Summary
Describimos el desarrollo de un modelo de ratón de SOP-como magro con dihidrotestosterona pelotilla para el estudio de la fisiopatología del SOP y la descendencia de estas presas como SOP.
Abstract
Hyperandrogenemia juega un papel fundamental en la función reproductiva y metabólica en las hembras y es el sello distintivo del síndrome de ovario poliquístico. Desarrollo de un modelo de ratón de SOP-como magro que imita a las mujeres con SOP es clínicamente significativo. En este protocolo, se describe dicho modelo. Mediante la inserción de una longitud de 4 mm de pastilla de polvo de cristal DHT (dihidrotestosterona) (longitud total de la pelotilla es 8 m m), y reemplazarlo cada mes, que son capaces de producir un modelo de ratón de SOP-like con doblez de 2 los niveles DHT suero mayor que los ratones no implantados con DHT (no-DHT). Se observó disfunción reproductiva y metabólica sin cambiar el peso corporal y composición corporal. Mientras que exhibe un alto grado de infertilidad, un pequeño subconjunto de estos ratones hembra SOP-como puede quedar embarazado y sus hijos muestran retraso de la pubertad y aumento de la testosterona como adultos. Este modelo de ratón magro como PCOS es una herramienta útil para el estudio de la fisiopatología del SOP y la descendencia de estas presas como PCOS.
Introduction
Hiperandrogenismo es el síndrome de ovario poliquístico (SOP) según los criterios del NIH y del exceso de andrógenos y SOP (AE-SOP) la sociedad. Las mujeres con SOP tienen dificultad para quedar embarazadas y han aumentado el riesgo de embarazo complicaciones1. Incluso si consiguen embarazadas, su descendencia femenina tiene una de2,de los resultados adversos para la salud3. Se han desarrollado modelos animales usando varias estrategias4,5,6,7,8,9,10,11 , 12 y exhibe muchas características del SOP (anovulación, y tolerancia deteriorada de la glucosa y la insulina) con mayor peso corporal y obesidad había asociada con el tamaño del adipocito agrandado y aumentó el peso del adipocito. Hay dos estrategias principales para producir modelos de animales que se utilizan para el estudio de PCOS. Uno es el tratamiento con altos niveles de andrógenos directamente (inyección de andrógenos exógenos, inserción) o indirectamente (por ejemplo, bloqueando la conversión de andrógenos a estrógenos con inhibidor de la aromatasa) después nacimiento13. Otro es por hyperexposure fetal de andrógenos durante la gestación14,15 estudiar la descendencia. Por ejemplo, la hembra crías de mono rhesus16,17, ovejas18y roedores expuestos a niveles masculinos de andrógenos durante el período intrauterino desarrollan SOP-como rasgos más adelante en la vida. Estos modelos habían mejorado significativamente nuestra comprensión de los efectos de andrógenos elevados y programación fetal y uterinos efectos ambientales. Sin embargo, estos modelos tienen sus propias limitaciones: 1) los animales desarrollan obesidad y por lo tanto es difícil separar los efectos del hyperandrogenemia reproductiva inducida por la obesidad y la disfunción metabólica; 2) antes del embarazo, las mujeres con SOP ya exhiben altos niveles de andrógenos, así ovocitos han sido expuestos a andrógenos en exceso antes de la fecundación; 3) las dosis farmacológicas de la testosterona (T) o dihidrotestosterona (DHT) usado después del nacimiento o durante la gestación pueden no reflejar el ambiente de andrógeno de PCOS. Se han medido los niveles de testosterona y DHT en suero y en líquido folicular ovárico y testosterona y los niveles DHT son 1.5 a 3.9 veces mayor en mujeres con SOP5,19,20,21 ,22,23 en comparación con las mujeres. Hemos creado un ratón adulto modelo23,24,25 que se desarrolla la disfunción reproductiva y metabólica dentro de dos semanas de la iniciación de la exposición crónica de DHT de la inserción de un pellet con 4 mm de longitud de polvo de cristal DHT (longitud total de la pelotilla es 8 m m). Este modelo produce suero DHT niveles sobre 2 superior (denominado 2xDHT) que el de los ratones de control sin tratamiento de DHT. Los ratones 2xDHT no presentan alteraciones del estradiol del suero basal, testosterona, LH y no no desarrollar obesidad y muestran similar peso ovárico, los niveles séricos de colesterol, ácidos grasos libres, leptina, TNFα y IL-623,24, 25 relativas a controles hasta 3,5 meses después de DHT inserción23,24,25. Además, por el apareamiento de las hembras que ya han desarrollado características del SOP, podemos estudiar el impacto de un ambiente materno hyperandrogenic en la salud metabólica y reproductiva de la descendencia15.
Este nuevo paradigma (pertinente a los criterios NIH y sociedad AE-SOP) modelos de la enfermedad mediante la producción de niveles relativamente similares de andrógenos a las mujeres con SOP 2 - 3-fold mayor testosterona o niveles de DHT en comparación con las mujeres. Sin embargo, este modelo se mantiene por DHT exógena continua y no de hiperandrogenismo endógeno programada, una vez que se retira el DHT. El objetivo general de este artículo es concentrarse en 1) Cómo hacer que el perdigón DHT; 2) Cómo generar un SOP lean como modelo de ratón; 3) estrategias para evaluar la descendencia femenina de estas represas. Otras medidas y la evaluación de fenotipos no se abordan en este manuscrito, pero pueden encontrarse en5,15,23,24,25,26.
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Protocol
Aquí, presentamos protocolos detallados para la inserción y preparación de pellets DHT y para la prueba metabólica y reproductiva. Los ratones utilizados en este estudio fueron un fondo mixto (C57/B6, CD1, 129Sv) y se mantuvieron con alimento y agua ad libitum en un ciclo de luz/oscuridad de 14/10 h a 24 ° C en las instalaciones de edificio de Broadway de investigación animal en la Facultad de Universidad de Johns Hopkins de Medicina. Todos los procedimientos fueron aprobados por la Comisión de uso y de Johns Hopkins Universidad Animal Care.
1. crear el modelo de ratón de síndrome-como
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Preparación de pellets DHT
- Tubo de silastic de autoclave para esterilizar. Cortar los tubos de silastic a una longitud de 15 mm con una cuchilla de afeitar;
- Sellar un lado inyectando silicona adhesiva médica en el tubo con una aguja blunted 20 G conectada a una jeringa de 3 mL. Émbolo debe ser retirado de la jeringa y luego adhesivo insertada en el depósito. El émbolo se reinserta y adhesivo hacia abajo hasta que comience a salir de la aguja. La aguja blunted se hace cortando el lado de la extremidad aguda de la aguja de 20 G con cualquier tijera fuerte. La longitud de silicio en el tubo debe ser más de 2 mm para permitir el recorte de la producción;
- Seque durante la noche; Si hay burbujas de aire en el lado cerrado. Los sin burbujas de aire se utilizan para las pelotillas de DHT. Otros pueden utilizarse para las pelotillas de control no-DHT.
- Usar guantes, mascarilla, gafas y bata de laboratorio antes de hacer pellets de DHT en una campana para evitar la exposición de la DHT a la piel.
- Verter polvo DHT en un recipiente plástico peso barco y presione el lado abierto del adhesivo capsulada tubos (producidos en A1.1) en el polvo de la DHT.
- Polvo DHT puede se apisona con un clip de papel grande que se endereza. Continúe hasta que la DHT alcanza una altura de 4 m m (o la longitud deseada). Compruebe la longitud de la DHT con una regla y selle el lado abierto con silicio, seco durante la noche.
- Corte cada lado sellado para hacer que la longitud de silicona 2 mm de largo. La longitud total de la pelotilla será 8 mm.
- Sellar ambos lados del tubo de vacío de silastic como pelotilla del control (no-DHT).
- Mantenga pastillas en un tubo cónico de 50 mL, envuelto con papel de aluminio (para evitar la exposición a la luz) a temperatura ambiente hasta su uso. Los pellets DHT mantienen eficacia plena durante al menos 3 meses de almacenamiento.
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Reemplazo e inserción de DHT
- Hasta 20 DHT pellets o gránulos de control se introducen por separado en un tubo cónico de 50 mL con solución salina al de 0.9% estéril 30 mL por 24 h a 37 °C para conseguir el equilibrio justo antes de la inserción.
- Antes de la cirugía, las superficies y los guantes son desinfectados con clidox y las superficies de trabajo están cubiertas con papel absorbente con plástico (cojín quirúrgico). Todos los instrumentos que entran en contacto con animales son descontaminados antes de entrar en el Animalario en autoclave. Instrumentos permitirá seco y fresco antes de su uso.
- se utilizan ratones hembra 2 meses de edad (4-5 ratones/jaula). Ratones se inyectaron por vía intraperitoneal con xilacina (3,5 mg/kg bw) y ketamina (78,8 mg/kg bw) usando una jeringa de insulina. Cálculos para la mezcla y dosificación de la anestesia es en la tabla 1.
- Después de anestesia adecuada se logra, según lo medido por la pérdida del reflejo del dedo del pie y lenta la respiración, el ratón será preparado para la cirugía.
- Desinfectar la piel de la zona con betadine con una gasa estéril y de limpiar con etanol al 70%. Otra vez se pintarán la zona con betadine.
- Un orificio de alrededor de 5 mm de longitud con las tijeras debajo de la piel cerca del cuello. Usando un trochar de 10 G, haga un pequeño túnel (15 mm) en dirección rostral. La pastilla se inserta dorsalmente con el trochar.
- La apertura luego se sella con pegamento quirúrgico. Manual aproximado la herida los bordes con pinzas y movimientos de cepillado suave para aplicar una capa delgada de adhesivo líquido a los bordes de la herida aproximados. Capas delgadas de 3 la acumulación de pegamento para asegurar que el adhesivo se distribuye uniformemente sobre la herida. El adhesivo debe extenderse 1 cm a cada lado de los bordes de la herida yuxtapuestos. Suturas o clips quirúrgicos pueden utilizarse también para cerrar el agujero. Vuelva a poner ratones en la jaula, alojada individualmente, con una almohadilla de calor para la recuperación. Reemplazar pellet cada 4 semanas para mantener un nivel constante de exposición del andrógeno. Se eliminará la pastilla original y nuevo pellet se insertará como se describe en A1.15 en posición similar.
- Prueba de ciclicidad estral después de 3 días de la inserción de la DHT. Etapa del ciclo estral es evaluado mediante citología vaginal. Las células vaginales son recogidas por 16 días consecutivos utilizando una pipeta p10 para chorros de solución salina estéril (aproximadamente 10 μl) en la cavidad vaginal y luego retirar la solución salina con la misma punta de pipeta estéril. Las células vaginales mudadas de la pared vaginal mezclan con solución salina y se recogen.
- Solución salina con las células sobre un portaobjetos rotulado se separó. Cada diapositiva puede contener seis muestras. Diapositivas están etiquetadas a la nota que muestra se coloca en cada uno de los seis lugares.
- Después de la solución salina haya secado por completo de la diapositiva, poner el portaobjetos en un recipiente con etanol al 100% para fijar las células. Diapositivas se fijarán durante al menos 5 minutos, pero pueden permanecer en fijador indefinidamente hasta su uso posterior.
- Poner diapositivas en soluciones de tinción para 1 minuto de tampón B y C. Wash portaobjetos con agua corriente y seca a temperatura ambiente.
- Examinar la morfología celular en un microscopio de luz objetiva de 10 X. Morfología de la célula para distinguir el proestro (P), (E) de estro, metestro (M) y diestro (D) se describe en referencias27,28,29.
- Cuenta los días en cada etapa y dividirán por el número total de días para calcular porcentaje tiempo en cada etapa.
- Prueba de tolerancia a la glucosa a los 21 días después de la inserción de DHT por ayuno los ratones durante la noche (16 h) y la inyección intraperitoneal de 2 g/kg de peso corporal de dextrosa 20%. Por ejemplo, si un peso corporal de ratón es 25 g, este ratón se inyectará con 250 μl de dextrosa 20% con una jeringa de insulina de 50 cc (0,5 mL). Glucómetro y las tiras reactivas evalúa los niveles de glucosa mediante el muestreo de sangre de vena de la cola en el 0, 15, 30, 60, 90, 120 min. Esto se describe en detalle en otra parte30.
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Colección de la sangre
- Recoja la sangre en varios días después de la inserción de la DHT (que límite de volumen de la colección 100 μL para esteroides y 30ul para análisis de LH/FSH) entre el 9 y 10:00 por vena submaxilar sangrado con la lanceta. Esto se describe en11.
- Centrifugar la sangre a 6.000 x g a 4 ˚C por 10 min y recoger la capa de suero en otro tubo de 1.5 mL que puede ser almacenado a-80 °C hasta análisis.
2. evaluación reproductiva perfiles de descendencia femenina de crónico DHT insertan presas
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Apareamiento
- Desplazar el ratón hembra a probarse en la jaula con un macho fértil probada (que previamente ha tenido cachorros con un ratón hembra) a los 15 días después de la inserción de pellets.
- Documento de peso corporal de la presa cada semana para determinar si el ratón está embarazado. Presa aumenta de peso de más de 3 g en una semana indica embarazo.
- Recoger la sangre de las presas la segunda semana después de que observamos mayor peso de las presas más de 3 g de la semana anterior.
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Determinado por la abertura vaginal y el primer estro de la pubertad
- Compruebe la abertura vaginal mediante inspección visual cada día después de que los cachorros son destetados a 21 días después del parto (PND), medir la distancia anogenital y registrar la edad de apertura vaginal.
- Una vez que se abre la vagina, recoger las células vaginales todos los días, como se describe en 1.2.8–1.2.11 para comprobar ciclicidad estral.
- Observar la morfología de la célula como 1.2.12 descrito, y el primer estro se define como la fecha que todas las células son cornified las células epiteliales.
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Cuerpo peso y oído punch
- Sumergir la extremidad de la lanceta en la pasta de tatuaje y marque cada cachorro con tatuaje en el dedo del pie como se describe en la referencia12 7 PND y pesar ratones cada 7 días hasta los 70 días de edad.
- Ratones de golpe de oído a numerarlos utilizando el sistema en la figura 1 entre 12 a 16 PND. Para distinguir el sexo, examinar el lado ventral del cuerpo, las hembras tienen pezones visibles.
- Recoja la sangre en el 21, 26, 70 PND después del nacimiento como se describió anteriormente en 1.3.1
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Análisis hormonales
- Los niveles de DHT en suero de sangre se miden por ambos análisis enzima-ligado del inmunosorbente (ELISA) y por tándem cromatografía líquida masa espectrometría (LC-MS)23,24,31,32. T se mide por LC-MS, o un rata/ratón ELISA que ha sido validado por la base de ensayo de ligando de Universidad de Virginia en el centro de investigación en reproducción23,24.
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Representative Results
Niveles de DHT y prueba de tolerancia a la glucosa
Niveles de DHT se midieron de suero recolectado por tanto ELISA y por LC-MS según protocolo 1.24, 1.25 y 2.9, 3.0. Los valores absolutos DHT son diferentes entre espectrometría de masas y ELISA, sin embargo, el repliegue relativo (aproximadamente 2 veces) de vs DHT DHT no es similar de ambos ensayos y a través de experimentos de15,23,24 ( Figura 2A). Niveles de DHT son aumentó significativamente de preconcepción embarazo en ratones DHT y no-DHT, sin embargo, los niveles DHT son 2 mayores en los ratones DHT en comparación con los ratones no-DHT tanto pregestacional (un día antes del apareamiento) y gestacional (alrededor de 14 días) puntos del tiempo (figura 2B). Puesto que los niveles absolutos de DHT diferencian entre ELISA y LC-MS, calcular niveles relativos (doble cambio: nivel DHT con inserción de DHT inserción vs no-DHT) dentro de los ensayos. Ratones hembra con DHT mostraron intolerancia a la glucosa en relación con no-DHT (figura 3) en 2 semanas después de la inserción de DHT según protocolo 1.23.
Descendencia femenina cuerpo peso y pubertad
Mientras que generalmente estériles, algunas presas embarazarse y tienen crías (alrededor del 30% tasa de embarazo, así que prueba fertilidad de 10 presas serán generalmente obtener 3 presas embarazadas, hace referencia al protocolo 2.1). Por lo tanto podemos evaluar efectos andrógenos crónica en presas en la descendencia femenina. Descendencia femenina de las presas DHT insertado se llama a hijas de DHT, y los de las presas no-DHT insertado se llaman a hijas de DHT no. No se observó ninguna diferencia entre no-DHT y DHT-hijas de la edad de apertura vaginal. Sin embargo, el primer estro de las hijas de DHT se retrasará (día 35 hija de DHT no; día 42 para DHT-hija). Esto se asocia con disminución del peso corporal en el PND de 35 y 42 en DHT-hijas con respecto a hijas de DHT no (figura 4; hace referencia al protocolo 2.4 – 2.7).
Los niveles hormonales y ciclicidad estral en descendiente femenino
Los niveles de testosterona no se alteran en el PND 21, pero se reducen a 26PND. Sin embargo, la testosterona se incrementa en 70 PND (figura 5, se refieren al protocolo 2.9-3.0). Hijas adultas de DHT mostraron perturbado ciclicidad estral comparado con hijas de adultos no-DHT, experimentando tiempos significativamente más largos en d y menos tiempo en P y E (figura 6A, B; según el método de protocolo de 1.17-1.22).
Figura 1: identificación del ratón. Dentro de una jaula, ratón es oído perforado en diversa posición para representar el número de ratón. Ratón Nº 1 a 3 se perfora en la oreja derecha, y #4 a 6 se perfora en la oreja izquierda vista dorsalmente. Si el ratón se perfora en las orejas en la posición #1 y #4, es #7; a 2 y 5, es #8; a 3 y 6 es #9; en el centro de la oreja izquierda es #10; en la posición 1 y 10 es #11; etc. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 2: suero DHT niveles. Niveles de DHT. (A) se miden los niveles de DHT suero por ELISA y espectrometría de masas. Aunque los valores absolutos son diferentes, los dos ensayos mostraron similares doblan diferencias DHT DHT no tratar ratones. (B) cambio de doblez de suero DHT en relación con los niveles de DHT no en momentos preconcepcional y gestacional. (Barras abiertas) de DHT-no y ratones hembra implantado DHT (barras negras) antes (un día antes del apareamiento) y durante el embarazo (alrededor de 14 días de gestación). Los valores son medias ±S.E.M. N = 5-8 por grupo. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 3: prueba de tolerancia a la glucosa (GTT). No-DHT y DHT implantado ratones se mantuvieron en ayuno durante la noche y glucosa (2 g/kg P.C.) se inyecta por vía intraperitoneal, y cola de glucosa en sangre se midió en diferentes puntos temporales. Ratones DHT tratado mostraron niveles significativamente creciente de la glucosa entre 30 a 120 min en comparación con los ratones tratado no-DHT. Los valores son medias ±S.E.M. N = 4-12 por grupo. * P < 0.05 haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 4: tratamiento de DHT materna antes del embarazo dio lugar a disminución del peso corporal en la descendencia femenina en PND 35 y 42. Peso corporal (eje y) se midió en los días después del parto como se muestra (eje x). Expuestos al DHT descendencia: barra negra; sin descendencia – DHT: barra libre. Los valores son medias ±S.E.M. N = 9-14 por grupo. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 5: suero DHT niveles. Se extrajo sangre por la mañana en PND 21, 26, 70 en la mañana. Niveles de DHT suero (eje y) de la descendencia femenina de hijas (barras abiertas) de DHT-no y DHT-hijas (barras negras). Los valores son medias ±S.E.M. N = 5-11 por grupo. Esta cifra ha sido modificada de referencia2haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 6: exceso del andrógeno materno crónica conduce a la ciclicidad perturbado en adultos hijas. (A) representación de ciclicidad estral de descendencia femenina. (B) el porcentaje de tiempo gastado en cada etapa de estro (eje y) durante 15 días (eje x) medidos por la examinación citológica de las células vaginales. Los valores son medias ±S.E.M. N = 5-9 por grupo. La etapa del ciclo estral (eje y). D: met/diestro; P: proestro; E: estro. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Tabla 1: Ketamina/xilacina cóctel.
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Discussion
Hiperandrogenismo es una característica clave de PCOS. Los niveles séricos DHT (dos veces más en ratones DHT que en ratones no-DHT) utilizados en este protocolo son inferiores a los reportados por otros investigadores en estudios previos y están calibrados para imitar proporcionalmente las mujeres con SOP5,19, 20,21. A diferencia de otros modelos, este modelo DHT 2 veces no altera el peso corporal y la composición de todo el cuerpo en comparación con los ratones no-DHT hasta 3,5 meses después de DHT inserción23,24. Estos ratones adultos de DHT implantado se mantienen por DHT exógena continua. Aunque no se altera la composición de todo el cuerpo, alteración de la estructura y función de los adipocitos se ha observado en magra de las mujeres SOP20. Un examen cuidadoso de diferentes depósitos está garantizado. Observamos deterioro ciclicidad estral dentro de una semana después de la inserción de DHT15 y reduce la fertilidad durante un mes 3 fertilidad evaluación23.
El pequeño subconjunto de DHT trataron ratones femeninos que fueron capaces de quedar embarazada y descendencia proporcionaron una oportunidad para evaluar el impacto del hyperandrogenemia pregestacional, gestacional y de enfermería en el desarrollo fetal. Para conseguir un experimento bien controlado, se necesitan varias hembras de cría que exige que al menos 10 pares de acoplamiento establecido. DHT-hijas sólo están expuestos al DHT durante la gestación y antes de PNA 21. DHT-hijas demostraron disminución del peso corporal comparado con hijas no DHT, lo que indica que la obesidad o sobrepeso no es una variable de confusión en los efectos fisiológicos observados15.
En estudios iniciales, validamos los niveles séricos de DHT en el tiempo. No se encontraron significativas diferencias en suero DHT en 1, 2, 3 y 4 semanas23,24. Niveles de DHT disminuidos después de 4 semanas, por lo tanto, sustituimos la pelotilla DHT cada 4 semanas. No observamos efectos reducción de DHT incluso que se han almacenado a temperatura ambiente durante 3 meses. Es importante incubar pellets en solución salina durante 24 h antes de la inserción. Este paso es vital para la liberación incluso de DHT de la pelotilla (comunicado de DHT lentamente a través del tubo de silastic). Ciclicidad estral puede ser examinado después de 3 días de la inserción de DHT, y Frotis vaginal pueden ser también examinado directamente en la solución salina sin seco y manchas debajo de un microscopio de luz después de que está familiarizado con la célula tipos27.
Fenotipo metabólico puede evaluarse en, o después, 2 semanas (14 días) de la inserción de la DHT. Sin embargo, los efectos de la DHT sobre el metabolismo en el final de la cuarta semana (28 días) se atenúan un poco, aunque no hay atenuación se observa disfunción reproductiva. Por lo tanto, evaluamos la función metabolismo normalmente al final de 2, 3, 5, 6, 7 semanas (14, 21, 35, 42 y 49 días, 2 veces en total inserción). La producción de pellets esteroides de liberación lenta en el laboratorio es una técnica madura que ha sido adoptada ampliamente por diferentes laboratorios33,34. Representa una alternativa rentable a los productos comercialmente disponibles, que puede superar los $50 o el sedimento (90 días DHT de la pelotilla, 5mg/de la pelotilla, IRA, NA-161). El producto comercial tiene la ventaja de no necesitar ser substituido por hasta 90 días, mientras que el sedimento que se describe en este informe necesita ser reemplazada cada 28 días. Para estudios a gran escala, los investigadores pueden encontrar más económico para producir sus propios pellets incluso con el trabajo adicional requerido para reemplazar pastillas cada 4 semanas.
Según lo observado por otros, modelos con la implantación de DHT crónica después de nacimiento no muestran aumento LH pulsátil frecuencia y esto pueden señalar diferentes mecanismos patológicos de andrógenos elevada inducida por función reproductiva entre desarrollo y adquirió la tardía hiperandrogenismo. Con este protocolo, que son capaces de investigar la descendencia femenina de crónico hyperandrogenic presas. Podemos aprovechar este modelo para tratar de comprender la reproducción (por ejemplo, el desarrollo folicular, la ovulación (cuerpos lúteos) y fertilidad) y consecuencias metabólicas (por ejemplo glucosa o lípidos metabolismo, composición corporal, depósito adiposo distribución). Nuestro protocolo agrega nueva herramienta para investigar andrógeno elevado inducido reproductiva y metabólica disfunción; y disocia la patofisiología causada por andrógenos elevados desde los que podría ser debido a la obesidad. Este modelo puede utilizarse para explorar los efectos específicos del tejido de andrógenos elevados en las mujeres. Además, la metodología aquí registrada para producción de pellets DHT puede aplicarse fácilmente al estudio de otras hormonas esteroides.
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Disclosures
Nada que revelar.
Acknowledgments
Este trabajo fue financiado por los institutos nacionales de salud (subvenciones R00-HD068130 a S.W.) y el centro de investigación de Diabetes de Baltimore: pilotos y viabilidad subsidio (S.W.).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Crystalline 5α-DHT powder | Sigma-Aldrich | A8380-1G | |
| Dow Corning Silastic tubing | Fisher Scientific | 11-189-15D | 0.04in/1mm inner diameter x0.085 in/2.15 mm outer diameter |
| Medical adhesive silicone | Factor II, InC. | A-100 | |
| Goggles, lab coats, gloves and masks. | |||
| 10 µL pipette tips without filter | USA Scientific | 11113700 | |
| Microscope slide for smear | Fisher Scientific | 12-550-003 | |
| Diff Quik for staining cells | Fisher Scientific | NC9979740 | |
| Lancet | Fisher Scientific | NC9416572 | |
| 3 mL Syring | Becton, Dickinson and Company (BD), | 30985 | |
| attached needle: 20 G | BD | 305176 | |
| Ruler: any length than 10 cm with milimeter scale. | |||
| Xylazine | Vet one AnnSeA LA, MWI, Boise | NDC13985-704-10 | 100 mg/mL |
| Ketamine Hydrochloride | Hospira, Inc | NDC 0409-2051-05 | 100 mg/mL |
| Surgical staple | AutoClip® System, Fine Science Tool | 12020-00 | |
| Insulin syringe | BD | 329461 | 1/2 CC, low dose U-100 insulin syringe |
| Trocar | Innovative Research of America | MP-182 | |
| Microscope | Carl Zeiss Primo Star | 415500-0010-001 | Germany |
| Ear punch | Fisher Scientific | 13-812-201 | |
| Testosterone rat/mouse ELISA kit | IBL | B79174 | |
| DHT ELISA kit | Alpha Diagnostic International | 1940 | |
| One touch ultra glucometer | Life Scan, Inc. | ||
| One touch ultra test stripes | Life Scan, Inc. | ||
| Eppendorf tube | Fisher Scientific | 05-402-18 | |
| Razor blade | Fisher Scientific | 12-640 | |
| Clidox | Fisher Scientific | NC0089321 | |
| surgical underpad | Fisher Scientific | 50587953 | Manufacturer: Andwin Scientific 56616018 |
| Betadine Antiseptic Solution | Walgreens | ||
| 3M Vetbond (n-butyl cyanoacrylate) | 3M Science. Applied to Life |
References
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