Summary
इस प्रोटोकॉल क्लिकर प्रशिक्षण के माध्यम से चूहों के लिए पिंजरे परिवर्तन की एक विधि का परिचय । चूहों प्रत्यक्ष प्रशिक्षण द्वारा ही नहीं बल्कि अवलोकन सीखने के द्वारा वांछित व्यवहार सीखते हैं । इस तेज़ और आसान प्रोटोकॉल के कार्यांवयन से मूषक सुविधाओं में भलाई और स्वच्छता में सुधार करने में मदद मिल सकती है ।
Abstract
पिंजरे सफाई एक नियमित प्रदर्शन पशुपालन प्रक्रिया है और प्रयोगशाला चूहों में तनाव पैदा करने के लिए जाना जाता है । तनाव के रूप में अच्छी तरह से किया जा रहा पर एक नकारात्मक प्रभाव हो सकता है और तुलना और अनुसंधान के परिणामों की reproducibility को प्रभावित कर सकते हैं, प्रयोगशाला पशुओं द्वारा अनुभवी तनाव की मात्रा को कम किया जाना चाहिए और जब संभव से बचा लिया । इसके अलावा, पिंजरे परिवर्तन के दौरान चूहा और पशु कार्यवाहक के बीच सीधा संपर्क स्वच्छता जोखिम भालू और इसलिए संभवतः नकारात्मक प्रभावों को अच्छी तरह से चूहों की जा रही है और अनुसंधान की गुणवत्ता ।
हमारे प्रोटोकॉल को नियमित प्रदर्शन पिंजरे में सुधार की प्रक्रिया को बदलने का लक्ष्य है । इस कारण से, हम एक व्यवहार्य प्रोटोकॉल है कि चूहों को क्लिकर प्रशिक्षण और अवलोकन के माध्यम से जानने के लिए स्वेच्छा से एक साफ पिंजरे में बदलने के लिए सक्षम बनाता है वर्तमान । यह प्रशिक्षण शारीरिक अशांति और पिंजरे में परिवर्तन के साथ जुड़े हैंडलिंग के कारण तनाव को कम करने में मदद करता है और समवर्ती प्रशिक्षण चरण पूरा होने के बाद पशु और पशु कार्यवाहक के बीच सीधे संपर्क में कमी सक्षम बनाता है ।
चूहों को क्लिकर प्रशिक्षण के कार्यांवयन के लिए तेजी से और आसान है । चूहों आम तौर पर प्रशिक्षण में रुचि रखते है और कुशलता से वांछित व्यवहार है, जो एक पाइप के माध्यम से पिंजरों बदल जरूरत पर जोर देता सीखो । यहां तक कि प्रशिक्षण के बिना, चूहों अवलोकन द्वारा वांछित व्यवहार करने के लिए, अवलोकन सीखने समूह के ८०% के रूप में सफलतापूर्वक पिंजरों जब परीक्षण बदल दिया । प्रशिक्षण आगे ट्रेनर और पशु के बीच विश्वास का एक रिश्ता स्थापित करने में मदद करता है । के रूप में स्वच्छता और अच्छी तरह से किया जा रहा दोनों पशु प्रयोगों में बहुत महत्वपूर्ण हैं, इस प्रोटोकॉल भी उच्च गुणवत्ता वाले अनुसंधान में सुधार करने में मदद कर सकता है ।
Introduction
नियमित प्रक्रियाओं प्रयोगशाला पशुओं1,2,3,4में तनाव पैदा कर सकता है । यह दिखाया गया है कि पिंजरे बदलते चूहों में हृदय मापदंडों और सामान्य गतिविधि में वृद्धि करता है4,5,6. इस तरह के तनाव प्रतिक्रियाओं से कम आंशिक रूप से शारीरिक अशांति और हैंडलिंग के बजाय नए अपरिचित पर्यावरण2,4के पिंजरे बदलने की प्रक्रिया के साथ जुड़े के कारण हो सकता है । विशेष महत्व की अच्छी तरह से माना जानवर7की जा रही पर तनाव का नकारात्मक प्रभाव है । इसके अलावा, तनाव व्यवहार में और स्वायत्त तंत्रिका तंत्र, neuroendocrine प्रणाली और प्रतिरक्षा प्रणाली सहित शरीर के अन्य मापदंडों में परिवर्तन लाती है । इसलिए, तनाव अक्सर पशु प्रयोगों में अप्रत्याशित विचलन का एक संभव स्रोत के रूप में जाना जाता है और उच्च गुणवत्ता वाले पशु अनुसंधान7,8में जितना संभव हो बचा जाना चाहिए । प्रयोगशाला पशुओं में तनाव को कम करने का एक तरीका प्रशिक्षण द्वारा है । प्रशिक्षण जानवरों आम तौर पर प्रयोगशाला पशु प्रबंधन के लिए एक बहुत ही उपयोगी उपकरण हो सकता है और वास्तव में है, यूरोपीय संघ के निर्देश 2010/ प्रशिक्षण संवर्धन के रूप में सेवा कर सकते हैं और प्रयोगों के लिए जानवरों को तैयार करने में मदद करता है; इस प्रकार, प्रशिक्षण को बनाए रखने और अच्छी तरह से बढ़ाने प्रयोगशाला सेटिंग्स10,11,12में योगदान देता है । एक संभव प्रशिक्षण विधि सकारात्मक सुदृढीकरण प्रशिक्षण (PRT) है । PRT operant कंडीशनिंग का एक रूप है जहां एक इनाम (जैसे, एक खाद्य इनाम), एक वांछित व्यवहार13के साथ जुड़ा हुआ है । प्रशिक्षण के इस फार्म का पहले से ही सामांयतः अमानवीय रहनुमाओं के लिए प्रयोगशाला सेटिंग्स में प्रयोग किया जाता है ताकि तनाव को कम करने और अच्छी तरह से बढ़ाने जा रहा है और विभिंन अंय पशु प्रजातियों में लोकप्रियता प्राप्त की है10,13, 14,15,16. स्वैच्छिक आंदोलन के प्रशिक्षण को भी अक्सर परिष्कृत पशुपालन प्रबंधन के लिए प्रयोग किया जाता है17,18,19। PRT न केवल सहयोग के लिए एक उपयोगी उपकरण है जब जानवरों के साथ काम कर; यह वैसे भी आम तौर पर ' जानवरों के लिए फायदेमंद है, कि क्या प्रशिक्षित व्यवहार सीधे20इस्तेमाल किया जा रहा है की परवाह किए बिना । सकारात्मक सुदृढीकरण प्रशिक्षण प्रोटोकॉल यहां वर्णित करने के लिए नियमित रूप से चूहे को स्वेच्छा से प्रक्रिया में भाग लेने का अवसर देकर पिंजरे में परिवर्तन का प्रदर्शन के दौरान तनाव के किसी भी रूप से बचने का लक्ष्य है ।
पशुओं के लिए संभव तनाव के अलावा, पशु सुविधाओं में काम करने की प्रक्रिया हमेशा स्वच्छता की स्थिति के रखरखाव के लिए नुकसान प्रदान करते हैं, विशेष रूप से प्रयोगशाला पशुओं और पशु कार्यवाहियों के बीच सीधा संपर्क स्वच्छता का खतरा भालू के रूप में संदूषण. कुतर में विशेषज्ञता पशु सुविधाओं में, गंदे से साफ पिंजरों में पशुओं के हस्तांतरण एक नियमित और उच्च कार्यभार प्रदान करता है । इस प्रक्रिया में आम तौर पर जानवरों और मनुष्यों के बीच सीधे संपर्क शामिल है और इस तरह एक स्वच्छ जोखिम कारक मानव त्वचा21पर बसे रोगजनकों के संभावित हस्तांतरण के कारण का प्रतिनिधित्व करता है । अंय पशु वैक्टर, रोगजनक और रोगजनक जीवों से स्थानांतरण के अलावा पशु सुविधाओं सबसे अधिक बार मनुष्यों के माध्यम से घुसपैठ22,23। के रूप में कम स्वास्थ्य के साथ जुड़ा हुआ है अच्छी तरह से किया जा रहा है, यहां तक कि उपनैदानिक संक्रमण nonreproducible प्रयोगात्मक परिणामों के लिए एक कारण हो सकता है, और यह स्पष्ट रूप से24,25से बचना चाहिए । इस खाते पर, स्वैच्छिक परिवर्तन पिंजरों के लिए पशुओं को प्रशिक्षण और शायद ही पशु और पशु कार्यवाहक के बीच कोई सीधा संपर्क के साथ प्रशिक्षण के बाद पिंजरे परिवर्तन के संचालन में सक्षम बनाता है, जिससे एक संभावित स्वच्छ जोखिम को कम करने जबकि प्रदर्शन प्रायोगिक प्रक्रियाएं ।
चूहों के प्रशिक्षण के लिए हमारे प्रोटोकॉल स्वेच्छा से परिवर्तन पिंजरों प्रयोगशाला चूहे प्रबंधन के लिए एक उपयोगी उपकरण हो सकता है, क्योंकि यह दिनचर्या के काम के प्रदर्शन के साथ संज्ञानात्मक संवर्धन के एक फार्म के रूप में प्रशिक्षण लिंक । तदनुसार, हमारे प्रोटोकॉल एक पशु के अनुकूल प्रक्रिया है कि अच्छी तरह से प्रयोगशाला पशु सुविधाओं में चूहों की जा रही बढ़ाने में मदद करता है । प्रशिक्षण चरण के बाद पिंजरे परिवर्तन के रूप में शायद ही पशु और पशु कार्यवाहक के बीच किसी भी सीधे संपर्क के साथ प्रदर्शन किया जा सकता है, यह इसके अतिरिक्त एक उच्च स्तर पर स्वच्छता बनाए रखने और इसलिए आगे पशु अनुसंधान में सुधार करने में मदद हो सकती है ।
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Protocol
चूहों की हैंडलिंग और प्रायोगिक प्रक्रियाओं यूरोपीय, राष्ट्रीय और पशु देखभाल के लिए संस्थागत दिशा निर्देशों के अनुसार आयोजित किया गया ।
1. Acclimatization और आदी होना
नोट: अगर चूहों को नहीं पहुंचाया गया तो acclimatization और आदी होना समय को कम किया जा सकता है । गैर इनवेसिव पहचान के लिए, रंग त्वचा के अनुकूल मार्कर के साथ पूंछ ।
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Week 1: Acclimatization
नोट: दो सत्रों के पहले सप्ताह के दौरान प्रदर्शन किया जाना चाहिए, आगमन के दिन पर एक और दूसरा एक 2 दिन के बाद आगमन ।- चूहों के आगमन के दिन:
- दो के जोड़े में चूहों अपने नए घर पिंजरे में स्थानांतरण । पुराने घोंसले और बिस्तर सामग्री के कुछ हस्तांतरण के रूप में अच्छी तरह से अपने परिचित भोजन छर्रों में से कुछ नए वातावरण के लिए आदी होना की सुविधा के लिए ।
- इसकी पूंछ से चूहे को उठाने से बचें । यदि संभव हो, पेट के नीचे या छाती के नीचे एक हाथ डाल दिया और दूसरे चूहों के हिंद पैरों का समर्थन हाथ उंहें उठा (1 आंकड़ा)26।
- दो दिन बाद आगमन का दिन:
- चूहों के घर का पिंजरा खोल कर एक हाथ को पिंजरे में डाल दिया । चूहों को सूंघकर हाथ का पता लगाने दो । अगर चूहे पिंजरे से बाहर निकलने की कोशिश कर रहे हैं, उंहें धीरे से पिंजरे में वापस दबाकर बाधा । अगले चार मिनट के लिए इस कार्यविधि के साथ जारी रखें ।
- यदि चूहों डर रहे है और अपने पर्यावरण की खोज शुरू नहीं करते हैं, प्रक्रिया को दोहराने प्रति दिन एक बार जब तक चूहों का पता लगाने के लिए शुरू करते हैं । इस मामले में, क्लिकर के लिए एक आदी होना आवश्यक हो सकता है ।
नोट: चूहों उनकी इंद्रियों के सभी के साथ नई चीजों का पता लगाने, तो कुछ समय के बाद, वे परिचित होने के रूप में एक ही experimenter पहचान लेंगे. यह हो सकता है कि चूहे के हाथों के मौखिक अन्वेषण करता है, लेकिन यह एक इनवेसिव तरीके से नहीं होना चाहिए । यदि यह स्थिति होती है, हाथ धीरे से दूर ले जाना चाहिए सुनिश्चित करने के लिए कि दस्ताने नष्ट नहीं कर रहे हैं । - घर पिंजरे के लिए इरादा खाद्य इनाम के छोटे टुकड़े जोड़ें ।
नोट: खाद्य इनाम प्रयोगशाला पशु पोषण के लिए आवश्यकताओं के अनुसार होना चाहिए । इस प्रोटोकॉल में, सफेद चॉकलेट प्रयोग किया जाता है (एक सिरिंज के अंत में आयोजित), लेकिन ऐसे सूखे फल, ताजे फल या अनाज के रूप में अन्य भोजन, संभव है. यदि पशु सुविधा स्वच्छता आवश्यकताओं विशेष शर्तों की मांग, वहां प्रयोगशाला पशुओं के लिए इलाज के लिए विभिंन आपूर्तिकर्ताओं रहे हैं । स्वास्थ्यप्रद विकल्प बेहतर है, लेकिन उच्च वसा और उच्च चीनी का मिश्रण जानवरों को भाग लेने के लिए एक अधिक से अधिक प्रेरणा दे सकता है ।
- चूहों के आगमन के दिन:
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सप्ताह 2: वैज्ञानिक और खाद्य इनाम के लिए आदी होना
- हाथ को बसावट के साथ जारी रखें और खाद्य इनाम पिछले सप्ताह में शुरू कर दिया । इंटरैक्शन समय को प्रति दिन दो मिनट तक सीमित करें.
- ऐसे मामलों में जहां चूहे बहुत चिंतित है, क्लिकर को आदी होना आवश्यक हो सकता है ।
- इस व्यवहार का मूल्यांकन करने के लिए, दिन 1 पर सत्र के बाद प्रत्येक पांच सेकंड में एक बार क्लिक करें । अगर चूहा एक भय से संबंधित व्यवहार के साथ प्रतिक्रिया करता है, क्लिकर आदत होना चाहिए ।
- क्लिकर को आदी होना के लिए, पांच बार क्लिक करें जबकि चूहा उस इनाम का उपभोग करता है जो सत्र के बाद पिंजरे में रखा जाता है । क्लिकर को आदी होना के रूप में जल्द ही पूरा कर लिया जाता है चूहा अब किसी भय से संबंधित व्यवहार को नहीं दिखाता.
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3 सप्ताह: आदी होना तीव्र हैंडलिंग के लिए
- दिनों में एक से तीन, उठाने या कई सेकंड के लिए चूहे को पथपाकर के साथ शुरू और धीरे समय का विस्तार (अधिकतम. दो मिनट प्रति चूहे) । अगर चूहा किसी भी aversive संकेत जैसे ठंड, चकमा दे रहा है या छुपा से पता चलता है बंद करो ।
- दिनों में चार और पांच, गुदगुदी में हैंडलिंग अंत, के रूप में Cloutier एट अल में वर्णित है । (२०१२) । 27
नोट: एक सफल आदी होना के लिए संकेतक हैं, उदाहरण के लिए, चूहा भोजन इनाम ले अगर यह हाथ से या हाथ से बंद हो रही चूहों की पेशकश की है, यह तलाश है, या इसे छू ।
2. क्लिकर प्रशिक्षण
नोट: एक प्रशिक्षण सत्र में चार मिनट लगते हैं और 15 सेकंड के ब्रेक के बाद प्रशिक्षण के 30 सेकंड के अंतराल होते हैं । ठहराव के दौरान किसी भी जोड़ा सामग्री निकालें । प्रेक्षक चूहे के लिए स्वतंत्र है कि वह क्या चाहता है, और यह भाग लेने की अनुमति दी है और इनाम भस्म, लेकिन ध्यान केवल दूसरे चूहे पर है । सभी चूहे एक दिन और पांच दिन पर गुदगुदी कर रहे थे । प्रशिक्षण सफलता के लिए, यह महत्वपूर्ण है कि प्रयोगकर्ता जानवरों के व्यवहार पर ध्यान देता है और एक शांत तरीके से काम कर रहा है । प्रशिक्षण दृढ़ता से समय और अवलोकन की शक्ति के प्रयोगकर्ता की क्षमताओं पर निर्भर करता है । कोई मौखिक प्रतिक्रिया प्रशिक्षण में होता है, और जानवरों के साथ मौखिक संचार सिर्फ सत्रों के बाहर हो सकता है. वांछित व्यवहार की शिक्षा के लिए एक संकेतक व्यवहार की पुनरावृत्ति है ।
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तैयारी
- इस तरह के इनाम, क्लिकर/लक्ष्य छड़ी संयोजन, एक टाइमर, एक साफ पिंजरे, धातु ट्यूब, और किसी भी अन्य विशिष्ट प्रशिक्षण सामग्री के रूप में आवश्यक सामग्री, तैयार करें ।
- घर पिंजरे एक शांत जगह पर स्थानांतरण ।
- पिंजरे से सभी वस्तुओं को हटा दें । केवल दो चूहों (प्रशिक्षित और पर्यवेक्षक) और बिस्तर सामग्री पिंजरे में रहना चाहिए ।
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प्रशिक्षण दिवस 1: प्राथमिक और माध्यमिक मजबूत के बीच एक कनेक्शन की स्थापना
- घर पिंजरे में एक छोटी सुरंग प्लेस, अधिमानतः एक चूहे से परिचित है ।
- रुको जब तक चूहा सुरंग में बैठता है और फिर इनाम के साथ चूहे खिला ।
नोट: यदि प्रशिक्षण स्थिति की परिस्थितियों में चूहा नहीं पिलाना है तो आदी होना चरण को विस्तारित या समायोजित किया जाना आवश्यक है. - जैसे ही चूहा इनाम में रुचि दिखाता है और के बारे में इनाम पर nibbling शुरू करने के लिए, क्लिक करें और फिर इनाम पर चूहा फ़ीड चलो । यह सुनिश्चित करना है कि दो प्रबलित के बाँधना सफल, दोहराने पर क्लिक करें और फिर 15 सेकंड के लिए फायदेमंद है । इस प्रथम प्रशिक्षण सत्र के दौरान कम से दो बार ऐसा करें ।
- यदि चूहे ने भाग लिया, प्राथमिक और माध्यमिक मजबूत के बीच एक कनेक्शन की स्थापना के संकेत के लिए जांच करें । इस वर्गीकरण के लिए मुख्य कसौटी भोजन इनाम है, जो चूहे सूंघने के द्वारा दिखाया गया है का आकलन है, चारों ओर देख रहे है और हाथ में है कि खाद्य इनाम या उसके हिंद अंगों को उठाने के लिए इनाम (चित्रा 2) के लिए देखने के लिए प्रस्तुत करता है । यदि ऐसा होता है, तो अगले भाग के साथ आगे बढ़ना; अंयथा, दोहराएं "प्रशिक्षण दिवस 1"
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प्रशिक्षण दिन 2 से 5: एक छोटी सुरंग से गुजर रहा
ध्यान दें: एक प्रशिक्षण सत्र के प्रशिक्षण के 30 सेकंड और चार मिनट के लिए तोड़ने के 15 सेकंड के चरणों बारी के होते हैं ।- एक ही सामग्री की एक छोटी सुरंग के रूप में पहली बार इस्तेमाल किया/मूल सुरंग है कि घर पिंजरे में दो पिंजरों लिंक होगा प्लेस ।
- टाइमर शुरू और तुरंत प्रशिक्षण के पहले 30 सेकंड के साथ शुरू करते हैं ।
- पहली बार चूहे सुरंग में प्रवेश करते हैं, सुरंग के अंत में इनाम पेश करते हैं । जैसे ही चूहे सुरंग में प्रवेश करते हैं, क्लिक करें और चूहे को इनाम खाने दें ।
- दूर खाद्य इनाम ले लो और जब तक चूहे सुरंग के लिए ब्याज एक बार फिर से पता चलता है रुको । क्लिक करें जैसे ही चूहा सुरंग में प्रवेश करती है और सुरंग के अंत में इनाम प्रस्तुत (चित्रा 3) ।
- प्रशिक्षण के 30 सेकंड के बाद, एक 15 दूसरा तोड़ जोड़ें (सुरंग निकालें) ।
- चार मिनट के लिए एक बाद 15 सेकंड के ब्रेक के साथ प्रशिक्षण के 30 सेकंड दोहराएं ।
- यदि चूहा वांछित व्यवहार से अधिक चार बार एक मिनट से पता चलता है, पर क्लिक करें और सिर्फ प्राथमिक मजबूत के साथ इनाम बंद करो ।
- चार मिनट के बाद बंद करो ।
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प्रशिक्षण सप्ताह 2: एक लक्ष्य छड़ी छू
- टाइमर शुरू और तुरंत प्रशिक्षण के पहले 30 सेकंड के साथ शुरू करते हैं । एक ब्रेक हर 15 सेकंड जोड़ें और फिर प्रशिक्षण के साथ पर चलते हैं ।
- चूहे के पास लक्ष्य छड़ी की ग्लोब प्लेस ।
- जैसे ही चूहा ग्लोब में रुचि दिखाता है, क्लिक करें और चूहे को इनाम । इसे कई बार दोहराएं ।
- अगर चूहा दुनिया में अधिक से अधिक चार बार एक मिनट में रुचि दिखाता है, अगले व्यवहार को मजबूत "नाक के साथ दुनिया को छू रहा है."
- अगर चूहा एक मिनट से अधिक चार बार के लिए है कि व्यवहार को दोहराता है, क्लिक करें और सिर्फ प्राथमिक मजबूत के साथ इनाम बंद करो ।
- चार मिनट के बाद बंद करो ।
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प्रशिक्षण सप्ताह 3 (पांच दिन) और 4 सप्ताह (तीन दिन): एक सुरंग के माध्यम से पिंजरे बदलने
नोट: यहां, केवल स्वच्छ पिंजरे की ओर सुरंग के माध्यम से गुजर प्रबलित है । 4 सप्ताह में प्रशिक्षण तीन प्रशिक्षण दिन को छोटा कर दिया गया है । इस समय पहले से ही प्रशिक्षण सफलता के लिए पर्याप्त है और अधिक प्रयोगों के लिए मूल्यांकन या डेटा रिकॉर्डिंग के लिए एक अतिरिक्त दिन के लिए अवसर देता है ।- घर पिंजरे और पहले से ही चूहे को परिचित सुरंग का एक लंबा संस्करण डालने के द्वारा एक सुरंग से एक नया साफ पिंजरे के बीच एक कनेक्शन का निर्माण ।
- एक दिन, कोई प्रशिक्षण प्रदर्शन, और बस चूहों सुरंग का निरीक्षण करते हैं । वहां एक अच्छा मौका है कि वे भी अपने दम पर इसे हस्तांतरण होगा ।
- दो दिन पर, चूहे को गंदे से साफ पक्ष को अपने दम पर सुरंग के माध्यम से हस्तांतरण करने के लिए दो मिनट दे । अगर चूहे आज़ादी से सुरंग के माध्यम से स्थानांतरण, कदम 2.5.8 को छोड़ ।
- अंयथा, पहले 30 द्वितीय प्रशिक्षण सत्र शुरू (30 प्रशिक्षण के सेकंड और एक 15 सेकंड तोड़ के बीच वैकल्पिक) चार मिनट के लिए ।
- क्लिक करें और जैसे ही यह सुरंग में रुचि दिखाता है चूहे को इनाम ।
- क्लिक करें और सुरंग में प्रवेश के इनाम पर जाओ ।
- क्लिक करें और इनाम अगर चूहे सुरंग में गहरा जाता है पर जाओ ।
- एक समान तरीके से जारी रखें जब तक चूहा पूरी सुरंग के माध्यम से चलाता है । जैसे ही चूहा साफ पिंजरे में सुरंग के अंत में बाहर झांकना शुरू होता है, लक्ष्य छड़ी, क्लिक करें, और दुनिया को छूने के लिए इनाम की दुनिया मौजूद है ।
- पिछले पर, चूहा सुरंग छोड़ने के लिए गाइड । इस प्रक्रिया के लिए, लक्ष्य छड़ी की ग्लोब का उपयोग करें । सुरंग के सामने दुनिया को प्रस्तुत करने और क्लिक करें और जैसे ही यह नए पिंजरे में कदम के रूप में चूहे को इनाम और दुनिया को छू रहा है ।
- "गंदे" घर पिंजरे में चूहे को वापस हस्तांतरण । पेट के नीचे या छाती के नीचे एक हाथ रखो और दूसरे हाथ चूहों के हिंद पैर का समर्थन करने के लिए उंहें उठा (1 चित्रा) । साफ पिंजरे के केंद्र में लक्ष्य छड़ी की दुनिया प्रस्तुत करते हैं । क्लिक करें और इनाम के रूप में चूहे सुरंग के माध्यम से चलाता है और लक्ष्य छड़ी (चित्रा 4) छू रहा है ।
- अगर चूहा एक मिनट से अधिक चार बार के लिए व्यवहार को दोहराता है, क्लिक बंद करो और सिर्फ प्राथमिक मजबूत के साथ इनाम ।
- चार मिनट के बाद बंद करो ।
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Representative Results
प्रशिक्षण दस महिला लिस्टर हूड (LD) चूहों के एक पलटन पर आयोजित किया गया । दस अप्रशिक्षित लेकिन धीरे से संभाला महिला LD चूहों एक नियंत्रण समूह के रूप में सेवा की । कोमल हैंडलिंग का मतलब है कि चूहे ही उनके शरीर से उठा रहे थे और पूंछ के आधार पर नहीं उठाया । अवलोकन द्वारा सीखने का मूल्यांकन करने के लिए, हम 10 महिला LD चूहों, जो प्रशिक्षित नहीं थे, लेकिन पिंजरे प्रशिक्षित चूहों के साथी थे और प्रशिक्षण का पालन करने में सक्षम थे की एक और समूह जोड़ा । सभी चूहों ने acclimatization और आदी होना को संभालने के लिए पूरा किया. प्रशिक्षण एक धातु पाइप के माध्यम से एक नए पिंजरे में ले जाने शामिल (4 चित्रा) । वांछित व्यवहार के प्रदर्शन (चित्रा 4) पुरस्कृत किया गया । हर प्रशिक्षण सत्र मूल्यांकन किया गया था, और प्रशिक्षण सफलता तीन श्रेणियों में विश्लेषण किया गया था: भागीदारी, कोई भागीदारी और explorative व्यवहार । प्रशिक्षित चूहों ने सामान्यतः प्रशिक्षण में रुचि दिखाई लेकिन नए परिवेश का पता लगाने के लिए उच्च प्रेरणा भी दी. विशेष रूप से पहले प्रशिक्षण के दिनों के दौरान, explorative व्यवहार बहुत प्रमुख (चित्रा 5) था । प्रशिक्षण के केवल तीन दिनों के बाद, चूहों के बहुमत वांछित व्यवहार प्रदर्शित किया और धातु पाइप (चित्रा 5) के माध्यम से पिंजरे बदल दिया है । पांच दिन का प्रशिक्षण पूरा करने के बाद सभी प्रशिक्षित चूहों ने व्यवहार (चित्रा 5) का प्रदर्शन किया । प्रशिक्षण प्रत्येक के पांच दिन के साथ, चार सप्ताह के लिए जारी किया गया था । अवलोकन प्रशिक्षण समूह के "प्रशिक्षण स्थिति" देखने के चार सप्ताह के बाद, इन चूहों का मूल्यांकन किया गया. इस मूल्यांकन के लिए, हम बार चूहों एक प्रशिक्षण सत्र के दौरान साफ पिंजरे में सुरंग के माध्यम से भाग गया की संख्या गिना । कुल मिलाकर चूहों का ८०% (चित्रा 6) देख कर वांछित व्यवहार सीखा ।
हमने आगे जांच की कि क्या प्रशिक्षण से प्रशिक्षित चूहों पर सकारात्मक प्रभाव पड़ा । इसलिए, हम प्रशिक्षण के चार सप्ताह के बाद संयम के दौरान चूहे के डर से संबंधित व्यवहार का मूल्यांकन किया । पेशाब, शौच और वोकलिज़ेशन दर्ज किए गए थे, और एक aversive स्कोर (कोई भय से संबंधित व्यवहार = 0, एक भय से संबंधित व्यवहार = 1, दो भय से संबंधित व्यवहार = 2, तीन भय से संबंधित व्यवहार = 3) की गणना की गई थी । अप्रशिक्षित समूह भय से संबंधित व्यवहार स्कोर (चित्रा 7) में उल्लेखनीय वृद्धि दिखाई ।
चित्रा 1 : चूहे की कोमल भारोत्तोलन । एक हाथ पेट के नीचे या छाती के आसपास रखा जाता है, और दूसरी ओर चूहे के हिंद पैर का समर्थन करता है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 2 : सूंघना और पालन करना । चूहे सूंघने, चारों ओर देख, या उसके हिंद अंग उठाने से खाद्य इनाम में रुचि दिखाता है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 3 : लघु सुरंग । एक छोटी सुरंग से गुजरने के बाद एक चूहे को पुरस्कृत । पर्यवेक्षक चूहा प्रक्रिया में रुचि दिखाता है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 4 : पिंजरे बदलने के बाद पुरस्कृत । एक चूहा एक धातु पाइप के माध्यम से एक साफ पिंजरे में ले जाने के बाद पुरस्कृत किया जाता है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 5 : सीखने तक दिन । दस महिला लिस्टर डाकू चूहों का एक समूह को क्लिकर प्रशिक्षण के उपयोग से एक धातु पाइप के माध्यम से पिंजरे बदलने के लिए प्रशिक्षित किया गया । प्रशिक्षण तीन श्रेणियों में मूल्यांकन किया गया: भागीदारी, कोई भागीदारी और explorative व्यवहार (एनडी: नहीं पाया: चूहों में से कोई भी संबंधित व्यवहार दिखाया) । सभी चूहों प्रशिक्षण के पांच दिनों के बाद प्रशिक्षित व्यवहार प्राप्त किया । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 6 : प्रेक्षणीय शिक्षण. दस महिला लिस्टर के एक समूह चूहों कि प्रशिक्षित चूहों के पिंजरे दोस्त थे खुद को प्रशिक्षण से गुजरना नहीं था, लेकिन प्रशिक्षण का पालन करने की अनुमति दी गई । निरीक्षण के चार सप्ताह के बाद, चूहों स्वैच्छिक पिंजरे बदलते व्यवहार के लिए मूल्यांकन किया गया । समग्र, प्रेक्षणीय अधिगम समूह के ८०% धातु पाइप के माध्यम से पिंजरों बदल दिया है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 7: भय से संबंधित व्यवहार स्कोर । प्रशिक्षण के चार सप्ताह के बाद, 3 समूहों (प्रशिक्षित, प्रेक्षणीय अधिगम, अप्रशिक्षित नियंत्रण समूह) में सभी चूहों को रोका गया था, और vocalizations, शौच और पेशाब दर्ज की गई और बाद में एक भय से संबंधित व्यवहार स्कोर की गणना करने के लिए इस्तेमाल किया गया प्रत्येक चूहे के लिए (कोई भय से संबंधित व्यवहार = 0, एक भय से संबंधित व्यवहार = 1, दो भय से संबंधित व्यवहार = 2, तीन भय से संबंधित व्यवहार = 3) । भय से संबंधित व्यवहार को अर्थ ± SEM के रूप में दर्शाया गया है । सांख्यिकीय विश्लेषण के लिए, एक तरह से ANOVA बाद Tukey के कई तुलना परीक्षण के साथ प्रदर्शन किया गया । अप्रशिक्षित समूह प्रशिक्षित और प्रेक्षणीय सीखने समूहों की तुलना में एक वृद्धि हुई भय से संबंधित व्यवहार स्कोर दिखाया । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
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Discussion
प्रोटोकॉल ऊपर वर्णित प्रयोगशाला10चूहों के लिए हमारे पहले वर्णित क्लिकर प्रशिक्षण प्रोटोकॉल का एक उपयोगी विस्तारित आवेदन है । कार्यांवयन acclimatization, आदी होना और क्लिकर प्रशिक्षण सहित सात सप्ताह की कुल पर प्रति दिन केवल मिनट की आवश्यकता है । व्यवहार्यता के लिए, इस प्रोटोकॉल चूहों की जोड़ी प्रति लगभग दस मिनट के सत्र के साथ सप्ताह के दिनों तक ही सीमित था । प्रोटोकॉल के लिए बड़े चूहे कॉलोनियों में स्थापित करने के लिए समय लेने वाली प्रतीत हो सकता है, लेकिन अगर जानवरों के दीर्घकालिक प्रयोगों के लिए या प्रजनकों के रूप में नामित कर रहे हैं, यह लंबे समय में बदलने पिंजरे की प्रक्रिया में सुधार करने में मदद कर सकते हैं । इसके अलावा, प्रयोगों प्रदर्शन करते समय एक कम अशांति परिणामों की गुणवत्ता में सुधार कर सकते हैं. इसके अलावा, सभी समय विस्तार इस प्रोटोकॉल में उल्लेख किया सिफारिशों रहे है और विशिष्ट आवश्यकताओं को किसी भी प्रयोगशाला में फिट संशोधित कर सकते हैं । समय spans छोटा किया जा सकता है अगर जानवरों के कार्यों को जल्दी से सीखते है या यदि चूहों पहले से ही आदत है । आम तौर पर, चूहों प्रशिक्षण में रुचि रखते है और केवल कुछ पुनरावृत्तियों की आवश्यकता के लिए एक पाइप के माध्यम से वांछित व्यवहार "पिंजरे परिवर्तन प्राप्त" । यहां तक कि प्रशिक्षण के बिना, चूहों अवलोकन द्वारा वांछित व्यवहार प्रदर्शन करने के लिए, के रूप में प्रेक्षणीय अधिगम समूह के ८०% सफलतापूर्वक स्वयंसेवी पिंजरे में लगे-बदलते जब परीक्षण सीखा । यहां, हम प्रशिक्षित पिंजरे बदलने क्योंकि यह एक बार पशुपालन में नियमित प्रक्रिया का प्रदर्शन किया है और पशुओं में तनाव पैदा करने के लिए जाना जाता है के लिए एक विधि प्रस्तुत करते हैं । इस तनाव से कम आंशिक रूप से पिंजरे परिवर्तन2,4के दौरान शारीरिक अशांति के कारण है । प्रशिक्षण चूहों को स्वेच्छा से इस पशुपालन प्रक्रिया के प्रदर्शन में सहयोग करने के लिए एक विकल्प देता है । एक काम में उलझाने में एक विकल्प होने जानवरों पर लाभकारी प्रभाव है और इसलिए28तनाव को कम करने में मदद कर सकता है के लिए सुझाव दिया है । प्रशिक्षण भी दूसरों के तरीके में फायदेमंद है, के रूप में यह संज्ञानात्मक संवर्धन का एक रूप के रूप में कार्य करता है । चूहों पर सकारात्मक प्रभाव भय से संबंधित व्यवहार में कमी से स्पष्ट रूप से दिखाई बन पर रोक दिया जा रहा है । न केवल प्रत्यक्ष प्रशिक्षण के लिए इन चूहों के बाद से निपटने के लिए फायदेमंद प्रतीत होता है, लेकिन प्रेक्षणीय सीखने से संबंधित व्यवहार स्कोर के रूप में अच्छी तरह से डर कम । हमारे चूहों मानक वातावरण में रखा गया था, एक परमवीर चक्र से समृद्ध-सुरंग और टिशू पेपर । प्रशिक्षण के अलावा, तीन समूहों भर में सभी चूहों एक गुदगुदी परख के अधीन थे । तदनुसार, हम अच्छी तरह से समूहों में से किसी में किसी भी घाटे का पता नहीं था, के रूप में वहां सुक्रोज वरीयता या तीन समूहों के बीच burrowing व्यवहार में कोई अंतर नहीं थे (डेटा नहीं दिखाया गया) । फिर भी, प्रशिक्षण के लिए चूहों के लिए फायदेमंद दिखाई, के रूप में वे कम डर से संबंधित व्यवहार दिखाया जबकि रोका जा रहा है ।
एक तरफ, चूहों प्रशिक्षण मनुष्यों और जानवरों, जिसमें से स्पष्ट रूप से लाभ जानवरों के बीच एक तनावपूर्ण बातचीत करने के लिए नेतृत्व कर सकते हैं । दूसरी ओर, तथापि, मनुष्यों और पशुओं के बीच संपर्क हमेशा स्वच्छता संदूषण का खतरा भालू । विशेष रूप से, जानवरों और प्रयोगकर्ता या पशु कार्यवाहक विषयों की खुला त्वचा के बीच संपर्क24चूहों में एक उच्च संक्रमण दर में परिणाम है । इसलिए, स्वच्छता के स्तर पर निर्भर करता है, जानवरों को ध्यान से प्रशिक्षित किया जाना चाहिए, और सुरक्षात्मक कपड़ों की सुविधा की आवश्यकता के आधार पर प्रोटोकॉल के लिए किए गए आवश्यक अनुकूलन के साथ प्रशिक्षकों द्वारा पहना जाना चाहिए । उदाहरण के लिए, धातु पाइप यदि पर्याप्त पाइप सफाई संभव है या बहुत समय से रोजमर्रा के काम के लिए खपत नहीं छोड़ा जा सकता है । हम पाइप का इस्तेमाल किया क्योंकि यह प्रशिक्षण सफलता का एक आसान माप की अनुमति देता है और भी सहज पिंजरों के बीच बारी से चूहों रोकता है । हालांकि, यह भी संभव है कि पुराने से पिंजरे की दीवारों को नए पिंजरे में ले जाकर पिंजरे बदलने के लिए चूहों को प्रशिक्षित किया जाए । इस प्रक्रिया को भी अगर पिंजरे बदलती बार होता है क्योंकि चूहों बहुत उत्सुक है और explorative प्रक्रिया को गति हो सकती है । पाइप और स्वच्छता के संबंध में पुरस्कार के चयन में, सुनिश्चित करें कि दोनों को साफ करने के लिए आसान कर रहे हैं, संक्रमित, या आटोक्लेव । प्रोटोकॉल अनुसंधान सेटिंग्स की एक श्रेणी के लिए समायोजित किया जा सकता है । उदाहरण के लिए, पुलों का उपयोग किया जा सकता है, जो चूहों शारीरिक जोखिम या शल्य चिकित्सा हस्तक्षेप के बाद घावों की अशांति के बिना पिंजरों को बदलने के लिए अनुमति देते हैं । लंबी अवधि में, इस प्रोटोकॉल प्रशिक्षित पशुओं और पशु कीपर के बीच कम सीधे संपर्क की अनुमति देता है । इस प्रकार, जानवरों के एक कम रोगाणु लोड करने के लिए उजागर कर रहे हैं । इसके अलावा, क्योंकि चूहों के सफल अवलोकन सीखने की, नहीं सभी चूहों प्रशिक्षण की आवश्यकता होगी । इस प्रेक्षणीय सीखने विशेष रूप से प्रजनन पिंजरों में उपयोगी हो सकता है, वंश मां से सीधे व्यवहार जानने के लिए सक्षम हो सकता है के रूप में । चूहों और पशु कार्यवाहियों के बीच प्रत्यक्ष लेकिन नहीं समग्र संपर्क को कम करने के लिए एक साथ प्रशिक्षण के माध्यम से विश्वास का एक रिश्ता स्थापित करते हुए संदूषण के जोखिम को कम करने में मदद कर सकते हैं । स्वच्छ स्तर बहुत महत्व का है, क्योंकि प्रजनन और प्रयोगात्मक चरणों के दौरान होने वाले समसामयिक संक्रमण काफी पशु प्रयोगों के वैज्ञानिक महत्व को सीमित कर सकते हैं; इस प्रकार, इस प्रोटोकॉल को और अच्छी तरह से सुधार किया जा रहा है और29विज्ञान में मदद कर सकते हैं ।
इस प्रोटोकॉल के सफल आवेदन के लिए, कई बिंदुओं को ध्यान में रखा जाना चाहिए । चूहों के लिए एक acclimatization अवधि अगर वे प्रशिक्षण से पहले पहुंचाया गया है बनाए रखा जाना चाहिए । acclimatization अवधि की लंबाई वैज्ञानिक अनुसंधान प्रश्न के लिए अनुकूलित किया जाना चाहिए । पिछले अध्ययनों से यह प्रदर्शित किया है कि तीन दिनों के एक समय अवधि के कुछ प्रयोग30,31के लिए पर्याप्त हो सकता है, जबकि एक अंय अध्ययन का प्रदर्शन किया है कि प्लाज्मा ग्लुकोकोर्तिकोइद दो सप्ताह३२से अधिक बढ़ रह । वर्तमान अध्ययन में, हम व्यावसायिक ब्रीडर से पशु सुविधा के लिए परिवहन के बाद 14 दिनों की एक acclimatization अवधि का चयन करें । प्रशिक्षण से पूर्व असुविधा के किसी भी लक्षण के लिए हर चूहे पर नजर रखी जानी चाहिए । प्रयोगकर्ता चूहों से परिचित नहीं है, तो चूहे मुंह बनाना पैमाने जैसे उपकरण संदर्भ३३के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । इन बातों के बिना, प्रशिक्षण सफलता दर कम हो सकती है । चूहों स्वाभाविक बहुत चिंतित हो सकता है और अतिरिक्त आदी होना चरणों की आवश्यकता हो सकती है । एक भयभीत जानवर को प्रशिक्षित करने का प्रयास सीमित सफलता मिलेगी । कम तनावग्रस्त और भयभीत पशु प्रयोग की शुरुआत में ही कर रहे हैं, तेजी से प्रशिक्षण पूरा हो जाएगा ।
आदी होना चरण के अंत में अधिक प्रयोगों के लिए आधारभूत डेटा रिकॉर्ड करने के लिए इष्टतम समय बिंदु है । आक्रामक तरीकों प्रयोग के लिए आवश्यक हैं, तो प्रोटोकॉल रोका जाना चाहिए । एक इनवेसिव विधि के बराबर या ऊपर हल्के गंभीरता अनुलग्नक आठवीं में बाहर सेट है कि किसी भी विधि का अर्थ है "प्रक्रियाओं का गंभीरता वर्गीकरण" निर्देश 2010/63/EU9.
प्रशिक्षण सत्र के लिए, एक प्रशिक्षण योजना एक उपयोगी उपकरण के लिए सुनिश्चित करें कि प्रोटोकॉल लगातार वांछित तरीके से आयोजित किया जाएगा हो सकता है । इस तरह की योजना विशेष रूप से महत्वपूर्ण है जब विभिंन प्रयोगकर्ता या संचालक शामिल हैं ।
एक साथ लिया, यह बहुत आसान है, आवेदन-केंद्रित प्रोटोकॉल केवल पशुपालन प्रक्रियाओं और अनुसंधान सेटिंग्स के दौरान तनाव को कम नहीं कर सकते हैं, लेकिन यह भी संभवतः पशु स्वच्छता पर लाभकारी प्रभाव पड़ता है । इसलिए, चूहों में पिंजरे परिवर्तन प्रशिक्षण उच्च गुणवत्ता वाले अनुसंधान और अनुसंधान जानवरों की भलाई की सुविधा कर सकते हैं ।
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Disclosures
लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।
Acknowledgments
लेखक थॉमस Wacker के लिए सबसे आभारी अपने तकनीकी समर्थन के लिए कर रहे हैं । हम आगे उसकी तरह समर्थन के लिए Dr. Mirjam रोथ धंयवाद ।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Target Stick with Clicker | Trixie | 2282 | |
| Metal Pipe (Alu Flexrohr nw 100) | Rotheigner | available in construction marktes | |
| White Chocolate/ white chocolate cream | Company doesn't matter, preferable organic quality | ||
| Prism Version 6.0 for Mac | GraphPad Software |
References
- Balcombe, J. P., Barnard, N. D., Sandusky, C. Laboratory routines cause animal stress. Contemporary Topics in Laboratory Animal Science. 43 (6), 42-51 (2004).
- Sharp, J., Zammit, T., Azar, T., Lawson, D. Stress-like responses to common procedures in individually and group-housed female rats. Contemporary Topics in Laboratory Animal Science. 42 (1), 9-18 (2003).
- Sharp, J. L., Zammit, T. G., Lawson, D. M. Stress-like responses to common procedures in rats: effect of the estrous cycle. Contemporary Topics in Laboratory Animal Science. 41 (4), 15-22 (2002).
- Duke, J. L., Zammit, T. G., Lawson, D. M. The effects of routine cage-changing on cardiovascular and behavioral parameters in male Sprague-Dawley rats. Contemporary Topics in Laboratory Animal Science. 40 (1), 17-20 (2001).
- Saibaba, P., Sales, G. D., Stodulski, G., Hau, J. Behaviour of rats in their home cages: Daytime variations and effects of routine husbandry procedures analysed by time sampling techniques. Laboratory Animals. 30 (1), 13-21 (1996).
- Sharp, J. L., Zammit, T. G., Azar, T. A., Lawson, D. M. Stress-like responses to common procedures in male rats housed alone or with other rats. Contemporary Topics in Laboratory Animal Science. 41 (4), 8-14 (2002).
- Pekow, C. Defining, measuring, and interpreting stress in laboratory animals. Contemporary Topics in Laboratory Animal Science. 44 (2), 41-45 (2005).
- Wilson, L. M., Baldwin, A. L. Effects of environmental stress on the architecture and permeability of the rat mesenteric microvasculature. Microcirculation. 5 (4), 299-308 (1998).
- The European Union European Parliament and the Council of the European Union. Directive 2010/63/EU of the European Parliament and of the Council of 22. Official Journal of the European Union. , The European Union European Parliament and the Council of the European Union Directive 2010/63/EU of the European Parliament and of the Council of 22 33-79 (2010).
- Leidinger, C., Herrmann, F., Thöne-Reineke, C., Baumgart, N., Baumgart, J. Introducing Clicker Training as a Cognitive Enrichment for Laboratory Mice. Journal of Visualized Experiments. 2017 (121), 1-12 (2017).
- Westlund, K. Training is enrichment-And beyond. Applied Animal Behaviour Science. 152, 1-6 (2014).
- Laule, G., Desmond, T. Positive reinforcement training as an enrichment strategy. Second Nature: Environmental Enrichment for Captive Animals. , 302-313 (1998).
- Laule, G. E., Bloomsmith, M. A., Schapiro, S. J. The Use of Positive Reinforcement Training Techniques to Enhance the Care, Management, and Welfare of Primates in the Laboratory. Journal of Applied Animal Welfare Science. 6 (3), 163-173 (2003).
- Kogan, L., Kolus, C., Schoenfeld-Tacher, R. Assessment of clicker training for shelter cats. Animals. 7 (10), 1-11 (2017).
- Miller, R., King, C. E. Husbandry training, using positive reinforcement techniques, for Marabou stork Leptoptilos crumeniferus at Edinburgh Zoo. International Zoo Yearbook. 47 (1), 171-180 (2013).
- Vertein, R., Reinhardt, V. Training female rhesus monkeys to cooperate during in-homecage venipuncture. Laboratory Primate Newsletter. 28, 1-3 (1989).
- Bloomsmith, M. A., et al. Positive reinforcement training to elicit voluntary movement of two giant pandas throughout their enclosure. Zoo Biology. 22 (4), 323-334 (2003).
- Bloomsmith, M. A., Stone, A. M., Laule, G. E. Positive reinforcement training to enhance the voluntary movement of group-housed chimpanzees within their enclosures. Zoo Biology. 17 (4), 333-341 (1998).
- Veeder, C. L., Bloomsmith, M. A., McMillan, J. L., Perlman, J. E., Martin, A. L. Positive reinforcement training to enhance the voluntary movement of group-housed sooty mangabeys (Cercocebus atys atys). Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 48 (2), 192-195 (2009).
- Coleman, K., Maier, A. The use of positive reinforcement training to reduce stereotypic behavior in rhesus macaques. Applied Animal Behaviour Science. 124 (3-4), 142-148 (2010).
- Newcomer, C. E., Fox, J. G. Zoonoses and other human health hazards. The Mouse in Biomedical Research, Vol. II, Diseases. , 719-745 (2007).
- Boot, R., Koopman, J. P., Kunstýl, I. Microbiological standardization. Principles of Laboratory Animal Science. , 143-165 (1993).
- Nicklas, W. Possible routes of contamination of laboratory rodents kept in research facilities. Scandinavian Journal of Laboratory Animal Science. 20, 53 (1993).
- FELASA working group on revision of guidelines for health monitoring of rodents and rabbits et al. FELASA recommendations for the health monitoring of mouse, rat, hamster, guinea pig and rabbit colonies in breeding and experimental units. Laboratory Animals. 48 (3), 178-192 (2014).
- Nicklas, W., et al. Implications of infectious agents on results of animal experiments. Laboratory Animals. 33, 39-87 (1999).
- Tierärztliche Vereinigung für Tierschutz e.V. Merkblatt Nr. 160. Heimtiere: Ratten. , (2014).
- Cloutier, S., Panksepp, J., Newberry, R. C. Playful handling by caretakers reduces fear of humans in the laboratory rat. Applied Animal Behaviour Science. 140 (3-4), 161-171 (2012).
- Bassett, L., Buchanan-Smith, H. M., McKinley, J., Smith, T. E. Effects of Training on Stress-Related Behavior of the Common Marmoset (Callithrix jacchus) in Relation to Coping With Routine Husbandry Procedures. Journal of Applied Animal Welfare Science. 6 (3), 221-233 (2003).
- Baker, D. G. Natural pathogens of laboratory mice, rats, and rabbits and their effects on research. Clinical Microbiology Reviews. 11 (2), 231-266 (1998).
- van Ruiven, R., Meijer, G. W., Wiersma, A., Baumans, V., Van Zutphen, L. F. M., Ritskes-Hoitinga, J. The influence of transportation stress on selected nutritional parameters to establish the necessary minimum period for adaptation in rat feeding studies. Laboratory Animals. 32 (4), 446-456 (1998).
- Capdevila, S., Giral, M., Ruiz de la Torre, J. L., Russell, R. J., Kramer, K. Acclimatization of rats after ground transportation to a new animal facility. Laboratory Animals. 41 (2), 255-261 (2007).
- Arts, J. W. M., Kramer, K., Arndt, S. S., Ohl, F. The impact of transportation on physiological and behavioral parameters in Wistar rats: implications for acclimatization periods. ILAR journal / National Research Council, Institute of Laboratory Animal Resources. 53 (1), 82-98 (2012).
- Sotocina, S. G., et al. The Rat Grimace Scale: A Partially Automated Method for Quantifying Pain in the Laboratory Rat via Facial Expressions. Molecular Pain. 7, (2011).
