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Medicine

腸血液関門と微生物叢製品の肝代謝を評価するためのIn Vivo

Published: October 20, 2018 doi: 10.3791/58456

Summary

栄養素、微生物叢代謝および循環に医薬品へのアクセスは、腸・血液関門 (GBB) によって制御されます。直接 GBB 透磁率、生体内で、一般的に使用される間接的な方法と対照をなして肝臓と腎臓の機能によって影響ほぼないされる測定法について述べる。

Abstract

腸血液関門 (GBB) は、血流に腸の内腔から栄養、細菌代謝産物や薬物の通過を制御します。GBB 整合性は、消化管、循環器・代謝疾患、血流に腸内細菌の代謝などの生理活性化合物の簡単にアクセス可能性がありますで妨げられます。したがって、GBB の透磁率および腸管外の疾患のマーカーがあります。さらに、細菌代謝産物の普及率の増加全体の生物の機能に影響があります。

GBB 透水性を研究するための一般的に使用されるメソッドは、実行前のヴィヴォです。これらのメソッドの精度には腸管の血流に依存、GBB の機能限界です。生体内で一般的に使用される方法が肝臓と腎臓の性能によってバイアスことがありますこれらのメソッドは、尿の評価に基づいているため、他の一方で、または/および外因性マーカーの血中濃度。腸管の血流を維持し、肝・腎機能によって事実上受けませんポータルの採血に基づく体内法を用いたラットの GBB 透水性の直接測定を紹介します。

門脈にポリウレタンのカテーテルが挿入され、肝のすぐ上下大静脈静脈の合流点。ベースライン時と消化管の必要な部分に選択したマーカーの投与後、血液をサンプリングします。ここでは、(1) TMA、腸内細菌の代謝産物、TMA の肝クリアランスの評価 (2) (3) 腸の腸ポータル血肝末梢血経路の評価コロンの透過性の評価を含むメソッドのいくつかのアプリケーションを提案します。細菌由来短鎖脂肪酸。さらに、プロトコルは、ポータル血圧の測定、消化管吸収と薬物の肝代謝を追跡するためにまた使用可能性があります。

Introduction

腸血液関門 (GBB) とも呼ばれる腸のバリアは、栄養素1の吸収を可能にしながら有害化合物の通過を制限するために血流から腸の内腔を分ける複雑な多層システムです。3 つの主要な層で構成されています: 粘液層、上皮と粘膜固有層。

多くの要因は、GBB の整合性と機能2に影響があります。GBB が心血管疾患や代謝疾患3,4血流に腸内細菌代謝産物の増加通路につながる可能性がありますを含む消化管および管外病気で妨げられることが示されています。腸内細菌代謝産物の普及率の増加は、全体の生物の機能に影響があります。たとえば、最近の研究は循環器系機能5,6,7 インドール、H2S、短鎖脂肪酸 (SCFA)、トリメチルアミン n-オキシドなどの細菌代謝産物の影響を表示します。、8,9。最後に、GBB 透過性を増加可能性があります腸10の形態的, 機能的変化に関連付けられている心血管疾患や代謝疾患のマーカーとして使用することが提案されている.したがって、両方の基本的な臨床科学の興味の細菌代謝産物の腸ポータル血肝臓全身血経路を追跡可能性があります。

GBB の透水性評価法の一般的利用実験的実行は体外切除腸管粘膜、または人工膜11,12の断片を使用しています。これらのメソッドの精度が、GBB の適切な機能が一定の腸の血流を必要とするという事実によって損なわれます。その一方で、生体内で利用できる方法は、外因性マーカー13の血中濃度や尿の評価に基づいています。しかし、外因性化合物の末梢血中及び尿中濃度は腎機能、すなわち、糸球体濾過率と尿細管排泄および肝臓の代謝によって影響を受けて、すなわち、最初に代謝を渡します。両方のパラメーターは、GBB とは無関係の研究被験者間大幅に異なる場合があります。

本稿では、門脈血サンプリングを用いたラットの GBB 透磁率の直接測定について説明します。この体内メソッドは、腸の血流を維持し、肝・腎機能に左右されない事実上。説明の方法は通常使用されません、おそらくいくつかの方法論の難しさのため。門脈・肝静脈の合流点のすぐ上の下大静脈カテーテルについて詳細に述べる.門脈と下大静脈から血液サンプリングにより GBB の透磁率と肝クリアランスの評価だけでなく、腸内細菌の代謝物や薬など、興味の分子の腸ポータル血肝臓全身血経路の追跡ができます。私たちの研究室でテストされたメソッドのいくつかのアプリケーションを提案する.TMA、腸内細菌の代謝産物、TMA の肝クリアランスの評価、SCFA の腸ポータル血肝臓全身血経路の評価コロンの透過性の評価が含まれます。

腸血液関門の透過性を評価する次のプロトコル手順に従ってください、順序: 1 (intraintestinal 政権の行挿入)、 3 (門脈カテーテル)、 4 (門脈血サンプリング)、 6 (腸の透過性マーカーの管理)、 4

肝クリアランスと腸ポータル血肝臓全身血経路を評価する次のプロトコルの手順に従ってください、順序: 1 (intraintestinal 政権の行挿入)、 2 (下大静脈カテーテル検査) 3 (門脈カテーテル)、 4 (門脈血サンプリング)、 5 (下大静脈血サンプリング)、 6 (腸の透過性マーカーの管理)、 4 57 (肝クリアランスの計算).

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Protocol

実験は科学的な目的に使用される動物の保護に関する指令 2010年/63 EU によると雄 Wistar 京都ラットに対して行われ、私のワルシャワの地元倫理委員会で承認されました。

1. Intraintestinal 管理のための行の挿入

注:ここでカテーテルを使用してマーカーの intracolonic 管理を提案する.それは、経口投与または経口消化管など胃または十二指腸のさまざまなレベルで修正されるかもしれません。使い捨て外科衣類、手術ガウン、フード、手袋などを使用して、手順 1-6 中に手術(針等)で使用される鋭いツールに関連する安全上の注意に従うことを確認してください。

  1. 手順の前に夜通し高速動物。すなわち、眼瞼や角膜反射の欠如によって、つま先ピンチと尾ピンチによるウレタン 1.5 g/kg bw i. p. の査定の適切な anesthetization の注入によって得られる、全身麻酔中にすべての手順を実行します。
  2. 大腸カテーテルとして小児のフォーリー カテーテル (10 階または 8 階) を使用します。コロン (約 8 cm) に挿入される部分を示すためカテーテルをマークします。
  3. コロンにカテーテルを挿入する前に、肛門領域や直腸内の便コンテンツを確認します。便が存在する場合、直腸部をマッサージすることで直腸を空します。
  4. カテーテルに潤滑剤 (例えばグリセリンやワセリン) を置きます。肛門と潤滑剤とその周辺を湿らせます。
  5. 外肛門括約筋をガイド線約 8 cm カテーテルを挿入します。ゆっくり前後と円形の動きを作る。
    注: にカテーテルを挿入しながら腹部の触診によってカテーテルの位置をチェックしてください。

2. 下大静脈カテーテル

  1. 脚の付け根の毛を剃る。交互 3 回アルコールとポビドン ヨードで皮膚を消毒して、外科用ドレープで脚の付け根の領域をカバー.
  2. 大腿動脈のパルスを感じるし、パルスの明白な場所に約 2.0 cm の長さの縦皮膚をカットしようとします。
  3. 筋膜と神経血管束を視覚化する筋肉を解剖します。
  4. 神経血管束から大腿静脈の解剖: 最初の神経そして大腿動脈および静脈。
    注: は、大腿静脈の小さな枝が簡単に破損して、出血の生産以来神経血管束の解剖時に注意します。
  5. 大腿静脈に 2 つの合字を置きます。まだ結び目を結ぶことはありません。針ホルダー付け近位の合字の両端をキャッチします。
  6. 静脈近位部分の近くに上向きホルダー付き合端を慎重に引き出します。静脈は血液で満たされてまで待ち、遠位の結び目を作る。
  7. 小さな切開 (1 mm) 結び目と近位の合字の間静脈に顕微鏡下のはさみを使用して。湾曲の端をピンセットや針を使ってカテーテルを挿入します。
    注: 静脈を穿刺し、カテーテル用針の曲がった先端をガイドとして使用します。カテーテルを挿入する際、近位の合字を緩めます。6 7.0 cm のカテーテルを挿入します。
  8. 2 つの単一の外科ノットで大腿静脈にカテーテルを固定します。同様に近位の合字を結ぶ。
  9. 注射器で血液を描画しようとして、カテーテルの開存を確認してください。0.3 ml のヘパリン生理食塩水 (100 単位/ml) カテーテルをすすいでください。
  10. 単一の針の 2 つの層の手術創を閉じます。

3. 門脈カテーテル

Figure 1
図 1: ポータル カテーテル。ポータルのカテーテルから成っている針外径: 長さ約 25.0 mm [A]、柔軟性のあるポリウレタン製カテーテル外径 0.9 mm: 0.025」、全長約 100.0 mm [B]、カテーテル外径の柔軟なプラスチック製のヒント: 0.040」、約 15.0 mm 長い [C] プラグイン [D]。、及び長さ 100.0 mm [E] の結紮 3/0。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください

  1. 図 1によるとポータルのカテーテルを準備します。
    1. 針の切り口を挿入 (OD: 9 mm) ポリウレタン製カテーテル外径に: 0.025」。
    2. 合字の 3/0 針とカテーテルの交差点を結ぶ。
      注: は、合字の長い部分が 6 cm 以上長いであることを確認します。
    3. OD のカテーテルの先端を挿入: 0.025"ポリエチレン カテーテル外径に: 0.040」。
    4. 金属またはプラスチック製のプラグでカテーテルを閉じます。
  2. 正中開腹
    1. 腹部の毛を剃る、交互 3 回アルコールとポビドン ヨードと皮膚の消毒し、手術用ドレープを使用して領域をカバーします。
    2. おへそを縦胸骨の剣状から皮膚をカットします。
    3. 白い線に沿って腹部壁の筋肉をカットします。
    4. 剣の軟骨 2 つのカットの間、Y の形で吻方カットを展開します。
  3. 門脈の解剖
    1. 生理食塩水で手術の綿棒を湿らせます。
    2. 盲腸、昇順し横行結腸と小腸ループを外在します。腸間膜のルートを公開する左側に腸を置きます。
      注: は、乾燥から腸を保護するために生理食塩水で湿らせたガーゼで腸をカバーします。
    3. 門脈を公開するには、側面にまたは上向きに湿らせた綿棒で絞りに向けて慎重に肝葉に移動します。
    4. (肝門部、長さ約 5 mm) の腸間膜に覆われていない門脈の一部をローカライズし、門脈下合 3/0 (15 センチ) を渡します。
      注意: 損傷から組織を保護する、合字を配置しながら、合字の生理食塩液を湿らせます。
    5. 合字の両端を鉗子でクランプし、船を安定させるために優しくそれを締めます。
  4. 挿入とカテーテルの安定化
    1. 門脈の無料部分の下ポータル カテーテルの合字の長い部分を渡すし、カテーテルは門脈のすぐ隣に位置するようにそれを引き出します。
    2. 上腸間膜静脈・門脈のジャンクションの下から 3 mm 上腸間膜静脈に針を挿入します。30 ° の角度で、静脈に入力した後、針を保持、角度を減らすため、ほぼ水平、門脈に平行に針を進めます。
      注: は、約 6-7 mm の長さの針を挿入します。安定の合字はカテーテルを挿入しながら優しく門脈を強化すべきです。
    3. 組織接着剤、針が挿入される場所に 1-2 滴を適用します。肝臓をカバー綿棒を削除します。
    4. 腸を腹腔内に戻します。
    5. ウォーム アップの生理食塩液を腸を湿らせ、湿らせた滅菌ガーゼでカバーします。
    6. カテーテルの開存を確認し、0.3 ml のヘパリン生理食塩水 (100 単位/ml) カテーテルをすすいでください。
      注: 静脈血カテーテルで逆流自発的に。
  5. 手術の終了
    1. 5 分後、腸の蠕動運動の色をチェック、適切な腸間膜血流が維持されていることを確認してください。
    2. 3 針と腹腔を閉じる: 壁の連続、吸収性縫合糸; - 腹壁筋の内側の層の腹膜腹壁 - 連続的な吸収性の縫合。 筋肉皮膚及び皮下組織の 1 つ、非吸収性縫合糸です。
      注: は外在、へその周囲、カテーテルの遠位部です。

4. 門脈血サンプリング

  1. 使用する特定のテスト プロトコルに従って時サンプル門脈血表 1を参照してください。
短いプロトコル 長いプロトコル
t0 -ベースライン (前 intracolonic 管理) に、 t0 -ベースライン (前 intracolonic 管理) に、
t1 -intracolonic 投与後 5 分 t1 -intracolonic 投与後 30 分
t2 -intracolonic 投与後 30 分 t2 -intracolonic 投与後 60 分

表 1: ポータル血液サンプリング プロトコル腸の透磁率の評価のため。

注: 連続採血間隔テスト物質のバイオアベイラビリティと管理 (結腸、胃など) のサイトで主に依存します。

  1. ポータル カテーテル プラグを開き、血液の流れを自由にできます。
  2. 使用シリンジ (vol. 2 mL) および鈍い針外径: 0.9 mm。 0.7 mL 以上の血液を集めます。
  3. ヘパリン生理食塩水 (100 単位/ml) の 0.3 mL で洗い流してカテーテル プラグを閉じます。

5. 下大静脈血サンプリング

  1. 使用する特定のテスト プロトコルに従って時サンプル下大静脈血表 2を参照してください。
門脈 下大静脈
t0 -ベースライン (前 intracolonic 管理) に、 t0 -ベースライン (前 intracolonic 管理) に、
t1 -intracolonic 投与後 30 分 t1 -intracolonic 投与後 30 分

血肝クリアランス測定のためのサンプリングと腸ポータル血肝臓全身血経路の追跡のテーブル 2: プロトコル。

  1. 下大静脈カテーテル プラグを開き、血液の流れを自由にできます。
  2. 以上 0.7 mL のシリンジを用いた血液を収集 (vol. 2 mL)、針の外径が壊れて: 0.9 mm。
  3. 0.2 0.3 と洗い mL のヘパリン生理食塩水 (100 単位/ml) とカテーテル プラグを閉じます。

6. 消化管透過性マーカーの管理

  1. ガイドワイヤーし、滅菌水 (通常 1 mL ですが挿入する前にチェックの実際のバルーンのサイズ) の十分な量を使用して大腸のカテーテルのバルーンを膨らませます。
    注: バルーン径が 1 cm を超えない。
  2. (傾斜約 15%) コロンから投与液の流出のリスクを最小限に抑えることをラットの頭を配置します。
  3. ゆっくりテスト物質を管理 (トリメチルアミンなど、100 mg/kg bw) 大腸カテーテルで排水ポートを使用します。
    注: 管理ソリューションの 0.75 mL と肛門から投与液の流出を防ぐために 0.5 mL/分の送り速度の量を超えないようにします。
  4. 10 分後に、カテーテルのバルーンをしぼませます。
  5. サンプルを使用する特定のテスト プロトコルによると門脈下大静脈から血液表 1 と表 2を参照してください。
  6. 承認された方法で動物を安楽死させます。

7. 肝クリアランスの計算

  1. 肝クリアランスは、門脈血の濃度 (1 - (下大静脈濃度に下大静脈の比、門脈血中濃度と下大静脈血中濃度の違いによって肝抽出として理解を表現します。/門脈濃度))。

8. 試験物質濃度 n 血液サンプルの評価

  1. 被験物質と試験方法、に応じて適切な検査(遠心分離等)のサンプルを対象します。提案プロトコルでは、TMA/TMAO とトリプル四重極質量分析計、高速液体クロマトグラフィーを用いた SCFA 濃度を評価します。補足資料にメソッドの詳細な説明を見つけてください。

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Representative Results

我々 は正常にラットの TMA の GBB の透磁率と肝のクリアランスを測定しました。我々 は、正常血圧ラット (図 2)4と比較して TMA に増加コロン透水性がある高血圧ラットを実証しました。別の研究にその高い塩の取入口に TMA (図 3)14の GBB 透磁率および肝クリアランスは影響しませんを発見しました。

SCFA スツール, 門脈血および末梢血での濃度を測定、我々 は末梢血に腸から分子のパスをトレースします。これらの実験のための模範的な結果は表 3に掲載されています。

Figure 2
図 2: 腸血液関門の透過性の高血圧に伴う変化します。TMA の Intracolonic 管理生産各グループにおける門脈血 TMA の大幅な増加 (n = グループごとに 12)。高血圧自然発症 (SHR) グループにおける門脈血 TMA の増加は血圧 (WKY) グループよりも有意に高かった。30 分、60 分採血 TMA 投与 (TMA IC) から成る長いプロトコルを使用しました。値は、手段、+ SE、*p < 0.05 対ベースライン、#p 0.05 < WKY 対 SHR.この図は、Jaworskaから変更されています。4この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください

Figure 3
図 3:高食塩摂取後腸血バリア透磁率および肝クリアランス。(TMA の A) Intracolonic 管理は、門脈血 TMA の大幅な増加を作り出した。増加のサイズ グループ間類似していた (n = 7 グループごとに)。TMA (TMA IC) の投与後基準 (0) と 15 分で採血簡易プロトコルを使用しました。(B) 肝 TMA クリアランス TMA の intracolonic 投与後のベースラインでグループと 15 分間類似していた。値は、手段、+ SE *p < 0.05 対ベースライン。この図は、Bielinskaから変更されています。14この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください

SCFA スツール濃度 (μ M) 門脈血中濃度 (μ M) 末梢血中濃度 (μ M)
AA-酢酸 (C2) 15998.40 ± 4317.58 564.22 ± 155.34 149.89 ± 31.74
IPA-プロピオン酸 (C3) 5390.70 ± 1016.19 138.25 ± 55.50 5.36 ± 3.25
IBA イソ酪酸 (C4) 191.20 ± 123.87 4.51 ± 1.60 1.14 ± 1.16
BA-酪酸 (C4) 4159.80 ± 3141.68 143.14 ± 68.42 6.43 ± 4.18
2MeB 2 酪酸 (C5) 80.90 ± 59.86 2.02 ± 0.88 1.14 ± 1.42
イヴァ イソ吉草酸 (C5) 109.10 ± 56.05 2.59 ± 1.07 0.90 ± 1.22
VA-吉草酸 (C5) 281.9 ± 158.20 8.55 ± 3.56 0.72 ± 1.02
ICA サインージ酸/4-メチル吉草酸 (C6) 5.9 ± 2.95 0.61 ± 0.15 1.76 ± 0.87
CA-カプロン酸 (C6) 287.00 ± 309.68 11.19 ± 4.94 1.12 ± 0.93

テーブル 3:スツール, 門脈血および末梢血における SCFA 濃度 (n = 7).

被験物質 可能なアプリケーション
細菌の代謝:
トリメチルアミン (TMA)、短鎖脂肪酸 (SCFA)、硫化水素など
GBB 透磁率研究
腸ポータル血肝臓全身血液の経路を追跡
肝クリアランスの研究
古典的な透過性マーカー:
多糖類、ペグ、FITC デキストランなど。
GBB 透磁率研究
吸収と肝クリアランスの研究

表 4: 可能なアプリケーションと模範的なテスト物質。

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Discussion

説明、直接、生体内で、GBB 透過性の測定方法を維持 closetophysiological 条件 (腸の血流を保持) 消化器系、肝臓や腎臓の機能に影響は事実上なかった。

この手法の重要なステップは、ポータルのカテーテルの挿入です。同時にこれがされる優しくそして断固とする必要があります。穏やかな、短い出血が正しく実行された; 門脈穿刺から生じるしかし、血管に針を挿入するときを停止します。持続する出血は、門脈が穿孔されてを示します。カテーテル挿入を容易にするにはも門脈を公開されている必要があります。Exteriorizing 腸後、腸間膜根はよく公開されると、上腸間膜静脈も表示するか (上腸間膜静脈は門脈に入る頭側)。門脈は通常側面に移動するが肝の葉で覆われています。また、ポータルのカテーテルの適切な安定化は、門脈破裂や出血、特に長い実験でカテーテルの動きが生じるので成功した手順は、重要です。カテーテルの追加の安定化は、組織接着剤で腸間膜に付着または 2 つの単一ステッチ (スレッド 6/0) を適用することによって腸間膜にカテーテルを接続することによって達成されるかもしれません。腹腔カテーテルの配置をセキュリティで保護するを閉じると後、カテーテルに巾着縫合を適用する可能性があります。

実験中に発生する可能性がありますいくつかのマイナーな問題があります。大腿静脈のカテーテル治療後静脈血がカテーテルで逆流しないに場合は、次の解決策を試して: ヘパリン生理食塩水でカテーテルをフラッシュ、ゆっくりと引き静脈から 1-2 mm のカテーテル、手術ノットを削除、新しい 1 つは、プルのネクタイカテーテルと挿入、または新しいカテーテルに置き換えます。実験後のカテーテルの適切な配置を確認してください。近位カテーテル先端を下大静脈、肝静脈の合流点のすぐ上に配置する、動物のサイズに応じて、6-7 cm のカテーテルを挿入します。0.3 から 0.5 を挿入可能性があるときは、コロンのカテーテル、カテーテルを進めると問題がある場合 mL の生理食塩水または. 5 〜 10 分、およびもう一度やり直してくださいコロンでカテーテルを残す力を使わない腸の穿孔を避けるためにカテーテルを挿入中。

私たちの研究で TMA は主に大腸の細菌によって生成される腸内細菌由来分子、コロン GBB 透過性マーカーとしてトリメチルアミン (TMA) を使用しました。ただし、FITC デキストランや糖のような古典的な透過性マーカーを含む他の多くの物質も使用する可能性があります (表 4参照)。被験物質の溶液を準備するとき腸内粘膜の刺激効果を考慮し、物質の濃度を適切に選択。血液サンプルのそれ以上の実験室プロシージャは、選択したマーカーに調整する必要があります。

我々 のプロトコルで、マーカーの intracolonic 管理を提案します。ただし、経口投与または経口消化管のさまざまなレベルで変更可能性があります。蠕動運動と酵素や胃酸の可能な相互作用の変速は、消化管など胃または十二指腸の上部の部分にマーカーを管理しているとき考慮に入れする必要があります。したがって、マーカーの投与後の採血の時間は調整が必要です。

提案手法は, 麻酔の副作用、GBB 機能に影響両方が一晩、絶食などのいくつかの制限があります。それは、プロシージャはターミナル、ない完全に生理学的な条件の間に採血を含むアカウントに取られるべき。ただし、GBB 透過性評価その他の実験方法をまだ多くの利点がある、前に述べたように、特に体外11を実行しました。たとえば、ウッシングチャンバーは、腸管の上皮細胞を通して電気伝導度と粒子のフラックスを測定します。この手法の主な弱点は、その過剰に簡素化にあります。小腸粘膜上皮細胞層だけでの測定の数が少ないを使用しての複雑な生理学的システムを記述することは困難です。一部の研究者は、Ussing 商工会議所研究全体厚腸を使用が、この手順は、いくつかの方法論的合併症15伴われます。さらに、有機物から分離した組織の限られた可能性によって法の精度が損なわれます。薬物動態学的研究で使用されるいくつかの培養方法は、腸粘膜バリアー12のモデルとして人工膜を使用します。しかし、ウッシングチャンバーと同様に、これらのメソッドは、GBB の構造と機能の複雑さを反映しません。

実験的および臨床的研究で利用できる体内透過試金もあります。彼らはほとんど尿や様々 なマーカー13の口頭または大腸の投与後の末梢血サンプリングに基づいています。広く使われている砂糖テストには、モノと哺乳類の生物、例えばマンニトール、ラクツロース代謝されていないオリゴ糖の経口摂取が含まれます。メソッドが非侵襲的、両方実験的ならびに臨床的使用16,17に用いることができます。ただし、関数によって、初回通過肝代謝と腎研究被験者間で有意差が結果に影響します。上記の間接方法と対照をなして門脈からの血液を集めて GBB 透磁率12の評価を直接ことができます。このメソッドは、肝臓と腎臓の機能に依存しない、事実上体外または試験管内でメソッド上の重要な利点である腸の生理学的な条件が維持されます。

このペーパーで説明したテクニックは、門脈と肝静脈の合流点のすぐ上の下大静脈から血液を採血肝クリアランスの比較的正確な評価のためでできます。(TMA) の図 3および表 3 (SCFA) の肝抽出の代表的な結果が掲載されています。3 主な SCFA、酢酸、プロピオン酸、酪酸、以前の研究でサポートされて、別の肝クリアランスによって特徴付けられることが示唆、Bloemenが酪酸やプロピオン酸の腸リリースを表示酢酸は、ほぼ肝取り込み18に匹敵します。したがって、提案するプロトコルは、腸管吸収、薬物動態学的研究で使用できる薬物の肝代謝を追跡に適しています。

テクニックは、他の実験目的にも調整ができます。ポータル血圧測定またはポータルに直接薬を投与の静脈、肝循環を研究するために、門脈カテーテルを使用可能性があります。例えば、我々 の以前の仕事で、我々 は肝循環と門脈圧19への影響を評価するために門脈に硫化水素ドナーを投与しました。

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Disclosures

著者が明らかに何もありません。

Acknowledgments

仕事は、ポーランド共和国高等教育科学省でサポートされて、ダイヤモンド許可なし: DI2017 009247。

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Needle OD: 9 mm Becton Dickinson  S.A. 301300
Polyethylene catheter ID: 0.025", OD: 0.040"  Scientific Commodities, Inc. #BB520-40
Polyethylene catheter ID: 0.012", OD: 0.025"  Scientific Commodities, Inc. #BB520-25
C-Flex Tubing,Opaque White 1/50"ID x 1/12 " OD   Cole-Parmer Instrument Co. 06424-59
Pediatric Foley catheter (size 10F or 8F)  Sigmed 0000 80305
Surgical ligatures 3/0 Yavo Sp. Z o.o.  P48JE
Absorbable surgical sutures - Polyglactine 910 4/0 KRUUSE Polska Sp. Zo.o. 152336
Tissue glue - Loctite 454Cyanoacrylate Adhesive Loctite  1370127
Povidone iodine EGIS Pharmaceuticals PLC 4449 11
Heparin - Heparinium WZF  WZF Polfa S.A. 02BK0417 Dilute 10 times with physiological saline
Glycerin 86% Laboratorium Farmaceutyczne Avena 5.90999E+12 Serves as a lubricant in colon catheterization
Xylocaine 2% AstraZenca  9941342
Urethane Sigma-Aldrich (Merck)  U2500-500G
Trimethylamine solution 45% Sigma-Aldrich (Merck)  92262-1L
Syringes 2 mL B.Braun Melsungen AG 4606027V
Saline 250 mL Fraesenius Kabi Polska Sp. Z o.o. 15LL707WL
Surgical scissors, straight, length 115 mm, 4 1/2 "blunt ends Braun NS-010-115-PKM
Artery forceps type Micro-Adson bent, length 140 mm 5 1/2 " Braun KN-008-140-ZMK
Anatomic forceps, lenght 95 mm, 3 3/4" sharp 0.7x0.55 Braun PO-001-007-ZMK
Micro Scissors type Vannas,  straight, lenght 85 mm, 3 3/8 " the length of the blades 6 mm Braun  NO-010-085-PMK
Towel clamps type Backhouse, lenght 130 mm, 5 1/8"  Braun HO-128-130-PMK
Needle holders, lenght 150 mm, 6" t=0.4 1/2  Braun  IM-927-150-PZMK
Delicate Scissors, lenght 110 mm , straight, 4 3/8” sharp  Braun NO-052-110-PMK
Anatomic forceps, lenght 95 mm, 3 3/4" sharp Braun PO-022-001-PMK

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

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医学、問題 140、腸-血液関門、腸の透過性、肝クリアランス、サンプリング、門脈血腸の細菌、TMA、短鎖脂肪酸
腸血液関門と微生物叢製品の肝代謝を評価するための<em>In Vivo</em>法
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Jaworska, K., Huc, T., Gawrys, M.,More

Jaworska, K., Huc, T., Gawrys, M., Onyszkiewicz, M., Samborowska, E., Ufnal, M. An In Vivo Method for Evaluating the Gut-Blood Barrier and Liver Metabolism of Microbiota Products. J. Vis. Exp. (140), e58456, doi:10.3791/58456 (2018).

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