Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove

Medicine

Vurdere Neuroprotective effekter av Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Pakk ut med en forbigående arteria cerebri okklusjon musemodell

doi: 10.3791/58454 Published: December 9, 2018
* These authors contributed equally

Summary

I denne studien endre vi en eksisterende eksperimentell metode for å få mer reproduserbar resultater, ved å etablere en arteria cerebri okklusjon (MCAO) musemodell. Peroral administrering av Glycyrrhizae Radix et Rhizome (GR) metanol ekstrakt (GRex), etter slag induksjon, betydelig redusert totale hjerteinfarkt volum i forhold til ubehandlet kontrollgruppen.

Abstract

Ischemia etterfulgt av reperfusion av cerebral blodstrøm etter et hjerneslag fører til døden av nerve celler og tap av hjernevevet. Den mest brukte dyremodell for å studere slag er arteria cerebri okklusjon (MCAO) modell. Tidligere studier har rapportert betennelsessykdommer som forskjellige størrelser selv når de samme eksperimentelle dyrearter ble brukt under lignende MCAO forhold. Derfor har vi utviklet en forbedret eksperimentell metode for å løse dette avviket. Mus ble utsatt for MCAO hjelp av en filament som okklusjon materiale for å etterligne menneskelige slag forhold og filament tykkelse var optimalisert for å etablere mer reproduserbar hjerteinfarkt volum. Mus behandlet med en metanol ekstrakt av Glycyrrhizae Radix et Rhizome (GRex) etter slag induksjon viste et betydelig redusert totale hjerteinfarkt volum og økt antall gjenlevende celler i forhold til ubehandlet kontrollgruppen. Dette endret eksperimentelle protokollen vist reproduserbar gunstige effekten av GRex på iskemiske hjerneslag.

Introduction

Hjerneskade forårsaket av iskemi og reperfusion av cerebral blodstrøm fører til døden av nerve celler og tap av hjernevevet. Denne typen hjerneskade fortsetter å øke med økende utbredelsen av cerebrovascular sykdommer på grunn av spredning av metabolske sykdommer som fedme, hypertensjon og diabetes mellitus1,2. Absolutte antallet eldre pasienter med hjerneslag økt dramatisk over hele verden, og kostnaden for medisinsk behandling for disse pasienter, som ofte utelatt med langsiktige handikap, er en stor samfunnsmessig byrde. Sekundær funksjonshemninger bør derfor begrenses så mye som mulig å redusere den økonomiske byrde1,2.

Den vanligste gnagere modellen av cerebral hjerteinfarkt er arteria cerebri (MCA) okklusjon (MCAO) modellen, der MCA er okkludert med en silisium-belagt kirurgisk suturing filament blokkere blodstrøm, forårsaker iskemiske hjerneslag3, 4. bruke en filament som okklusjon materialet lar kontroll av okklusjon tid og varighet ved å manipulere varigheten av intra-luminal filament innsetting.

Tidligere studier har vist at selv når samme gnager MCAO modellen brukes, det totale volumet av cerebral hjerteinfarkt varierer mellom eksperimenter, forårsaker lav reproduserbarhet studiene. For å forbedre reproduserbarhet, optimalisert vi tykkelsen på filament mint brukes i eksperimentet. Resultatene av en innledende studie av cerebral iskemiske perioden og indusert hjerteinfarkt viste at en iskemiske lengre tid enn 60 min lov volumetriske regionen skadet hjernevev observert og kvantifisert.

Glycyrrhizae Radix et Rhizoma (GR), også kjent som lakris, består av tørkede røttene og rotstokker av Glycyrrhiza uralensis og G. glabra. Det er brukt i kinesisk og koreansk tradisjonell medisin for ulike formål, herunder som tilsetningsstoff og medicinally5,6,7.

I en tidligere studie8forbehandling med GR metanol ekstrakt (GRex) viste en anti-apoptotisk effekt i MCAO mus, inkludert betydelige forebygging av nedgangen i protein uttrykk for B-celle lymfom 2 (Bcl-2) og Bcl ekstra stor (Bcl-xL). Denne studien ble gjennomført for å forbedre reproduserbarhet av konvensjonelle MCAO musemodell ved å evaluere effektiviteten ved hvis etter betennelsessykdommer behandling med GRex effektivt redusert betennelsessykdommer volumet MCAO-indusert hjerne skade.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Alle prosedyrer som involverer dyr ble godkjent av den etiske komiteen av Pusan National University (godkjenningsnummer, PNU-2016-1087). En grafisk oversikt over denne studien er vist i figur 1.

1. forberedelse og administrasjon av GRex

Merk: GR brukt i denne studien ble kjøpt fra kommersielle farmasøytiske selskap.

  1. Plasser 200 g GR i 2000 mL av metanol og ruge ved romtemperatur (25 ° C) i 5 dager.
  2. Filtrere blandingen med filter papir med 0,26 mm tykkelse og 5 µm porestørrelse, og fjern deretter nedbryting. Legge til 1000 mL av metanol GR rester og filtrere igjen.
  3. Kombinere de to supernatants, filtrere gjennom filter papir, konsentrere under vakuum og deretter freeze-dry rester å produsere GRex.
  4. Oppløse GRex i dimethyl sulfoxide (DMSO), fortynnet med 0,9% fysiologiske saltvann og filtrere gjennom filtere 0,45 µm sprøyten. Juster deretter siste konsentrasjonen av DMSO < 5%.
  5. Administrere GRex (300 mg/kg kroppsvekt) 1t etter reperfusion av MCAO via muntlig gavage. Administrere DMSO fortynnet i fysiologiske saltvann (10 mL/kg kroppsvekt) bare til normal gruppe og kontroll grupper, henholdsvis.
    Merk: Konsentrasjonen av GRex brukes i dette eksperimentet ble fastsatt ifølge konsentrasjonen som var aktiv gjennom våre tidligere studie8.

2. mus modell av MCAO

  1. Bruk mannlige C57BL/6 mus alderen 6 uker og veier 22-25 g. gir alle dyr med fri tilgang til standard chow og vann, og huset dem i et miljø med kontrollert temperatur (22 ± 1 ° C) og en 12 h lys/mørke syklus.
    1. Dele musene i grupper av seks mus hver, som skal bestå av humbug-opererte normal, kontroll og GRex behandlingsgrupper.
    2. Utføre MCAO kirurgi (modifisering av metoden for Koizumi et al. 9) på kontroll og GRex behandlingsgrupper ved hjelp av en stereo-mikroskopet.
  2. Indusere innånding anestesi i mus med 2% isoflurane i 70% N2O og 30% O2. Anestesi anses tilstrekkelig når musen svarer til mekanisk stimulans på halen. Opprettholde kroppstemperaturen av musene på 36,5 ± 0,5 ° C med en kropp temperatur-holder teppe koblet til et termometer.
  3. Fjerne alt håret på kistene og nakken av musene ved barbering etterfulgt av bruk av hår fjerning krem, desinfisere kirurgiske området av huden med betadine scrub alternerende med alkohol for to ganger, og gjør deretter et snitt ca 2 cm lang med kirurgisk blad i midten av halsen. Forsiktig isolere den venstre arteria carotis communis (LCCA), eksterne arteria carotis og grenen av den interne arteria carotis fra omliggende bindevev.
  4. Ligate den eksterne arteria carotis og carotis communis med en kirurgisk Sutur (4-0 silke Sutur, halv hitch knute) for midlertidig å blokkere blodstrøm i den interne arteria carotis under operasjonen.
  5. Sett inn en silisium-belagt nylon Sutur (8-0 monofilament, 11 mm lang) gjennom den interne arteria carotis til opprinnelsen til venstre MCA. Justere tykkelsen av silisium-belagt del av filament for 0,10-0,12 mm.
  6. Mål nedgang i relativ cerebral blodgjennomstrømning (rCBF) i MCA bruker en laser Doppler flowmeter. MCAO vil bli bekreftet når rCBF opprettholdes for < 20% av hvile tilstand verdier under hele iskemiske perioden.
  7. Reparer den innsatte filament blodkaret for 2t mens cerebral arterien er okkludert, og deretter trekke nøye filament for å gjenopprette blodsirkulasjonen for 22t reperfusion. Sutur i huden sy på 5 steder (3-0 silke Sutur, to halv uhell knute) og la hver musen for å vekke av bedøvelsen.
  8. I normal-gruppen Utfør en humbug operasjon følge den samme fremgangsmåten ovenfor (før 2.4), med følgende unntak. Ligate carotis og Sutur radert muskel- og hud.

3. måling av volumet av skadet hjernevev

  1. Etter eutanasi av mus for hjerneskade måling med CO2 innånding hjerner avgiftsdirektoratet musen 24 timer etter utbruddet av MCAO iris kirurgisk saks og vinklet tang.
    1. Etter fjerner hodet med saks, gjør et snitt i huden midtlinjen av hodet til snu huden fra skallen.
    2. Bryte parietal bein med vinklet tang, peeling av dura rolle samtidig, og deretter isolere hjernen nøye fra skallen.
  2. Kutt forbrukeravgift vevet inn i inndelinger (1 mm tykk) bruker en mus hjernen matrise og deretter flekken delene i 17 minutter i en løsning av 2% 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC).
  3. Fikse delene i 10% formalin minst 2 h og deretter fotografere dem bruker et digitalt kamera. TTC vil bli observert stain levedyktig vev rød mens nekrotisk områdene vil være hvit.
  4. Analysere og kvantifisere cerebral betennelsessykdommer området hver del med ImageJ.

4. hematoxylin og Eosin (H & E) og Cresyl Violet farging av histologiske deler

  1. Euthanize mus for histologiske studier ved CO2 innånding og perfuse dem transcardially med 10 mL fosfat-bufret saltoppløsning (PBS), etterfulgt av 10 mL av 4% paraformaldehyde (PFA). Isolere hjernen bruke samme fremgangsmåte som ovenfor (3.1) og fordype hjernen i 10 mL av 30% sukrose over natten.
  2. Embed hjernevev i optimal kutte temperatur (OCT) sammensatte og skjær det coronally i 15-µm-tykk seksjoner med en kryostaten. Montere delene på glass lysbilder, etterfulgt av flekker med hematoxylin og eosin (H & E) eller cresyl violet.
  3. Fordype glass lysbildene i 80% etanol for 1 min etterfulgt av flekker i hematoxylin løsning for 5 min.
    1. Dypp lysbildene i 1% syre alkohol to ganger, oppsluke mettet lithium carbonate løsning for 30 s, vask med vann fra springen i 30 s, og counterstain i eosin løsning for 30 s.
    2. Skyll lysbildene i vann fra springen, suge i 95% og absolutt etanol fortløpende.
    3. Air-Dry lysbilder, fjerne dem i xylen for minst 10 min og deretter montere coverslips ved hjelp av montering medium.
  4. Plass glass lysbilder på et lysbilde varmere minst 1t, etterfulgt av nedsenking i 50% etanol fortynnet med kloroform over natten.
    1. Stain lysbildene med 0,1% cresyl violet i 10 min i 40 ° C tørr ovn.
    2. Oppsluke 95% etanol i 30 minutter og deretter tørke i absolutt etanol for 2 ganger.
    3. Klart 2 ganger i xylen for 5 min og deretter montere med montering medium etter luft tørker.
  5. Bruker et mikroskop, observere histologiske endringene som har skjedd etter MCAO-indusert hjerneskade.

5. statistisk analyse

  1. Express eksperimentelle resultatene som betyr ± standardavvik og bestemme den statistiske betydningen mellom gruppene med en én-veis variansanalyse (ANOVA) etterfulgt av Tukey's post hoc analyse ved hjelp av en dataanalyse programvare.
  2. Angi den statistiske betydningen på en p-verdien < 0,05.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

I humbug-opererte normal gruppen er ingen cerebral betennelsessykdommer observert mens i kontrollgruppen, et relativt bredt spekter av skadede områder er observert. I mus er administrert 300 mg/kg GRex i en statistisk signifikant reduksjon i skadet område-MCAO modellgruppen observert (figur 2).

Histologiske endringene blir etterforsket av flekker iskemiske hjerne seksjoner med H & E eller cresyl violet. H & E flekker gir strukturell informasjon og funksjonelle opplysninger om celler10, mens cresyl violet flekker brukes til å anslå antall hippocampus neurons11. Dermed H & E eller cresyl violet intensitet, målt med ImageJ programvare (Figur 3A), gir en indeks på cellen overlevelse. H & E og cresyl violet flekker intensiteter betydelig nedgang i kontrollgruppen i forhold til normal gruppen (Figur 3B, 3 C). Gruppen GRex-behandlet viser større histologiske integritet, noe mindre neuronal celledød, enn i kontrollgruppen (Figur 3C). Disse resultatene indikerer at GRex har potent neuroprotective effekter mot iskemi/reperfusion-indusert hjerneskade.

Figure 1
Figur 1 . Ordningen av arteria cerebri okklusjon (MCAO) modell og behandling med metanol ekstrakt av Glycyrrhizae Radix et Rhizome (GRex). Mus ble behandlet med 300 mg/kg av GRex 1 h etter MCAO reperfusion, som ble opprettholdt for 2 h. mus var euthanized 24 timer etter MCAO startet, og deretter høstet hjernen skiver ble lagret i en fryser for protein analysen eller beiset med TTC løsning for betennelsessykdommer mål. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 2
Figur 2 . Representant bilder (A) hjernen seksjoner viser effekten av metanol ekstrakt av Glycyrrhizae Radix et Rhizome (GRex) behandling på post arteria cerebri okklusjon (MCAO)-indusert hjernen betennelsessykdommer volumer og (B) én behandling med 300 mg/kg GRex 1 h etter MCAO reperfusion betydelig undertrykt betennelsessykdommer volumer. Resultatene presenteres som betyr ± SDs. ## #p < 0,001 vs normal gruppen ** p < 0,01 vs kontroll gruppe. n = 6 per gruppe. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 3
Figur 3 . Representant bilder av (A) hematoxylin og eosin (H & E)- og cresyl violet-farget hjernen inndelinger og (B, C) intensitet, som ble brukt for å evaluere effekten av metanol ekstrakt av Glycyrrhizae Radix et Rhizome (GRex) på hjernen til midten arteria cerebri okklusjon (MCAO)-skadet mus. Histologiske integritet og vev skade i musen hjernen var vurdert med (B) H & E eller (C) cresyl violet flekker 1t innlegg-MCAO reperfusion. Røde flekker i H & E-farget inndelinger angir kjernefysiske skade. Neurons farget med cresyl violet var farget lilla. GRex-behandlet gruppen viste bedre histologiske integritet enn kontrollgruppen gjorde, som viser mindre neuronal celledød. enH & E-farget; bcresyl violet-farget; c og d, forstørrelser og b, henholdsvis. Resultatene er betyr ± SDs. ## #p < 0,001, og * p < 0,05 vs normal og kontroll grupper. n = 6 per gruppe. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Med den økende utbredelsen av metabolske sykdommer som kronisk hypertensjon, diabetes og hyperlipidemi, som er større risk faktorene for hjerneslag, har hjerneslag forebygging og behandling blitt et viktig område av medisinsk forskning12, 13. underskudd i språk og bevegelse etter et hjerneslag er sterkt korrelert med graden av skade på hjernen vev14 og resultere i en dårlig livskvaliteten for pasienter og deres familier15. Det er viktig å bruke en passende dyr modell av slag som involverer de samme patologiske forandringene som de som oppstår i menneskelig sykdom å studere effekten av medikamentelle behandlinger. Den MCAO modellen etterligner trombotiske slag av hindrer cerebral arteriell fartøy. Det er vanlig fordi det er relativt reproduserbare og minimal invasiv16,17,18,19.

En sammenligning av cerebral hjerteinfarkt indusert for samme hvile tid rapportert av flere forskere, viser imidlertid at totalt hjerteinfarkt volumet varierer mellom studier. Vi konkluderte med at det var forskjeller i okklusjon materialer og den kirurgiske prosedyren. Derfor, selv om MCAO gnager modellen svært reproduserbare, det er ikke alltid mulig å få slike reproduserbarhet. Derfor optimalisert vi tykkelsen på filamenter brukes i mus MCAO modell gjennom våre foreløpige studie og forrige rapport8.

Mest karakteristiske resultatet av våre foreløpige studie sammenlignet med andre studier som at TTC flekker ikke avsløre noen hjerneinfarkt når ischemia ble indusert for 60 min (data ikke vist). Selv etter 90 og 120 min MCAO i mus, vår resultatet viste lavere hjerteinfarkt volum enn andre undersøkelser. En begrensning av denne studien er at vi ikke har ennå bestemt den eksakte årsaken til disse resultatene. men planlegger vi å utforske dette fenomenet i videre studier.

Tallrike studier har nylig rapportert at GR eller komponentene har farmakologiske aktiviteter inkludert antitumor antimikrobielle og anti-inflammatoriske effekter20,21,22. En tidligere studien rapporterte at GRex forbehandling effektivt hemmet aktivering av caspase-9 av upregulating protein uttrykk for Bcl-2 og Bcl-xL8. Forebyggende behandlinger for hjerneslag er imidlertid mindre klinisk relevant enn post-takts behandling.

I denne studien, som var basert på en tidligere studie8 vurdert effektiviteten av GRex etter behandling i en MCAO musemodell. Som avbildet i delen representant resultatene, viste GRex etter behandling gunstige effekter å redusere totale hjerteinfarkt volum og ameliorating skader cellulære strukturer på MCAO-indusert hjerneskade i mus. Bestemt handling mekanismer for GRex på post iskemisk hjerneskade mangler i denne studien, men eksperimentelle protokollene som brukes i denne studien ble vist effekten av dette urtemedisin ved å etterligne menneskelige effekter av et strøk.

Selv om de eksperimentelle resultatene ikke er observert i denne studien nevrale underskudd score (NDS) ble målt i våre foreløpige eksperiment og ingen signifikant forskjell kjent mellom kontrollen og GRex-behandlet grupper, som antas å skyldes kort observasjon tidspunktet sammenlignet alvorlighetsgraden av streken. Vi planlegger å observere effekten av GRex behandling på NDS over en lang periode etter forårsaker moderate ødeleggelser.

I konklusjonen, ble neuroprotective effekten av GRex behandling i en mus MCAO modell demonstrert i denne studien med god reproduserbarhet. Proteiner involvert i den underliggende mekanismen bør undersøkes i fremtidige studier.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne ikke avsløre.

Acknowledgments

Ikke aktuelt.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Gwangmyoung Pharmaceuticals Co., Korea Glycyrrhizae Radix et Rhizoma
Qualitative filter paper Advantec Filter paper No. 2 Qualitative filter paper
Dimethyl sulfoxide (DMSO) Sigma D8418-250ML Dimethyl sulfoxide (DMSO)
Syringe filter (0.45 µm) Sigma CLS431220 Syringe filter (0.45 µm)
Stereo Microscope Leica M50 Stereo Microscope
Stereo Microscope Nikon SMZ745 Stereo Microscope
Laser Doppler Moor Instrument moorVMS-LDF Laser Doppler
Anesthesia Tabletop Bracket with N2O&O2 Flowmeter System Harvard Appratus 34-1352 Anesthesia Tabletop Bracket with N2O&O2 Flowmeter System
Homeothermic Monitoring System Harvard Appratus 55-7020 Homeothermic Monitoring System
Digital Camera Canon Eos-M2 Digital Camera
Cryostat Leica CM3050S Cryostat
Microscope Carl Zeiss Zeiss Axio Microscope
Data Analysis Systat Software Inc. SigmaPlot version 12 Data Analysis
Data Analysis NIH Image ImageJ Data Analysis
Mouse diet Doo Yeol Biotech Standard rodent chow Mouse diet
Isoflurane JOONGWAE A02104781 Isoflurane
Isoflurane TROIKAA ISOTROY 100 Isoflurane
Silk suture (4-0 Black silk)  AILEE SK47510 Silk suture (4-0 Black silk) 
Silk suture (3-0 White silk)  Baekjae 57 Silk suture (3-0 White silk) 
Nylon suture (8-0 monofilament)  AILEE NB825 Nylon suture (8-0 monofilament) 
2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) Sigma T8877-25G 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC)
Formalin (Formaldehyde solution) JUNSEI 69360-1263 20KG Formalin (Formaldehyde solution)
Hematoxylin (Harris Hematoxylin) YD Diagnostics EasyStain Hematoxylin (Harris Hematoxylin)
Eosin (1% Eosin Y Solution) MUTO PURE CHEMICALS 3200-2 Eosin (1% Eosin Y Solution)
Cresyl violet (acetate) Sigma C5042-10G Cresyl violet (acetate)
Paraformaldehyde  Sigma-Aldrich P6148-1KG Paraformaldehyde 
Sucrose JUNSEI 31365-0350 1KG Sucrose
Optimum cutting temperature (OCT) compound Scigen 4583 Optimum cutting temperature (OCT) compound
Disecting Knife Fine Science Tools 10055-12 Disecting Knife
#4 Forcep Fine Science Tools 11241-30 #4 Forcep
#5 Forcep Fine Science Tools 11254-20 #5 Forcep
#6 Forcep Fine Science Tools 11260-20 #6 Forcep
#7 Fine Forcep Fine Science Tools 11274-20 #7 Fine Forcep
Surgical Scissors Fine Science Tools 14001-12 Surgical Scissors
Extra Fine Bonn Scissors Fine Science Tools 14084-08 Extra Fine Bonn Scissors
Moria Pascheff-Wolff Spring Scissors Fine Science Tools 15371-92 Moria Pascheff-Wolff Spring Scissors
Vessel Dilating Forcep Fine Science Tools 18153-11 Vessel Dilating Forcep

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Bejot, Y., Delpont, B., Giroud, M. Rising stroke incidence in young adults: more epidemiological evidence, more questions to be answered. Journal of the American Heart Association. 11, (5), (2016).
  2. Hadadha, M., Vakili, A., Bandegi, A. R. Effect of the inhibition of hydrogen sulfide synthesis on ischemic injury and oxidative stress biomarkers in a transient model of focal cerebral ischemia in rats. Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 24, (12), 2676-2684 (2015).
  3. Durukan, A., Tatlisumak, T. Animal models of ischemic stroke. Article in Handbook of Clinical Neurology. 92, 43-66 (2009).
  4. Kim, D. Animal Models of Stroke. Brain and Neurorehabilitation. 4, (1), 1-11 (2011).
  5. Rizzato, G., Scalabrin, E., Radaelli, M., Capodaglio, G., Piccolo, O. A new exploration of licorice metabolome. Food Chemistry. 221, 959-968 (2017).
  6. Zhu, Z., et al. Rapid determination of flavonoids in licorice and comparison of three licorice species. Journal of Separation Science. 39, (3), 473-482 (2016).
  7. Ota, M., Mikage, M., Cai, S. Q. Herbological study on the medicinal effects of roasted licorice and honey-roasted licorice. Yakushigaku Zasshi. 50, (1), 38-45 (2015).
  8. Lim, C., et al. Licorice pretreatment protects against brain damage induced by middle cerebral artery occlusion in mice. Journal of Medicinal Food. 21, (5), 474-480 (2018).
  9. Koizumi, J. Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. Experimental studies of ischemic brain edema. Nosotchu. 8, (1), 1-8 (1986).
  10. Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections. Cold Spring Harbor Protocols. 2008, (2008).
  11. Zhu, Y., Liu, F., Zou, X., Torbey, M. Comparison of unbiased estimation of neuronal number in the rat hippocampus with different staining methods. Journal of Neuroscience Methods. 254, 73-79 (2005).
  12. Alberts, M. J., Ovbiagele, B. Current strategies for ischemic stroke prevention: role of multimodal combination therapies. Journal of Neurology. 254, (10), 1414-1426 (2007).
  13. Pinto, A., Tuttolomondo, A., Di Raimondo, D., Fernandez, P., Licata, G. Cerebrovascular risk factors and clinical classification of strokes. Seminars in Vascular Medicine. 4, (3), 287-303 (2004).
  14. Barlow, S. J. Identifying the brain regions associated with acute spasticity in patients diagnosed with an ischemic stroke. Somatosensory and Motor Research. 33, (2), 1-8 (2016).
  15. Roth, S., Liesz, A. Stroke research at the crossroads - where are we heading. Swiss Medical Weekly. 146, 14329 (2016).
  16. Feuerstein, G. Z., Wang, X. Animal models of stroke. Molecular Medicine Today. 6, (3), 133-135 (2000).
  17. Herson, P. S., Traystman, R. J. Animal models of stroke: translational potential at present and in 2050. Future Neurology. 9, (5), 541-551 (2014).
  18. Kumar, A., Gupta Aakriti, V. A review on animal models of stroke: an update. Brain Research Bulletin. 122, 35-44 (2016).
  19. O'Collins, V. E., Donnan, G. A., Howells, D. W. History of animal models of stroke. International Journal of Stroke. 6, (1), 77-78 (2011).
  20. Ji, S., et al. Bioactive constituents of Glycyrrhiza uralensis (licorice): discovery of the effective components of a traditional herbal medicine. Journal of Natural Products. 79, (2), 281-292 (2016).
  21. Yang, R., Wang, L. Q., Yuan, B. C., Liu, Y. The pharmacological activities of licorice. Planta Medica. 81, (18), 1654-1669 (2015).
  22. Yang, R., Yuan, B. C., Ma, Y. S., Zhou, S., Liu, Y. The anti-inflammatory activity of licorice, a widely used Chinese herb. Pharmaceutical Biology. 55, (1), 5-18 (2017).
Vurdere Neuroprotective effekter av Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Pakk ut med en forbigående arteria cerebri okklusjon musemodell
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Lee, S. E., Lim, C., Lee, M., Kim, C. H., Kim, H., Lee, B., Cho, S. Assessing Neuroprotective Effects of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Extract Using a Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Mouse Model. J. Vis. Exp. (142), e58454, doi:10.3791/58454 (2018).More

Lee, S. E., Lim, C., Lee, M., Kim, C. H., Kim, H., Lee, B., Cho, S. Assessing Neuroprotective Effects of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Extract Using a Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Mouse Model. J. Vis. Exp. (142), e58454, doi:10.3791/58454 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter