Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Behavior
Click here for the English version

Behavior

En visuell Guide för att studera beteendemässiga försvar att patogenen attacker i blad-skärning myror

Published: October 12, 2018 doi: 10.3791/58420
Automatic Translation
1, 1, 1
1Centre for Social Evolution, Section for Ecology and Evolution, Department of Biology, University of Copenhagen

Summary

Vi presenterar en visuell guide till sjukdom försvar beteenden i blad-skärning myror, med enskilda klipp och tillhörande definitioner, illustreras i en experimentell infektion scenario. Vårt huvudmål är att hjälpa andra forskare identifiera viktiga defensiva beteenden och att tillhandahålla en gemensam förståelse för framtida forskning på detta område.

Abstract

Den komplexa livsstilen, evolutionära historia Avancerat samarbete och sjukdom försvar av leaf-skärning myror är väl studerat. Även om många studier har beskrivit de beteenden i samband med sjukdom försvar och associerade användning av kemikalier och antimikrobiella medel, har ingen gemensam visuell referens gjorts. Huvudsyftet med denna studie var att spela in korta klipp av beteenden som är involverade i sjukdomen försvar, både profylaktiskt och direkt riktade mot en antagonist av kolonin efter infektion. Att göra så vi använde en infektion experiment, med sub kolonier av leaf-skärning ant arten Acromyrmex echinatior, och den mest betydande kända patogena hotet myrorna svamp gröda (Leucoagaricus gongylophorus), en specialiserad patogena svampar i släktet Escovopsis. Vi filmade och jämförde infekterade och icke-infekterade kolonier, i både tidiga och mer avancerade stadier av infektionen. Vi kvantifieras viktiga defensiva beteenden över behandlingar och visar att de beteendemässiga Svaren till patogen attack sannolikt varierar mellan olika kaster av arbetstagaren myror och mellan tidiga och sena detektion av ett hot. Baserat på dessa inspelningar som vi har gjort ett bibliotek av beteendemässiga klipp, tillsammans med definitioner av de viktigaste enskilda defensiva beteenden. Vi räknar med att sådan vägledning kan utgöra en gemensam referensram för andra forskare som arbetar inom detta område, att erkänna och studera dessa beteenden, och också ge större utrymme för att jämföra olika studier för att i slutändan hjälpa bättre förstå rollen dessa beteenden spela i sjukdom försvar.

Introduction

Leaf-skärning myror är avancerade sociala insekter, utgör några av de mest komplexa kolonierna på jorden. De är en härledd gren av svamp växande myrorna (stammen Attini) bestående av de två släkten Acromyrmex och Atta1. De odlar svamp gröda arten Leucoagaricus gongylophorus (basidiesvampar: Agaricales), som de lita på som sin huvudsakliga mat källa2,3. Myrorna leverera denna svamp med färska blad material för sin tillväxt och svampen i gengäld producerar näringsrika svullna hyphal tips (gongylidia) som konsumeras av myrorna och deras barnaskaran. Kolonierna är byggda under jord, svamp grödan bibehålls i externa gardens4,5och ant bönderna skydda sina grödor monokultur från potentiella patogener6,7,8 ,9,10,11,12. Kolonierna dela arbetet mellan arbetstagare av olika storlek (kast) och ålder13,14,15, som sträcker sig till försvar av myror och gröda från patogener.

Vi kan förvänta att blad-skärning Myra kolonier bör vara sårbara för sjukdomen. Grupp levande förväntas underlätta spridningen av sjukdomar mellan omsorgspersonal på grund av täta interaktioner och därmed lättare transmission16. Myrorna är mottagliga för entomopathogenic svamp parasiter, såsom Metarhizium arter och Beauveria bassiana6. Dessa parasiter är generalister och förekommer ofta i marken nära den Bon7,8. Odling av svamp grödan som en monokultur4,gör5 det sannolikt att också vara mottagliga för sjukdomen17,18. Det kan vara infekterade av generalist svamp parasiter (inklusive Aspergillus niger och Trichoderma arter3); dock det mest betydande hotet är en specialist necrotrophic svamp i släktet Escovopsis (Ascomycota: Hypocreales)11. Genom utsöndring av mycolytic enzymer och andra föreningar, Escovopsis dödar och erhåller näringsämnen från svampen gröda12, med potentiellt dödliga konsekvenser för Myra kolonier11,19.

För att bekämpa sjukdomen hot, har myrorna anmärkningsvärda försvar på både individ och kolonin nivå, att kombinera biologisk bekämpning, beteendemässiga och kemiska försvar att agera profylaktiskt och, när nödvändigt, som svar på infektion. Sammantaget dessa försvar förebygga eller minska effekterna av infektioner från både generalist patogener och specialister såsom Escovopsis. De innebär i huvudsak att undvika sammandragning av parasiter i miljö20, hindra parasiter från att ange boet, och begränsa smittspridning inom Bon. De första raderna i försvar inkluderar kemikalier från körtel sekret3,21,22,23,24,25,26, 27 att desinficera växt substrat, genom arbetstagare slicka dem före inkorporeringen i svampen trädgård och myror som utför både själv- och allogrooming. När grooming själva, särskilt vid inträdet boet, kan arbetstagare också gälla sura fekal sekret deras kropp27. Dessa profylaktiska försvar är bevisligen viktig till undvika infektion av patogena hot6,7,8,9,10,11, 12.

Om inledande försvar misslyckas och en patogen som Escovopsis lyckas komma in boet och svampen trädgården, och om infektionen upptäcks tidigt, använder myrorna svampen grooming att ta bort sporer25,28. Myrorna kan tillämpa sekret från metapleural körtlar eller överföra sporer till infrabuccal fickan (en munhålan), där de blandas med en kemisk cocktail som innehåller metapleural och labial körtel sekret26. Det finns mer än 20 kända föreningar i dessa körtlar, inklusive γ - keto-, karboxyl- och indoleactic syror3. Dessa är aktivt tillämpad25, har antibiotika, fungistatisk och svampdödande egenskaper29, och kan hämma Escovopsis spore grobarhet30. Sporer som lagras i infrabuccal ficka utvisas senare utanför den koloni31,32. De flesta av denna svamp grooming efter tidig detektering utförs av mindre arbetstagare28,33. Men om en patogen lyckas undvika upptäckt och sprider inom svampen trädgården, både mindre och större arbetstagare ogräs infekterade delarna svampen28och denna borttagna materialet deponeras utanför boet31. Dessutom art i släktet leaf-skärning Acromyrmex använda biologisk bekämpning i form av antibiotika som produceras av symbiotiska Actinobacteria34,35,36— underhålls på de ant nagelband37huvudsakligen unga stora arbetare34,38,39,40— att producera föreningar som förhindrar mycelial tillväxt av Escovopsis 34 , 38 , 41. denna antibiotika produktion kan i sin tur försämras av Escovopsis-producerade föreningar under en infektion19.

Figure 1
Figur 1: Ant morfologiska egenskaper. En schematisk skiss av en Myra som visar de morfologiska strukturer som nämns i protokollet. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Leaf-skärning ant försvar utgör således en integrerad montering av beteendemässiga och kemiska mekanismer som tillsammans ger dessa myror med mycket effektivt skydd mot sjukdom42. Förstå dessa försvar är av stort intresse, och de har varit omfattande forskat16,20,42,43,44. En visuell sammanställning av defensiva beteenden som skulle hjälpa entydig definition och beskrivning av dem för systematisk användning av forskare är dock, att vår kunskap, inte tillgängliga. Även om den terminologi som används för att beskriva ant beteende är relativt standardiserade, är det därför inte säkert att samma beteende gärningar heter konsekvent i olika studier. Här är vårt främsta mål att åtgärda detta genom att ge tydlighet och standardisering genom en sammanställning av videoinspelningar av enskilda profylaktisk och defensiva beteenden tillsammans med tillhörande definitioner. Vi filmade dessa klipp under ett beteende experiment, där vi observerade och kvantifieras beteenden i samband med experimentella Escovopsis infektioner av Acromyrmex echinatior sub kolonierna, vars resultat vi presenterar också här som ett belysande exempel på hur denna sammanställning kan användas för beteendevetenskapliga studier.

Protocol

1. Escovopsis isolering

  1. Isolera Escovopsis stammar från Acromyrmex echinatior laboratorium kolonier, genom att placera svampen trädgård fragment, med myror bort, på en petriskål med fuktig bomullstuss i flera dagar tills Escovopsis gror och sporulates. Överföra sporer till potatis dextros agarplattor (PDA, 39 g/L) och inkubera vid ca 23° C i ungefär två veckor.
    Obs: En stam användes i den aktuella studien.
  2. Använd en steril nål för att plocka ut mogna sporer från dessa första plåtar. Plocka tillräckligt sporer att täcka spetsen på nålen.
  3. Inokulera sporer på nya plattor under sterila förhållanden och inkubera vid ~ 23 ° C i cirka två veckor.
  4. När hyfer har täckt hela plattan och vuxit till mogna bruna sporer, upprepa steg 1.3 men denna gång med sporer från den nya PDA-plattan.
  5. Upprepa processen tills ett rena bestånd av Escovopsis för varje stam är förvärvade (inga synliga föroreningar som växer på eller under plattan ytan).

2. experimental set-up

  1. Använd tre A. echinatior kolonier.
    Obs: Här kolonierna Ae160b, Ae322 och Ae263 användes.
  2. Från varje koloni, göra 12 sub kolonier. Gör sex sub kolonier för observation efter 0 h och sex sub kolonier för observation efter 72 h. Detta ger totalt 36 sub kolonier. Markera hälften av sub kolonierna från varje ”förälder” koloni som kontroll, och den andra hälften som'Escovopsis behandling'.
    Obs: Medan i överordnade kolonier närvaron av en drottning påverkar arbetstagaren beteende, vi förväntar oss (även om detta inte kan garanteras), att drottning-mindre sub kolonier är benägna att bete sig som queenright kolonier under den korta tid som experimentet körs.
  3. För varje sub koloni, använda en fyrkantig låda med längd: ~ 3,15 tum (8 cm), bredd: ~ 2,17 på 5,5 cm och djup ~ 1.77 i (4,5 cm).
    Obs: Den viktiga punkten är att ge tillräckligt utrymme för myrorna utanför svampen fragmentet till foder och dumpa avfall, men samtidigt göra rutan tillräckligt liten för att det är möjligt att filma och beteende erkännande.
  4. För varje sub koloni, Lägg en te-sked storlek (ca 2,2 cm3 och 1,2 g) bit av den centrala delen av svampen trädgården (L. gongylophorus) från den ursprungliga kolonin, ett par bramble blad, och en bit av bomull indränkt i vatten.
    Obs: Råbomull ger fuktreglering. Det bör inte vara drypande av vatten, och bör inte röra svampen trädgården.
  5. För sub kolonier behandlas med Escovopsis, Använd en inympning loop och fyll öppningen så det bara omfattas av Escovopsis sporer. Inokulera sporer genom att försiktigt Knacka en liten, lokaliserad delen av svampen trädgården tio till tjugo gånger så att Sporerna inte alltför klustrade.
  6. För sub kolonier används som kontroller, härma tillämpningen av Escovopsis på svampen trädgården med en steril inympning loop.
    Obs: Även om detta inte skedde i det nuvarande experimentet, Inympning av ett sterilt pulver (som grafit eller Talk) kan göras i detta skede att skilja mellan en infektion med en patogen och en inert agent.
  7. För 72 h observationer, lämna hälften av sub kolonierna (både kontroller och infekterade) för 72 h efter införandet av Escovopsis innan du lägger till myrorna eller inleda video inspelningen.
    Obs: Väntar på 72 h i avsaknad av myror gör det troligt att Escovopsis sporer kommer att gro (opublicerade in vitro- data); även om detta ökar också risken för andra infektioner (t.ex. från en svamp som redan finns i svamp trädgården), är denna tidsperiod att föredra för denna behandling att representera i tidigt skede av en etablerad infektion.
  8. För 0 h observationer, direkt efter steg 2,6 och cirka 30 min innan inspelning lägga till två barnaskaran, fyra mindre och fyra stora arbetstagare samtidigt från den överordnade kolonin i varje ruta.
    1. Använd två stora arbetare från inom trädgården som är ung med ljust pigment, med Actinobacteria täcker de flesta av nagelbanden. Ta de andra två från utanför trädgården, med mörka pigment och Actinobacteria som endast täcker laterocervical plattorna.
  9. För 72 h observationer, upprepa 2.8 och 2.8.1 på 30 min innan inspelningen, dvs71,5 h efter inokulering med Escovopsis.
    Obs: Experimental sub kolonier är betydligt mindre än etablerade naturliga Acromyrmex kolonier. Detta är nödvändigt för att korrekt registrera beteende. Medan detta kan påverka frekvensen av vissa beteenden kvalitativt, var sammansättningen av sub kolonier valt att återspegla mix av arbetstagare i naturliga kolonier till mer sannolikt kvalitativt återspeglar de beteendemässiga interaktionerna.

3. video inspelningen och scoring beteenden

  1. Använd en USB endoskop bifogas en laptop (eller motsvarande) och tillhandahålla tillräckligt med ljus.
  2. För varje sub koloni, utföra videoinspelning i 4 h (börjar på antingen 0 h eller 72 h efter infektion).
  3. Efter inspelning 36 sub kolonierna, granska sammanlagt 144 h av film och poäng alla uppföranden av intresse för alla individer i varje sub koloni.
    Obs: I nuvarande experimentell exempel hade vi att utesluta två sub kolonierna (en kontroll från kolonin Ae160b) och en behandling sub koloni från kolonin Ae322 på grund av infektion med svampar än Escovopsis, minska det totala antalet timmar av observationer 136.
  4. Varje gång ett beteende observeras, spela in det som 1 händelse.
    Obs: Ett beteende kan vara kort eller lång tid, men endast Poäng det som > 1 om den avbryts av ett annat beteende, eller om myran är passiv under en tid.

4. beteenden

Obs: Behavioral definitioner gjordes med hjälp av en kombination av beskrivningar från tidigare studier23,27,28,31,45 och personliga iakttagelser. För en detaljerad illustration skylta viktiga morfologiska strukturer används i protokollet för erkännande av beteenden, se figur 1.

  1. Själv grooming och antenn rengöring (Video 1)
    1. Märka om myran slutar benrörelsefrihet att inleda själv grooming. Kontrollera att antennerna är draget igenom antenn städare på frambenen (figur 1), en clamp-liknande struktur ligger på tibia-tarsus gemensamma bestående av ett snäpp inför en sporre med olika storlek borst och kammar45, 46.
    2. Efter rengöring antennen, Observera att myran kommer att rensa benen och antenn städare, genom att dra benen genom de mouthparts, tar bort partiklar och potentiella patogener med glossa (figur 1).
      Obs: Själv grooming kan bestå av städning antennen och därefter antennen städare (figur 1), men också använda mouthparts för att rengöra benen. När en myra rengöring dess ben, rengör det oftast alla sex sträckor i följd.
  2. Svampen grooming (Video 2)
    1. Tillkännagivande om myran stannar benrörelser på en fast punkt på svampen trädgården. Observera att antennerna är orörlig och parallella pekade mot svampen så att vinkeln mellan skaftet och funiculus (figur 1) är cirka 45 °, och spetsen på antennerna nästan vidrör varandra, nära tips av Underkäkar ( (Se figur 1).
    2. Observera att den övre (maxillae) och lägre (labium) mouthparts är öppna, med den glossa (figur 1) framväxande slicka svampen.
  3. Allogrooming (Video 3)
    1. Observera detta beteende när en eller flera myror har närmat sig en annan (mottagaren) ant eller vice versa. Under uppförandet, myrorna stoppa rörelsen och stå tätt tillsammans med fysisk kontakt. Den grooming ant(s) kan flytta något att täcka ett större område av mottagarens Myrans kropp.
    2. Observera att av riskkällornas antenner kan vara orörlig och pekade mot en viss punkt av mottagande ant eller flytta och trycka lätt på mottagaren. Vinkeln mellan scape och funiculus (figur 1) är cirka 45 ° beroende på om de är fast på en viss punkt eller avlyssning. Tips på skådespelarens antenner är oftast nära varandra och tips av Underkäkar (figur 1).
    3. Observera att den övre (maxillae) och lägre (labium) mouthparts är öppna, med den glossa (figur 1) framväxande slicka mottagare myran.
  4. Metapleural körteln grooming (Video 4)
    1. Observera när myran stannar rörelsen att inleda metapleural körtel (figur 1) grooming. Observera att myran lutar åt sidan för att nå en av dess främre ben tillbaka till rub öppningen (meatus) i metapleural körtel (till exempel höger främre benet).
      Obs: Den andra framben är samtidigt (i detta exempel den vänstra främre benet) slickade av glossa (figur 1).
    2. Kontrollera att myran lutar till motsatt sida och byter ben och upprepar samma rörelse med motsatt ben. Myran fortsätter att röra frambenen till metapleural körtlar och därefter till den glossa som ständigt växlar mellan benen (figur 1).
      Obs: I det här exemplet myran nu förmedla den vänstra främre benet metapleural körteln och högra främre benet till glossa (figur 1). Efter metapleural körtel (figur 1) grooming, initierar myran ofta själv grooming (steg 4.1).
  5. Spore ogräsrensning (Video 5)
    1. Observera detta beteende när myran stannar benrörelser på en fast punkt på svampen trädgården. Observera att antennerna är orörlig och parallella, pekade mot svampen så att vinkeln mellan skaftet och funiculus är cirka 45°, och tips på antennerna nästan vidrör varandra och tips av Underkäkar (figur 1).
    2. Kontrollera att myran öppnar sin mandibles (figur 1) för att ta synliga Escovopsis sporer och lossa dem från svamp odling genom att dra dem bort. Myran bär kluster av sporer ur boet, medan antennerna försiktigt sig för orientering. Antennerna kan rengöras genom antenn städare (figur 1, se Video 1) medan du håller kluster av sporer. Myran sjunker sporer i en avfallet högen.
      Obs: Inspelning av aktiviteten runt avfallet högen gjordes inte i det nuvarande experimentet men skulle vara en lämplig förlängning av det nuvarande protokollet.
  6. Svampen ogräsrensning (Video 6)
    1. Observera detta beteende när myran stannar benrörelser på en fast punkt av svampen. Antennerna är löst pekade mot delen av svampen myran försöker ta bort, medan något trycka svamp bit.
    2. Observera att myran använder sin mandibles till antingen skär genom svamp grödan att lösgöra ett angivet område, eller att ta en del av svampen lappa med sin mandibles (figur 1). Myran kommer samtidigt rock från sida till sida på versen, medan det drar bort svampen lappa.
      Obs: Ogräsrensning kan göras av flera arbetare och både minderåriga och majors. Om så, några myror gör svampen styckning, utför andra den gungande och dra rörelse. Den fristående delen av svampen bärs utanför boet och avsläppt i avfallet högen. Inspelning av avfall insättningen gjordes inte i det nuvarande experimentet men skulle vara en lämplig förlängning av det nuvarande protokollet.
  7. Fekal vätska grooming (Video 7)
    1. Observera detta beteende när myran stannar benrörelser på en fast punkt på svampen trädgården. Myran böjer sina gaster (figur 1) och huvudet mot varandra för att tillämpa en droppe av fekal vätska på mouthparts.
    2. Observera att myran drar främre benen genom Underkäkar (figur 1), en i taget. Därefter flyttar myran antenner via antenn städare (figur 1) ligger på tibia-tarsus leden mellan frambenen.
  8. Droplet uppstötningar (Video 8)
    1. Observera detta beteende när myran stannar benrörelser på en fast punkt av svampen. Antennerna är orörlig och parallella, pekade mot svampen så att vinkeln mellan skaftet och funiculus är cirka 45°, och tips på antennerna berör nästan varandra och tips av Underkäkar (figur 1).
    2. Observera att myran kräks en droppe vätska på svampen, varierande från att vara transparent för ljus gul eller ens brun, från sin mouthparts.

Representative Results

Huvudsyftet med denna studie var skapandet av korta videoklipp som illustrerar beteenden associerade med sjukdom försvar i blad-skärning myror, att generera en katalog som ska användas som referens för framtida studier. Studien använder dessutom ett exempel på ett experiment inom vilken kvantifierades dessa beteenden för att visa hur denna katalog får användas i behavioral studies, vars representativa resultat sammanfattar vi här.

Sub-Colonies sattes upp för observation i tidigt skede (0 h) och sent skede (72 h) infektion. På grund av kraftiga infektioner med svampar än Escovopsis efter 72 h exkluderades två sub kolonierna (en kontroll för kolonin Ae160b) och en behandling för kolonin Ae322, så vi fokuserar presentationen av resultaten på 0 h tidpunkten och lägger mindre vikt beteenden som observerats efter 72 h. Efter filma alla sub kolonier och scoring defensiva beteenden, hittade vi skillnader i beteendemönster i samband med tid efter infektion och sammanhang, inklusive de olika sätt som de användes av mindre och större arbetstagare. Däremot utfördes själv grooming på alla gånger i både kontroll och infekterade sub kolonier. Det var också vanligt när myrorna var söker och försöker ta bort, Escovopsis hyfer eller sporer. Eftersom problemet var så allmänt observerade och frekvent i alla situationer, vi inte kvantifiera det.

Vi gjorde alla andra beteenden som beskrivs i protokollet och nuvarande beräknade totala och genomsnittliga frekvenser för mindre och större arbetare per sub koloni (tabell 1). Vi hittade kontroller, mindre arbetstagare tränas den trädgård gröda mer än stora arbetare (figur 2a), som anekdotiskt observerade att de tillbringade mer tid i svampen trädgården. I kolonierna infekterade med Escovopsis fanns det en tendens till ökad svampen grooming övergripande i förhållande till kontroll kolonier, men detta var inte signifikant (F1,23 = 2,80, p = 0.1077; Tabell 2. Figur 2 en). det var en icke-signifikant ökning i fekal grooming med infektion (F1,23 = 0,60, p = 0.4455; Tabell 1) men ingen skillnad mellan små och stora arbetstagare (figur 2b). Vi observerade fekal grooming när arbetstagare in svampen, snarare än när de var på eller helt bort från svampen för längre tidsperioder.

Figure 2
Figur 2: frekvens av grooming händelser. Det genomsnittliga antalet (± standardfel (SE), n = 9) av (a) svampen grooming och (b) fekal vätska grooming händelser inom fyra timmar efter inympningen, jämföra mindre och större arbetare i kontroller och Escovopsis behandlingar. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Flera beteenden var extremt sällsynt. Vi observerade endast metapleural körteln grooming fyra gånger, och alla instanser inträffat efter 72 h. en gång i kontrollgruppen, och tre gånger i kolonier med Escovopsis infektion (tabell 1). Vi hittade nästan som sällan, att myrorna skulle regurgitate en flytande droplet mot svampen trädgården och ett par gånger utanför svampen (tabell 1). I grupperna 0 h hände detta när en kontroll sub koloni och två gånger i infekterade kolonier - beteendet i alla tre instanser utfördes av en större arbetare. Vid ett tillfälle regurgitated en mindre arbetare en droppe i hörnet av rutan och en gång en större arbetare gjorde samma på en bramble blad, båda vid Escovopsis behandling. I 72 h kolonierna, var droplet uppstötningar på svampen aldrig observerats i kontroll kolonierna men hänt sju gånger i infekterade kolonier. Sex av dessa var av större arbetare och tre av dessa av en enda individ som lagt droppar utanför svampen trädgården.

Spore ogräsrensning (figur 3en) och svampen ogräsrensning (figur 3b) var båda låg frekvens. Fanns ingen signifikant skillnad i frekvens av svampen ogräsrensning mellan infekterade kolonier och kontroller, fanns det en tendens för ogräsrensning för att öka med tiden eftersom infektion (F1,23= 2,91, p = 0.1014; Tabell 2). våra observationer fokuserade på Escovopsis spore ogräsrensning, som inte förändrades betydligt med tiden, men det fanns en tendens till en högre frekvens i kolonier som angripits av Escovopsis än i icke-infekterade kontroller (F1,23 = 3,27, P = 0.0838; Tabell 2). färre sub kolonier infekterade med Escovopsis hade synliga sporer kvar efter observationsperioden med en tidig infektion (när myror infördes efter 0 h av spore inympningen), med myror att ta bort alla sporer i nästan hälften av sub kolonierna (4 av 9. Figur 3 c). I senare skede infektioner (där myror infördes efter 72 h av spore inympningen), myrorna inte var ägnat att undanröja sporer helt i någon av de underordnade kolonierna. Sammantaget tyder dessa observationer på en tendens för myrorna att flytta från spore ogräsrensning till svampen ogräsrensning under loppet av en infektion.

Figure 3
Figur 3: frekvensen av ogräsrensning händelser. Menar frekvens (± standardfel (SE), n = 9) (a) spor ogräsrensning (av Escovopsis sporer) och (b) svampen ogräsrensning (Escovopsis eller andra svampar) under en observationsperiod 4 h jämföra minderåriga och majors från behandlingsgrupperna, och (c) antalet sub kolonier med synliga Escovopsis sporer i behandlingsgrupperna vid slutet av observationsperioden. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Mindre arbetstagare - kontroll Mindre arbetstagare - behandling Stora arbetstagare - kontroll Stora arbetstagare - behandling
0h
Svampen grooming 84 (9.333) 131 (14,56) 37 (4.111) 66 (7.333)
Allogrooming 6 (0.6667) 14 (1.556) 5 (0.5556) 6 (0.6667)
Spore ogräsrensning 0 3 0 5 (0.5556)
Svampen ogräsrensning 0 0 0 0
Fekal vätska grooming 46 (5.111) 69 (7.667) 27 (3.000) 48 (5.333)
Droplet-programmet 0 0 1 (0.1111) 2 (0.2220)
Metapleural körteln grooming 0 0 0 0
72h
Svampen grooming 10 (1.429) 45 (5.000) 24 (3.429) 38 (4.222)
Allogrooming 2 (0.2857) 10 (1.111) 1 (0.1110) 4 (0.4440)
Spore ogräsrensning 0 0 0 1 (0.1110)
Svampen ogräsrensning 0 1 (0.1110) 0 2 (0.2220)
Fekal vätska grooming 19 (2.714) 38 (4.222) 30 (4.286) 30 (3.333)
Droplet-programmet 0 1 (0.1110) 0 6 (0.6667)
Metapleural körteln grooming 0 2 (0.2220) 1 (0.1429) 1 (0.1110)

Tabell 1 : Antalet beteenden i fyra timmar för observation på 0 och 72 h efter Escovopsis inympning. Det genomsnittliga totala antalet observationer (med genomsnittlig frekvenser per individ inom parentes), jämföra mindre och större arbetstagare från kontroll och Escovopsis infektion sub kolonier, respektive (n = 9).

Typ 3 tester av fasta effekter
Svampen grooming Allogrooming Fekal grooming Spore ogräsrensning Svampen ogräsrensning
Effekter NUM DF Den DF F-värde PR > F NUM DF Den DF F-värde PR > F NUM DF Den DF F-värde PR > F NUM DF Den DF F-värde PR > F NUM DF Den DF F-värde PR > F
Koloni 2 23 0,77 0.4733 2 23 0,52 0.5989 2 23 0,54 0.5903 2 23 0,51 0.6052 2 23 1.17 0,3272
Sub koloni (koloni) 6 23 0,93 0.4892 6 23 0,51 0.7978 6 23 0,63 0.7067 6 23 1,67 0.1742 6 23 1,53 0.2127
Behandling 1 23 2.8 0.1077 1 23 1,85 0.1875 1 23 0,6 0.4455 1 23 3.27 0.0838 1 23 1 0.3275
Tid 1 23 6,53 0.0177 1 23 0,88 0.3574 1 23 0,97 0.3361 1 23 0,53 0.4742 1 23 2,91 0.1014

Tabell 2 : Statistiska resultat av blandade ANOVA testar på separata beteenden som statistiska analyser kan utföras. Fasta effekter var koloni, sub koloni (kapslade koloni), behandling och tid. Vänligen klicka här för att hämta tabellen.

Video 1
Video 1: själv grooming och antenn rengöring. Vänligen klicka här för att se denna video. Högerklicka för att ladda ner.

Video 2
Video 2: svampen grooming. Vänligen klicka här för att se denna video. Högerklicka för att ladda ner.

Video 3
Video 3: Allogrooming. Vänligen klicka här för att se denna video. Högerklicka för att ladda ner.

Video 4
Video 4: Metapleural körteln grooming. Vänligen klicka här för att se denna video. Högerklicka för att ladda ner.

Video 5
Video 5: Spore ogräsrensning. Vänligen klicka här för att se denna video. Högerklicka för att ladda ner.

Video 6
Video 6: svampen ogräsrensning. Vänligen klicka här för att se denna video. Högerklicka för att ladda ner.

Video 7
Video 7: fekal vätska grooming. Vänligen klicka här för att se denna video. Högerklicka för att ladda ner.

Video 8
Video 8: Droplet uppstötningar. Vänligen klicka här för att se denna video. Högerklicka för att ladda ner.

Discussion

Huvudsyftet med denna studie var att observera och registrera karakteristiska leaf-skärning ant defensiva beteenden i närvaro av svamp-garden infektion med Escovopsis, skapa referens clips för använda av bredare forskarsamhället. Det bör noteras att dessa beteenden inte är uteslutande till försvar av kolonier från Escovopsis, men kan också spela en roll i försvaret mot andra föroreningar och infektioner6,7,8,9 ,10,11,12, och i försvaret av myrorna själva42. Våra protokoll ger en bakgrund för bredare forskning om försvar i svamp växande myror. Detta är sannolikt att vara särskilt användbart: (i) för unga forskare som inte är bekant med dessa beteenden; (ii) att säkerställa konsekvent definitioner för och observationer av beteenden; (iii) för att underlätta jämförelser mellan olika studier och ant arter. (iv) eftersom ett antal av dessa beteenden kan inträffa så sällan att även erfarna kan forskare aldrig observerat dem; (iv) eftersom förstå och känna igen beteenden under kontrollerade förhållanden i laboratoriet hjälp studier i situ där förhållandena är svårare att styra.

Resultaten från vår beteendemässiga studie överensstämmer med tidigare arbete som visade att mindre arbetstagare svampen brudgummen — avgörande om en infektion upptäcks tidigt — mer än stora arbetstagare25,28,32. Här, ökat stora arbetare mängden svamp grooming efter Escovopsis infektion (figur 2en). Detta tyder på att mindre arbetstagare är de dominerande svampen groomers, men att större arbetstagare kan hjälpa att förebygga spridningen av mer etablerade infektioner. Större större arbetarna ta bort sporer snabbare, medan mindre arbetare kunde vara mer lämpad för att ta bort mindre tillgängliga sporer. Vi fann också att arbetstagarna framgångsrikt bort sporer i omkring hälften av de smitta sub kolonierna (fyra av nio) när de infördes vid tidpunkten för infektion, och således kunde upptäcka den patogen tidigt (figur 3c). Sammantaget denna pekar på en serie av beteendemässiga Svaren där myrorna först försöka stoppa Escovopsis infektion genom att ta bort sporer (och gör så innan en infektion sprider), snarare än att ta bort delar av svampen trädgården (figur 3a, b. ). Detta förändras över tid om infektionen fortskrider, när myrorna är mer benägna att ta bort delar av den svamp trädgård28. Även våra urvalsstorlekar var för liten för att vara avgörande, och vi kan inte utesluta att samtidiga infektioner inducerad ogräsrensning beteenden, stöder våra data denna trend, med svampen ogräsrensning huvudsakligen att vara närvarande vid senare stadier av infektionen (figur 3 en). De allmänt låga nivåerna av svampen ogräsrensning antyder att myrorna andra försvar (t.ex.kemikalier) brukade ytterligare hämmar tillväxten av Escovopsiseller att ingen av våra experimentella sub kolonier smittades alltför hårt (att göra mer destruktiva försvar onödigt).

Våra fynd tyder på att själv grooming med fekal vätska är kännetecken av myror in svampen trädgården, och används som en profylaktisk åtgärd, i stället för att associeras med en infektion. Liknande observationer har setts i foundress honor som groom sig och överföra fekal droppar med sin mun till deras ben, när du anger boet eller hanterar grödan27. En infektion skulle i teorin öka aktiviteten av arbetstagare vid kanten av svampen trädgården, om det borttagna infekterat materialet utförs samt tappade i avfall högar. Därav, fekal vätska grooming kan också indirekt öka under infektion att minimera sjukdom som sprids. Vi förväntar oss det motsatta mönstret för allvarliga infektioner, med nedsatt rörlighet vid kanten av svampen trädgården, eftersom arbetstagare antingen överge svampen eller anta mer extrema åtgärder såsom kemiska försvar.

Medan fekal vätskor skulle kunna tjäna som ett viktigt profylaktiskt kemiska för individ, används allogrooming av boet-kompisar på andra arbetstagare om de upptäcker främmande partiklar eller mikrober. Den verkliga skillnaden vi observerade mellan frekvensen (tabell 1) av fekal vätska grooming (n = 304) och allogrooming (n = 48) kan tyda på en skillnad i upptäckt av patogen. Myror är inte kunna lätt upptäcka patogener på sig själva med sina antenner; allogrooming görs å andra sidan genom boet-mates, som kan inspektera hela kroppen av en myra och bara välja att brudgummen vid behov. Eftersom Escovopsis är en parasit svamp trädgården i stället för myrorna, kan detta också förklara den låga mängden allogrooming.

Vi observerade sällan metapleural körteln grooming, och endast i senare skeden av infektion. Arter av svamp växande myror med riklig Pseudonocardia bakteriell täcka brudgummen metapleural körtlar mindre än arter med mindre eller ingen täcka25,47. Som A. echinatior har ett överflöd av den symbiont47, kan detta förklara den låga körteln grooming frekvens. Metapleural körtel secretionen är också dyrt att producera30, och kan lagras inom infrabuccal fickan för längre tid, vilket innebär att behovet av grooming metapleural körtel kan vara ovanliga. Under metapleural körteln grooming, myrorna samtidigt växla ben och slicka benet som hade bara tränas körteln; sporer överförs därmed till infrabuccal fickan, där körtel sekret är avgörande för att hämma Escovopsis' potential för efterföljande groning25. Mindre arbetstagare är mer rikligt inuti boet och har större metapleural körtlar per enhet kropp massa30, tyder på att de är ansvariga för huvuddelen av metapleural körtel sekret. Detta skulle också förklara varför, i vår studie, den högsta frekvensen av svampen grooming var bland mindre arbetare.

Vi förväntas iaktta behavior(s) indikerar aktiv användning av antibiotika från den bakteriella symbiont Pseudonocardia, vanligen observerats på nagelbanden Acromyrmex arbetstagare och känd för att spela en roll i försvar mot Escovopsis 36 , 39 , 40. den mest sannolika förklaringen för att inte observera sådant beteende, är att tillämpningen av dessa antibiotika kan införlivas i andra beteenden, som själv grooming följt av svampen grooming eller ogräsrensning, som kan göra det svårt att följa som en distinkta beteende.

Vi observerade ovanliga beteende regurgitating flytande droppar vidare till svampen trädgården. Uppstötningar av mat för nestmates har tidigare beskrivits i blad-skärning myror22. I vårt experiment, droppar skilde sig i färg från transparent till mörkbrun, föreslår de får en näringskälla för andra myror eller ge vatten. Vi observerade endast två tillfällen där andra myror drack från droppar, så att vi inte kan avgöra om droppar gynna andra myror eller servera att rehydrera svampen När luftfuktigheten är låg. De flesta observationer av detta beteende var under Escovopsis infektioner, vilket kan innebära en defensiv roll, såsom immun priming av uppstötningar av antimikrobiella peptider16,48. Vi kan inte dra några säkra slutsatser om detta eftersom problemet var sällsynt, men det skulle vara en intressant linje att undersöka vidare, till exempel genom att fastställa huruvida droppar har antimikrobiella egenskaper.

Med tanke på att observationsstudier av komplexa defensiva beteenden av leaf-skärare myror, inklusive någon jämförelse med och utan trädgård infektion, skulle vara extremt svårt att göra i fältet, experimentella data kan ge värdefulla insikter i dessa beteenden under mer kontrollerade förhållanden. Medan de iakttagelser som gjorts under laboratorieförhållanden kan skilja sig från de beteenden som finns under naturliga förhållanden, verktyg såsom vår katalog av viktiga defensiva beteenden behöver utvecklas, för att förbättra både experimentell och fältet studier i framtiden. Den experimentella metoden kan dock delvis förklara varför vissa beteenden var extremt sällsynta (t.ex. allogrooming, metapleural körteln grooming) i vår demonstration av att använda dessa beteendemässiga definitioner. Framtida studier kan därför överväga begränsningar i detta experiment, att hitta sätt att göra mer naturlig observationer. Ytterligare faktorer kan också integreras i det nuvarande protokollet, till exempel skilja mellan Actinobacteria-bär (yngre) och äldre arbetstagare med mindre riklig lock, som kan svara annorlunda på hotet om en Escovopsis infektion. Det finns kompromisser mellan att göra observationer mer korrekt (till exempel genom poängsättning fokal individer), eller som har större sub kolonin storlek (större antal arbetstagare) och mängden tid eller antal sub kolonier eller individer som kan filmas på en given peka i tid. Dock fokuserade set-up skulle kunna utvidgas för större beteendevetenskapliga studier med fokus på att åtgärda en beteendevetenskaplig mål, i detta fall vi på framgångsrikt skylta en metod för registrering och definiera specifika defensiva beteenden.

Vi dokumenterade beteenden som bidrar till försvar i blad-skärning myror och mer påtagligt, har systematiskt identifieras, beskrivs och fångas defensiva beteenden på film. Våra representativa resultat förstärka annan forskning inom detta område tyder på varför det är svårt för en patogen att framgångsrikt angripa svamp-jordbruk Myra kolonier, när inför en omfattande uppsättning defensiva beteenden och associerade tillämpningen av antimikrobiella föreningar. Vårt huvudsakliga mål var att ge ett nytt verktyg för framtida arbete på detta område, och vi hoppas att beteendemässiga katalogen kommer att vara värdefulla för att säkra samstämmighet och strömlinjeformad definitioner, observationer och tolkningar av beteenden, att fungera som en viktig resurs för framtida forskning.

Disclosures

Författarna har något att avslöja.

Acknowledgments

Vi vill tacka linje Vej Ugelvig och Kirsten Sheehy för användbar diskussioner kring grooming mekanismer av antenn städare och filmning set-up. Michael Poulsen stöds av en Villum Kann Rasmussen Young Investigator Fellowship (VKR10101) och Tabitha Innocentius av en Marie Curie enskilda Europeiska gemenskap (IEF bevilja 627949). Vi vill också tacka the Smithsonian Tropical Research Institute för användning av faciliteter och logistiskt stöd i Panama och Autoridad Nacional del Ambienten om tillstånd att samla in och exportera myror till Danmark.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Plastic boxes N/A N/A Transparent. Length: 3.15 in (8 cm), width: 2.17 in (5.5 cm), depth: 1.77 in (4.5 cm)
Petri dishes Sarstedt 82.1472 3.62x0.63 in (9.2x1.6 cm)
Inoculation loops Labsolute 7696431 Disposable 1uL. Length: 7.67 in (19.5 cm) 
Cameras DBPower NTC50HD_8.5mm USB Endoscope Camera
Holders for the cameras N/A N/A Old beaker clamp stand.
Laptop HP N/A Generic laptop for saving recordings.
Program used on the laptop Windows Movie maker N/A
Forceps Vermandel 50.054 Soft
Potato dextrose broth Sigma-Aldrich P6685-1KG 24 g/L

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Hölldobler, B., Wilson, E. O. The ants. , Belknap Press of Harvard University Press. (1990).
  2. Weber, N. A. Gardening ants, the attines. , American Philosophical Society. (1972).
  3. Bot, A. N. M., Ortius-Lechner, D., Finster, K., Maile, R., Boomsma, J. J. Variable sensitivity of fungi and bacteria to compounds produced by the metapleural glands of leaf-cutting ants. Insectes Sociaux. 49 (4), 363-370 (2002).
  4. Poulsen, M., Boomsma, J. J. Mutualistic fungi control crop diversity in fungus-growing ants. Science. 307 (5710), 741-744 (2005).
  5. Mueller, U. G., Scott, J. J., Ishak, H. D., Cooper, M., Rodrigues, A. Monoculture of Leafcutter Ant Gardens. Plos One. 5 (9), (2010).
  6. Hughes, W. O. H., Thomsen, L., Eilenberg, J., Boomsma, J. J. Diversity of entomopathogenic fungi near leaf-cutting ant nests in a neotropical forest, with particular reference to Metarhizium anisopliae var. anisopliae. Journal of Invertebrate Pathology. 85 (1), 46-53 (2004).
  7. Samson, R. A., Evans, H. C., Latgé, J. -P. Atlas of entomopathogenic fungi. , Springer-Verlag; Wetenschappelijke Uitgeverij Bunge. (1988).
  8. Shah, P. A., Pell, J. K. Entomopathogenic fungi as biological control agents. Applied Microbiology and Biotechnology. 61 (5-6), 413-423 (2003).
  9. Hughes, D. P., Evans, H. C., Hywel-Jones, N., Boomsma, J. J., Armitage, S. A. O. Novel fungal disease in complex leaf-cutting ant societies. Ecological Entomology. 34 (2), 214-220 (2009).
  10. Andersen, S. B., et al. The Life of a Dead Ant: The Expression of an Adaptive Extended Phenotype. American Naturalist. 174 (3), 424-433 (2009).
  11. Currie, C. R., Mueller, U. G., Malloch, D. The agricultural pathology of ant fungus gardens. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 96 (14), 7998-8002 (1999).
  12. Reynolds, H. T., Currie, C. R. Pathogenicity of Escovopsis weberi: The parasite of the attine ant-microbe symbiosis directly consumes the ant-cultivated fungus. Mycologia. 96 (5), 955-959 (2004).
  13. Camargo, R. S., Forti, L. C., Lopes, J. F. S., Andrade, A. P. P., Ottati, A. L. T. Age polyethism in the leaf-cutting ant Acromyrmex subterraneus brunneus Forel, 1911 (Hym., Formicidae). Journal of Applied Entomology. 131 (2), 139-145 (2007).
  14. Hughes, W. O. H., Sumner, S., Van Borm, S., Boomsma, J. J. Worker caste polymorphism has a genetic basis in Acromyrmex leaf-cutting ants. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 100 (16), 9394-9397 (2003).
  15. Wilson, E. O. Caste and Division of Labor in Leaf-Cutter Ants (Hymenoptera, Formicidae, Atta). 2. The Ergonomic Optimization of Leaf Cutting. Behavioral Ecology and Sociobiology. 7 (2), 157-165 (1980).
  16. Schmid-Hempel, P. Parasites and Their Social Hosts. Trends in Parasitology. 33 (6), 453-462 (2017).
  17. Hamilton, W. D., Axelrod, R., Tanese, R. Sexual Reproduction as an Adaptation to Resist Parasites (a Review). Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 87 (9), 3566-3573 (1990).
  18. Zhu, Y. Y., et al. Genetic diversity and disease control in rice. Nature. 406 (6797), 718-722 (2000).
  19. Heine, D., et al. Chemical warfare between leafcutter ant symbionts and a co-evolved pathogen. Nature Communications. 9, (2018).
  20. Cremer, S., Pull, C. D., Furst, M. A. Social Immunity: Emergence and Evolution of Colony-Level Disease Protection. Annual Review of Entomology. 63, 105-123 (2018).
  21. Quinlan, R. J., Cherrett, J. M. Role of Substrate Preparation in Symbiosis between Leaf-Cutting Ant Acromyrmex octospinosus (Reich) and Its Food Fungus. Ecological Entomology. 2 (2), 161-170 (1977).
  22. Richard, F. J., Errard, C. Hygienic behavior, liquid-foraging, and trophallaxis in the leaf-cutting ants, Acromyrmex subterraneus and Acromyrmex octospinosus. Journal of Insect Science. 9, (2009).
  23. Reber, A., Purcell, J., Buechel, S. D., Buri, P., Chapuisat, M. The expression and impact of antifungal grooming in ants. Journal of Evolutionary Biology. 24 (5), 954-964 (2011).
  24. Poulsen, M., Bot, A. N. M., Boomsma, J. J. The effect of metapleural gland secretion on the growth of a mutualistic bacterium on the cuticle of leaf-cutting ants. Naturwissenschaften. 90 (9), 406-409 (2003).
  25. Fernandez-Marin, H., Zimmerman, J. K., Rehner, S. A., Wcislo, W. T. Active use of the metapleural glands by ants in controlling fungal infection. Proceedings of the Royal Society B-Biological Sciences. 273 (1594), 1689-1695 (2006).
  26. Fernandez-Marin, H., et al. Functional role of phenylacetic acid from metapleural gland secretions in controlling fungal pathogens in evolutionarily derived leaf-cutting ants. Proceedings of the Royal Society B-Biological Sciences. 282 (1807), (2015).
  27. Fernandez-Marin, H., Zimmermann, J. K., Wcislo, W. T. Nest-founding in Acromyrmexoctospinosus (Hymenoptera, Formicidae, Attini): demography and putative prophylactic behaviors. Insectes Sociaux. 50 (4), 304-308 (2003).
  28. Currie, C. R., Stuart, A. E. Weeding and grooming of pathogens in agriculture by ants. Proceedings of the Royal Society B-Biological Sciences. 268 (1471), 1033-1039 (2001).
  29. Ortius-Lechner, D., Maile, R., Morgan, E. D., Boomsma, J. J. Metaplural gland secretion of the leaf-cutter ant Acromyrmex octospinosus: New compounds and their functional significance. Journal of Chemical Ecology. 26 (7), 1667-1683 (2000).
  30. Poulsen, M., Bot, A. N. M., Nielsen, M. G., Boomsma, J. J. Experimental evidence for the costs and hygienic significance of the antibiotic metapleural gland secretion in leaf-cutting ants. Behavioral Ecology and Sociobiology. 52 (2), 151-157 (2002).
  31. Bot, A. N. M., Currie, C. R., Hart, A. G., Boomsma, J. Waste management in leaf-cutting ants. Ethology Ecology & Evolution. 13 (3), 225-237 (2001).
  32. Little, A. E. F., Murakami, T., Mueller, U. G., Currie, C. R. Defending against parasites: fungus-growing ants combine specialized behaviours and microbial symbionts to protect their fungus gardens. Biology Letters. 2 (1), 12-16 (2006).
  33. Abramowski, D., Currie, C. R., Poulsen, M. Caste specialization in behavioral defenses against fungus garden parasites in Acromyrmex octospinosus leaf-cutting ants. Insectes Sociaux. 58 (1), 65-75 (2011).
  34. Currie, C. R., Scott, J. A., Summerbell, R. C., Malloch, D. Fungus-growing ants use antibiotic-producing bacteria to control garden parasites. Nature. 398 (6729), 701-704 (1999).
  35. Scheuring, I., Yu, D. W. How to assemble a beneficial microbiome in three easy steps. Ecology Letters. 15 (11), 1300-1307 (2012).
  36. Worsley, S. F., et al. Symbiotic partnerships and their chemical interactions in the leafcutter ants (Hymenoptera: Formicidae). Myrmecological News. 27, 59-74 (2018).
  37. Currie, C. R., Poulsen, M., Mendenhall, J., Boomsma, J. J., Billen, J. Coevolved crypts and exocrine glands support mutualistic bacteria in fungus-growing ants. Science. 311 (5757), 81-83 (2006).
  38. Poulsen, M., et al. Variation in Pseudonocardia antibiotic defence helps govern parasite-induced morbidity in Acromyrmex leaf-cutting ants. Environmental Microbiology Reports. 2 (4), 534-540 (2010).
  39. Poulsen, M., Cafaro, M., Boomsma, J. J., Currie, C. R. Specificity of the mutualistic association between actinomycete bacteria and two sympatric species of Acromyrmex leaf-cutting ants. Molecular Ecology. 14 (11), 3597-3604 (2005).
  40. Andersen, S. B., Hansen, L. H., Sapountzis, P., Sorensen, S. J., Boomsma, J. J. Specificity and stability of the Acromyrmex-Pseudonocardia symbiosis. Molecular Ecology. 22 (16), 4307-4321 (2013).
  41. Currie, C. R., Bot, A. N. M., Boomsma, J. J. Experimental evidence of a tripartite mutualism: bacteria protect ant fungus gardens from specialized parasites. Oikos. 101 (1), 91-102 (2003).
  42. Cremer, S., Armitage, S. A. O., Schmid-Hempel, P. Social immunity. Current Biology. 17 (16), R693-R702 (2007).
  43. Schluns, H., Crozier, R. H. Molecular and chemical immune defenses in ants (Hymenoptera: Formicidae). Myrmecological News. 12, 237-249 (2009).
  44. Masri, L., Cremer, S. Individual and social immunisation in insects. Trends in Immunology. 35 (10), 471-482 (2014).
  45. Hackmann, A., Delacave, H., Robinson, A., Labonte, D., Federle, W. Functional morphology and efficiency of the antenna cleaner in Camponotus rufifemur ants. Royal Society Open Science. 2 (7), (2015).
  46. How ants use 'combs' and 'brushes' to keep their antennae clean. , Available from: https://www.youtube.com/watch?time_continue=65&v=AB4HoeloqZw (2015).
  47. Fernandez-Marin, H., Zimmerman, J. K., Nash, D. R., Boomsma, J. J., Wcislo, W. T. Reduced biological control and enhanced chemical pest management in the evolution of fungus farming in ants. Proceedings of the Royal Society B-Biological Sciences. 276 (1665), 2263-2269 (2009).
  48. Konrad, M., et al. Social Transfer of Pathogenic Fungus Promotes Active Immunisation in Ant Colonies. Plos Biology. 10 (4), (2012).

Tags

Beteende problem 140 sociala immunitet antimikrobiellt försvar profylax grooming ogräsrensning svampen trädgård metapleural körtel uppstötningar antenn rengöring
En visuell Guide för att studera beteendemässiga försvar att patogenen attacker i blad-skärning myror
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Nilsson-Møller, S., Poulsen,… More

Nilsson-Møller, S., Poulsen, M., Innocent, T. M. A Visual Guide for Studying Behavioral Defenses to Pathogen Attacks in Leaf-Cutting Ants. J. Vis. Exp. (140), e58420, doi:10.3791/58420 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter