Summary
이 프로토콜의 목표 높은 처리량 패션에 애벌레 zebrafish의 용기를 통해 붙일 레이블 음식의 통과 시간을 측정 하는 것입니다.
Abstract
Zebrafish는 약 안전 테스트에 대 한 대체 모델 생물으로 사용 됩니다. Zebrafish의 위장 (GI)는 포유류의 유전, 신경, 그리고 약리 유사점이 있다. 약물의 임상 테스트 동안 GI 편협 일반적 이며 인간의 건강에 심각한 위협이 있습니다. 전 임상 포유류 모델에서 기 독성에 대 한 테스트 시간, 테스트 화합물, 및 노동 비쌀 수 있다. 여기에 제시 된 높은 처리량 방법 기 안전 문제를 예측 하기 위해 사용할 수 있습니다. 포유류 모델에 비해,이 메서드는 화합물의 낮은 수량을 사용 하는 동안 테스트 기 교통에 복합 효과의 더 편법 평가 대 한 수 있습니다. 이 방법에서는, 애벌레 zebrafish (7 일 게시물 수정) 형광 라벨을 포함 하는 음식을 먹이. 수 유, 후 각 애벌레 물고기는 96-원뿔-하단-잘 접시의 우물에 배치 하 고 테스트 화합물 (물에 녹는) 또는 차량으로 약을 복용. 직감 교통 발생, 대변, 우물의 바닥에 축적 하 고 속도는 이런 우물의 바닥에서 형광을 측정 하 여 모니터링 플레이트 분 광 광도 계를 사용 하 여 시간 동안 반복적으로. 주어진된 처리 그룹에서 애벌레에서 형광은 평균 하 고 이러한 값은 그래프로 표준 오류 함께 각 측정 시간에 대 한 저조한 식품의 평균 운송 시간이 지남에 나타내는 곡선. 소화 관 통과 시간에 미치는 영향 차량 대우 그룹의 각 치료 그룹에 대 한 곡선 아래의 영역을 비교 하 여 식별 됩니다. 이 방법은 알려진 임상 기 효과; 약물에 의해 유도 된 zebrafish 기 운송 시간에 변화 감지 그것은 하루 기 효과 대 한 치료의 수십이 사용할 수 있습니다. 따라서, 안전한 화합물 수 있습니다 신속 하 게 우선 순위가 포유류 테스트는 신속한 검색과 proffers 3Rs 발전.
Introduction
Zebrafish (Danio rerio) 척 추가 있는 생물학 모형 및 약물 독성 및 효능; 예측 하는 데 사용 됩니다. 이 분야에서 새로운 응용 프로그램 매년 등장. 포유류 모델 zebrafish의 이점이 그들의 통치, 작은 크기, 그리고 organogenesis 통해 투명도 포함 됩니다. Zebrafish 장기의 기능, 예를 들어, 심장, 눈, 위장 (GI)1,2에 복합 영향 평가로 약물 후보 급성 독성, 또한 예측 하는 데 사용 됩니다. Zebrafish 개발 및 생리학 많은 방법3 에 포유동물의 그들과 유사 하 고 인간의 질병과 관련 된 유전자의 80%는 제 브라 체4.
Zebrafish의 GI로 포유류 기 요로 비슷한 생리학 하지만 더 간단한 건축5. Zebrafish는 아무 위; 이전 장 전구는 식량 창 고 역할을 합니다. 제 브라 내장에서 유전자 발현5포유동물 많은 유사점이 있다. 포유류 처럼, zebrafish의 장의 신경 제어 창 자 운동 성, 그리고 장 innervation 다른 척추 동물6,7의 거울. 이러한 유사점을 바탕으로, 인간의 내장의 기능 장애는 zebrafish, 포유류 모델8에서 파생 하는 방법을 사용 하 여에서 연구 되었습니다.
약물의 임상 테스트 동안 GI 편협 일반적 이며 인간의 건강에 심각한 위협이 있습니다. 2005 년-2010 년 동안 주요 제약 회사에서 프로그램의 검토 공개 임상 연구 종료9의 9%에 대 한 주요 원인으로 기 안전. 전 임상 포유류 모델에서 기 독성에 대 한 테스트 시간, 화합물, 및 노동 비쌀 수 있다. 기 대 중 교통에 대 한 예측 높은 처리량 분석 결과 유연성 테스트, 독성 화합물을 제공 하 고 3Rs 영향을 제공할 수 있습니다. 이러한 분석 결과 제공 하 고 새로운 방법 여기에 설명 된 프로토콜에 의해 제공 됩니다. 이 높은 처리량 분석 결과 초기 신약 개발 후보, 우선순위 및 더 큰 종에 테스트 기 안전의 감소에 기여에 채택 될 수 있었다.
Protocol
여기 설명 된 모든 방법을 승인 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC) AbbVie.Abbvie의 밑에 운영 한다 국가 학회 건강 가이드의 관리 및 실험 동물의 사용에 대 한 대 한 협회에 의해 신임 된 시설에서 평가 및 인증 실험실 동물의 배려 (AAALAC). 아니 동물 건강 관심사는 이러한 연구에서 관찰 되었다.
1. 번 식 성인 Zebrafish 태아를 수집
- 집과 품종 성인 zebrafish 일반적인 농업을 사용 하 고 사례를 번 식. 예를 들어 Westerfield10를 참조 하십시오.
- 탈수 용 해 하 여 배아 중간 준비 바다 소금 ( 재료의 표참조)에 이온 물 60 mg/l.의 농도에
- 수집 성인 사육 챔버, 린스에서에서 계란을 수정 된 배아 매체와 고 14시 10분에 28 ± 1 ° C에서 10 cm 배양 접시 (접시 당 50 배아)에서 태아의 약 50 mL에 배아를 집 h 라이트: 어두운 주기.
- 24 시간 및 각 접시 접시 당 50 배아 포함 되도록 배아 생존 보충 후 살아남은 비 배아를 제거 합니다.
2. 염색 비 식품을 사용 하 여 피드를 애벌레 기차
- 4일 하루 후 수정 (4 dpf)에 각 페 트리 접시 가루 애벌레 물고기 음식의 2 mg에에서 애벌레 피드 ( 재료의 표참조) 뿌리는 물 위에 음식으로.
- 애벌레를 허용 피드를 다음 깨끗 한 그들을 전송 3-4 h (음식) 페 트리 접시 포함 하는 약 50 mL 신선한 배아 매체.
- 가능한 작은 음식으로 전송에 투입, 새로운 요리에 최종 전송 되기 전에 약 50 mL 신선한 배아 매체를 포함 하는 페 트리 접시에 각 유 충을 씻어.
- 수 유 및 5 dpf 및 6 dpf에 애벌레의 세 정을 반복 합니다.
3. 6 dpf에 형광 음식과 피드 7 dpf에 애벌레를 준비
- 형광 라벨 (라 함 형광 음식, 필드 외 의 방법으로 포함 하는 음식을 준비합니다 3). 짧게, 믹스 300 µ L 형광의 이온 물 ( 재료의 표참조), 100 µ L 고 200 mg의 가루 10 cm 시계 유리에 애벌레 음식.
- 시계 유리에 얇은 층으로 결과 붙여넣기를 확산. 대 한 어둠 속에서 실 온에서 건조 붙여넣기 허용 > 8 h.
- 시계 유리에서 말린된 혼합물을 다쳤어요, 분말, 그리고 어둠 속에서 실내 온도에 저장에 호감. 형광입니다 이제 애벌레에 먹이를 준비.
- 먹이 형광 애벌레를 같은 방식으로 이전 수 유, 일 7 dpf에는 제공 하는 2 mg 형광 음식 접시 당 (2.1-2.2.1 단계 참조).
참고: 음식을 잘게 지상 분말에 인지 확인 합니다. 문 지르고 엄지손가락과 집게손가락 사이 종이 무게에 형광 음식을 잘게 지상 식품 확보를 위한 유용한 방법입니다.
4. 준비 시험 화합물의 집중된 투약 솔루션
- 각 테스트 대상 복용량 x 2 농도에 배아 중간에 화합물을 디졸브. 복용량 범위 테스트를 원하는 경우 원하는 복용에 대 한 적절 한 농도의 여러 집중된 투약 솔루션을 준비 합니다.
- 24 애벌레 치료 될 수 있도록 충분히 각 집중된 투약 솔루션을 준비 합니다. 각 유 충 100 필요 합니다 µ L 주입 솔루션 (최종 볼륨 잘 당 200 µ L), 그래서 아주 최소한 2.4 mL 복용량 솔루션은 각 치료 그룹;에 필요한 2.5 mL 적절 한 볼륨을 것입니다.
- 용 매 (예: 디 메 틸 sulfoxide) 시험 화합물의 초기 solubilizing 사용 되었다, 적절 한 차량 제어 복용량 준비 (즉, 용 매 화합물 하지 않고 복합 치료로 동일한 양의). 그리고, 각 화합물 처리 그룹에 대해 수행 된 24 애벌레 치료에 충분 한 차량 솔루션 준비.
5. 전송 애벌레 96 잘 접시와 치료 적용
- 후 2 시간에 대 한 형광 음식에 피드를 애벌레 허용 되었습니다, 전송 피 펫을 사용 하 여 이전 일에 수 유 후 이루어졌다 rinsing 접시에 그들을 이동.
- 각 유 충은 씻어 서 후 100 µ L 태아 매체, 함께 그것을 철회 하 고 96 잘 폴리스 티 렌 원뿔 아래 다 잘 접시의 우물으로 이동 ( 재료의 표참조), 유 충으로 잘으로 전체 100 µ L 태아 매체 분배.
- 애벌레의 필요한 번호 96 잘 접시에 전송 되었습니다, 일단 2 × 100 µ L 집중 투약 솔루션을 각 영역을 추가 합니다.
참고: 12 채널 멀티 채널 피 펫의 사용 용이 (12-에-한 번) 애벌레의 급속 한 먹이 지. 잘못 된 치료를 실수로 추가 하지 않도록에 가까운 트랙의 애벌레는 치료와 함께 복용 하 고 치료 사이 피 펫 팁을 변경 해야 합니다. 계속.
6. 측정 초기 및 후속 형광 각 우물에서
- 추가한 후 복용량 솔루션 장소 96 잘 접시 플레이트 분 광 광도 계에 흥분 하 고 형광 라벨에서 배출 감지.
참고:는 노란색-녹색 라벨 사용된 (참조 테이블의 재료)에 대 한 적절 한 파장의 빛은 505에서 흥미로운 nm와 515에 감지 nm. - 접시를 동요 하지 않고 즉시 승계에 있는 5 시간 아래에서 96 잘 접시의 형광을 읽기. 우물에서 초기 형광으로 각 우물에서 5 읽기의 최소 값을 사용 합니다.
참고: 5 읽기 접시 읽을 때마다 찍은 이유는 애벌레 때때로 흥분 빛의 경로에서 수영을 그들의 창 자에서 음식에서 나온된 배설물의 unrepresentative 인 매우 큰 신호. 최소 5 읽기의 복용 취소 transited 음식에서 인위적으로 높은 측정을 사용 하지 않도록 도울 수 있다. - 96 잘 접시의 형광 (초기 읽기에 대해 수행 된)를 읽고 첫 번째 2 h 포스트 주입, 30 분 마다 3-4 시간 t, 주입 한 다음 번에 대 일 분 마다 5, 6, 7, 및 8 포스트 주입 시간 동안 매 시간 마다.
- 하지 (96 잘 접시 진동)에 의해 방해를 받아 주의 읽기 사이 대변을 정착 하 고 28 ± 1 ° C 읽기 사이 애벌레를 품 어.
- 28 ± 1 ° C에서 밤에 애벌레를 품 어 고 애벌레 하루 전에 복용 했다 같은 시기 다음 아침 96 잘 접시에서 형광을 읽으십시오. 이 측정을 사용 하 여 24 시간 후 복용량 형광으로.
7. 데이터 분석
참고: 여기 우리가 잘 당 축적을 계산 하 고 각 시간 지점에 대 한 그룹의 평균.
- 잘만 최소 5 읽기의 각 값을 사용 하 여 당 축적을 계산 하기 위해 각 시간 점의 값에서 초기 값을 뺍니다. 초기 값을 뿐만 아니라 (이 인해 각 잘 0의 초기 축적)에 대 한이 계산을 수행 합니다.
- 24 시간 시점에서 잘에서 축적 미만 150 상대 형광 단위 이면 잘; 추가 분석에서 제외 이러한 낮은 값은 수 유를 하는 동안 가장 낮은 또는 애벌레에 의해 형광 음식의 아무 섭취 가능성이 되며 따라서 그 애벌레 없습니다 좋은 과목 환승 시간을 측정 하기 위한.
- 각 시간 지점에 대 한 공동 치료 애벌레로 그 평균의 표준 오차를 포함 하는 웰 스에 대 한 평균 축적을 계산 합니다.
- 각 치료 그룹에 대해 x 축에 시간 대 y 축에는 평균 축적을 플롯 하 고 그 곡선 (AUCs)에서 영역을 비교.
참고: 트리 트 먼 트를 크게 느린 운송 시간을 가속 AUCs 크게 작거나 큰, 차량 취급 그룹 보다 각각 있을 것 이다.
Representative Results
(그림 1) 동일한 기능을 평가 하기 위한 낮은 처리량 방법입니다 형광 현미경 검사 법의 높은 처리량 교체로 병사 교통 평가 플레이트 기반 분 광 광도 법을 사용 하 여이 메서드를 사용할 수 있습니다. 그림 1에 데이터를 생성 하기 위해 동일 하 게 취급된 생선 기 교통 4 시간 지점에서 형광 현미경 검사 법 (대표 이미지 표시) 또는 분 광 광도 법을 사용 하 여 분석 되었다 0, 4, 8, 그리고 24 시간 후 주입; 그 실험에서 데이터의 비교 했다 높게 상관 된 결과 (데이터 r2 의 선형 회귀 0.95 =). 선형 회귀는 부정적인 기울기 유지 형광 신호를 측정 하는 현미경과 분 광 광도 법 측정 transited 신호.
인간에서는, 잘 설립 기 활동으로 서로 다른 메커니즘의 화합물의 효과에서 zebrafish 분 광 광도 법 분석 결과 (그림 2)를 사용 하 여 검색할 수 있습니다. 차량 취급 컨트롤에 비해, 아트로핀 (4.2 µ M) 및 심 실 (5 µ M) 감속 기 교통 tegaserod (3.3 µ M) 동안 고 metoclopramide (33 µ M) 전송 시간을 가속. 리스로 마이 신 (14 µ M), 전송 시간을 가속 것으로 예상 했다이 방법에 의해 측정 된 효과가 없습니다. 전에 제거 데이터로 애벌레 없이 또는 매우 낮은 신호 처리 그룹 크기 24 했다. 타입-1-오류 제어를 위한 Tukey의 솔직히 상당한 차이 사용 하 여 화합물 처리 고 차량 처리 그룹 사이 시간 포인트 당 평균 신호에 대 한 AUC 비교 되었다. 효과 중요 한 경우에만 고려 되었다 p ≤ 0.05. 위의 치료에 사용 하는 농도 최대 복용량을 용납, 이전 실험에서 결정 및 총 관찰 없이 관찰 부정적인 영향으로 가장 높은 복용량으로 정의 했다.
분 광 광도 법 분석 결과 화합물의 복용량-의존 효과 측정할 수 있습니다. 그림 3 아트로핀 zebrafish 애벌레 복용량 독립적으로 기 운송 속도가 보여주는 데이터를 제공 합니다. 아트로핀의 낮은 복용량, 테스트, 0.042 µ M 두 높은 농도 각 했다 상당한 영향, 0.42 µ M의 4.2 µ M 보다 효과 적은 데 더 큰 영향을 했다.
새로운 분석 결과 긍정적이 고 부정적인 컨트롤, 즉, 활성 및 비활성 대상 시스템에 각각 알려진 화합물을 테스트 하 여 평가 될 수 있다 (이 경우 대상 시스템은 포유류 기 교통). 분 광 광도 법 분석 결과 대 한 18 활성 (긍정적인) 컨트롤 및 6 비활성 (부정적인) 컨트롤 테스트 되었습니다. 이러한 실험을 바탕으로, 분 광 광도 법 분석 결과 높은 긍정적인 예측 값 (90.9%), 그러나 낮은 감도 (55.6%)와 부정적인 예측 값 (38.5%). 이 값은 표 1에 제공 된 데이터에서 파생 됩니다. 그들은 실제로, zebrafish 환승 시간은 치료에 의해 영향을, 경우 포유류 교통 영향을 받을 것입니다를 반영. 그러나, zebrafish 환승 시간에 영향을 주지 않습니다 경우에, 이것은 포유류 효과의 예측 하지입니다.
그림 1: 형광 음식 교통 플레이트 기반 분 광 광도 법에 의해 현미경 이미징 및 신호에 해당 이득에서 신호의 손실이 감지. (A) 기 운송 시간에 아트로핀 (4.2 µ M) 효과의 분석에서 대표적인 현미경 이미지. (B) 평균 신호 미세한 이미지에서 계량은 매우 (부정적인) 폴된 대변 (분 광 광도 법)에서 동일 하 게 대우에서 신호와 상관. 아트로핀 치료 물고기에서 데이터 빨간색에 있습니다. 이 그림에서 카사 르 외 허가로 복사 된 11. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 2 : 치료 기 전송 속도 변경 하는 수 다 잘 플레이트에서 시간이 지남에 형광 신호를 축적 분석. 별표 (*)는 차량 취급 생선 보다 크게 다른 AUC를 나타냅니다. 오차 막대는 시간 포인트 당 처리 그룹에서 애벌레에 대 한 평균 신호의 표준 오차를 나타냅니다. 카사 르 외 허가이 수치를 다시 11. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 3 : 시간이 지남에 배설물 축적의 형광 분 광 광도 법에 의해 반영 아트로핀 복용량 의존 zebrafish 직감 환승 시간이 느려집니다. 별표 (*)는 차량 취급 생선 보다 크게 다른 AUC를 나타냅니다. 오차 막대는 시간 포인트 당 처리 그룹에서 애벌레에 대 한 평균 신호의 표준 오차를 나타냅니다. 이 수치는 카사 르 외 허가 다시 사용 11. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
표 1: 포유류와 물고기 24 화합물의 병사 활동. 이 테이블은 카사 르 외 허가 다시 사용 11.
Discussion
Zebrafish 애벌레 기 운송 시간, 여기, 측정 하기 위한 새로운 분 광 광도 법 방법은 포유류 기-기능에 대 한 치료 효과 예측할 수 있는 효율적인 분석 결과입니다. 분석 결과 낮은 감도, 그것은 첫 번째 계층 분석 실험 수 독성12에 따라 후보 치료의 껍질 벗기기 위해 적합 높은 긍정적인 predictivity가 있다. 이 방법은 쉽게 실행 하는, 높은 처리량, 있으며 처리 단계 형광 현미경 검사 법 보다 덜 동물을 사용 하 여.
이 방법에 내재 된 기술적 도전이 있다. 형광 음식을 먹이 및 개인 우물에 그들을 전송 하는 것은 처음에 도전 후 개별 애벌레를 잡기. 그러나, 연습, 숙련 된 기술자 15 분 미만에 96 잘 접시를 채울 수 있습니다. 만약 주어진된 시간 지점에서 접시는 실수로 동요와 배설물 문제 읽기 전에 우물의 바닥에서 불안, 축적 감소 표시 됩니다. 이것은 동요 하지 않고 신중 하 게,에서 plate(s)를 이동 하 여 피할 수 있습니다. 우리의 경험에서는, 정상적인 움직임, 플레이트 분 광 광도 계 자동화 한 서랍을 포함 하 여 분석 결과 방해 하지 않았다. 독자는 히터 장착 플레이트 (즉, 접시 필요가 없습니다 측정 사이 인큐베이터에 반환), 분석 결과 근처 실험실 벤치 장애의 더 낮은 기회에 대 한 최적화 수 있지만 이것은 우리의 경험에서 필요 하 고.
초기 시도 방법에 먹이 일 전에 분석 결과에 포함 되지 않았다. 그 '연습' 수 유 없이 낮은 숫자 애벌레의 치료 응용 프로그램 전에 허용 되는 시간 동안 충분 한 형광 음식 소비. 그 시도에 치료 그룹 내에서 유사 했다, 하 고 더 많은 데이터를 시간이 지남에 낮은/아니오 신호를 축적으로 인해 사용할 수 없게 되었습니다. 심지어 연습 먹이, 일부 애벌레 형광 음식의 충분 한 양을 소모 하지 않는, 그 애벌레에서 데이터 제외 그룹 내에서 변이 감소와 치료 효과 파악 하는 능력을 증가. 큰 그룹 크기 (즉, 24 대 12) 시작 유용한 데이터 분석에 기여 하는 애벌레의 충분 한 숫자에 대 한 수 있습니다.
그러나 형광 현미경 검사 법 마지막 시간 지점에서 microplate 데이터 반영 아트로핀 그룹, 차량 그룹에 비해 낮은 최종 신호 음식 교통 아트로핀 치료 애벌레 (표시 되지 않음)에서 24 시간으로 거의 완료 했다 계시 한다. 반대로, 높은 최종 microplate 형광 차량 취급 애벌레 마지막 시간 지점 하기 전에 그들의 GI로 무효화 분명히 있다 하더라도 전송 시간을 가속 치료와 연관 되었다. 형광 음식을 먹이 하는 애벌레의 치료에 무작위로 할당을 바탕으로, 우리 가정 형광 음식의 동등한 소비 평균 치료 그룹 중. 대변에서 형광 애벌레 기 관에서 소요 된 시간을 감소, 이렇게 및 위에서 설명한 패턴에 따라, 또는 빠른 교통 배설물을 어떻게든 형광을 추가. 그러나 실제 원인은 알 하지 심문, 분석 결과 아직도 이다 측정 하 고 그룹 사이 교통 시간 비교.
작은 분자 화합물에서 독성 기 효과 감지에이 방법의 고용은 하나의 응용 프로그램 이다. 다른 가능한 응용 프로그램 (예를 들어, 과민성 대 장 증후군) 질환 모델링 등 소설 치료 발견 같은 질병, 또는 프로 활동적인 화합물을 발견. 또한, 유전자 변형 모델 결합,이 방법은 사용 될 수가 정상 기 교통, 교통 장애, 장의 신경 결핍 등에서 유전자의 역할. Zebrafish 애벌레 세포 배양의 추정 규모는 전체 유기 체 플랫폼을 제공 하지만 여러 조직과 제 브라에서 함께 작동 하는 무수 한 세포 유형 이후, 시스템 생물학 질문 요청 받을 수 있습니다 및이 사용 하 여 응답 모델입니다.
발전 기술 및 새로운 응용 프로그램으로, zebrafish 독성 테스트의 행위에 효율성 향상을 나갈 것입니다. 방법 및 분석을 처리 하는 애벌레 zebrafish 높은 처리량13,14에서 개선 하기 위해 계속 됩니다. 여기에 제시 된 새로운 방법은 더 강렬한 zebrafish 연구를 만들 수 있는 개선의 한 예입니다.
Disclosures
디자인, 연구 행위, 그리고이 연구에 대 한 재정 지원 AbbVie에 의해 제공 되었다. AbbVie는 데이터, 검토, 및 원고의 승인의 해석에 참가 했다. 미 카사 르, X. Huang, 그리고 토니 콜 AbbVie의 직원 공개 추가 충돌의 관심이 없다.
Acknowledgments
Carpetbones.com의 사이먼 카사 르 설계 하 고 만든 기 교통 분석 결과의 생활에서 절차를 설명 하는 데 사용 하는 애니메이션된 그림.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Wild type zebrafish breeding pair | Various sources - for example ZIRC (Zebrafish International Resource Center) | ZL-1 | Adult wild type zebrafish of AB lineage |
| 1.7 L Breeding Tank - Beach Style Design | Tecniplast | 1.7L SLOPED | Breeding tank |
| Instant Ocean sea salt | Intant Ocean | SS15-10 | Dehydrated sea salt |
| First Bites larval fish food | Hikari | 20095 | Powdered larval fish food |
| Yellow-green (505/515) Fluospheres | Invitrogen | F8827 | Fluorescent label |
| V-bottom 96-well polystyrene microplates | Thermo Fisher Scientific | 249570 | Multiwell microplate with V-shaped bottom in each well |
| Atropine | Sigma Aldrich | A0132 | |
| Amitriptyline | Sigma Aldrich | A8404 | |
| Tegaserod | Sigma Aldrich | SML1504 | |
| Metoclopramide | Sigma Aldrich | M0763 | |
| Erythromycin | Sigma Aldrich | E5389 | |
| Spectramax M2e microplate reader | Molecular Devices | Spectramax M2e | A multi-well plate spectrophotometer capable of fluorescent excitation and emission detection. |
| SoftMax Pro | Molecular Devices | SoftMax Pro | Software for spectrophotometer data acquisition |
References
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