Summary
We presenteren een protocol om te induceren en te detecteren CMHs veroorzaakt door LPS injectie bij Sprague-Dawley ratten, die kan worden gebruikt in de toekomst onderzoek onderzoek naar de pathogenese van CMHs.
Abstract
Cerebrale microhemorrhages (CMHs) komen vaak voor bij oude patiënten en zijn gecorreleerd aan verschillende neuropsychiatrische aandoeningen. De etiologie van CMHs is complex, en neuroinflammation wordt vaak waargenomen als een co voorkomen. Hier beschrijven we een sub acute CMHs rat model geïnduceerd door injectie van het lipopolysaccharide (LPS), evenals een methode voor het opsporen van CMHs. systemische LPS injectie is relatief eenvoudig, economisch en kosteneffectieve. Een groot voordeel van LPS injectie, is zijn stabiliteit voor het opwekken van ontsteking. CMHs veroorzaakt door LPS injectie kon worden opgespoord door bruto observatie, haematoxyline en eosine (HE) kleuring, Perl's Pruisische kleuring, Evans blauw (EB) dubbel-labeling en magnetische resonantie beeldvorming-gevoeligheid gewogen imaging (MRI-Zwi) technologie. Ten slotte worden andere methoden van de ontwikkeling van diermodellen CMHs, met inbegrip van hun voordelen en/of nadelen, ook besproken in dit verslag.
Introduction
Klassieke cerebrale microhemorrhages (CMHs) verwijzen naar gerelateerde kleine deposito's van bloed afbraakproducten zoals Hemosiderine van rode bloedcellen in de hersenen-1. Volgens de studie Rotterdam Scan kan CMHs worden gevonden in bijna 17,8% van de personen in de leeftijd 60-69 jaar en 38,3% in die meer dan 80 jaar2. De prevalentie van CMHs bij ouderen is relatief hoog, en een correlatie tussen de accumulatie van CMHs en cognitieve en neuropsychiatrische dysfunctie geweest gevestigde3,4. Verschillende dierlijke modellen van CMHs hebben onlangs gemeld, met inbegrip van knaagdier modellen geïnduceerd door type IV collagenase stereotaxic injectie5, APP transgene6, β-N-methylamino-L-alanine blootstelling7en hypertensie8, met CMHs geïnduceerd door systemische ontsteking als een van de meest goed geaccepteerde keuzes. Fisher et al. LPS afgeleid van Salmonella typhimurium 9 eerst gebruikt voor het ontwikkelen van een acute muismodel van CMHs. Later, dezelfde groep gemeld de ontwikkeling van een sub acute CMHs muismodel met behulp van de dezelfde benadering2.
LPS is beschouwd als een gestandaardiseerde inflammatoire prikkel via intraperitoneale injectie. Eerdere studies hebben bevestigd dat LPS injectie neuroinflammation veroorzaken kan, zoals blijkt uit de grote hoeveelheid microglia en Astrocyt activering in dierlijke2,10 modellen. Bovendien was het een positieve correlatie tussen de activering van de activering van het neuroinflammation en het aantal CMHs gevestigde2,10. Op basis van deze eerdere studies, werden we gevraagd om een CMHs rat model te ontwikkelen door intraperitoneale injectie van LPS.
Voorschotten in detectie technologieën hebben geresulteerd in een toename van het aantal onderzoeken van het onderzoek op CMHs. De meest algemeen erkend methoden voor het opsporen van CMHs omvatten de detectie van de rode bloedcellen door de haematoxyline en eosine (HE) kleuring, ijzer(III) ijzer detectie door Pruisisch blauw kleuring9, detectie van Evans (EB) afzetting door immunofluorescentie blauw beeldbewerking en 7.0 Tesla magnetische resonantie beeldvorming-gevoeligheid gewogen beeldvorming (MRI-Zwi)10. De huidige studie is gericht op het ontwikkelen van een methode van screening voor CMHs.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle methoden die hier worden beschreven zijn goedgekeurd door de Animal Care en gebruik Comité (ACUC) van het PLA Army General Hospital.
1. materialen
- Voorbereiding van LPS injectie
- Voeg 25 mL gedestilleerd water tot 25 mg van LPS poeder een eindconcentratie van 1 mg/mL, afgeleid van S. typhimurium . Winkel de injectie in een steriele buis bij 4 ° C.
Let op: LPS is giftig. - Bereid een 2% EB oplossing in normale zoutoplossing 0,9% EB injectie om op te houden werken concentratie.
- Voeg 25 mL gedestilleerd water tot 25 mg van LPS poeder een eindconcentratie van 1 mg/mL, afgeleid van S. typhimurium . Winkel de injectie in een steriele buis bij 4 ° C.
2. dieren
- LPS toedienen aan mannelijke ratten Sprague-Dawley (SD), 10 weken oud (gemiddeld gewicht: 280 ± 20 g) door intraperitoneale injectie.
Let op: Als ratten zijn gekocht bij een andere organisatie, vervolgens de adaptieve fase mag niet minder dan 7 dagen.
3. LPS injecties
- Injecteren van LPS intraperitoneally in elke rat bij een dosis van 1 mg/kg en de rats terugkomen in hun kooi.
Opmerking: Verdoving is niet nodig. - Zes uur later, injecteren de dezelfde dosis van LPS injectie in de rats.
- Zestien uur later injecteren de dezelfde dosis van LPS in de rats.
Let op: SD ratten injecteren met LPS bij een dosis van 1 mg/kg kan resulteren in een mortaliteit van 5%. Het sterftecijfer kan verdere toename van jongere of oudere ratten of zwangere vrouwelijke ratten. - De rats terugkomen in hun kooien na injectie van LPS en ad libitum toegang bieden tot eten en drinken.
Opmerking: Ratten zullen vertonen een duidelijke systemische inflammatoire respons, en is daarom essentieel dat de kooien schoon gedurende het gehele experiment blijven. Ratten moet worden regelmatig (2 x dag) monitoring voor gewicht, algemene uiterlijk en houding na de eerste injectie van LPS. Als de ratten begint te vertonen van een gebogen houding, onwil om te gaan, belangrijk gewichtsverlies (> 20%), porfyrine kleuring dat zij humaan euthanized voorafgaand aan de 7 dag EB studie eindpunt.
4. sample collectie
- EB injectie
- Zeven dagen na de eerste injectie, anesthetize de rat door intraperitoneally volgens uw goedgekeurde IACUC protocol.
- 1-2 min wachten voor de ratten vertonen geen hoornvlies reflex reacties. Uitvoeren van een 5-8 mm-diep cardiale lekke band op elke rat; het puncturing punt moeten 5 mm aan de linkermarge van borstbeen op de 3e en 4e intercostals ruimte.
- Wacht totdat het bloed herstel wordt waargenomen, en vervolgens EB injecteren bij een dosis van 0,2 mL/100 g lichaamsgewicht in het hart van de linker ventrikel.
Let op: Cardiac punctie en EB injectie moeten zorgvuldig geschieden. EB kan worden geïnjecteerd in de borstholte of pericard in plaats van het hart van de linker ventrikel.- Zuigen terug met een lege buis en dit volume te vervangen door een EB-buis vóór injectie te helpen verminderen van het percentage mislukkingen (bv., injectie ribbenkast door fout).
- Houd de rat in een liggende positie gedurende 10 minuten.
Opmerking: Als monster niet gebruikt wordt voor het detecteren van EB lekkage in immunofluorescentie beeldbewerking, dan deze stap kan worden weggelaten.
- Bruto observatie
- Uitvoeren van cardiale perfusions ijskoude 1 M fosfaat buffer zoutoplossing (PBS) gebruiken om de cerebrale therapieën en de hersenen te ontruimen.
- Met behulp van een scalpel, maak een abdominale insnijding over de gehele lengte van het middenrif.
- Knippen door ribben net links van de middellijn van de ribbenkast.
- Toegankelijk opwaarts naar de borstholte. Gebruik klemmen om het hart bloot te stellen en om de afvoer van bloed en andere vloeistoffen.
- Terwijl gestaag het hart met een tang (het hart moet nog steeds worden gewonnen), direct invoegen van een naald in het uitsteeksel van het linkerventrikel te breiden dit tot ongeveer 5 mm. de naald op die positie veilig door klemmen in de buurt van het punt van binnenkomst.
Let op: Doen buitensporig verlengt niet de naald, als het kan de interieur wand doorboren en het verkeer van oplossingen in gevaar te brengen. - Laat de klep zodat de stroom ijskoude PBS oplossing (200-300 mL) in een langzame en gestage tempo van ongeveer 20 mL/min met behulp van een pomp perfusie. Als de dieren fixatie in plaats van bruto observatie moeten, gebruikt u dezelfde dosisniveaus van ijskoude zoutoplossing 0,9%.
- Maak met scherpe schaar een insnijding in het atrium, ervoor te zorgen dat de oplossing voortdurend stroomt. Als de vloeistof niet vrij stroomt of uit de neusgaten of de mond van het dier komt, verplaatsen de naald.
- Scherm voor CMHs door bruto observatie.
Opmerking: Als het monster niet wordt gebruikt bij de berekening van het aantal CMHs door bruto observatie, dan deze stap kan worden weggelaten.
- Uitvoeren van cardiale perfusions ijskoude 1 M fosfaat buffer zoutoplossing (PBS) gebruiken om de cerebrale therapieën en de hersenen te ontruimen.
- Fixatie
- Uitvoeren van cardiale perfusions met ijskoude 0,9% zoutoplossing (200-300 mL) wissen van de cerebrale therapieën en hersenen.
- Cardiale perfusions met ijskoude 4% paraformaldehyde voor fixatie uitvoeren
- Onthoofden van ratten, isoleren van de hersenen en het onderdompelen van de hersenen in de 20% sacharoseoplossing voor ten minste 6 uur.
- Veranderen van de oplossing in 30% sacharose en moeilijke situatie voor een andere 6 h.
- 10 mm dik hersenen weefsels secties met behulp van een cryostaat voor te bereiden.
5. hij kleuring
Opmerking: Deze procedure wordt uitgevoerd met behulp van een hij kleuring Kit.
- Wassen van de dia's in gedestilleerd water.
- Vlek in de Haematoxyline oplossing gedurende 8 minuten wassen in stromend kraantjeswater voor 5 min.
- Differentiëren in 1% zuur alcohol voor 30 s. Wash in stromend kraantjeswater voor 1 min.
- Vlekken in 0,2% ammoniak water (blauwsel) of verzadigde lithium carbonaat oplossing voor 30 s tot 1 min. Wash in stromend kraantjeswater voor 5 min.
- Spoel in 95% alcohol (10 dips).
- Counterstain met eosine oplossing voor 30 s tot 1 min.
- Uitdrogen door 95% alcohol, twee wijzigingen van absolute alcohol, voor elke 5 min.
- Duidelijk in xyleen voor 30 s.
- Monteren met behulp van Liu methode9.
- Analyseren met behulp van een helderveld fluorescentie Microscoop.
Opmerking: rode bloedcellen vrijgelaten uit de bloedvaten, die de onderdelen van CMHs zijn, verschijnt in rood-oranje onder hij kleuring.
6. Perl Pruisisch blauw kleuring
Opmerking: Deze procedure wordt uitgevoerd met behulp van een Perls kleuring Kit.
- Dia's met gedestilleerd water wassen.
- Vlek in reactie oplossing met gelijke delen mengsel van ferrocyanide en zoutzuur voor 10 min.
- Uitdrogen, duidelijk, monteren en analyseren van de dia's, zoals beschreven in stappen 5.7 – 5.10.
7. EB dubbel-kleuring
Opmerking: Deze procedure volgt stap 4.1.3.
- Wassen van dia's met PBS driemaal voor elke 5 min.
- Dia's met 4', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) oplossing gedurende 15 minuten bij kamertemperatuur incuberen.
- Wassen van de dia's met PBS oplossing drie keer, gedurende 5 minuten elk, en mount dia's met PBS-glycerol oplossing.
- Analyseren van beelden op een fluorescentie Microscoop. EB afzetting wordt aangegeven door rode fluorescentie; kernen worden aangegeven door blauwe fluorescentie.
8. MRI-SWI
- MRI op een 7-T magneet uitgerust met een actief afgeschermde kleurovergang systeem (16 cm-binnendiameter) uitvoeren.
- Zeven dagen na de behandeling, anesthetize de rats gelaatsmasker na inademing van 1,5-2,0% Isofluraan met behulp van een systeem van Isofluraan anesthesie.
- Dierenarts zalf op de ogen van de rat om te voorkomen dat droogte terwijl onder verdoving toepassen.
- Houd de ratten in naar voren gebogen positie en uitvoeren van een scan MRI-SWI.
- Verkrijgen van SWI gewogen scans met behulp van een echo van de snel-spin-reeks met de volgende parameters: echo tijd (TE) 8 ms, herhaling tijd (TR) 40 ms, flip-hoek = 12°, beeldveld (FOV) 35 mm × 35 mm, overname matrix 384 × 384, verwerven van 1 mm dik-segmenten.
- CMHs in MRI-SWI volgens Greenberg et al. identificeren 11, waaronder de volgende criteria: (1) een diameter van ≤10 mm, en (2) circulaire, geïsoleerde en laag-signaal intensiteit vlekken.
- Aan het einde van het experiment, euthanaseren de ratten met behulp van de methode van de overdosis kooldioxide op (een stroom van 6 L/min) of 30% van het volume van de container.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
CMHs kunnen worden opgespoord met behulp van diverse benaderingen. De meest goed geaccepteerde methoden omvatten het volgende: (1) bruto observatie en evaluatie van oppervlakte CMHs (weergegeven in afbeelding 1, bovenste); (2) hij kleuring voor de opsporing van rode bloedcellen (afgebeeld in figuur 2A, bovenste deelvenster) of Pruisische kleuring detecting ijzer(III) ijzer afgeleid van lysis van de rode bloedcellen (figuur 2A, lagere paneel); (3) EB verdubbeld kleuring voor de detectie van EB afzetting afgeleid van BBB lekkage (Figuur 3, deelvenster links); (4) MRI-SWI detectie van CMHs hypointense signalen (Figuur 4, linkerpaneel).
Figuur 1: bruto observatie van oppervlakte CMHs. Bovenste deelvenster (A): Rat model; Lagere paneel (B): Control dier. Rode pijlen duiden oppervlakte CMHs. Modified en hergebruikt met toestemming10. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 2: hij kleuring en Pruisische kleuring beelden. (A) Reflected rat model. Rode bloedcellen werden gevonden buiten de haarvaten in het bovenste deelvenster en ijzer(III) IJzeren punten afgeleid van lysis van rode bloedcellen werden ontdekt in lagere paneel; (B) Reflected controle dier. Rode bloedcellen noch ijzer(III) IJzeren punten bleken. Schaal bars = 100 µm (linkerdeel van A en B). Schaal bars = 50 µm (rechterdeel van A en B). Machtiging gemodificeerde en hergebruikte met10. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 3. Dubbel label EB afzetting fluorescentie imaging. Linker paneel: Rat model. Hoeveelheid EB moleculen gelekt uit benadeelde BBB werden ontdekt (in rood); Rechter paneel: controle dier. Geen EB moleculen werden ontdekt. DAPI blauw werd gebruikt als mount medium. Schaal bars = 100 µm. gewijzigd en opnieuw gebruikt met toestemming10. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 4. MRI-SWI beelden. Linker paneel (A): Rat model. Zwarte pijlen duiden hypointense signalen van CMHs; Rechter paneel (B): Control dier. Geen hypointense signalen werden gevonden. Machtiging gemodificeerde en hergebruikte met10. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
In de afgelopen jaren toegenomen onderzoeken op CMHs. Het mechanisme van CMHs blijft echter onduidelijk is, te vragen wetenschappers om dierlijke modellen die deze bijzondere voorwaarde te simuleren. Bijvoorbeeld, Hoffmann et al. een hypoxie-geïnduceerde CMHs muismodel ontwikkeld dat laat zien dat CMHs worden veroorzaakt door hypoxie en verstoring van cerebrovasculaire autoregulatie12. Reuter et al. 5 een CMHs model in APP23-transgene muizen, waaruit bleek dat Cerebrale amyloïde angiopathie (CAA) speelt een belangrijke rol in de etiologie van CMHs. Fisher et al. rapporteerde een muismodel van CMHs die werd veroorzaakt door LPS injectie9, opgericht die bleek dat de CMHs worden veroorzaakt door ontsteking2,13,14. Ook wij hebben met succes een sub acute CMHs model in SD ratten met behulp van LPS injectie ontwikkeld en hebben gevonden dat stikstofoxide synthase (NOS), met name neurale NOS en endotheel NOS, zijn betrokken in de etiologie van CMHs, waardoor de ontsteking10 .
De kritische stap van onze protocol is de LPS-injectie, die uitvoerig is gebruikt bij de ontwikkeling van lymfkliertest modellen van neuropsychiatrische aandoeningen zoals depressie15, schizofrenie16, ziekte van Parkinson17, ziekte van Alzheimer 18en Prion ziekten19. Om onze kennis is onze gebruik van een enkele dosis (1 mg/kg) veel hoger dan die in andere studies15,16,17,18,19werd toegepast. Dit zou een plausibele reden voor de sterfte in de huidige studie. LPS dosis wijziging voor CMHs inductie wellicht een interessant onderzoeksonderwerp, als verschillende doses of injectie schema is aangetoond dat ze invloed hebben op het aantal, de grootte, distributie en progressie van CMHs2. Een eerdere studie heeft aangetoond dat het bestuur van LPS aan muizen bij een dosis van 3 mg/kg acute CMHs2 induceert.
Hoewel de ontwikkeling van verschillende dierlijke modellen heeft vergemakkelijkt onderzoek onderzoek naar CMHs, moeten we toegeven dat die dierlijke modellen niet het proces van klinische CMHs doen simuleren. Bijvoorbeeld, in ons model rat, evenals Fisher's muizen model, CMHs werden waargenomen in het cerebellum, hoewel de meeste werden waargenomen in de lobar regio's (vooral CAA-gerelateerde) en diepe - of infra-tentorial locaties (voornamelijk hypertensie-gerelateerde)20, 21. wij heb geen verklaring voor deze discrepantie in distributie, hoewel zowel Fisher en ons team deze observatie aan de kwetsbaarheid van de cerebellaire bloedvaten tot ontsteking wijt.
In de meeste klinische gevallen voortvloeien CMHs uit meer dan één etiologische factor, hoewel ontsteking een belangrijke rol in de etiologie speelt. Studies gericht op meerdere factoren die CMHs, in plaats van pure ontsteking geïnduceerde CMHs veroorzaken, kunnen dus meer nuttig in het simuleren van deze voorwaarde. De LPS injectie model kan worden gebruikt met andere onderliggende factoren te onderzoeken van het mechanisme van de CMHs. Bijvoorbeeld, hebben Fisher et al. uitgevoerd een voorontwerp, nog interessante stap met veroudering muizen ingespoten met LPS, en aangetoond dat veroudering is een belangrijke factor die de hersenen gevoeliger voor ontsteking geïnduceerde CMHs14zouden kunnen maken. Volgens ons is de betekenis van het huidige model de verenigbaarheid ervan met de andere factoren in dierlijke modellen voor veroudering14, trauma22, evenals de chronische ziekten zoals hypercholesterolemie23of transgene modellen zoals hypertensie,24 omwille van de eenvoud, tijd-effectiviteit en de stabiliteit van dit protocol.
Patiënten met CMHs Toon cognitieve dalingen neuropsychiatrische manifestaties en vertigo, die verband houden met de verdeling van de CMHs. Een beperking van dit protocol is dat na LPS injectie, we kunnen niet uitsluiten de effecten van de perifere ontsteking op het gedrag van de ratten, hoewel een afname van sociaal gedrag en gravende (intrinsieke natuurlijke activiteit van knaagdieren als gevolg van de bijzondere waardevermindering van dagelijkse activiteiten) werden waargenomen. Verdere zijn studies over manieren om te verbeteren van onze methode voor de opwekking van een dierlijk model van CMHs, bijvoorbeeld, methode voor het injecteren van LPS of schema van observatie, gerechtvaardigd.
Dit eenvoudige, rendabele en stabiele CMHs lymfkliertest model geïnduceerd door LPS injectie kan echter worden gebruikt door onderzoekers in het ophelderen van de etiologie van CMHs.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs hebben niets te onthullen.
Acknowledgments
Wij danken leraar Jian Feng Lei en collega's uit de hoofdstad Medizinische Universität voor begeleiding tijdens de MRI. Wij danken ook Jing Zeng van de afdeling Neurologie, de tweede Volksrepubliek ziekenhuis van Yichang voor het verstrekken van technische ondersteuning.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| LPS | Sigma-Aldrich | L-2630 | for inflammation induction |
| EB | Sigma-aldrich | E2129 | for EB leakage detection |
| DAPI dying solution | Servicbio | G1012 | count medium for IF |
| Perl’s Prussian staining | Solarbio | G1424 | Kit for Prussian staining |
| HE staining | Solarbio | G1120 | Kit for HE staining |
| chloral hydrate | Sigma-Aldrich | 47335U | For anesthesia |
| phosphate buffer saline (PBS) | Solarbio | P1022 | a kind of buffer solution commonly used in experiment |
| 0.9% saline solution | Hainan DonglianChangfu Pharmaceutical Co., Ltd., China | solution for perfusion | |
| paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | 158127 | a kind of solution commonly used for fixation |
| 20% sucrose solution | Solarbio | G2461 | a kind of solution commonly used for fixation |
| 30% sucrose solution | Solarbio | G2460 | a kind of solution commonly used for fixation |
| vet ointment | Solcoseryl eye gel, Bacel, Switzerland | for rat's eyes protection |
References
- Sumbria, R. K., et al. A murine model of inflammation-induced cerebral microbleeds. J Neuroinflammation. 13 (1), 218 (2016).
- Vernooij, M. W., et al. Prevalence and risk factors of cerebral microbleeds the Rotterdam Scan Study. Neurology. 70 (14), 1208-1214 (2009).
- Pettersen, J. A., et al. Microbleed topography, leukoaraiosis, and cognition in probable Alzheimer disease from the Sunnybrook dementia study. Archives of Neurology. 65 (6), 790-795 (2008).
- Xu, X., et al. Cerebral microbleeds and neuropsychiatric symptoms in an elderly Asian cohort. Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 88 (1), 7-11 (2017).
- Mcauley, G., Schrag, M., Barnes, S., Obenaus, A., Dickson, A., Kirsch, W. In vivo iron quantification in collagenase-induced microbleeds in rat brain. Magnetic Resonance in Medicine. 67 (3), 711-717 (2012).
- Reuter, B., et al. Development of cerebral microbleeds in the APP23-transgenic mouse model of cerebral amyloid angiopathy-a 9.4 tesla MRI study. Frontiers in Aging Neuroscience. 8 (8), 170 (2016).
- Scott, L. L., Downing, T. G. A single neonatal exposure to BMAA in a rat model produces neuropathology consistent with neurodegenerative diseases. Toxins. 10 (1), E22 (2018).
- Toth, P., et al. Aging exacerbates hypertension-induced cerebral microhemorrhages in mice: role of resveratrol treatment in vasoprotection. Aging Cell. 14 (3), 400-408 (2015).
- Liu, S., et al. Comparative analysis of H&E and Prussian blue staining in a mouse model of cerebral microbleeds. Journal of Histochemistry & Cytochemistry. 62 (11), 767-773 (2014).
- Zeng, J., Zhào, H., Liu, Z., Zhang, W., Huang, Y. Lipopolysaccharide induces subacute cerebral microhemorrhages with involvement of Nitric Oxide Synthase in rats. Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 27 (7), 1905-1913 (2018).
- Greenberg, S. M., et al. Cerebral microbleeds: A guide to detection and interpretation. Lancet Neurology. 8 (2), 165-174 (2009).
- Hoffmann, A., et al. High-Field MRI reveals a drastic increase of hypoxia-induced microhemorrhages upon tissue reoxygenation in the mouse brain with strong predominance in the olfactory bulb. Plos One. 11 (2), e0148441 (2016).
- Sumbria, R. K., et al. Effects of phosphodiesterase 3A modulation on murine cerebral microhemorrhages. Journal of Neuroinflammation. 14 (1), 114 (2017).
- Sumbria, R. K., et al. Aging exacerbates development of cerebral microbleeds in a mouse model. Journal of Neuroinflammation. 15 (1), 69 (2018).
- Mello, B. S. F., et al. Sex influences in behavior and brain inflammatory and oxidative alterations in mice submitted to lipopolysaccharide-induced inflammatory model of depression. Journal of Neuroimmunol. 320, 133-142 (2018).
- Souza, D. F. D., et al. Changes in astroglial markers in a maternal immune activation model of schizophrenia in Wistar rats are dependent on sex. Frontiers in Cellular Neuroscience. 9 (489), (2015).
- Dutta, G., Zhang, P., Liu, B. The Lipopolysaccharide Parkinson's disease animal model: mechanistic studies and drug discovery. Fundamental & Clinical Pharmacology. 22 (5), 453-464 (2008).
- El-Sayed, N. S., Bayan, Y. Possible role of resveratrol targeting estradiol and neprilysin pathways in lipopolysaccharide model of Alzheimer disease. Advances in Experimental Medicine and Biology. 822 (822), 107-118 (2015).
- Combrinck, M. I., Perry, V. H., Cunningham, C. Peripheral infection evokes exaggerated sickness behaviour in pre-clinical murine prion disease. Neuroscience. 112 (1), 7-11 (2002).
- Pantoni, L. Cerebral small vessel disease: from pathogenesis and clinical characteristics to therapeutic challenges. Lancet Neurology. 9 (7), 689-701 (2010).
- Rosand, J., et al. Spatial clustering of hemorrhages in probable cerebral amyloid angiopathy. Annals of Neurology. 58 (3), 459-462 (2005).
- Robinson, S., et al. Microstructural and microglial changes after repetitive mild traumatic brain injury in mice. Journal of Neuroscience Research. 95 (4), 1025-1035 (2017).
- Kraft, P., et al. Hypercholesterolemia induced cerebral small vessel disease. Plos One. 12 (8), e0182822 (2017).
- Schreiber, S., Bueche, C. Z., Garz, C., Baun, H. Blood brain barrier breakdown as the starting point of cerebral small vessel disease? - New insights from a rat model. Experimental & Translational Stroke Medicine. 5 (1), 4 (2013).
