Summary
PCOS とこれらの PCOS のようなダムから子孫の病態を検討するジヒドロテストステロン ペレット リーン PCOS のようなマウス モデルの開発について述べる.
Abstract
Hyperandrogenemia は女性の生殖、代謝機能に重要な役割を果たしているし、多嚢胞性卵巣症候群の特徴であります。PCOS をもつ女性を模したリーン PCOS のようなマウス モデルの開発は臨床的に意味があります。このプロトコルでは、このようなモデルについて述べる.DHT (ジヒドロテストステロン) 結晶粉末ペレットの 4 mm 長さを挿入することによって (ペレットの長さの合計は 8 mm)、それを毎月交換して血中 DHT レベル 2 倍ない DHT (いいえ DHT) で移植したマウスより高いと PCOS のようなマウスのモデルを生成することがおります。体重と体組成を変更することがなく生殖、代謝不全を見ました。不妊症の高度を示す、これらの PCOS のような雌マウスの小さなサブセットは妊娠して得ることができる、彼らの子孫は、大人として思春期遅発症、増加したテストステロンを表示します。PCOS のような無駄のないマウス PCOS とこれらの PCOS のようなダムから子孫の病態を検討する有用なツールです。
Introduction
検索は、NIH の基準に従って多嚢胞性卵巣症候群 (PCOS) とアンドロゲン過剰な PCOS (AE PCOS) 社会の特徴です。PCOS をもつ女性は妊娠しにくいがあるし、1妊娠合併症のリスクを増加しています。妊娠する場合でも、彼らの女性の子孫は、健康への悪影響成果2,3を持っています。動物モデルは、様々 な戦略4,5,6,7,8,9,10,11を使用して開発されています。,12 PCOS (無排卵、または障害者の血糖、インスリン耐性) の体重増加と肥満肥大脂肪細胞サイズと重量は増加した脂肪細胞に関連付けられている機能の多くを展示します。PCOS を研究に使用される動物のモデルを生産する 2 つの主要な方法があります。13出生後治療高レベルのアンドロゲン直接 (外因性アンドロゲン注射/挿入) または直接 (アンドロゲンへの変換エストロゲン アロマターゼ阻害剤をブロック) などであります。別は、アンドロゲンの胎児 hyperexposure 妊娠14,15中に子孫を勉強します。たとえば、アカゲザル16,17、羊18、および子宮内胎児期アンドロゲン男性レベルにさらされる齧歯動物からの女性の子孫は、人生の後半 PCOS のような形質を開発します。これらのモデルは大幅上昇アンドロゲン効果と胎児のプログラミングや子宮環境への影響の理解を強化しました。ただし、これらのモデルは独自の制限があります: 1) 動物が肥満を開発し、生殖性肥満や代謝不全; から hyperandrogenemia の効果を分離するは困難です2) 妊娠前に PCOS をもつ女性は既にアンドロゲンの高レベルを示す、従って卵子は受精; 前に過剰なアンドロゲンにさらされています。3) 薬理学的用量テストステロン (T) または出生後または妊娠の間に使用されるジヒドロテストステロン (DHT) は、多嚢胞卵巣のアンドロゲン環境を表さない場合があります。卵巣の卵胞液や血清テストステロンと DHT のレベルが測定され、テストステロンと DHT のレベルが 1.5 〜 3.9 倍 PCOS5,19,20,21 の女性で高い ,22,23影響を受けない女性と比較されました。我々 は、成体マウス モデル23,24,25の 4 mm のペレットの挿入から慢性の DHT 露出の開始の 2 週間以内生殖、代謝不全を開発作成クリスタル DHT パウダー (ペレットの長さの合計は 8 mm)。このモデルは、DHT 処置なしコントロール マウスの場合に比べて倍高い (2xDHT と呼ばれる) については、血中 DHT を生成します。2xDHT マウスが基底血清エストラジ オール、テストステロン、LH の変化を示さない、肥満を開発しないように、表示する同様の卵巣重量, 血清コレステロール、遊離脂肪酸、レプチンは、tnf α, il-623,24、 25相対的に制御する DHT 挿入23,24,25後さらに最大 3.5 ヶ月。また、PCOS の機能を既に開発している雌を交配による子孫15の代謝と生殖に関する健康にハイパーアンドロゲン母体環境の影響を学ぶことができます。
この新しいパラダイム (NIH と AE PCOS 社会基準に関連する) は、比較的同じようなレベルのこれらの女性にアンドロゲンで PCOS 2 ~ 3 倍より高いテストステロンまたは影響を受けない女性に比べて DHT レベルを生成することによって病気をモデル化します。ただし、このモデルが DHT を撤回したら、継続的な外因性 DHT によっておよびプログラムされた内因性検索からではなくが管理されます。この記事の全体的な目標は、1 に焦点を当てるには) どのように DHT ペレット;2) マウス モデルのようなリーン PCOS を生成する方法3) これらのダムから女性の子孫を評価する戦略。他の測定と表現型の評価、本稿では取り上げませんが、5,15,23,24,25,26で見つけることができます。
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Protocol
詳しいプロトコル DHT ペレット作製と挿入、および生殖および代謝テストを紹介します。本研究で使用されるマウス混血 (C57/B6、CD1、129Sv) が維持された食糧とのジョンズホプキンス大学でブロードウェイ研究棟動物施設で 24 ° C で 14/10 h/明暗サイクルで水を自由医学。すべてのプロシージャは、ジョンズ ・ ホプキンス大学動物ケアおよび使用委員会によって承認されました。
1. PCOS のようなマウス ・ モデルを作成します。
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DHT ペレット作製
- 滅菌するオートクレーブ シラスティック チューブです。シラスティック チューブをかみそりの刃で 15 mm の長さにカットします。
- 3 mL の注射器に接続されている 20 G の鈍い針とチューブにメディカル粘着シリコンを注入することによって 1 つの側面をシールします。プランジャーは、注射器とし、貯水池に挿入接着剤から撤退する必要があります。プランジャーを挿入し、針から出現し始めるとそれまで粘着プッシュ ダウン。鈍い針は強力なハサミで 20 G 針の鋭い先端側を切断によって行われます。シリコン チューブの長さはポスト プロダクション トリミング; のように 2 mm 以上にする必要があります。
- 一晩乾燥;シール側の気泡を確認します。空気泡無しとのそれらは DHT ペレットに使用されます。他の人は、いいえ DHT 制御ペレットに使用できます。
- 皮膚に DHT の露出を避けるためにフードの DHT ペレットを作る前に手袋、マスク、ゴーグル、白衣を着用します。
- プラスチックに注ぐ DHT 粉ボートと接着剤の開放側が DHT 粉にチューブ (A1.1 で生産) を頂いたプレスの重量を量る。
- DHT の粉末が整えられる、大型のクリップとを押さえ込んだことができます。 DHT 4 mm (または長さ) の高さに達するまで続行します。チェック定規、シールとシリコン、開いている側と DHT の長さは一晩乾かします。
- それぞれのシール側シリコン長さ 2 mm の長さにカットします。ペレットの長さの合計は 8 mm になります。
- コントロール (いいえ DHT) ペレットとして空シラスティック チューブの両サイドをシールします。
- ペレットを使用するまで室温で (露光しないように) 箔巻き 50 mL の円錐管にしてください。DHT ペレットは、ストレージの少なくとも 3 ヶ月の完全性を維持します。
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DHT の挿入と置換
- 20 DHT までペレットまたはコントロールのペレットが、30 mL 滅菌 0.9% 生理食塩水 37 °C 挿入直前平衡の 24 h で 50 mL の円錐管に別々 に沈んでいます。
- 術前 clidox で表面と手袋を消毒、作業面がきれいなプラスチック バックアップ吸水紙 (外科パッド) で覆われています。 動物と接触するすべての楽器は、オートクレーブによる動物施設に入る前に浄化します。 ナショナルインスツル メンツは、乾燥して使用する前に冷却する許可されます。
- 2 ヶ月齢の雌マウスを使用 (マウス/ケージ 4-5)。マウスはキシラジンを腹腔内に注入される (3.5 mg/kg bw) とケタミン (78.8 mg/kg bw) インスリン注射器を使用しています。混合と麻酔を投与量の計算は、テーブル 1にあります。
- 適切な麻酔が達成される, つま先反射の消失によって測定される呼吸を減速した後、マウスは手術の準備中でしょう。
- 滅菌ガーゼを使用して betadine で領域の皮膚を消毒して、70% エタノールできれい. 地域は、betadine に再び塗装されます。
- 5 mm 程度で長さはさみ首付近の皮膚の下穴を開けます。10 G trochar を使用して、吻側方向に小さなトンネル (15 mm) を作る。ペレットは、trochar と背側に挿入されます。
- 開口部を接着剤で封印します。手動でおおよそ傷の端鉗子と近似の創傷部に液状接着剤の薄膜を適用する穏やかなブラシ ストローク。蓄積 3 接着剤を確実に接着剤の薄層は、傷に均等に分散されます。接着剤タンブレロ傷の端のそれぞれの側に 1 cm を拡張してください。穴を閉じるには縫合や手術クリップが使えます。マウスを個別に収容、回復のための熱パッド、ケージに戻します。アンドロゲン暴露の一定レベルを維持する 4 週間ごとのペレットを交換します。オリジナルのペレットが削除され、新しいペレットは A1.15 同様の立場で説明するように挿入されます。
- DHT 挿入の 3 日後に発情周期をテストします。発情周期のステージは、膣細胞診により評価されます。 膣の細胞は、16 日間連続 p10 pipettor を使用して膣腔に滅菌生理食塩水 (約 10 μ L) を噴出して同じ滅菌ピペット チップと生理食塩水の撤回によって収集されます。 膣壁から脱皮腟の細胞生理食塩水を混ぜて、収集しました。
- ラベル付きのスライド上に細胞を生理食塩水を拡散します。各スライドは、六つのサンプルを含めることができます。スライドは、六つの場所のそれぞれでどのサンプルを配置するラベルです。
- 生理食塩水の後が完全に乾いてスライドで、スライドを入れセルを修正し、100% エタノールが付いている容器。スライドは、少なくとも 5 分間固定する必要がありますが、定着剤でさらに使用されるまで無期限に残ることができます。
- バッファー B に 1 分間染色ソリューションと水道水、常温乾燥の C. 洗浄スライドにスライドを置きます。
- 10 X の客観的光顕微鏡下で細胞の形態を調べます。 参照27,28,29proestrus (P)、発情 (E)、metestrus (M)、発情 (D) を区別するために細胞の形態を説明します。
- 各日の段階し、各段階での時間の割合を計算する日数の合計数で割った値の数。
- DHT 挿入後 21 日目のマウスを一晩 (16 h) を断食と 20% ブドウ糖の 2 g/kg 体重を腹腔内に注入することによって耐糖能をテストします。たとえば、マウスの体重は 25 g、そのこのマウスを 20% ブドウ糖の 250 μ L で 50 cc (0.5 mL) インスリン注射器で挿入されます。ブドウ糖のレベルは、0、15、30、60、90 で尾静脈からの血液をサンプリングすることによって glucometer およびテスト ストリップによって評価されて 120 分。これについてはで詳細に他の場所で30。
-
血のコレクション
- 顎下腺静脈出血ランセット (ステロイドの 100 μ L、LH ・ FSH の試金のための 30ul コレクション ボリューム制限) DHT 挿入後様々 な日に 9 と 10 の間の血液を収集します。これは11で説明されます。
- 4 ̊C, 10 分間で 6,000 x gで血液を遠心分離し、アッセイまで-80 °C で保存することができます別の 1.5 mL チューブに血清層を収集します。
2. 生殖を評価する慢性的な DHT から女性の子孫のプロファイルは、ダムを挿入
-
交尾
- テストする雌マウスは、ペレット挿入後 15 日間で実績のある肥沃な男性 (つまり雌マウスの子犬が既に) とケージに移動されます。
- マウスが妊娠しているかどうかにダムの体重毎週を文書化します。ダム一週間で 3 g 以上の体重増加量は、妊娠を示します。
- 我々 は前に、の週から 3 g より大きいダムの体重増加を観察した後 2 週目ダムの血を収集します。
-
膣口と発情した思春期
- 目視検査後、子犬は引き離される毎日で膣口を確認 21 日に出生後 (PND)、肛門性器間距離を測定し、膣口の年齢を記録します。
- 膣が開いたらは、発情周期をチェックする 1.2.8–1.2.11 で説明したように膣に細胞を毎日収集しています。
- 説明 1.2.12 として細胞の形態を観察し、最初の発情は日付として定義されているすべての細胞が角化上皮細胞であります。
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本体重量と耳パンチ
- ランセット先端を浸しタトゥー ペーストと参照12/7 PND で説明として爪先のタトゥーとそれぞれの子犬をマークし、70 日齢まで 7 日ごとマウスの重量を量る。
- 耳パンチ マウスそれらの番号は、図 1 12 に 16 の PND との間でシステムを使用してください。セックスを区別、体の腹側を調べて、女性に見える乳首があります。
- 21、26、70 の血を集める PND 1.3.1 で上記の出産後
-
ホルモン測定
- 血清中の DHT レベル両方の酵素免疫測定法 (ELISA) により測定し、液体クロマトグラフィー ・ タンデム質量分析計 (LCMS)23,24,31,32。T は、LC-MS、またはラット/マウス再生23,24の研究センターでヴァージニアの大学リガンド アッセイ コアによって検証されている elisa 法によって測定されます。
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Representative Results
血中 DHT 濃度とブドウ糖負荷試験
DHT のレベル測定した血清の収集から両方の elisa 法による LCMS によるプロトコル 1.24-1.25、2.9 3.0 によると.DHT の絶対値が異なる質量分析法と elisa 法、ただし、DHT 対なし DHT 挿入されます。 両方の試金からと全体実験15,23,24 (の相対倍 (約 2 倍)図 2 a)。 DHT のレベルが DHT となし DHT マウスの妊娠による先入観から大幅に増加、しかし、DHT のレベルが倍 (交尾の前に 1 日) pregestational 両方でなし DHT マウスに比べて DHT マウスで高いと妊娠 (およそ 14 日間)時間ポイント (図 2 b)。相対レベルを計算我々 ELISA と LC MS DHT の絶対レベルが異なるので (変更を折る: DHT 挿入 vs なし DHT と DHT レベル) アッセイ内。DHT と雌マウスは DHT 挿入 1.23 のプロトコルに従って、次の 2 週間でなし DHT (図 3) を基準にして耐糖能障害を示した。
女性の子孫はボディ重量と思春期
いくつかのダムが妊娠や子犬を持って、一般的に不妊 (約 30% の妊娠率、ので、我々 をダム 10 の肥沃度をテスト通常 3 妊娠中ダムを取得、プロトコル 2.1 を参照してください)。したがって女性の子孫のダムで慢性的なアンドロゲンの影響を評価できます。挿入 DHT ダムから女性の子孫が DHT の娘と挿入なし DHT ダムからのそれらはなし DHT 娘を呼ばれます。膣口の年齢をなし DHT と DHT の娘の違いは認められなかった。しかし、DHT の娘の最初の発情が著しく遅れた (いいえ DHT 娘のため 35 日; DHT 娘の 42 日目)。これは no DHT 娘に対する DHT の娘で 35 と 42 の PND で減少、体重に関連付けられている (図 4プロトコル 2.4-2.7 を参照してください)。
ホルモン性のレベルおよび女性の子孫の発情周期
テストステロンのレベルは 21 PND で改変されていないが、26PND に縮小されます。70 PND で、テストステロンは増加 (図 5、2.9 から 3.0 のプロトコルを参照してください)。大人の DHT 娘を示した M/D になり、P と E の時間大幅に長い時間を経験して、大人なし DHT 娘に比べて発情周期を中断 (図 6 a, B; 1.17-1.22 のプロトコル方法に従って)。
図 1: マウスの識別。1 つのケージ内マウスはマウスの数を表すための別の位置でパンチの耳です。3 マウス #1 は右の耳のパンチは、#4 に 6 は背部に表示左耳にパンチします。マウスは、#1 と 4 の位置に耳上殴られます場合、それは #7;2、5 では #8;3 と 6 は #9;左耳の中では #10;1 と 10 の位置では #11;などこの図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 2: 血中 DHT レベル。血中 DHT。(A) 血中 DHT 濃度は ELISA、質量分析法によって測定されます。DHT となし DHT の違い絶対値が異なるが類似を示した 2 つのアッセイを折る投与マウス。(B) 血中 DHT フォールドの変更を妊娠前と妊娠時点で非 DHT レベルを基準にしています。いいえ DHT (白棒) と (交尾の前に 1 日) 前に DHT 注入 (黒いバー) 雌マウスと妊娠 (妊娠のおよそ 14 日)。値は、平均 ±S.E.M。 N = グループあたり 5-8。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 3: ブドウ糖負荷試験 (GTT).いいえ DHT と DHT を注入したマウスが一晩絶食し、ブドウ糖 (2 g/kg BW) を腹腔内、注入された尾血糖値を異なる時点で測定しました。DHT は、いいえ DHT 扱われるマウスと比較された 30 〜 120 分間大幅に増加したブドウ糖のレベルを示したマウスを扱われます。値は、平均 ±S.E.M。 N = 4-12 グループごと。* P < 0.05この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 4: 35 と 42 の PND で女性の子孫の減少、体重の妊娠母体の DHT の治療結果です。体重 (y 軸) を示す (x 軸) として出生後の日に測定しました。DHT 公開子孫: 黒いバー;ない-DHT の子孫: 開いているバー。値は、平均 ±S.E.M。 N = グループあたり 9-14。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 5: 血中 DHT レベル。PND 21、26、朝 70 で午前中に採血。いいえ DHT 娘 (白棒) と DHT の娘 (黒いバー) の女性の子孫から (y 軸) の血中 DHT のレベルします。値は、平均 ±S.E.M。 N = グループあたり 5-11。この図は、参考2から変更されているこの図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 6: 成人の娘の妨げられた機能の周期につながる慢性母体アンドロゲン過剰。(A) 女性の子孫の発情周期の表現。(B) 15 日間 (x 軸) 膣細胞の細胞学的検査で測定した各発情期 (y 軸) で費やした時間の割合。値は、平均 ±S.E.M。 N = グループあたり 5-9。発情周期の段階 (y 軸) です。M/D: 会った/発情。P: proestrus;E: 発情。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
表 1: ケタミン ・ キシラジンのカクテル。
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Discussion
検索は、PCOS の重要な機能です。このプロトコルで使用される (2 つの DHT マウスなし DHT マウスでより高い倍) 血清 DHT レベル前の研究で他の研究者によって報告されるそれらより低いし、比例して PCOS5,19、女性を模倣するように校正されています 20,21。他のモデルとは異なりこの 2 倍の DHT モデルは体重と DHT 挿入23,24後 3.5 ヶ月間なし DHT マウスと比較して全体の身体組成を変更しません。これら移植 DHT の成体は、継続的な外因性 DHT によって維持されます。全身体組成は変わらないがリーン PCOS 女性20構造の変化と脂肪細胞の機能を観察されています。異なる拠点の精査が必要です。我々 は DHT 挿入15後 1 週間以内の障害の発情周期の観察し、3 月不妊治療評価23時豊饒の減少します。
DHT の小規模なサブセットが妊娠することができた雌マウスを扱われ、子孫は胎児の発育に pre-gestational、妊娠および授乳 hyperandrogenemia の影響を評価する機会を提供しています。適切に管理された実験を得るために複数の繁殖の女性が必要確立される、少なくとも 10 の交配ペアが余儀無くされます。DHT の娘は妊娠の間にそして 21 PNA の前に、DHT にされるだけです。DHT の娘は、肥満や太り過ぎが観察された生理学的な効果15交絡変数ではないことを示すなし DHT 娘と比較して減少、体重を示した。
初期の研究では時間の経過と共に血中 DHT を検証されます。1、2、3、および 4 週間23,24で血清 DHT に有意差は見つかりません。DHT のレベルは、4 週間後に減少した、したがって、我々 置き換える DHT ペレット 4 週間ごと。彼らは 3 ヶ月間の常温保存が DHT の減少効果は従わない。挿入直前に 24 h のため生理食塩水でペレットをインキュベートすることが重要です。この手順は、DHT のペレット (シラスティック チューブを通してゆっくりと DHT リリース) からのリリースも重要です。DHT の挿入、3 日後に発情周期を調べることができます、スメア検査することがもドライなし生理食塩水と染みの光学顕微鏡下で直接セルに精通してタイプ27後。
代謝表現型評価できます、またはそれ以降に DHT 挿入の 2 週間 (14 日間)。ただし、4 週間 (28 日) の終わりに代謝に DHT の影響は減衰少し生殖機能障害の減衰を認められなかったけれども。したがって、2、3、5、6 の終わりに通常の代謝機能に 7 週間 (14、21、35、42、49 日間、合計 2 回挿入) を評価します。ラボで緩ステロイド ペレットの生産は、異なる研究所33,34で広く採用されている成熟した手法です。 それは $50/ペレット (DHT ペレット、5 mg/ペレット、アイラ、NA 161 90 日) を超えることができる市販の製品にコスト効果の高い代替を表します。商用製品はこのレポートで説明したペレットは、28 日ごとに交換する必要がある間、90 日間の交換する必要がないという利点があります。大規模な研究は、ため、捜査官はより経済的にペレットを交換して 4 週間ごとに必要な追加作業にも独自のペレットを作成を見つけるかもしれない。
他人に観察、慢性の DHT 注入生年月日を表示しない増加 LH 拍動頻度とこれは上昇アンドロゲンの異なる病態をポイント可能性があります後でモデルによる発達と生殖機能と遅発性では、検索を取得しました。このプロトコルでは、慢性的なハイパーアンドロゲン ダムから女性の子孫を調査することがおります。生殖 (例えば卵胞発育、排卵 (黄体) と不妊治療) と (例えば糖や脂質の代謝、身体組成、脂肪デポ代謝の結果を完全に理解しようとするこのモデルを活用することができます。分布)。私達のプロトコルは上昇アンドロゲン誘発生殖、代謝障害を調査する新しいツールを追加します肥満が原因であることができるそれらから上昇アンドロゲンによって引き起こされる病態を分離し、。このモデルは、女性の高アンドロゲンのティッシュ特定の効果を探検する使用ことができます。さらに、他のステロイド ホルモンの研究に DHT ペレット生産のためここで報告された方法論を簡単に適用できます。
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Disclosures
何も開示します。
Acknowledgments
この仕事は健康の国民の協会 (南西に R00 HD068130 で補助金) とボルチモア糖尿病研究センターによって支持された: パイロットと可能性 (南西) に付与します。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Crystalline 5α-DHT powder | Sigma-Aldrich | A8380-1G | |
| Dow Corning Silastic tubing | Fisher Scientific | 11-189-15D | 0.04in/1mm inner diameter x0.085 in/2.15 mm outer diameter |
| Medical adhesive silicone | Factor II, InC. | A-100 | |
| Goggles, lab coats, gloves and masks. | |||
| 10 µL pipette tips without filter | USA Scientific | 11113700 | |
| Microscope slide for smear | Fisher Scientific | 12-550-003 | |
| Diff Quik for staining cells | Fisher Scientific | NC9979740 | |
| Lancet | Fisher Scientific | NC9416572 | |
| 3 mL Syring | Becton, Dickinson and Company (BD), | 30985 | |
| attached needle: 20 G | BD | 305176 | |
| Ruler: any length than 10 cm with milimeter scale. | |||
| Xylazine | Vet one AnnSeA LA, MWI, Boise | NDC13985-704-10 | 100 mg/mL |
| Ketamine Hydrochloride | Hospira, Inc | NDC 0409-2051-05 | 100 mg/mL |
| Surgical staple | AutoClip® System, Fine Science Tool | 12020-00 | |
| Insulin syringe | BD | 329461 | 1/2 CC, low dose U-100 insulin syringe |
| Trocar | Innovative Research of America | MP-182 | |
| Microscope | Carl Zeiss Primo Star | 415500-0010-001 | Germany |
| Ear punch | Fisher Scientific | 13-812-201 | |
| Testosterone rat/mouse ELISA kit | IBL | B79174 | |
| DHT ELISA kit | Alpha Diagnostic International | 1940 | |
| One touch ultra glucometer | Life Scan, Inc. | ||
| One touch ultra test stripes | Life Scan, Inc. | ||
| Eppendorf tube | Fisher Scientific | 05-402-18 | |
| Razor blade | Fisher Scientific | 12-640 | |
| Clidox | Fisher Scientific | NC0089321 | |
| surgical underpad | Fisher Scientific | 50587953 | Manufacturer: Andwin Scientific 56616018 |
| Betadine Antiseptic Solution | Walgreens | ||
| 3M Vetbond (n-butyl cyanoacrylate) | 3M Science. Applied to Life |
References
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