Summary
Здесь мы описываем подробная методология, необходимые для проведения стресс расширение страх обучения (Самореактивных) эксперименты, доклинические модель посттравматического стрессового расстройства, у крыс и мышей. Модель использует аспекты Pavlovian страх кондиционирования и замораживания как индекс расширения страх в грызунов.
Abstract
Страх расширения функциональности имеют важное значение для выживания, но непропорционально высокий уровень страха может увеличить уязвимость для развития психических расстройств, таких как посттравматическое стрессовое расстройство (ПТСР). Чтобы понять биологические механизмы регуляции страха в ПТСР, важно начать с действительным животной модели расстройства. Этот протокол описывает методологии, необходимые для проведения стресс расширение страх обучения (Самореактивных) эксперименты, доклинические модель ПТСР, у крыс и мышей. Самореактивных была разработана для пилки критических аспектов ПТСР, включая долгосрочные просветительские обучения страха, вызванного острого стресса. Самореактивных использует аспекты Pavlovian страх принадлежности, но производит четкие и надежные сенсибилизированных страх ответ гораздо больше, чем нормальный условного страх ответы. Травма процедура включает в себя размещение грызунов в камере принадлежности и управляющие 15 несигнальное потрясений, случайным образом распределены более 90 минут (для крыса экспериментов; для мыши экспериментов, 10 несигнальное используются потрясений, случайным образом распределены более чем 60 минут) . На 2 день грызуны помещаются в романе кондиционирования контексте где они получают один шок; затем на день 3 они помещаются обратно в том же контексте на 2 день и испытаны для изменения в замораживание уровней. Грызуны, которые ранее получали травмы дисплей повысить уровень замораживания на день тестирования по сравнению с теми, которые получили без потрясений в первый день. Таким образом с этой моделью, один очень стрессовые опыт (травма) производит крайних страх стимулов, связанных с травматическим событием.
Introduction
Страх — это критический поведение для выживания, позволяя людям распознавать и реагировать на угрозы. Однако преувеличенные опасения ответы могут способствовать развитию психических расстройств, таких как посттравматическое стрессовое расстройство (ПТСР). ПТСР характерно преувеличенные ответ на мягкий стресс, особенно те из них, которые напоминают оригинальной травмы и тенденция к развитию новых страхи1,2. В лаборатории страх часто измеряется путем замораживания поведение, которое является надежной и этологических допустимый индекс страх в людей и грызуны3,4. В то время, как известно, ПТСР включает dysregulation страха и выражение расширенной страх, отсутствует надежный животных моделей ПТСР, которые надежно захватить этот дополненной страх ответ относительно безобидных раздражитель.
Этот протокол обеспечивает подробной методики, необходимые для проведения стресс расширение страх обучения (Самореактивных) эксперименты, надежные и достоверные доклинических модель ПТСР, у крыс и мышей. Самореактивных использует аспекты Pavlovian страх кондиционирования, но он производит различные ответы от нормальной страх кондиционирования и резюмирует расширенной страх, следующие травматического стресса наблюдается в ПТСР пациентов5,6. В этой модели один очень стрессовые опыт (упоминаемый здесь как травма) приводит к прочному поведенческие изменения, включая экстремальные страх раздражителей связанных с травматическим событием, повышенная возбудимость, увеличение реактивности старт-рефлекс и изменены глюкокортикоидный сигнализации7,8. Главной особенностью Самореактивных это что следующее воздействие травматического стресса (серия несигнальное потрясений) в различных условиях, животных показывают преувеличенные страх ответ на мягкий стресс (например., один удар) в другом контексте. Важно отметить, что эффект Самореактивных не обусловлен обобщения из контекста травма Роман контекста или увеличение шок чувствительности5. В нашей модели мы целенаправленно использовать процедуры, способствующие сокращению какие-либо обобщения Роман контекст таких как собственный транспорт, запах и сетки слово шаблон. Таким образом в отличие от обычных страх кондиционирования, Самореактивных является не Ассоциативный процесс, который приводит к новым обучения страх, что непропорционально связано с экологические сигналы, непосредственно не связанных с травматическим опытом. Обширная работа показывает, что одного 90-минутной сессии, содержащий 15 непредсказуемых потрясений в крыс (или один 60-минутной сессии, содержащий 10 непредсказуемых потрясений в мышах) индуцирует сенсибилизация длительный страх кондиционирования, а также повышенная возбудимость и регуляции в суточный ритм базальной кортикостерона. В отличие от предварительного воздействия на один footshock не производят Самореактивных9. Кроме того Самореактивных может использоваться надежно крыс и мышей.
Следовательно модель Самореактивных ПТСР является мощным инструментом для исследования биологических механизмов, участвующих в патофизиологии ПТСР. С помощью Самореактивных, исследователи можно изучить как воздействия травмы может повлиять на обучение будущих страх. Кроме того эта модель может быть полезна для расследования конкретных клеточном и молекулярном механизмов, которые могут быть вовлечены в регулировании выражение расширенной страх, как отмечено в ПТСР.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. субъекты
- Крысы
- Заказать крыс приехать, когда они приблизительно 90 дней старых и сингл размещается в клетках стандартных крыс.
Примечание: Рекомендуется один корпус, как группа жилье производит изменчивость из-за взаимодействия между животных в клетке, домой, особенно после воздействия стресса. Самореактивных была продемонстрирована в самцов и самок крыс, в Лонг-Эванс и крысах Sprague-Dawley и у крыс в возрасте 19 дней7,10. - Случайным образом назначить по крайней мере два условия животных: травма (n = 8) и не травма (n = 8) (см. Рау и др. 5 для дополнительного контроля условий).
- Заказать крыс приехать, когда они приблизительно 90 дней старых и сингл размещается в клетках стандартных крыс.
- Мыши
- Заказать мышей, чтобы прибыть, когда они являются приблизительно 60 дней старых и сингл размещается в клетках стандартной мыши. Одноместный дом мышей для по крайней мере 4 недель до травмы, а также на протяжении эксперимента.
- Случайным образом назначить животных по крайней мере два условия: травма (n = 8) и не травма (n = 8).
2. Оборудование для установки
- Настроить один набор страха кондиционирования палат в качестве контекста A и второй набор камер страха кондиционирования в качестве контекста B (см. Таблицу материалов). Место каждой страх принадлежности камеры внутри звук смягчающие кабина для предотвращения вторжений внешних шумов (см. Таблицу материалов).
- Убедитесь, что метод освещения камер с видимого света (например, свет Белый дом накладных) присутствует в камерах, выступающей в качестве контекста (см. Таблицу материалов).
- Убедитесь, что различные решения доступны для очистки камер между каждое животное и предоставления различных запахов для каждой камеры (например., разбавленным очистки раствора и 1% уксусной кислоты).
Примечание: Очень важно, что генерируемые животных запахов быть ликвидированы11. - Место пластиковых вставок в контексте B дифференцировать внутреннюю структуру двух контекстах. Рекомендуется черного оргстекла треугольная Вставка. Альтернативно, используйте Белый пластиковый лист для создания изогнутой задней стены (см. Таблицу материалов).
- Место сетки этажей в каждом страх кондиционирования палаты для footshock доставки, с помощью шаблона сетки для каждого контекста для различения текстуры этаже между контекстами (см. Таблицу материалов).
Примечание: Достаточно собственный сетки модели включают плоских сеток (все бары расположены в одной горизонтальной плоскости), решетки (баров, расположенных в двух офсетных горизонтальных плоскостей) в шахматном порядке и чередующихся сетки (баров, расположенных в одной горизонтальной плоскости, но различной диаметры). - Место чистой Металлические лотки под каждый этаж сетки для сбора помета. Запах кастрюли с чистящим раствором (см. Таблицу материалов).
- Предоставлять точные сроки и амплитуда footshock доставки для каждого контекста.
- Подключить генератор шок и скремблер способных доставлять 1 мА или меньше амплитуда потрясения на каждом этаже сетки для доставки footshock (см. Таблицу материалов).
Примечание: Ударные генераторы и скремблеры должны находиться за пределами звук, смягчающих камеры, с кабели, соединяющие генераторов и скремблер этажей сетки через отверстия в звук, смягчающих камеры. Это предотвратит повреждение вследствие жевания, очистки раствора и т.д. - Используйте мультиметр для проверки текущего доставляются генератором шок, поместив каждый зонд на другой панели сетки пола и подтверждающий, что амплитуда желаемого шок производится (см. Таблицу материалов).
- Убедитесь, что метод для контроля времени и амплитуды ударной доставки (например, компьютерное программное обеспечение) (см. Таблицу материалов).
- Подключить генератор шок и скремблер способных доставлять 1 мА или меньше амплитуда потрясения на каждом этаже сетки для доставки footshock (см. Таблицу материалов).
- Убедитесь, что метод для видео запись каждого животного во время каждой экспериментальной сессии (см. Таблицу материалов).
Примечание: Это будет необходимо записать 1) когда светятся камеры видимого света и 2) когда темные камеры. Последний может быть достигнуто путем с помощью камеры ночного видения или светящиеся и записи потемнела камеры, с помощью инфракрасных или инфракрасный свет. - Убедитесь, что отличительной метод транспортировки животных от виварий для контекста B доступен для дальнейшей дифференциации двух контекстах.
Примечание: Хотя методы, такие как черный пластиковое корыто (38 x 30 x 24 см) разделен на четыре отделения или очистить пустые клетки были успешно использованы, может использоваться любой транспортный ящик, которая заметно отличается от дома клетке.
3. Самореактивных процедура для крыс и мышей
- Обработка всех грызунов ежедневно, мягко удаляя их из homecage и удерживая каждый 60-90 секунд для по крайней мере за 7 дней до начала процедуры Самореактивных.
- На 1 день Самореактивных процедуры место темы в контексте A, где они будут получать травматического стресса.
- Настройка контекста A с одним набором сетки этажей (например., плоских сеток) и освещения камер с видимого света.
- Для проверки текущей доставляются генератором шок, поместив каждый зонд на другой панели сетки пола и подтверждающий, что амплитуда желаемого шок производится используйте мультиметр.
Примечание: Повреждения или коррозия баров может привести к слабым или неравномерным шок доставки. Жидкостей, включая мочи, касаясь сетки вдоль стены может также негативно сказаться на шок доставки. - Протрите камеры стены и двери и распылить лотки под полы сетки с одним из решений (например., разбавленным моющий раствор).
Примечание: Это необходимо для устранения запахов от предыдущих животных. - Транспорт животных от виварий экспериментальной комнату в их клетках дома размещены на корзину и место индивидуально в страх принадлежности камеры. Только Принесите один раунд в стоит животных (определяется количество страха принадлежности камеры) номер эксперимент одновременно.
Примечание: Чтобы избежать путает силу порядка или сроков, каждый раунд должен содержать животных в травма и травма каких-либо условий. - Для крыса экспериментов, используйте генератор шок и скремблеры доставить 15 1-s, 1-мА footshocks, случайно представлено более 90 минут (средняя МСИ = 6 мин) сквозь прутья сетки камер, содержащих травмы состояния субъектов. Разоблачить травмы элементы управления не в том же контексте 90 минут без доставки шок.
- Для экспериментов мыши, используйте генератор шок и скремблеры доставить 10 1-s, 1-мА footshocks, случайно представлены более 60 минут (средняя МСИ = 6 мин) через сетку этажей камер, содержащих травмы состояния субъектов. Разоблачить травмы элементы управления не в том же контексте на 60 минут без доставки шок.
- После 90 минут (Крыса экспериментов) или 60 минут (мыши экспериментов) возвращение всех животных в их homecages и быстро вернуться к виварий.
- На 2 день Самореактивных процедуры оцените страх к контексту травмы, при желании.
- Настройка контекста как сделано на 1 день.
- Транспорт животных в номер эксперимент в их дома клетки на 1 день.
- Место животных в контексте A 8 минут без доставки шок и видео запись поведение в течение всей сессии.
- После 8 минут возвращение всех животных в их homecages и быстро вернуться к виварий.
- На 3 день Самореактивных процедуры разоблачить все предметы на мягкий стресс в контексте.
Примечание: Эта процедура может произойти где угодно от 24 часов до 90 дней после травматического стресса9.- Настройка контекста B с другим набором сетки этажей от тех, которые используются в контексте A (например, чередуя или шахматном сетки полы) и черные треугольные или белым изогнутым оргстекло вставок. Не освещают камер с видимого света; Хотя, инфракрасный или инфракрасный свет может использоваться при необходимости.
- Для проверки текущей доставляются генератором шок, поместив каждый зонд на другой панели сетки пола и подтверждающий, что амплитуда желаемого шок производится используйте мультиметр. Для проверки текущей доставляются генератором шок, поместив каждый зонд на другой панели сетки пола и подтверждающий, что амплитуда желаемого шок производится используйте мультиметр.
Примечание: Повреждения или коррозия баров может привести к слабым или неравномерным шок доставки. Жидкостей, включая мочи, касаясь сетки вдоль стены может также негативно сказаться на шок доставки. - Протрите камер и спрей посуду под полы сетки с раствором, не используется в контексте A (например., 1% уксусной кислоты).
- Транспорт животных от виварий экспериментальной комнату в метод отличается от метода используется для контекста (например, черный пластиковое корыто) и поместите их индивидуально в страх кондиционирования камер. Привести только один раунд стоит животных в эксперимент номер в то время (определяется количество страха принадлежности камеры).
- Разоблачить всех животных на мягкий стресс (описано ниже) и запись видео замораживания и активности во время сессии.
- После 180-s базового периода доставить всех животных одного 1-s, 1-мА footshock (крысы) или одного 2-s, 1-мА footshock (мышь).
Примечание: Убедитесь, что в течение 180-s базового периода замораживания не должен превышать 5%12. - Удалите все животные 30 секунд после удара доставки и быстро вернуться к виварий.
- После 180-s базового периода доставить всех животных одного 1-s, 1-мА footshock (крысы) или одного 2-s, 1-мА footshock (мышь).
- На 4 день Самореактивных процедуры тест страх к контексту мягкий стресс.
- Настройка контексте B, как это сделано на 3 день.
- Транспорт животных от виварий экспериментальной комнату в тот же транспорт, как сделано на 3 день.
- Место животных в контексте B 8 минут без шок видео и доставки запись замораживания на протяжении всей сессии.
- Удалите все животные после 8 минут и быстро вернуться к виварий.
4. анализ данных
- Мера страх на записанные экспериментальных сессиях с использованием замораживания, определяется как отсутствие все движения, за исключением, что необходимый для дыхания.
Примечание: Замораживание наиболее точно забил слепого человека бомбардиром, но есть несколько автоматических программ, которые выполняют хорошо. Однако всех автоматизированных систем должны быть откалиброван для человеческого наблюдателя быть точной13.- Оценка замораживания вручную, у слепых в экспериментальных условиях экспериментатора отмечает вопросу каждые 4 секунды на протяжении периода времени интерес3. На каждое замечание Классифицируйте темы, как «замораживания» или «не замораживать». Сравните число замораживания наблюдений на общее количество наблюдений определить процент времени, затраченного замораживания.
- Чтобы использовать автоматизированные видео анализ забить замораживания, сначала убедитесь, что результаты от автоматизированного анализа видео соответствуют результаты, полученные от стороны скоринга, как существенн по-разному замораживания Оценка от автоматизированного анализа может выдавать неточные результаты.
Примечание: Крыса или мышь, которая никогда не были шокированы должен показать замораживания между 0 и 5%, в то время как более высокие значения предложить бедным калибровка оборудования
- Используйте методы, описанные выше для измерения страха во время периодов времени интерес (описано ниже).
- Мера страх к контексту травма как процент времени замораживания через весь 8-мин тест сессии в день 2.
- Мера обобщение страха от травмы контекста к контексту мягкий стресс как процент времени замораживания в период базовой 3-мин в контексте B на 3 день до родов шок.
Примечание: Для Самореактивных, важно различать контексты достаточно хорошо, так что есть не значительные обобщение. - Мера страх сразу же после шока на 3 день как процент времени замораживания в период 30-х, который следует шок.
- Мера страх к контексту мягкий стресс как процент отработанное время через весь 8-мин тест сессии на 4 день.
- Мера шок реактивности суммы, или скорости движения в период 3-s, во время и сразу же после удара на 3 день.
Примечание: ANOVAs рекомендуются для анализа всех данных, как дополнительные группы (например., лечение наркозависимости) могут быть добавлены при необходимости.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Результаты теста контексте травмы на день 2 показаны на рисунке 1. Животных в состоянии травмы показали значительно более высокий уровень замораживания в контексте A по сравнению с не травма управления, указывающее приобретение страха к контексту травмы [крыс: F(1,17) = 23.58, p < 0,01; мышей: F(1,14) = 666.50, p < 0.0001]. Замораживание в течение базового периода до одного удара в контексте романа на день 3 показан на рисунке 2. Травмы и не травма животных показан минимальный замораживание уровней, которые не отличаются от друг друга [крыс: F(1,17) = 3.14, p > 0.05; мышей: F(1,14) = 1,70, p > 0.05]. Это показывает, что контексты A и B были достаточно различных, таким образом, что животных травма не рекомендуется обобщать от травмы контекста к контексту роман. Реактивность с одного удара в день 3 показан на рисунке 3. Травма животных показали ниже реактивности шок, по сравнению с элементы управления не травмы [крыс: F(1,17) = 3,59, p = 0,07; мышей: F(1,14) = 6.53, p < 0,05]. Это указывает, что расширения страх обучения, наблюдается в животных травма не из-за повышение восприимчивости к поражению электрическим током. Заморозки в период 30-х, сразу же после одного удара на 3 день показано на рисунке 4. Травма животных показали более замораживания, по сравнению с не травма элементы управления, указывающее, что воздействие травматического стресса увеличить страх сразу же после мягкой стрессор [крыс: F(1,17) = 7.29, p < 0,05; мышей: F(1,14) = 6.10, p < 0,05]. Критическим испытанием Самореактивных модели является контексте тест на день 4 (рис. 5). В ходе этого испытания, травма животных показали замораживания значительно выше по сравнению с не травма элементы управления, указывающее, что воздействие травматического стресса расширения страх, научиться stressor последующих мягкая [крыс: F(1,17) = 14.06, p < 0,01; мышь: F(1,14) = 12.05, p < 0.01].
Рисунок 1: замораживание в контексте A на день 2. (A) крыс в условиях травмы показали выше замораживание чем крысы в не состоянии травмы (p < 0.01). (B) мышах в состоянии травмы показали выше замораживание чем мышей в не состоянии травмы (p < 0.0001). Планки погрешностей представляют собой стандартные ошибки. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 2: базовые замораживания в контексте B на день 3. (A) крысы в травмы и не травма условия выставляются низко замораживания и не были значительно отличаются друг от друга в базовый период до 1 шок (p > 0,05). (B) мышах в травмы и не травма условий выставляются низко замораживания и не были значительно отличаются друг от друга в базовый период до 1 шок (p > 0,05). Планки погрешностей представляют собой стандартные ошибки. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 3: травма уменьшается шок реактивности в день 3. (A) крыс в условиях травмы показало тенденцию к снижению движение во время и сразу же после одного шок, по сравнению с крыс в условиях не травма (p = 0,07). (B) мышах в состоянии травмы, показали снижение движение во время и сразу же после одного удара по сравнению с мышей в не состоянии травмы (p < 0,05). Планки погрешностей представляют собой стандартные ошибки. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 4: травма производит расширение замораживание сразу же после одного удара в день 3. (A) крыс в условиях травмы показало значительно расширенной замораживания по сравнению с не травма групп (p < 0,05). (B) мышах в состоянии травмы показало значительно расширенной замораживания по сравнению с не травма групп (p < 0,05). Планки погрешностей представляют собой стандартные ошибки. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 5: травма производит расширение замораживания в контексте B на день 4. (A) крыс в условиях травмы показало значительно расширенной замораживания по сравнению с не травма групп (p < 0.01). (B) мышах в состоянии травмы показало значительно расширенной замораживания по сравнению с не травма групп (p < 0.01). Планки погрешностей представляют собой стандартные ошибки. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Самореактивных является надежная модель поведения ПТСР, которые могут быть сведены воедино в крыс и мышей и могут быть использованы для изучения сенсибилизированных страх ответы, которые характеризуют ПТСР. После травматического стресса грызуны показывают увеличение страх ответ в совершенно другом контексте только после того, как именно в паре с мягкий стресс, который служит напоминанием о предыдущей травматический опыт. После травматического стресса грызунов неудивительно показывают высокий уровень страха, когда вернулся к контексту травматического стресса на 2 день, указывающее что памяти для травматического стресса нетронутыми (рис. 1). Однако они показывают минимальный страх обобщение из контекста травматического стресса Роман контекста, как указано минимальное замораживание 3-мин базовый период на день 3 (рис. 2). Это означает, что любое расширение обучения этот роман контекст является не просто из-за обобщение из контекста травмы. Кроме того животных, подвергшихся воздействию травматического стресса не показывают увеличение реактивности одного удару на день 3 (рис. 3), указав, что совершенствование обучения не из-за одного удара воспринимается как более болезненным после предыдущего воздействие ударных. Критически животных, подвергшихся воздействию травматического стресса показывают увеличение замораживания сразу же после одного удара на 3 день (рис. 4) и когда вернулся в контексте одного удара на день 4 (рис. 5), указывающее расширения страх ответ .
Предыдущие эксперименты показали также Самореактивных производит расширение тревоги подобное фенотип, как указано снижение разведки в открытом поле испытаний8. Последствия процедуры Самореактивных было показано, быть долговечными, сохраняющееся в течение по крайней мере 90 дней после травмы, далее установление надежности модели5. Следовательно Самореактивных является ценным инструментом для исследования биологических механизмов ПТСР.
Важно отметить, что Самореактивных является не просто из-за страха обобщения или выражение увеличения страха, так как травматический опыт должны прийти перед мягким стрессор для увеличения страха контекста, в паре с мягким стрессор5. Это исключает толкование, которое Самореактивных происходит от выражения расширения страх. Кроме того Самореактивных не может толковаться как обобщение страха от травмы контекст на контекст Роман потому, что предыдущие результаты показывают, что исчезновение страха травматической памяти не смягчать Самореактивных5,14. Как отличительной чертой ПТСР сопротивление к вымиранию (в виде воздействия терапии), это еще более укрепляет связь между15Самореактивных и посттравматического стрессового расстройства. Кроме того манипуляции, которые производят амнезия страх кондиционирования в контекст травмы оставляют Самореактивных unaffected, далее о том, что Самореактивных не из-за страха обобщение5,10. Наконец хотя обычно мы рассмотрим расширение обучения контекстуальные страха, стресс несигнальное шок также повышает слуховой страх принадлежности. Эти заключения показывают, что Самореактивных является формой стабильной чувствительности в страхе обучения схемы.
Хотя Самореактивных модель является простой в конструкции, аспекты протокола должны тщательно соблюдаться для устойчивых результатов. Например исследователи следует с осторожностью использовать очень разные методы транспорта для контекста A и B контекста для уменьшения базовых обобщение. Неспособность сделать достаточно различных контекстах A и B может также привести к высокий уровень обобщения из контекста A до B контекста до шок, осложняющих интерпретации результатов. Еще одним фактором, который также должен приниматься во внимание время, что животные остаются в контексте B после одного удара. Неспособность удалять животных из контекста вскоре после одного шок может производить исчезновение страха в контексте B, что приводит к снижению замораживания во время последующих контекста теста.
Самореактивных процедура может быть адаптирована для нескольких видов, что подтверждается его способностью производить фенотип сенсибилизированных страх у мышей и крыс. Важно обратить внимание на небольшие различия в протоколе мышей и крыс; к примеру мышей требуют stressor чуть более интенсивным мягкий (2-х шок, по сравнению с 1-s шок у крыс). Это необходимо для учета того факта, что мышь в целом Показать уровень замораживания, чем крысы (см. Рисунок 5). Кроме того важно отметить, что эти протоколы были разработаны главным образом для Лонг-Эванс крыс и мышей C57Bl/6. В то время как надежность этой процедуры предполагает, что она может быть адаптирована для различных штаммов мышей и крыс, важно учитывать различия в поведении между штаммами. Например DBA/2 мышей показывают снижение страха принадлежности, по сравнению с мышей C57Bl/6 и таким образом может потребовать сильнее подготовки протокола16. В противоположность этому крысах Sprague-Dawley клонат показать высокий уровень замораживания, чем крысы Лонг-Эванс и могут потребовать слабее подготовки протокола для предотвращения потолок эффекты17. Мы рекомендуем, манипулируя тока между 0,5 и 1,5 мА, как это очень эффективный способ Титруйте силы кондиционирования.
В заключение Самореактивных процедура производит надежные и долговечные поведенческих усовершенствований в обучении страх, что отражает увеличение страх ответы, наблюдается у больных ПТСР. Самореактивных также изменяет другие меры тревоги, включая снижение произвольное поведение в открытом поле тест, потенцируется старт-рефлекс реактивности и увеличение глюкокортикоидных рецепторов выражение в BLA8. Следовательно Самореактивных может быть мощным инструментом для понимания некоторых аспектов этой ПТСР фенотип.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Д-р Fanselow является членом-основателем правления Neurovation Labs.
Acknowledgments
Эта работа финансировалась путем национального института из здравоохранения R01AA026530 (MSF), центр Staglin для мозга и поведенческих здоровья (MSF), НРСА-F32 MH10721201A1 и NARSAD 26612 (AKR) и NSF DGE-1650604 (SG).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Fear Conditioning Chamber for Low Profile Floors | Med Associates Inc. | VFC-008-LP | Fear conditioning chamber |
| Sound Attenuating Cubicle | Med Associates Inc. | NIR-022SD | Sound-attentuaing cubicle to prevent intrusion of outside noise |
| NIR/White Light Control Box | Med Associates Inc. | NIR-100VR | Light control box capable of delivering white and near-infrared light |
| NIR VFC Light Box | Med Associates Inc. | NIR-100L2 | White overhead houselight |
| Windex Original Glass Cleaner | Windex | Solution for cleaning and scenting fear conditioning chambers between animals | |
| Acetic acid | Fisher Scientific | A38-212 | Solution for cleaning and scenting fear conditioning chambers between animals |
| A-Frame Chamber Insert | Med Associates Inc. | ENV-008-IRT | Black Plexiglas triangular insert to differentiate internal layout of Contexts A and B |
| Curved Wall Insert | Med Associates Inc. | VFC-008-CWI | White plastic sheet to differentiate internal layout of Contexts A and B |
| Low Profile Contextual Grid Floor with 1/8" Grid Rods for Mouse | Med Associates Inc. | VFC-005A | Flat grid floor for mice |
| Low Profile Contextual Grid Floor with Alternating 1/8" & 3/16" Grid Rods Mouse | Med Associates Inc. | VFC-005-S | Staggered grid floor for mice |
| Low Profile Contextual Grid Floor with 1/8" Staggered Grid Rods for Mouse | Med Associates Inc. | VFC-005A-L | Alternating grid floor for mice |
| Low Profile Contextual Grid Floor with 3/16" Grid Rods for Rat | Med Associates Inc. | VFC-005 | Flat grid floor for rats |
| Low Profile Contextual Grid Floor with Alternating 3/16" & 3/8" Grid Rods | Med Associates Inc. | VFC-005-L | Alternating grid floor for rats |
| Low Profile Contextual Grid Floor with 3/16" Staggered Grid Rods for Rat | Med Associates Inc. | VFC-005-S | Staggered grid floor for rats |
| Metal pans | Med Associates Inc. | Metal pans to catch droppings underneath grid floors | |
| Standalone Aversive Stimulator/Scrambler | Med Associates Inc. | ENV-414S | Shock generator and scrambler for footshock delivery |
| Multimeter | Fluke | 87-5 | Tool for measuring footshock amplitude |
| VideoFreeze Software | Med Associates Inc. | SOF-843 | VideoFreeze software for controlling shock delivery |
| High Speed Firewire Monochrome Video Camera | Med Associates Inc. | VID-CAM-MONO-4 | Video camera capable of recording in near-infrared light |
References
- Bremner, J. D., Krystal, J. H., Southwick, S. M., Charney, D. S. Functional neuroanatomical correlates of the effects of stress on memory. Journal of Traumatic Stress. 8 (4), 527-553 (1995).
- Dykman, R. A., Ackerman, P. T., Newton, J. E. Posttraumatic stress disorder: a sensitization reaction. Integrative Physiological and Behavioral Science. 32 (1), 9-18 (1997).
- Fanselow, M. S., Bolles, R. C. Naloxone and shock-elicited freezing in the rat. Journal of Comparative and Physiological Psychology. 93 (4), 736-744 (1979).
- Fanselow, M. S. What is Conditioned Fear? Trends in Neurosciences. 7, 460-462 (1984).
- Rau, V., DeCola, J. P., Fanselow, M. S. Stress-induced enhancement of fear learning: an animal model of posttraumatic stress disorder. Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 29 (8), 1207-1223 (2005).
- Perusini, J. N., Fanselow, M. S. Neurobehavioral perspectives on the distinction between fear and anxiety. Learning and Memory. 22 (9), 417-425 (2015).
- Poulos, A. M., et al. Sensitization of fear learning to mild unconditional stimuli in male and female rats. Behavioral Neuroscience. 129 (1), 62-67 (2015).
- Perusini, J. N., et al. Induction and Expression of Fear Sensitization Caused by Acute Traumatic Stress. Neuropsychopharmacology. 41 (1), 45-57 (2016).
- Rau, V., Fanselow, M. S. Exposure to a stressor produces a long lasting enhancement of fear learning in rats. Stress. 12 (2), 125-133 (2009).
- Poulos, A. M., et al. Amnesia for early life stress does not preclude the adult development of posttraumatic stress disorder symptoms in rats. Biological Psychiatry. 76 (4), 306-314 (2014).
- Fanselow, M. S., Sigmundi, R. A. Species-specific danger signals, endogenous opioid analgesia, and defensive behavior. Journal of Experimental Psychology: Animal Behavior Processes. 12 (3), 301-309 (1986).
- Jacobs, N. S., Cushman, J. D., Fanselow, M. S. The accurate measurement of fear memory in Pavlovian conditioning: Resolving the baseline issue. Journal of Neuroscience Methods. 190 (2), 235-239 (2010).
- Anagnostaras, S. G., et al. Automated assessment of pavlovian conditioned freezing and shock reactivity in mice using the video freeze system. Frontiers in Behavioral Neuroscience. , (2010).
- Long, V. A., Fanselow, M. S. Stress-enhanced fear learning in rats is resistant to the effects of immediate massed extinction. Stress. 15 (6), 627-636 (2012).
- Craske, M. G., et al. Optimizing inhibitory learning during exposure therapy. Behaviour Research and Therapy. 46 (1), 5-27 (2008).
- Paylor, R., Tracy, R., Wehner, J., Rudy, J. W. DBA/2 and C57BL/6 mice differ in contextual fear but not auditory fear conditioning. Behavioral Neuroscience. 108 (4), 810-817 (1994).
- Graham, L. K., et al. Strain and sex differences in fear conditioning: 22 kHz ultrasonic vocalizations and freezing in rats. Pyschology and Neuroscience. 2 (2), 219-225 (2009).
