Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Bioengineering
Click here for the English version

Bioengineering

Isolasjon og Decellularization av en helt svin bukspyttkjertelen

Published: October 10, 2018 doi: 10.3791/58302
Automatic Translation
*1, *2, 1, 1
1Department of Surgery, Institute of Clinical Sciences, Sahlgrenska Academy, University of Gothenburg, 2The Transplant Institute, Sahlgrenska University Hospital
* These authors contributed equally

Summary

Tissue engineering for hele bukspyttkjertelen er en utfordring på grunn av dens exocrine og endokrine funksjoner. Vi viser en metode for Disseksjon av en intakt svin bukspyttkjertelen og prosessen med vellykkede decellularization av perfusjon av vaskemidler Triton X-100, natrium deoxycholate og deoxyribonuclease.

Abstract

Tissue engineering for hele bukspyttkjertelen kan forbedre gjeldende behandlinger for diabetes mellitus. Det ultimate målet er å vev ingeniør bukspyttkjertelen fra en allogene eller xenogeneic med menneskelige celler. En demonstrasjon av metoder for effektiv disseksjon, decellularization og recellularization av svin bukspyttkjertelen kan dra feltet. Som menneskelige pancreases, svin pancreases har en spesiell anatomiske avtale med tre lobes (splenic, duodenalsår, og tilkobling) rundet av tolvfingertarmen og tynntarmen. Den duodenalsår flik av bukspyttkjertelen kobler til tolvfingertarmen ved flere små blodkar. Tissue engineering i bukspyttkjertelen er komplisert på grunn av dens exocrine og endokrine natur. I dette papiret viser vi en detaljert protokoll å dissekere hele svin bukspyttkjertelen og decellularize det med vaskemidler stund bevarer sin struktur og noen ekstracellulær matrix-komponenter. For å oppnå fullstendig perfusjon, velges aorta vik og portalen blodåre som utløp. Andre blodkar (hepatic arterien, splenic blodåre, splenic arterien, hvem arterien og venen treet) og galle duct er samskrevet. For å hindre dannelse av blodpropp, grisen er heparinized, og umiddelbart etter disseksjon, tømmes orgel med kaldt heparin. For å hemme virkningen av exocrine enzymer, er bukspyttkjertelen decellularization satt til 4 ° C. Decellularization er utført av perfusjon Triton X-100, natrium deoxycholate og deoxyribonuclease, med en intermitterende og siste omfattende vask. Med en vellykket decellularization, bukspyttkjertelen vises hvite, og en histologiske evaluering med hematoxylin og eosin viser et fravær av kjerner med bevarte ekstracellulær matrix struktur. Dermed kan den foreslåtte metoden brukes å analysere og decellularize hele svin bukspyttkjertelen.

Introduction

Diabetes mellitus er preget av tilstedeværelsen av økte nivåer av glukose i blodet. Det er anerkjent som en stor offentlig helse utfordring i de fleste land1. Høye nivåer av blodsukker påvirker blodårene og nervesystemet, forårsaker skade på øynene, hjertet, og nyrene og extremity ischemia. Tradisjonelle omfatter behandlingsmetodene injeksjoner av eksogene insulin, narkotika og livsstilsendringer. Sette til side en kur for sykdommen, i noen tilfeller, mislykkes tilgjengelig behandlinger å opprettholde insulin på terapeutisk nivåer, noe som resulterer i hyperglykemi. Selv om transplantasjon av holmer eller hele bukspyttkjertelen eliminerer sykdommen, er det ikke ofte gjort på grunn av mangel på passende donor organer og risikoer og problemer involvert immunsuppresjon og innkapsling2.

Gjeldende forbedringer innen tissue engineering og regenerativ medisin har kapasitet for å gi en løsning for disse problemene. Med teknikken for decellularization, mobilnettet materialet fra mennesker eller dyr giver kan fjernes mens viktig ekstracellulær matrix (EFM) proteiner, vekstfaktorer, og signalnettverk molekylene er bevart i stillaset. Slike stillaser kan potensielt være transplantert uten behov for immunsuppresjon, gjenoppretter funksjonen orgel etter recellularization med mottakerens egen ikke er immunogenic stamceller3,4. Vev-konstruert organer fra allogene eller xenogeneic kan brukes i klinisk transplantasjon, som store ekstracellulær matrix proteiner er bevart blant arter og kan ikke bli avvist etter transplantasjon5.

Decellularization er en godt utforsket med optimal bruk av fysiske krefter, kjemiske rengjøringsmidler og enzymer i en fysiologisk fjerne celler og kjernefysisk materiale fra en vev eller organ. Recellularization er en prosedyre til såing celler i acellular orgel. Det er en intellektuelt tøff prosedyre, krever et stort antall celler, en optimal celle-såing strategi og en bioreactor system for kulturen av orgelet på fysiologisk akseptabel forhold som temperatur, trykk og gasser6.

Bukspyttkjertelen kan betraktes som en utfordrende vev tissue engineering på grunn av sin exocrine og endokrine kapasiteter. Exocrine vevet ut flere fordøyelsesenzymer, mens delen endokrine skiller ut hormoner, inklusive insulin. Decellularization av intakt pancreases fra musen7,8, menneskelige9og gris10 allerede er rapportert ved hjelp av enzymer (trypsin, deoxyribonuclease [DNase]) og ikke-ioniske (Triton X-100) og ioniske vaskemidler ( natrium deoxycholate [SDC] og natrium dodecyl sulfate [SDS]). Imidlertid etter publiserte protokollene, vi slitt med en vellykket disseksjon og komplett perfusjon og decellularization samtidig opprettholde en ECM-struktur. Spekulerte vi at de brukte vaskemidler under decellularization føre til lysis av celler, og dermed slippe fordøyelsesenzymer inn orgel. Utgitt enzymer vil en irreversibel skade ECM stillaset og gjøre det ineffektivt for decellularization og recellularization. En design for metoden som effektivt decellularizes bukspyttkjertelen mens hemme virkningen av fordøyelsesenzymer kan løse problemet. Vi valgte strategi Peloso et al., av decellularization i bukspyttkjertelen på en kald temperatur, selv om de ikke rapporterte om hvorfor kald temperatur er brukt9. Samtidig utviklet vi en disseksjon strategi med endringer fra Taylor et al. ved å velge aorta som en perfusjonsmåling vik over cøliaki stammen (CT) og overlegen hvem arterie (SMA)11.

I en nylig publisert artikkel12viser vi en metode for effektiv isolasjon og decellularization av svin bukspyttkjertelen samtidig bevare noen ECM-komponenter. I dette papiret, vi viser en detaljert beskrivelse av hvordan å analysere en hel svin bukspyttkjertelen som inneholder splenic, duodenalsår og tilkobling lobes, og presentere en gradvis protokoll for vellykket decellularization.

Protocol

Disseksjon av et svin bukspyttkjertel og decellularization prosedyren presenteres her følger etiske retningslinjer Universitetet i Gøteborg.

1. forberedelse av Decellularization-oppsett

  1. Bruk 3 x 5 mm silikon rør, koble i serien beholderen vaskemiddel innløpet til peristalic pumpen og deretter å bukspyttkjertelen i organ kammer via degasser (se figur 1). Koble en mannlig luer til gratis slutten av rør i orgel kammer.
  2. Bruker en annen 3 x 5 mm silisium rør, koble orgel kammeret til den vaskemiddel stikkontakt beholder via peristaltiske pumpen å samle perfused vaskemiddel.
  3. Koble en 2 ml umerkede pipette til de ledige endene på rør i vaskemiddel innløp container og vaskemiddel stikkontakt cointainer.
  4. Holde hele oppsettet på 4 ° C.

Figure 1
Figur 1: Forberedelse av perfusjon opplegget. Bruker en 3 x 5 mm silikon tube, som vist i oppsettet, koble i serien beholderen vaskemiddel innløpet til peristaltiske pumpen, degasser og orgel kammeret. Svarte pilene viser flytretningen fra vaskemiddel innløp beholder til orgel kammer. For vaskemiddel uttaket, bruke en annen 3 x 5 mm silikon rør og koble den orgel kammer via peristaltiske pumpen til beholderen vaskemiddel stikkontakt. Den røde piler vise flytretningen fra orgel kammer til vaskemiddel stikkontakt beholder. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

2. forberedelse av Decellularization løsninger

  1. Løsning 1 (fosfat-bufret saline [PBS]): legge til 8 g (137 mM) natriumklorid, 0.2 g (2,7 mM) kalium klorid, 1,44 g (10 mM) natrium fosfat og 0,24 g (1,8 mM) kalium fosfat 1 L ultrapure vann og rør til oppløst. Justere pH 7,4 med saltsyre (HCl). Totalt er 3,2 L denne løsningen nødvendig.
  2. Løsning 2 (PBS + heparin): 1 L løsning 1, legge til 3,4 mL av heparin (17 internasjonale enheter [IU] /mL). Forberede denne løsning frisk og holde det på is til det blir kaldt. Totalt er 1,2 L denne løsningen nødvendig.
  3. Løsning 3 (ultrapure vann + Natriumazid + disodium ethylenediaminetetraacetic syre [EDTA]): 1 L ultrapure vann, legge 1,86 g av EDTA (5 mM) og 200 mg (0,02%) Natriumazid. Rør til oppløst salter. Cool løsningen på 4 ° C før bruk. Totalt er 22 L denne løsningen nødvendig.
  4. Løsning 4 (PBS + Natriumazid + EDTA): 1 L løsning 1, legge til 200 mg (0,02%) Natriumazid og 1,86 g (5 mM) EDTA. Rør til oppløst salter. Cool løsningen på 4 ° C før bruk. Totalt er 1 L denne løsningen nødvendig.
  5. Løsning 5 (ultrapure vann + Natriumazid): 1 L ultrapure vann, legge til 200 mg (0,02%) Natriumazid. Rør til oppløst salter. Cool løsningen på 4 ° C før bruk. Totalt er 260 L denne løsningen nødvendig.
    Merk: EDTA danner en utløse med SDC og ble ekskludert fra løsning 5 siden det vil bli brukt for umiddelbar vask før og etter SDC behandling.
  6. Løsning 6 (SDC + Triton X-100): Til 940 mL ultrapure vann, legger 40 g (4%) SDC, 60 mL (6%) Triton X-100, 200 mg (0,02%) Natriumazid og 69,6 mg (0.4 mM) phenylmethylsulfonyl fluor (PMSF). Rør helt oppløst. Cool løsningen på 4 ° C før bruk. Legg til PMSF før bruk. Totalt er 9,6 L denne løsningen nødvendig.
  7. Løsning 7 (DNase): Legge til 10.000 Kunitz enheter av DNase-I 250 mL (40 Kunitz enheter/mL) Dulbecco's PBS inneholder CaCl2 og MgCl2. Forberede frisk og bruke umiddelbart. Varm løsningen på 37 ° C før bruk.
  8. Løsning 8 (PBS + natrium azide): 1 L løsning 1, legge til 200 mg (0,02%) Natriumazid. Rør til oppløst salter. Cool løsningen på 4 ° C før bruk. Totalt er 1 L denne løsningen nødvendig.

3. Disseksjon av svin bukspyttkjertelen

Merk: I denne studien svin pancreases ble dissekert fra euthanized, heparinized (400 IU/kg) kvinnelige griser veier 45 kg fra en gård.

  1. Plass grisen på tabellen disseksjon i supine posisjon.
  2. Gjøre en midtlinjen snitt fra xiphoidal prosessen til skambenet (ca. 40 cm) ved hjelp av en skalpell, utsette alle abdominal organer.
  3. Finn den splenic, duodenalsår, og tilkoblingen lobes.
  4. Finn nivået av store duodenalsår papilla og ligate tolvfingertarmen muntlig fra det stedet benytter to separate suturer.
  5. Ligate underlegne spiserøret med to separate suturer og kutt mellom ligaturer med saks å ta magen ut.
  6. Skille connective vev fra kolon nå tynntarmen.
  7. Skille bindevevet i tykktarmen som festes til den splenic flik av bukspyttkjertelen.
  8. Fjerne tykktarmen fra tynntarm etter ligating arteriene.
  9. Finn dårligere hvem venen og mindreverdig hvem arterien treet og ligate med én Sutur hvor de vises caudally i bukspyttkjertelen.
  10. Ligate splenic arterien og vene med en Sutur, nær milten, i hilum, og kutte distally med saks fjerne milten.
  11. Følg tolvfingertarmen til duodenalsår og tilkobling lobes tømmes og ligate tolvfingertarmen nederst med to separate suturer.
  12. Analysere portalen blodåre, ligate det med en Sutur å hindre eventuell blod lekkasje fra leveren og kutte proximally til ligatur. Portalen blodåre fungerer som en stikkontakt i løpet av decellularization.
  13. Analysere og ligate av galle duct og hepatic arterie med to suturer. Kutte distally til suturer.
  14. Finn aorta under nyre venen og dissekere den i skallen retning fra muskler og bindevev før den når bukspyttkjertelen området.
  15. Snu bukspyttkjertelen forsiktig og dissekere aorta, holde SMA og CT intakt, og kutte aorta overlegen til CT og mindreverdig til SMA med saks.
  16. Skjær resten av omkringliggende vev med saks og benytt bukspyttkjertelen.
  17. 50 mL sprøyte er koblet til 4 mm arteriotomy kanyle, flush organ gjennom aorta med løsning 2 til det perfuses hele orgel eller til hele organ blir kald.

4. forberedelse av svin bukspyttkjertelen til Decellularization

  1. Holde bukspyttkjertelen 4 ° C eller is gjennom hele prosessen.
  2. Klippe bildet av tolvfingertarmen med saks, rengjøre den mat ved flushing 50-150 mL ultrapure vann med en 25-mL pipette, og ligate det igjen med suturer.
  3. Ligate ene enden av aorta og alle grenene i tillegg til SMA og CT med suturer å hindre lekkasje.
  4. Sett inn fra den andre enden av aorta en 4 mm arteriotomy kanyle og ligate det med suturer.
  5. Perfuse bukspyttkjertelen med løsning 3 1t på 20 mL/min bruker decellularization oppsett.
    Merk: Prefill rørene av pumpen med løsning 3 slik at ingen bobler angi bukspyttkjertelen. Se etter eventuelle lekkasjer fra alle sider av orgel og ligate alle åpne vaskulær grener med bildet, unntatt portalen blodåre.
  6. Fryse bukspyttkjertelen på 20 ° C i løsning 4 til starten av decellularization.

5. decellularization av svin bukspyttkjertelen

  1. Tine bukspyttkjertelen på 4 ° C.
  2. Løpe peristaltiske pumpen i decellularization oppsettet med løsning 3 på 20 mL/min til ingen luftbobler er sett i vaskemiddel innløp røret.
  3. Plasser bukspyttkjertelen i beholderen decellularization og koble vaskemiddel innløp røret til aorta i bukspyttkjertelen. Vask organ av perfusjon med løsning 3 overnatting på 20 mL/min på 4 ° C.
  4. Hell løsningen i orgel kammeret.
  5. Erstatt løsning 3 med løsning 5 og perfuse bukspyttkjertelen i 30 min på 20 mL/min på 4 ° C. Hell ut løsningen i orgel kammeret.
  6. Legg løsning 6 og perfuse bukspyttkjertelen 8 h på 20 mL/min på 4 ° C. Hell ut løsningen i orgel kammeret.
  7. Vask organ av perfusjon med løsning 5 96 h på 20 mL/min på 4 ° C. Hell ut løsningen i orgel kammeret.
  8. Forberede bukspyttkjertelen DNase behandling ved resirkulering 500 mL Dulbecco's PBS inneholder CaCl2 og MgCl2 i 30 min på 37 ° C. Hell ut løsningen i orgel kammeret.
  9. Legge til 250 mL løsning 7 og perfuse bukspyttkjertelen 4 h på 20 mL/min på 37 ° C. Hell ut løsningen i orgel kammeret.
  10. Vask organ av perfusjon med løsning 5 120 h på 20 mL/min på 4 ° C.
  11. Lagre orgelet i løsningen 8 på 4 ° C i korte tidsperioder eller på 20 ° C i lange perioder.

6. bekreftelse av Decellularization

  1. Med saks, klipp 3 til 10 mm biopsier fra alle lobes av bukspyttkjertelen og løse dem i formaldehyd 48 h ved romtemperatur.
  2. Vask bitene i ultrapure vann i 15 min, behandle dem i en vevsprosessor etter standardprotokoller og bygge dem inn i parafin.
  3. Skjær 5 µm inndelinger ved hjelp av mikrotomen og stain dem av Meyers hematoxylin og 0,2% alkoholholdig eosin (han) etter standardprotokoller.
  4. Vis lysbildene under en lys mikroskop etter tapet av kjerner.
    Merk: Et stykke fra en ferskt vev behandlet på samme måte kan brukes som en kontroll etter tilstedeværelsen av kjerner.

Representative Results

Representant svin bukspyttkjertelen disseksjon bilder, som kan hjelpe i å finne og dissekere dårligere hvem arterien og vene treet, portalen blodåre, hepatic arterien, gallekanalen og aorta forgreninger til CT og SMA, er vist i figur 2A, 2bog 2 C (gule piler), henholdsvis. Figur 3A viser brutto morfologi av en normal bukspyttkjertelen, som vises med lys rosa og inneholder splenic, tilkobling og duodenalsår lobes. Etter decellularization, den rosa fargen går tapt og decellularized bukspyttkjertelen ser blek hvit i fargen. Brutto morfologi bildet viser splenic, vises tilkobling og duodenalsår lobes av en decellularized bukspyttkjertelen i figur 3B. Figur 3 c viser tilstedeværelse av mange blå kjerner i en normal bukspyttkjertelen etter farging med han. I en decellularized bukspyttkjertelen, han flekker viste tap av kjerner, ingen blå kjerner er sett (figur 3D).

Figure 2
Figur 2: bilder av et svin bukspyttkjertelen disseksjon. (A) plassering av dårligere hvem arterien og venen treet (gul pil). (B) Ligation av portalen blodåre, hepatic arterien og galle duct (gul pil). (C) Aorta forgrening cøliaki bagasjerommet og overlegen hvem arterien (gul pil). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 3
Figur 3: brutto morfologi og han flekker av normal og decellularized pancreases. (A) brutto morfologi av en normal bukspyttkjertelen. (B) brutto morfologi av en decellularized bukspyttkjertelen. (C) han flekker viser tilstedeværelse av blå kjerner i en normal bukspyttkjertelen. (D) han flekker viser fraværet av blå kjerner i en decellularized bukspyttkjertelen. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Discussion

Den foreslåtte protokollen, benytter perfusjon av SDC og Triton X-100 på 4 ° C, vil decellularize hele svin bukspyttkjertelen vellykket. Utfordringen i denne teknikken er Disseksjon av intakt bukspyttkjertelen som inneholder alle tre lobes uten å skade parenchyma og dens leverer fartøy, samt ligation av den andre vaskulære grener av prøven for å perfuse orgel uten lekkasje. Svin bukspyttkjertelen har en annen anatomi sammenlignet med menneskelige bukspyttkjertelen. Det består av tre lobes opphold i nær kontakt med tynntarmen av delvis omgir den. Vi dissekert tolvfingertarmen sammen med bukspyttkjertelen, som flere små blodkar fra bukspyttkjertelen koble tarmen. Under optimalisering studiene vist sløv kutting av blodkar lekkasje og en ufullstendig perfusjon av løsninger.

Siden aorta kobles til bukspyttkjertelen gjennom cøliaki og overlegen hvem arteriene, valgte vi aorta som en vik å holde perfusjonen enkelt ved bare å bruke en kanyle, og derfor en vik. I vår erfaring, ligation av aorta over CT og under SMA reduseres av disseksjon og reduserer risikoen for skade noen av de to blodårene. I tillegg til en heparinized gris, vi la også merke at et perfusjon av kaldt heparin via aorta umiddelbart etter dissection hjelper i å oppnå perfusjon av løsninger gjennom orgel. Vi spekulere Hvis dette skjer ved å hindre dannelse av blodpropp i blodkar. Den første perfusjonen av en bukspyttkjertelen med ultrapure vann etter disseksjon vil lyse røde blodlegemer og fjerne blod restene i organ, og dermed hindre dannelse av blodpropp. Denne perioden kan også brukes til å finne unligated liten grenene av vener og arterier, som blodstrøm kan enkelt merke over bakgrunnen.

Vi valgte å holde hele decellularization prosedyren på kalde temperaturer (4 ° C), da dette vil hindre av exocrine enzymer som fra exocrine celler i bukspyttkjertel. Exocrine enzymer, når ikke hemmet, kan føre til en skadelig effekt på celler og ECM, som de kan fordøye cellemembraner og proteiner12. Som fryses kan effektivt brast cellene, inkludert vi et fryse/tine skritt, først før perfusjonsmåling vaskemidler4,13. Første vask etter tining vil fjerne restene av cellen serieopptak. Vaskemiddel behandling vi brukte er en blanding av SDC og Triton X-100 i uvanlig høy konsentrasjoner og en høy perfusjon hastighet. Vi valgte denne tilnærmingen å oppnå raskere decellularization ved å fjerne exocrine cellene skade ECM. Vi spekulere at en hard og rask protokoll er gunstig for bukspyttkjertelen decellularization, som mindre tid vil være tilgjengelig for bukspyttkjertelen enzymer til å samhandle med ECM, dermed bevare god ECM-komponenter. For å bevare ECM komponentene, lagt vi også serine protease hemmer (PMSF) til vaskemiddel løsningene, som som vil hemme aktivering av enzymer fra exocrine celler14. Natriumazid legges til alle decellularization løsninger, det fungerer som en bakteriostatisk agent, og dermed begrenser sjansen for bakteriell forurensning15.

Bukspyttkjertelen decellularized etter denne protokollen viste en bevaring av ECM strukturer og ECM proteiner kollagen og elastin. Imidlertid ble betydelig tap av glycosaminoglycans oppdaget i decellularized bukspyttkjertelen. Bukspyttkjertelen decellularized på denne måten viste også løftet for feste menneskelige fosterets bukspyttkjertelen stamceller og uttrykk for exocrine og endokrine markører i stykker recellularized for 14 dager12. Imidlertid vil generere en intakt og funksjonell bukspyttkjertelen, er videre forskning nødvendig i å vurdere riktig celle kilder, celletyper, celle seeding strategier og bioreactor kultur.

Disclosures

S.S.H. har aksjer i Verigraft, et selskap som har lisensiert teknologi av blod fartøy tissue engineering. Andre forfattere ikke avsløre.

Acknowledgments

Denne studien ble finansiert av en bevilgning fra den svenske regjeringen LUA ALF til S.S.H.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
4mm DLP arteriotomy cannula Medtronic 31104
2ml Unlabelled pipette vWR 612-3720
Degasser Biotech AB 0001-6484
DNase-I Worthington LS0020007
Dulbecco's PBS with CaCl2 and MgCl2 Sigma Aldrich D8662
EDTA disodium salt dihydrate AlfaAesar A15161.OB
Heparin Leo 387107
Luer Male with 1/8" ID Barb Oina LM-2PP-QC For 3X5mm silicon tube
Peristaltic pump Oina SP-1X4
PMSF Roche 10837091001 Unstable in aqueous solution. Should be added fresh before perfusion.
Potassium chloride Sigma Aldrich P5405
Potassium hydrogen phosphate Sigma Aldrich P9791
SDC Sigma Aldrich 30970
Silicon tube 3X5mm VWR 2280706
Sodium Azide Sigma Aldrich 71290
Sodium chloride Sigma Aldrich 13423
Sodium hydrogen phosphate Merck 71640-M
Suture Vömel 14817
Syrringe 50mL Becton Dickinson 300137
Triton-X-100 AlfaAesar A16046.OF

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Federation, I. D. IDF Diabetes Atlas. , Available from: http://www.diabetesatlas.org (2016).
  2. Yang, H. K., Yoon, K. H. Current status of encapsulated islet transplantation. Journal of Diabetes and its Complications. 29 (5), 737-743 (2015).
  3. Badylak, S. F., Taylor, D., Uygun, K. Whole-organ tissue engineering: Decellularization and recellularization of three-dimensional matrix scaffolds. Annual Review of Biomedical Engineering. 13, 27-53 (2011).
  4. Crapo, P. M., Gilbert, T. W., Badylak, S. F. An overview of tissue and whole organ decellularization processes. Biomaterials. 32 (12), 3233-3243 (2011).
  5. Hynes, R. O. The evolution of metazoan extracellular matrix. Journal of Cell Biology. 196 (6), 671-679 (2012).
  6. Scarritt, M. E., Pashos, N. C., Bunnell, B. A. A review of cellularization strategies for tissue engineering of whole organs. Frontiers in Bioengineering and Biotechnol. 3, 43 (2015).
  7. Goh, S. K., et al. Perfusion-decellularized pancreas as a natural 3D scaffold for pancreatic tissue and whole organ engineering. Biomaterials. 34 (28), 6760-6772 (2013).
  8. Wu, D., et al. 3D Culture of MIN-6 Cells on Decellularized Pancreatic Scaffold. In Vitro and In Vivo Study. Biomed Research International. 2015, 432645 (2015).
  9. Peloso, A., et al. The Human Pancreas as a Source of Protolerogenic Extracellular Matrix Scaffold for a New-generation Bioartificial Endocrine Pancreas. Annals of Surgery. 264 (1), 169-179 (2016).
  10. Mirmalek-Sani, S. H., et al. Porcine pancreas extracellular matrix as a platform for endocrine pancreas bioengineering. Biomaterials. 34 (22), 5488-5495 (2013).
  11. Taylor, M. J., Baicu, S., Greene, E., Vazquez, A., Brassil, J. Islet isolation from juvenile porcine pancreas after 24-h hypothermic machine perfusion preservation. Cell Transplantation. 19 (5), 613-628 (2010).
  12. Elebring, E., Kuna, V. K., Kvarnstrom, N., Sumitran-Holgersson, S. Cold-perfusion decellularization of whole-organ porcine pancreas supports human fetal pancreatic cell attachment and expression of endocrine and exocrine markers. Journal of Tissue Engineering. 8, 2041731417738145 (2017).
  13. Gilpin, A., Yang, Y. Decellularization Strategies for Regenerative Medicine: From Processing Techniques to Applications. Biomed Research International. 2017, 9831534 (2017).
  14. James, G. T. Inactivation of the protease inhibitor phenylmethylsulfonyl fluoride in buffers. Analytical Biochemistry. 86 (2), 574-579 (1978).
  15. Lichstein, H. C., Soule, M. H. Studies of the Effect of Sodium Azide on Microbic Growth and Respiration: I. The Action of Sodium Azide on Microbic Growth. Journal of Bacteriology. 47 (3), 221-230 (1944).

Tags

Bioteknologi problemet 140 bukspyttkjertelen svin bukspyttkjertelen disseksjon vev engineering decellularization regenerativ medisin ekstracellulær matrix
Isolasjon og Decellularization av en helt svin bukspyttkjertelen
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Kuna, V. K., Kvarnström, N.,… More

Kuna, V. K., Kvarnström, N., Elebring, E., Holgersson, S. S. Isolation and Decellularization of a Whole Porcine Pancreas. J. Vis. Exp. (140), e58302, doi:10.3791/58302 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter