relatieve biologische inhoud van water vs. de pseudofeces en de ontlasting. Ontlasting en pseudofeces kunnen niet bevatten een aanzienlijk groter percentage van organisch materiaal dan het water; ze zijn een product van de gefilterde en verwerkte deeltjes uit het water. Onder bepaalde omstandigheden kan de biologische inhoud van de biodeposits iets groter dan die van het water worden vanwege de biologische investering die tweekleppigen maken voor het verwerken van voedseldeeltjes; echter zal, deze investering ten hoogste opbrengst een kleine toename in de ontlasting organisch materiaal. Het percentage organisch materiaal gemeld hier is ver boven het percentage dat kan worden toegeschreven aan metabole fecale verlies. De pseudofeces monsters van Massachusetts illustreren dit potentiële probleem. De biologische inhoud van de pseudofeces was heel variabel, zoals hierboven, maar sommige van de duplo's leverde gehalte aan organische die aanzienlijk die van de overeenkomstige watermonsters overschreden. Het is mogelijk dat tijdens de zware zeeën van het laatste uur van de biodeposit collectie, pseudofeces werden gecombineerd met exogene organisch materiaal, die kunstmatig verhoogd van het gehalte aan organische en leverde fysiologisch onmogelijk resultaten (Figuur 7) . Indien hoge zee-Staten een waarschijnlijke mogelijkheid in de toekomst worden toepassingen van deze methode, de toevoeging van meer wordt gerepliceerd door extra kamers aanbevolen.
Een beperking van de methode is dat dit apparaat is ontworpen voor het kwantificeren van het voederen van volwassen individuen. De nauwkeurige en volledige collectie van ontlasting en pseudofeces uit tweekleppige zaad is moeilijk vanwege de geringe omvang van de ontlasting (pseudo) en zou vereisen veel langer experimenten genoeg materiaal om te overtreffen op de analytische aantoonbaarheidsgrens aan te schaffen. Als kleine personen worden gebruikt, kunnen verschillende worden gebundeld in één kamer te verhogen van het tempo van de ontlasting en pseudofeces productie per kamer. Alternatief, kunnen de apparaten worden herontworpen met veel kleinere experimentele chambers. Het weer en de zee staat mogelijk ook belangrijke beperkingen, zoals dit zal invloed hebben op de nauwkeurigheid van de biodeposit sample collectie. Extreme temperaturen en regen kunnen verminderen het aantal tweekleppige replicatieonderzoeken die zich voeden. De diepte waarop water pompen worden ingezet kan worden gedifferentieerd tussen experimenten om de seston gebruikt in de experimenten weerspiegelen de seston typisch van de diepte waarop de tweekleppige teelt zal plaatsvinden. Ondanks deze mogelijke beperkingen biedt de methode de unieke mogelijkheid om te studeren de filtratie en het voederen van tweekleppigen onder natuurlijke omstandigheden, met natuurlijke seston, in tegenstelling tot de gesimuleerde omstandigheden in het laboratorium. De gegevens die gegenereerd zijn veel realistischer dan laboratoriumexperimenten en meer kans om weer te geven van de prestaties van tweekleppigen op de locatie van belang. De nieuwe methode uit te voeren aan boord metingen sterk breidt de potentiële geografische reikwijdte.
De groeiende interesse in offshore Mossel aquacultuur presenteert een ideale gebruikersgroep voor toekomstige toepassingen van deze methode. Belanghebbenden in het optimaliseren van de vestiging van nieuwe offshore-aquacultuur operaties kunt deze benadering onderzoeken de tweekleppige prestaties op voorgestelde locaties. Een voorbeeld van een toepassing die wordt gepland is voor het testen van hypothesen over de optimale diepten voor een cultuur van blauw-Mossel schorsing in de kustwateren off van zuidelijk New England (Mizuta en Wikfors, in review).
Disclosures
De auteurs hebben niets te onthullen.
Acknowledgments
De auteurs wil erkennen van NEFSC en de NOAA visserij Service Office van de aquacultuur voor financiering. De auteurs zijn dankbaar hun academische en industriepartners, Scott Lindell, onderzoek Specialist bij Woods Hole Oceanografisch Instituut, en Phil Cruver, CEO van Catalina Sea Ranch, die gerangschikt en toegang krijgen tot offshore Mossel groeiende gebieden. Het werk zou niet mogelijk zijn geweest zonder de volgende werkbordessen; R/V Captain Jack eigendom van Catalina Sea Ranch, R/V Gemma eigendom en wordt beheerd door The Marine biologische laboratorium, en de R/V Victor Loosanoff Exploitatiedoor NOAA visserij, noordoosten visserij Science Center. Wij danken ook boot kapiteins Jim Cvitanovich en Bill Klim op hun expertise. Werner Schreiner geboden zijn technische expertise in het ontwerpen en fabriceren van de frames, gimbal tabel en ballasttank, hoofd tank en experimentele kamers.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| GF/C glass microfibre filters | Whatman | 1822-025 | 25 mm diameter circles |
| Submersible Utility Pump | Utilitech | PPSU33 | 1/3 HP |
| Filtration manifold | Sterlitech | 313400 | 3-place manifold, PVC |
| Filter forceps | Millipore | XX6200006P | |
| Filter funnel | Ace Glass | D140942 | 300 ml; glass |
| Frit support | Fisher Scientific | 09-753-14 | 25mm diameter; glass |
| Vacuum Filter Holders | Fisher Scientific | 09-753-4 | For 25mm filter funnels and frit supports |
| Drying Oven | Fisher Scientific | 15-103-0503 | Gravity convection |
| Box Furnace Oven | ThermoFisher Scientific | BF51794C | |
| Ammonium formate | Fisher Scientific | A666-500 | |
| Tetraselmis sp. | National Center for Marine Algae and Microbiota | 119 strains of Tetraselmis sp. are available for sale by NCMA, and specific strain should be selected based on temperature of planned experiments. As such, we have not recommended a specific catalog number here. | |
| Glass petri dish | Fisher Scientific | 08-747A | 60 mm diameter |
References
- Pauly, D., Zeller, D. Catch reconstructions reveal that global marine fisheries catches are higher than reported and declining. Nature Communications. 7, 10244 (2015).
- Diana, J. S. Aquaculture production and biodiversity conservation. BioScience. 59 (1), 27-38 (2009).
- Gallardi, D. Effects of bivalve aquaculture on the environment and their possible mitigation: a review. Fisheries and Aquaculture Journal. 5, 105 (2014).
- Newell, R. I. E. Ecosystem influences on natural and cultivated populations of suspension-feeding bivalve molluscs: A review. Journal of Shellfish Research. 23 (1), 51-61 (2004).
- Lindahl, O., Kollberg, S. Can the EU agri-environmental aid program be extended into the coastal zone to combat eutrophication. Hydrobiologia. 629 (1), 59-64 (2009).
- Rose, J. M., Bricker, S. B., Tedesco, M. A., Wikfors, G. H. A role for shellfish aquaculture in coastal nitrogen management. Environmental Science & Technology. 48 (5), 2519-2525 (2014).
- McKindsey, C. W., Thetmeyer, H., Landry, T., Silvert, W. Review of recent carrying capacity models for bivalve culture and recommendations for research and management. Aquaculture. 261 (2), 451-462 (2006).
- Cheney, D., Langan, R., Heasman, K., Friedman, B., Davis, J. Shellfish culture in the open ocean: lessons learned for offshore expansion. Marine Technology Society Journal. 44 (3), 55-67 (2010).
- Shumway, S. E. Shellfish aquaculture and the environment. , Wiley-Blackwell. Chichester, UK. (2011).
- Dame, R. F. Ecology of marine bivalves: An ecosystem approach. , CRC Press. Boca Raton, FL. (2011).
- Bayne, B. L., et al. Feeding behaviour of the mussel, Mytilus edulis: responses to variations in quantity and organic content of the seston quantity and organic content of the seston. Journal of the Marine Biological Association of the United Kingdom. 73 (4), 813-829 (1993).
- Ward, J. E., Shumway, S. E. Separating the grain from the chaff: particle selection in suspension- and deposit-feeding bivalves. Journal of Experimental Marine Biology and Ecology. 300 (1-2), 83-130 (2004).
- Heck, K. L. Jr, Valentine, J. F. The primacy of top-down effects in shallow benthic ecosystems. Estuaries and Coasts. 30 (3), 371-381 (2007).
- Prins, T. C., Smaal, A. C., Dame, R. F. A review of the feedbacks between bivalve grazing and ecosystem processes. Aquatic Ecology. 31 (4), 349-359 (1998).
- Ferreira, J. G., Saurel, C., Lencarte e Silva, J. D., Nunes, J. P., Vazquez, F. Modelling of interactions between inshore and offshore aquaculture. Aquaculture. 426, 154-164 (2014).
- Stevens, C., Plew, D., Hartstein, N., Fredriksson, D. The physics of open-water shellfish aquaculture. Aquacultural Engineering. 38 (3), 145-160 (2008).
- Iglesias, J. I. P., Urrutia, M. B., Navarro, E., Ibarrola, I. Measuring feeding and absorption in suspension-feeding bivalves: an appraisal of the biodeposition method. Journal of Experimental Marine Biology and Ecology. 219 (1-2), 71-86 (1998).
- Riisgård, H. U. On measurement of filtration rates in bivalves - the stony road to reliable data: review and interpretation. Marine Ecology Progress Series. 211, 275-291 (2001).
- Møhlenberg, F., Riisgård, H. U. Efficiency of particle retention in 13 species of suspension feeding bivalves. Ophelia. 17, 239-246 (1978).
- Shumway, S. E., Cucci, T. L., Newell, R. C., Yentsch, C. M. Particle selection, ingestion, and absorption in filter-feeding bivalves. Journal of Experimental Marine Biology and Ecology. 91 (1-2), 77-92 (1985).
- Velasco, L. A., Navarro, J. M. Feeding physiology of two bivalves under laboratory and field conditions in response to variable food concentrations. Marine Ecology Progress Series. 291, 115-124 (2005).
- Galimany, E., Ramón, M., Ibarrola, I. Feeding behavior of the mussel Mytilus galloprovincialis (L.) in a Mediterranean estuary: A field study. Aquaculture. 314 (1-4), 236-243 (2011).
- Wilcox, R. R. Understanding and applying basic statistical methods using R. , John Wiley & Sons. Hoboken, NJ. (2017).
- Velasco, L. A., Navarro, J. M. Feeding physiology of two bivalves under laboratory and field conditions in response to variable food concentrations. Marine Ecology Progress Series. 291, 115-124 (2005).
- Filgueira, R., Labarta, U., Fernández-Reiriz, M. J. Flow-through chamber method for clearance rate measurements in bivalves: design and validation of individual chambers and mesocosm. Limnology and Oceanography Methods. 4, 284-292 (2006).
- Grizzle, R. E., Greene, J. K., Luckenbach, M. W., Coen, L. D. A new in situ method for measuring seston uptake by suspension-feeding bivalve molluscs. Journal of Shellfish Research. 25 (2), 643-649 (2006).
- Riisgård, H. U. On measurement of filtration rates in bivalves - the stony road to reliable data: review and interpretation. Marine Ecology Progress Series. 211, 275-291 (2001).
- Newell, C. R., Wildish, D. J., MacDonald, B. A. The effects of velocity and seston concentration on the exhalant siphon area, valve gape and filtration rate of the mussel Mytilus edulis. Journal of Experimental Marine Biology and Ecology. 262 (1), 91-111 (2001).
