Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove

Medicine

Оценка влияния нейропротекторной Glycyrrhizae Radix et корневище извлечь с помощью переходных средней мозговой артерии окклюзии мыши модели

doi: 10.3791/58454 Published: December 9, 2018
* These authors contributed equally

Summary

В этом исследовании мы изменить существующий экспериментальный метод для получения более воспроизводимые результаты, путем создания модели мыши средней мозговой артерии окклюзии (СМАо). Пероральное введение Glycyrrhizae Radix et корневища (GR) метанола экстракт (GRex), после инсульта индукции, значительно сократили объем всего миокарда по сравнению с необработанными контрольной группы.

Abstract

Ишемии, следуют реперфузии мозгового кровообращения после инсульта приводит к смерти нервных клеток и потере ткани головного мозга. Наиболее часто используемых животных модель для изучения инсульта является средней мозговой артерии окклюзии (СМАо). Предыдущих исследований сообщили различные инфаркте размеры даже когда же экспериментальных животных был использован в аналогичных СМАо условиях. Поэтому мы разработали более экспериментальный метод для устранения этого несоответствия. Мышей были подвергнуты СМАо с помощью нити как непроходимость материал для имитации условий человека инсульта и накаливания толщину был оптимизирован для создать более громкости воспроизводимый миокарда. Мышей, получавших с метанолом экстракт Glycyrrhizae Radix et корневища (GRex) после инсульта индукции показан объем значительно снизилась общая миокарда и увеличение количества живых клеток по отношению к группе управления необработанными. Это изменение экспериментальный протокол успешно и можно воспроизвести продемонстрировано благотворное влияние GRex на ишемического инсульта.

Introduction

Повреждения головного мозга, вызванные ишемии и реперфузии мозгового кровотока приводит к смерти клетки нерва и потере ткани головного мозга. Этот тип повреждения головного мозга продолжает увеличиваться с распространением цереброваскулярных заболеваний из-за распространения таких метаболических заболеваний, как ожирение, гипертензия и сахарный диабет1,2. Абсолютное количество пожилых больных с инсультом резко возросло во всем мире, и стоимость медицинского обслуживания для этих пациентов, которые часто остаются с долгосрочной инвалидности, является тяжелым бременем общества. Таким образом вторичной инвалидности должны быть смягчены как можно больше уменьшить экономическое бремя1,2.

Наиболее часто используемые грызунов модель ишемии миокарда является средней мозговой артерии (MCA) окклюзии (СМАо), в котором MCA закрыта с силиконовой оболочкой хирургические сшивающие накаливания блокировать поток крови, вызывая ишемического инсульта3, 4. с помощью нити как непроходимость материал позволяет контролировать время окклюзии и постоянство, манипулируя продолжительность интра просветный накаливания вставки.

Предыдущие исследования показали, что даже когда же грызунов СМАо модель используется, общий объем ишемии миокарда колеблется от экспериментов, вызывая низкая воспроизводимость результатов исследований. Чтобы улучшить воспроизводимости, мы оптимизировали Толщина нити мяты, используемых в эксперименте. Результаты предварительного исследования церебрального ишемического периода и индуцированных миокарда, показал ишемического период дольше, чем 60 мин позволила регионе объемные повреждения ткани мозга наблюдается и количественно.

Glycyrrhizae Radix et корневище (GR), также известный как солодка, состоит из сушеных корней и корневищ солодки uralensis и glabra г. Он был использован в китайских и корейских традиционной медицины для различных целей, включая в качестве пищевой добавки и лечебных5,6,7.

В предыдущем исследовании8, предварительной обработки с GR метанола экстракт (GRex) показан эффект анти apoptotic СМАо мышей в том числе значительные предотвращения снижения экспрессии белков B-клеточной лимфомы 2 (Bcl-2) и Bcl очень большой (Bcl-xL). Это исследование было проведено для улучшения воспроизводимость традиционной модели мыши СМАо путем оценки ее эффективности в определении, если после инфаркта лечение с GRex эффективно сократить объем инфаркте СМАо индуцированной мозгового повреждения.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Все процедуры с участием животных были утверждены Комитетом по этике Пусанского национального университета (номер официального утверждения, ПНУ-2016-1087). На рисунке 1показан графический обзор этого исследования.

1. Подготовка и администрирование GRex

Примечание: Гр, использованных в данном исследовании был приобретен у коммерческих фармацевтической компании.

  1. 200 g гр в 2000 мл метанола и проинкубируйте 5 дней при комнатной температуре (25 ° C).
  2. Смесь с помощью фильтр-бумаги с толщина 0,26 мм и 5 мкм поры фильтра, а затем удалить супернатант. Добавлять 1000 мл метанола GR остатков и фильтровать снова.
  3. Объединить два supernatants, процеживают через фильтровальную бумагу, сосредоточиться в вакууме и затем freeze-dry остатков для производства GRex.
  4. Распустить GRex в диметилсульфоксида (ДМСО), разбавить 0,9% физиологического раствора и процеживают через фильтр шприц 0,45 мкм. Затем настройте конечная концентрация ДМСО < 5%.
  5. Администрировать GRex (300 мг/кг массы тела) 1 час после реперфузии СМАо через пероральная затравка. Администрировать ДМСО, разбавленных в физиологического раствора (10 мл/кг массы тела) только к обычной группы и группы управления, соответственно.
    Примечание: Концентрация GRex, используемых в этом эксперименте был определен согласно концентрации, которая была активна через наши предыдущие исследования8.

2. мыши модель СМАо

  1. Использование самцов мышей C57BL/6 в возрасте 6 недель и весом 22-25 г. обеспечить всех животных с свободный доступ к стандартным Чоу и воды и дом их в среде с контролируемой температурой (22 ± 1 ° C) и 12 h свет/темно цикла.
    1. Разделите мышей на группы по шесть мышей каждый, которые должны состоять из Шам работает нормальный, контроля и лечения групп GRex.
    2. Выполнять СМАо хирургии (модификация метода Koizumi et al. 9) на элемент управления и GRex лечения групп с помощью стерео микроскопа.
  2. Побудить ингаляционной анестезии в мышей, с помощью изофлюрановая 2% 70% N2O и O 30%2. Анестезия считается достаточным, когда мышь перестает механических раздражитель, применительно к его хвост. Поддерживать температуру тела мышей на 36,5 ± 0,5 ° C, с помощью тела, температура Холдинг одеяло подключен к термометр.
  3. Удалить все волосы на груди и шеи мышей после бритья следуют использования удаления волос крем, дезинфекция хирургические сайт кожи с скраб Бетадин, чередующихся с алкоголем за два раза, а затем сделать надрез примерно 2 см длиной, с хирургической лезвие в центре шеи. Тщательно изолируйте левую общую сонную артерию (LCCA), Внешние сонной артерии и ветви внутренней сонной артерии от окружающих соединительной ткани.
  4. Перевязать наружной сонной артерии и общей сонной артерии с шовного (4-0 Шелковый шов, половина Хитч узел), временно блокировать поток крови в внутренней сонной артерии во время операции.
  5. Вставьте кремния покрытием нейлон шовные (Мононить 8-0, 11 мм) через внутренней сонной артерии на происхождение левой MCA. Отрегулировать толщину кремния покрытием частью накаливания к ряду 0,10-0,12 мм.
  6. Измерьте сокращение относительной мозгового кровотока (rCBF) в MCA, с помощью лазерного доплеровского расходомера. СМАо будет подтверждено, когда rCBF поддерживается в < 20% значения состояния покоя во время всего периода ишемического.
  7. Исправить вставленной нити в кровеносный сосуд для 2 h, пока закрыта мозговой артерии, а затем аккуратно снять накаливания для восстановления кровотока на 22 h реперфузии. Шовные коже по шитье на 5 мест (3-0 Шелковый шов, две половины hitches узел) и позволить каждой мыши, чтобы пробудить от анестезии.
  8. В нормальной группе операция Шам следуя той же процедуре выше (до 2.4), за следующим исключением. Перевязать общей сонной артерии и шовные резаная мышц и кожи.

3. Измерение объема ткани поврежденных мозга

  1. После эвтаназии мышей для измерения повреждения головного мозга с CO2 ингаляции акцизных мыши мозги 24 ч после начала СМАо, используя Ножницы хирургические Ирис и угловой щипцами.
    1. После удаления головы с помощью ножниц, сделайте надрез в коже средней линии головы перевернуть кожу от черепа.
    2. Разорвать теменной кости с угловым щипцами, отшелушивающим Дура вопрос в то же время, а затем изолировать мозг тщательно от черепа.
  2. Вырезать подакцизным ткань в разделы (толщиной 1 мм) с помощью матрицы мозга мыши и затем пятна в разделах 17 мин в раствор 2% 2,3,5-triphenyltetrazolium хлорида (TTC).
  3. Исправьте в подразделах формалина 10% для по крайней мере 2 часа и затем сфотографировать их с помощью цифровой камеры. TTC будет соблюдаться пятно жизнеспособных ткани красный, в то время как некротические областях будет белым.
  4. Анализа и количественной оценки Церебральный инфаркт площадь каждой секции с помощью ImageJ.

4. гематоксилином и эозином (H & E) и количество кресил фиолетовое окрашивание Гистологические срезы

  1. Усыпить мышей для гистологического исследования, CO2 ингаляции и perfuse их transcardially с 10 мл физиологического раствора фосфатного буфера (PBS), а затем 10 мл 4% параформальдегида (PFA). Изолировать мозг, используя ту же процедуру, как и выше (3.1) и погружать мозга в 10 мл 30% сахарозы на ночь.
  2. Внедрить мозговой ткани оптимального раскроя температуры (OCT) соединения и coronally нарезать его секции толщиной 15 мкм с помощью криостата. Смонтируйте разделы на стеклянных вставках, следуют окрашивание с гематоксилином и эозином (H & E) или количество кресил фиолетовый.
  3. Погружайте стекла слайды в 80% этанола за 1 мин, после окрашивания в растворе гематоксилином за 5 мин.
    1. Дважды Dip слайды кислоты 1% алкоголя, погрузиться в насыщенных лития карбонат решение для 30 сек, промыть проточной водой для 30 s, а затем изображение в раствор эозина для 30 s.
    2. Промойте слайды в водопроводной воде, Замочите в 95% и абсолютного этанола последовательно.
    3. Просушите слайды, очистить их в ксилоле по крайней мере 10 минут, а затем смонтировать coverslips, с помощью установки среднего.
  4. Место стекла слайды на слайде теплее, по крайней мере 1 h, следуют погружения в 50% этанола, разбавляют метилхлороформа на ночь.
    1. Пятно слайды с 0.1% количество кресил фиолетовый для 10 минут в духовке 40 ° C сухой.
    2. Погружать в 95% этаноле для 30 минут, а затем обезвоживает в абсолютного этанола, в 2 раза.
    3. Снимите 2 раза в ксилоле на 5 минут, а затем смонтировать с монтажа средних после воздушной сушки.
  5. С помощью микроскопа, наблюдать гистологические изменения, которые произошли после СМАо индуцированной черепно-мозговой травмы.

5. Статистический анализ

  1. Экспресс результаты эксперимента как средства ± стандартное отклонение и определения статистической значимости между группами с помощью односторонний дисперсионный анализ (ANOVA) следуют Тьюки должность Специального анализа с помощью программного обеспечения для анализа данных.
  2. Установите статистическую значимость в p-значение < 0,05.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

В группе Шам работает нормально не Церебральный инфаркт наблюдается, тогда как в контрольной группе, наблюдается сравнительно широкий спектр поврежденных областей. В мышах управляемых 300 мг/кг GRex в группе СМАо модель, статистически значимое снижение в поврежденной области наблюдается (рис. 2).

Гистологические изменения исследованы путем пятнать ишемии мозга секции с H & E или количество кресил фиолетовый. H & E окрашивание обеспечивает структурную информацию и конкретные функциональные информацию о10клеток, тогда как количество кресил фиолетовое окрашивание используется для оценки общего числа Нейроны гиппокампа11. Таким образом, H & E или количество кресил фиолетовый интенсивности, как измеряется с помощью программного обеспечения ImageJ (рис. 3А), обеспечивает индекс выживание клетки. H & E и количество кресил фиолетового окрашивания интенсивности значительно уменьшение в группе управления по отношению к обычной группы (рис. 3B, 3 C). GRex лечение группа показывает более гистологические целостности, подразумевая меньше смерти нейрональные клетки, чем в контрольной группе (рис. 3C). Эти результаты показывают, что GRex имеет мощный нейропротекторной эффекты против ишемии/реперфузи наведенного черепно-мозговой травмы.

Figure 1
Рисунок 1 . Схема модели средней мозговой артерии окклюзии (СМАо) и обращения с экстрактом метанола Glycyrrhizae Radix et корневища (GRex). Мыши были относиться с 300 мг/кг GRex 1 ч после СМАо реперфузии, который был сохранен для 2 h. мышей были Усыпленных 24 ч после СМАо началось, а затем заготавливаемым мозга ломтики были хранится в глубокой заморозке для assay протеина или окрашенных с ТТС раствор для инфаркте измерение. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Figure 2
Рисунок 2 . Представитель изображения участков мозга (A), показаны последствия метанола экстракт Glycyrrhizae Radix et корневища (GRex) лечение на пост средней мозговой артерии окклюзии (СМАо)-индуцированной томов при инфаркте мозга и (B) одного лечения с 300 мг/кг GRex 1 h после СМАо реперфузии значительно подавлены при инфаркте тома. Результаты представлены как средства ± SDs. ## #p < 0,001 против обычной группы, ** p < 0.01 против управления группы; n = 6 для каждой группы. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Figure 3
Рисунок 3 . Представитель изображения (A) гематоксилином и эозином (H & E)- и количество кресил фиолетовый окрашенных мозга секции и (B, C) цвета света, которые использовались для оценки воздействия экстракта метаноле Glycyrrhizae Radix et корневища (GRex) на мозги среднего мозговой артерии окклюзии (СМАо)-ранения мышей. Гистологические целостности и ткани ущерб в мозг мыши были начисленных используя (B) H & E или (C) количество кресил фиолетовое окрашивание 1 h пост СМАо реперфузии. Красное окрашивание в H & E-окрашенных разделов указывает ядерный ущерб. Нейроны, окрашенные с фиолетовыми количество кресил окрашивали фиолетовый. GRex лечение группы показали лучше гистологические целостности, чем в контрольной группе, указывающее меньше нейронов клеточной смерти. , H & E-витражи; bколичество кресил фиолетовый витражи; c и d, расширениям и b, соответственно. Результаты являются средства ± SDs. ## #p < 0,001, и * p < 0,05 против нормальной и контрольных групп; n = 6 для каждой группы. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

С распространением метаболических заболеваний, таких как хронические гипертония, сахарный диабет, гиперлипидемия, которые являются основными факторами риска развития инсульта инсульта профилактики и лечения стали важной областью медицинских исследований12, 13. дефицит языка и движение после инсульта сильно коррелирует с степень повреждения мозга ткани14 и привести к плохой качества жизни пациентов и их семей15. Важно использовать соответствующие животной модели инсульта, который включает в себя же патологические изменения, которые происходят в болезни человека для изучения эффективности медикаментозного лечения. СМАо модель имитирует тромботических штрихов, препятствуя артериальных сосудов головного мозга. Обычно он используется, потому что это относительно воспроизводимость и минимально инвазивной16,,1718,19.

Однако сравнение области ишемии миокарда, индуцированной же отдыха время сообщили несколько исследователей, показывает, что объем всего миокарда колеблется между исследованиями. Мы пришли к выводу, что это было из-за различия в используемых материалов окклюзии и хирургической процедуры. Таким образом хотя считается весьма воспроизводимые СМАо грызунов модель, это не всегда можно получить такие воспроизводимость. Таким образом мы оптимизировали Толщина нити, используемые в модели СМАо мыши через наши предварительные исследования и предыдущий доклад8.

Наиболее отличительной результат нашего предварительного исследования по сравнению с что других исследований является, что TTC окрашивания не выявили каких-либо ишемии миокарда при ишемии был индуцированной 60 мин (данные не показаны). Даже после 90 и 120 мин СМАо в мышей наш результат показали меньше объема миокарда чем у других исследований. Одно ограничение этого исследования является, что мы еще не определили причину этих результатов; Однако мы планируем изучить этот феномен в дальнейших исследованиях.

Многочисленные исследования недавно сообщили, что ГР или его компоненты имеют фармакологических мероприятий, в том числе противоопухолевой, антимикробным и противовоспалительным действием20,21,22. Предыдущие исследования сообщили, что GRex предварительной обработки эффективно ингибирует активацию caspase-9 по upregulating белков Bcl-2 и Bcl-xL8. Однако профилактических методов лечения инсульта менее клинически значимых, чем лечение после инсульта.

В этом исследовании, которое основывается на предыдущем исследовании8 оценивали эффективность GRex после лечения в СМАо мыши модели. Как показано в разделе представитель результаты, GRex после лечения показали благотворное влияние в сокращении объема всего миокарда и смягчению ущерба клеточных структур в СМАо индуцированной черепно-мозговой травмы у мышей. Конкретные действия механизмов GRex после ишемии мозга травмы не хватает в этом исследовании, но экспериментальные протоколы, используемые в данном исследовании успешно продемонстрировала эффекты это травяные средства правовой защиты путем передразнивать человека последствий инсульта.

Хотя результаты эксперимента не наблюдаются в этом исследовании, оценка нейрональных дефицита (NDS) был измерен в наших предварительных эксперимент и никакого существенного различия было отмечено между элементом управления и лечить GRex группами, которые предположительно были должным образом время короткое замечание по сравнению с тяжести инсульта. Мы планируем соблюдать эффекты лечения GRex на NDS в течение длительного периода после умеренные повреждения.

В заключение нейропротекторной эффект от лечения GRex в мышиной модели СМАо был продемонстрирован в этом исследовании с хорошей воспроизводимостью. Белков, участвующих в основной механизм должен рассматриваться в будущих исследованиях.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Авторы не имеют ничего сообщать.

Acknowledgments

Не применимо.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Gwangmyoung Pharmaceuticals Co., Korea Glycyrrhizae Radix et Rhizoma
Qualitative filter paper Advantec Filter paper No. 2 Qualitative filter paper
Dimethyl sulfoxide (DMSO) Sigma D8418-250ML Dimethyl sulfoxide (DMSO)
Syringe filter (0.45 µm) Sigma CLS431220 Syringe filter (0.45 µm)
Stereo Microscope Leica M50 Stereo Microscope
Stereo Microscope Nikon SMZ745 Stereo Microscope
Laser Doppler Moor Instrument moorVMS-LDF Laser Doppler
Anesthesia Tabletop Bracket with N2O&O2 Flowmeter System Harvard Appratus 34-1352 Anesthesia Tabletop Bracket with N2O&O2 Flowmeter System
Homeothermic Monitoring System Harvard Appratus 55-7020 Homeothermic Monitoring System
Digital Camera Canon Eos-M2 Digital Camera
Cryostat Leica CM3050S Cryostat
Microscope Carl Zeiss Zeiss Axio Microscope
Data Analysis Systat Software Inc. SigmaPlot version 12 Data Analysis
Data Analysis NIH Image ImageJ Data Analysis
Mouse diet Doo Yeol Biotech Standard rodent chow Mouse diet
Isoflurane JOONGWAE A02104781 Isoflurane
Isoflurane TROIKAA ISOTROY 100 Isoflurane
Silk suture (4-0 Black silk)  AILEE SK47510 Silk suture (4-0 Black silk) 
Silk suture (3-0 White silk)  Baekjae 57 Silk suture (3-0 White silk) 
Nylon suture (8-0 monofilament)  AILEE NB825 Nylon suture (8-0 monofilament) 
2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) Sigma T8877-25G 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC)
Formalin (Formaldehyde solution) JUNSEI 69360-1263 20KG Formalin (Formaldehyde solution)
Hematoxylin (Harris Hematoxylin) YD Diagnostics EasyStain Hematoxylin (Harris Hematoxylin)
Eosin (1% Eosin Y Solution) MUTO PURE CHEMICALS 3200-2 Eosin (1% Eosin Y Solution)
Cresyl violet (acetate) Sigma C5042-10G Cresyl violet (acetate)
Paraformaldehyde  Sigma-Aldrich P6148-1KG Paraformaldehyde 
Sucrose JUNSEI 31365-0350 1KG Sucrose
Optimum cutting temperature (OCT) compound Scigen 4583 Optimum cutting temperature (OCT) compound
Disecting Knife Fine Science Tools 10055-12 Disecting Knife
#4 Forcep Fine Science Tools 11241-30 #4 Forcep
#5 Forcep Fine Science Tools 11254-20 #5 Forcep
#6 Forcep Fine Science Tools 11260-20 #6 Forcep
#7 Fine Forcep Fine Science Tools 11274-20 #7 Fine Forcep
Surgical Scissors Fine Science Tools 14001-12 Surgical Scissors
Extra Fine Bonn Scissors Fine Science Tools 14084-08 Extra Fine Bonn Scissors
Moria Pascheff-Wolff Spring Scissors Fine Science Tools 15371-92 Moria Pascheff-Wolff Spring Scissors
Vessel Dilating Forcep Fine Science Tools 18153-11 Vessel Dilating Forcep

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Bejot, Y., Delpont, B., Giroud, M. Rising stroke incidence in young adults: more epidemiological evidence, more questions to be answered. Journal of the American Heart Association. 11, (5), (2016).
  2. Hadadha, M., Vakili, A., Bandegi, A. R. Effect of the inhibition of hydrogen sulfide synthesis on ischemic injury and oxidative stress biomarkers in a transient model of focal cerebral ischemia in rats. Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 24, (12), 2676-2684 (2015).
  3. Durukan, A., Tatlisumak, T. Animal models of ischemic stroke. Article in Handbook of Clinical Neurology. 92, 43-66 (2009).
  4. Kim, D. Animal Models of Stroke. Brain and Neurorehabilitation. 4, (1), 1-11 (2011).
  5. Rizzato, G., Scalabrin, E., Radaelli, M., Capodaglio, G., Piccolo, O. A new exploration of licorice metabolome. Food Chemistry. 221, 959-968 (2017).
  6. Zhu, Z., et al. Rapid determination of flavonoids in licorice and comparison of three licorice species. Journal of Separation Science. 39, (3), 473-482 (2016).
  7. Ota, M., Mikage, M., Cai, S. Q. Herbological study on the medicinal effects of roasted licorice and honey-roasted licorice. Yakushigaku Zasshi. 50, (1), 38-45 (2015).
  8. Lim, C., et al. Licorice pretreatment protects against brain damage induced by middle cerebral artery occlusion in mice. Journal of Medicinal Food. 21, (5), 474-480 (2018).
  9. Koizumi, J. Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. Experimental studies of ischemic brain edema. Nosotchu. 8, (1), 1-8 (1986).
  10. Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections. Cold Spring Harbor Protocols. 2008, (2008).
  11. Zhu, Y., Liu, F., Zou, X., Torbey, M. Comparison of unbiased estimation of neuronal number in the rat hippocampus with different staining methods. Journal of Neuroscience Methods. 254, 73-79 (2005).
  12. Alberts, M. J., Ovbiagele, B. Current strategies for ischemic stroke prevention: role of multimodal combination therapies. Journal of Neurology. 254, (10), 1414-1426 (2007).
  13. Pinto, A., Tuttolomondo, A., Di Raimondo, D., Fernandez, P., Licata, G. Cerebrovascular risk factors and clinical classification of strokes. Seminars in Vascular Medicine. 4, (3), 287-303 (2004).
  14. Barlow, S. J. Identifying the brain regions associated with acute spasticity in patients diagnosed with an ischemic stroke. Somatosensory and Motor Research. 33, (2), 1-8 (2016).
  15. Roth, S., Liesz, A. Stroke research at the crossroads - where are we heading. Swiss Medical Weekly. 146, 14329 (2016).
  16. Feuerstein, G. Z., Wang, X. Animal models of stroke. Molecular Medicine Today. 6, (3), 133-135 (2000).
  17. Herson, P. S., Traystman, R. J. Animal models of stroke: translational potential at present and in 2050. Future Neurology. 9, (5), 541-551 (2014).
  18. Kumar, A., Gupta Aakriti, V. A review on animal models of stroke: an update. Brain Research Bulletin. 122, 35-44 (2016).
  19. O'Collins, V. E., Donnan, G. A., Howells, D. W. History of animal models of stroke. International Journal of Stroke. 6, (1), 77-78 (2011).
  20. Ji, S., et al. Bioactive constituents of Glycyrrhiza uralensis (licorice): discovery of the effective components of a traditional herbal medicine. Journal of Natural Products. 79, (2), 281-292 (2016).
  21. Yang, R., Wang, L. Q., Yuan, B. C., Liu, Y. The pharmacological activities of licorice. Planta Medica. 81, (18), 1654-1669 (2015).
  22. Yang, R., Yuan, B. C., Ma, Y. S., Zhou, S., Liu, Y. The anti-inflammatory activity of licorice, a widely used Chinese herb. Pharmaceutical Biology. 55, (1), 5-18 (2017).
Оценка влияния нейропротекторной Glycyrrhizae Radix et корневище извлечь с помощью переходных средней мозговой артерии окклюзии мыши модели
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Lee, S. E., Lim, C., Lee, M., Kim, C. H., Kim, H., Lee, B., Cho, S. Assessing Neuroprotective Effects of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Extract Using a Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Mouse Model. J. Vis. Exp. (142), e58454, doi:10.3791/58454 (2018).More

Lee, S. E., Lim, C., Lee, M., Kim, C. H., Kim, H., Lee, B., Cho, S. Assessing Neuroprotective Effects of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Extract Using a Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Mouse Model. J. Vis. Exp. (142), e58454, doi:10.3791/58454 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter