Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

Farelerde Glomerular filtrasyon transdermal ölçümü

Published: October 21, 2018 doi: 10.3791/58520

Summary

Burada tarif biz bilinçli, glomerular filtrasyon debisi (GFR) ölçmek için bir protokol bir transdermal GFR monitör kullanarak fareler serbestçe hareket.

Abstract

Transdermal analiz glomerular filtrasyon (gündüz), fare ve sıçan modelleri akut böbrek yaralanma ve kronik böbrek hastalığı böbrek işlevinde değerlendirmek için kullanılan kurulan bir tekniktir. Ölçüm sistemi doğrudan arkadaki bilinçli, özgürce hareket hayvan cilde yapıştırılan ve eksojen GFR izleyici floresein-isothiocyanate (FITC) atılımı kinetik ölçer bir minyatür floresans dedektörü oluşur konjuge sinistrin (bir inulin analog). Bu sistem içinde rats ayrıntılı olarak tarif edilmiştir. Ancak, daha küçük boyutlarından dolayı farelerde Transkutanöz GFR ölçümü ek teknik sorunlar sunar. Bu yazıda bu nedenle kim bu tahlil farelerde birkaç yıl üzerinden sahne olmuştur transdermal GFR monitörler farelerde üç farklı müfettişler kombine deneyimleri temel alarak kullanımı ilk detaylı pratik rehberlik sağlar.

Introduction

Transkütanöz kullanımı GFR monitörler farelerde Schreiber ve meslektaşları tarafından 2012 yılında ilk bildirildi ve bu teknikle elde GFR ölçümleri karşılaştırarak doğrulandı sonuçlarla FITC-sinistrin bolus izni doğrudan ölçümü elde 1seri kan örnekleri. Bugüne kadar orada-si olmak be içinde Transkutanöz GFR monitörler kullanılmıştır sıçanlar ve fareler 35 hakemli yayınlar (preklinik GFR monitör kullanıldı konferans özetleri ve dergi makaleleri düzenli olarak güncellenen listesi bulunabilir MediBeacon Web sitesi2). Transdermal GFR ölçümlerde sıçanlar ve fareler bir dizi yayınlar1,3,4,5tarif edilmiş ve kullanımı sıçanlarda gösteren bir video öğretici yayınlanan6olmuştur. Ancak, ölçüm farelerde ek teknik sorunlar sunar. Burada, ilk detaylı pratik rehberlik transdermal GFR monitörler farelerde kullanımını sağlar.

Orada çeşitli nedenlerle neden müfettişler kemirgen modelleri böbrek işlevinde değerlendirmek için transdermal GFR monitör kullanımı lehine başlıyor. Transdermal ölçüm FITC-sinistrin izni ile böbrek fonksiyonu geleneksel serum kreatinin ve kan üre nitrojen (BUN) gibi7renal fonksiyon parametreleri göre daha hassas ve doğru bir ölçü sağlamak için gösterilmiştir, 8. Bir geliştirilmiş değerlendirme algoritma uygulayarak, gösterdi Friedemann ve meslektaşları sistem hassas altın standart, sürekli infüzyon tekniği GFR ölçümü3için karşılaştırılabilir ulaşır. Son yıllarda yapılan çalışmalarda da sıralı analiz Transkutanöz GFR monitör kullanma hayvanların kan ile engel olmadan akut böbrek yaralanma (AKI) indüksiyon sonra böbrek işlev hem de fonksiyonel iyileşme erken değişiklikleri incelemek için kullanılabilecek göstermiştir birim veya Hemodinami, tahlil sıralı gerektirmez örnekleme9,10kan. Yetenek GFR yüksek kesinlik ve tekrar tekrar aynı hayvan duyarlılığı ölçmek için bu tekniği farklı araştırma disiplinler çeşitli için cazip kılıyor. Transdermal GFR monitörler ilaç firmaları tarafından roman bileşiklerin yanı sıra temel ve translasyonel araştırma için üniversitelerde toksisitesi değerlendirmek için kullanılmaktadır.

Protocol

Tüm hayvan deneyleri ABD ve Birleşik Krallık'ın yerel kurallara uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Liverpool Üniversitesi yapılan deneylerde UK hayvanlar (bilimsel yordamlar) Yasası 1986 altında verilen bir lisans altında gerçekleştirilen ve Liverpool Üniversitesi Etik Komitesi tarafından kabul edildi. Vanderbilt Üniversitesi Tıp Merkezi'nde yürütülen tüm hayvan deneyleri Vanderbilt kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi tarafından kabul edildi.

1. hazırlanması FITC-sinistrin

  1. 40 mg/mL FITC-sinistrin fosfat tamponlu tuz (PBS) hazırlayın.
    Not: Aliquots-20 ° C'de kalite fark yok azalma ile birkaç ay depolanabilir; Ancak birden çok donma-çözülme döngüsü-meli var olmak kaçmak. FITC-sinistrin ışığa duyarlı - tüp ışıktan korunan tutmak.
  2. FITC-sinistrin her fare için gerekli hacmi hesaplamak:
    1. Her fare ölçüm her gününde tartın.
    2. Önerilen doz gram vücut ağırlığı başına 0,15 mg FITC-sinistrin olduğunu.

2. fare hazırlık

  1. Ayrı kafeslerde GFR ölçümleri geçiren fareler için hazır olun. Emici kağıt havlu ve gıda birkaç granül sağlar.

3. fareyi (1-2 gün önce GFR ölçümü) saç kaldırma

  1. Fare ile % 3 isoflurane anestezi ve sonra fareyi uyuyor, anestezi ile bağlı olarak fare Solunum oranı % 1.5-2 isoflurane korumak. Fare eğilimli bir ısı yastık yerleştirin.
  2. Kürk yönde karşı başkanlığındaki bir elektrikli tıraş makinesi kürk çoğunu bir fare arka kenarından kaldırmak için kullanın. Şiir kadar boyun ve kaburga arasında tepesinden tıraş.
  3. Epilasyon kremi ince bir tabaka pamuk bud (Şekil 1A) kullanarak traş bölgeye uygulayın. Pamuk bud krem cilt gibi mümkün olduğunca yakın uygulanır sağlamak için kürk yönünü karşı hareket.
  4. Krem 1-3 dakika sonra pamuk temizleme bezi ve ılık su ile yıkama çıkarın. Cilt çok kırmızı ve tahriş ölçüm sonra görünürse ölçüm gerçekleştirmez ve epilasyon cilt zarar görmesini önlemek için 72 saat içinde tekrar değil.

4. hazırlama Transdermal GFR monitör

  1. Kullanılabilir düzeltme eklerini iki boyutlarından birini kullanın. İlk 2.5 x 3 cm2 boyutu ve ölçümler farelerde için doğrudan kullanılabilir. Diğer düzeltme eklerinin boyutu 6 x 3 cm2 ve fareler veya daha büyük hayvanlar kullanılmak üzere içindir ama fare kullanmak için daha küçük bir boyuta kesilebilir.
  2. Destek yama bir tarafı kapalı soyma ve yapışkanlı tarafındaki LED üzerinde tam olarak açık pencere konumlandırma GFR aygıt sopa.
  3. Pil boyutuna uygun ve pil yama bir tarafı sopa için fazla yapışkan yama kesti.

5. Transdermal GFR monitör bağlama

  1. İsoflurane farenizle 3.1 adımda anlatıldığı gibi uyuşturan ve fare eğilimli bir ısı yastık yerleştirin. Fareler sadece için transdermal GFR monitör yerleşimini ve enjeksiyon FITC-sinistrin anestezi; anestezi FITC çürüme ölçümü için kurtarmak için izin verir.
  2. % 70 etanol ile önceden traş cildi temiz. Yaklaşık 12 cm altında fare hipoalerjenik ipek bant yerleştirin (Şekil 1B; böylece fare için çok geniş değildir için 1.5-2 cm bant genişliği azaltılması gereken).
  3. Kaset sadece yaklaşık 2 cm fare sağ tarafında ve diğer sol tarafta şekilde konumlandırın. Bandı sağ tarafında bir kenarına kaldırdıktan sonra ölçüm ve kolay yerleşimi için kat. -Sol yönergeleri adım 5.3 ve 5.6 hayvan sağ tarafındaki aygıtın yerleşim için vardır ve hayvan sol tarafında cihaz yerleşim için gerekirse takas olabilir.
  4. Pil cihaza bağlayın, destek pili çıkarın ve güvenli bir şekilde cihazın üstüne yerleştirin. Cihazın kullanıma hazırdır ve yanıp sönen mavi ışık yayan diyotlar (LED'ler) başlattığınızda veri toplama başlar.
  5. Destek aygıttan kaldırmak ve traş cilt üzerine yerleştirin. Pozisyon cihazın LED'ler açığa pencere üzerinde kaburga-öyle ki o yok mu çok yakın omurga veya bacaklarda (Şekil 1 c).
  6. Cihazın beyaz bant ile güvenli. Sağ tarafta güvenli aygıt, daha sonra şal çevrede belgili tanımlık fare ve aygıt (Şekil 1E) sol tarafında tüm kenarlarda sıkı kaydırma ilk (Şekil 1 d). İdeal olarak, teyp sol tarafında sadece cihazın kapsar ve sağ fare karın altında biter.
  7. Kaseti fare vücut çevresi ile birlikte basarak iliştirin. Kaseti sıkıca, ama değil sıkıca bağlı olması gerekir. Çok gevşek o zaman cihaz hareket edecek çok fazla etrafında ve hareket eserler neden. Ancak, bu nefes veya hareket kısıtlayan veya cilt üzerinde çok fazla baskı koyar çok sıkı olmamalıdır.
  8. El değmemiş FITC-sinistrin enjeksiyon izin alınması gereken okuma sabit bir arka plan için 3 dakika için bırakmak. Bu süre içinde sıcak bir ısı yüzey veya eldiven ile kuyruk kuyruk ven enjeksiyon için (Bu yol kullanıyorsanız) hazırlamak için sıcak su ile dolu.

6. FITC sinistrin enjeksiyon

  1. Bir insülin şırınga FITC-sinistrin (Bu en yakın 10 μL yuvarlak) enjeksiyon için gerekli hesaplanan miktarı ile hazır olun.
  2. FITC-sinistrin kuyruk ven veya retro-orbital enjeksiyon tarafından yönetme. FITC-sinistrin izni eğri üzerinde birden fazla doruklarına önlemek için bir yumuşak ama hızlı bolus yönetilen. Sadece kısmi bir doz FITC sinistrin yönetme birden çok girişimleri zorunda daha iyidir.

7. GFR ölçümü

  1. İsoflurane anestezi ve ölçüm dönemi süresince kurtarmak için kendi başına bir kafeste fareyi getirin.
  2. Fareyi 1,5 saat için kafeste gözlemlemek ve sonra aygıtı Kaldır. Bilinçli fare aygıtı kaldırmak hızlı, verimli ve genellikle iyi tolere fare ama yeni kullanıcılar için bu adımı fare uyuşturan tercih edebilirsiniz.
    1. Bir seçenek olarak, fare ile isoflurane uyuşturan.
    2. Diğer seçenek olarak, fare fare aygıt kaldırıldı iken metal barlar kavramak için izin üstünde tepe-in belgili tanımlık kafes tel rafa yerleştirin.
  3. Bir hızlı, düzgün hareket karnından altında beyaz sıva teypten koparmak ve derisini çıkarmak belgili tanımlık aygıt ve siyah sıva. Bataryayý cihazdan henüz kesmez dikkat et.
  4. Fare için ev onun kafes dönmek.

8. okuma ve verileri değerlendirerek

  1. Dikkatlice pili aygıttan bağlantıyı kes
  2. Cihazın USB kablosunu ve kabloyu bilgisayara bağlayın
  3. Açık okuma bilgisayar yazılımı (Sensor_ctrl_app.exe)
  4. Sırada, "connect", "okuma", "adını" tıklatın ve "Kaydet", programı kapatın
  5. İşlemek ve ilgili kılavuzda açıklandığı gibi verileri analiz yazılımı değerlendirme

Representative Results

Bu bölümde transdermal GFR monitör kullanımı temsil edici bir şekilde sonuçlarını. Transdermal monitör fare suşların çeşitli ve AKI ve CKD2modelleri kullanılır.

Şekil 2 temsilcisi FITC-sinistrin izni eğrileri erkek BALB/c farelerde öncesinde ve sonrasında iskemi reperfüzyon hasarı (IRI) ile eşzamanlı kontralateral nefrektomi gösterir. FITC-sinistrin hızla sağlıklı fareler (Şekil 2A) dolaşımda üzerinden temizlenir, ama izni önemli ölçüde AKI (Şekil 2B, C) ile farelerde gecikir. Çok şiddetli AKI ile farelerde değil glomerular filtrasyon (Şekil 2C) tam yokluğu gösteren FITC-sinistrin floresan 90 dakikalık ölçüm süresi içinde herhangi bir değişiklik olabilir.

Transdermal GFR ölçümü minimal invaziv ve böbrek fonksiyonları aynı farelerde değişiklikleri birden çok kez puan üzerinden izlemek için kullanılır. Şekil 3 sıralı transdermal FITC-sinistrin izni ölçümleri temel yönü tarafından belirlenen GFR değişimler ve IRI (tek taraflı iskemi ile eşzamanlı kontralateral nefrektomi) inducing sonra 1, 2 ve 4 gün gösteriyor. Gösterilen veriler FITC-sinistrin izni half-life (Şekil 3A) içerir ve GFR (Şekil 3B) ölçülen FITC-sinistrin izni half-life Schreiber ve ark1tarafından tanımlandığı gibi hesaplanan.

Şekil 4' te, kronik böbrek hastalığı (CKD) açıklanan11olarak gecikmeli kontralateral nefrektomi ardından uzun süreli tek taraflı IRI gerçekleştirerek erkek BALB/c farelerde akımıdır. GFR transdermal FITC-sinistrin izni gün 26'den sonra ilk IRI tarafından değerlendirildi. FITC-sinistrin half-life (Şekil 4A) artış ve bu nedenle GFR (Şekil 4B), düşüş bu farelerde bozulmuş böbrek fonksiyon gösterir. Bu veriler Transkutanöz GFR ölçümü ile CKD farelerde böbrek işlevinde değişiklikleri ölçmek için kullanılabilir göstermek.

Şekil 5A FITC-sinistrin half-life yakından tam aralığı GFR ölçümleri zarar görmemiş fareler ve farklı severities IRI kaynaklı AKI ile fareler üzerinde borulu yaralanma yarı kantitatif histolojik değerlendirilmesi ile ilişkisi gösterir. Buna ek olarak, serum kreatinin ve kan üre nitrojen (BUN) olumlu bir gösterdi ama FITC-sinistrin giriş izni (Şekil 5B, C), zayıf korelasyon gösteren Transkutanöz GFR ölçümleri böbrek daha güvenilir bir ölçü sağlamak yaralanma (borulu yaralanma puanları) ya serum kreatinin düzeyinde daha IRI kaynaklı AKI veya BUN aşağıdaki.

Figure 1
Şekil 1: transdermal GFR monitör bağlama. Epilasyon(a)(B), fare altında teyp yerleşimini fotoğraflarını fare cilt (C) ve teyp fare ve aygıt (D-E) lütfen etrafında sarma tarafından aygıt güvenliğini sağlama aygıtında yerleşimini için buraya tıklayın. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek.

Figure 2
Şekil 2: örnek FITC-sinistrin izni eğrileri farelerde erkek BALB/c önce ve sonra iskemi reperfüzyon hasarı (IRI) ile eşzamanlı kontralateral nefrektomi. Temel(a)ve bir gün sonra IRI ameliyatta gösteren aynı fare (B) bu fare böbrek işlevinde Engelli izni eğrileri. (C) izni IRI ameliyattan sonra bir gün daha ağır yaralı bir fareden eğri. Böbrek yetmezliği gösteren hiçbir boşluk FITC-sinistrin ölçüm döneminde yapıldı. Ham veri siyah veri noktalarını temsil eder, mavi çizgiler 3 bölmeli uyum gösterir ve yeşil çizgiler % 95 güven aralıkları gösterir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 3
Şekil 3: erkek BALB/c fare, yaş 8-10 hafta tek taraflı iskemi ile eşzamanlı kontralateral nefrektomi yapıldı (n = 5). GFR temel ve gün 1, 2 ve 4 üzerinde ameliyattan sonra değerlendirildi ve sham işletilen kontrol fare ile karşılaştırıldığında (n = 5). FITC-sinistrin half-life(a), fareler, vücut ağırlığı ile birlikte GFR (B) hesaplamak için kullanıldı. Veri noktaları tek tek hayvan gösterir ve ortalama ve standart hata hata çubukları gösterir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 4
Şekil 4: erkek BALB/c fare yaş 8-10 hafta gün 8 tek taraflı iskemi ile gecikmeli kontralateral nefrektomi yapıldı (n = 5). GFR gün 26 tarafından değerlendirildi ve sağlıklı kontrol yaş eşlemeli fareler için karşılaştırıldığında (n = 5). FITC-sinistrin half-life(a), fareler, vücut ağırlığı ile birlikte GFR (B) hesaplamak için kullanıldı. Veri noktaları tek tek hayvan gösterir ve hata çubukları ortalama ve standart sapma gösterir. Borulu yaralanma 0-50 derece nekroz ve cast oluşumu üzerinde kör bir gözlemci tarafından (kan) göre periyodik asit Schiff lekeli böbrek bölümlerde atan oldu. Bu yöntem Wang ve meslektaşları12den uyarlanmıştır. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 5
Şekil 5: böbrek fonksiyonu/hasar üç ölçü korelasyon (borulu yaralanma histolojik değerlendirme (n = 39), serum kreatinin düzeyinde (n = 30) ve kan üre nitrojen (BUN) (n = 30)) FITC-sinistrin giriş izni (half-life). Erkek BALB/c fare değişen süreler (25-45 dk) tek taraflı böbrek Transpediküler sıkma veya sahte ameliyatla farklı AKI, şiddeti teşvik için eşzamanlı kontralateral nefrektomi yapıldı ve böbrek fonksiyon parametreleri ve histopatoloji gün 4 değerlendirildi IRI sonra. Borulu yaralanma skoru (A; FITC-sinistrin izni ile güçlü bir pozitif korelasyon gösterdi R2 = 0,88), oysa serum kreatinin düzeyinde (B) ve (C) BUN hem olumlu ama FITC-sinistrin izni ile zayıf korelasyon gösterdi (R2 = 0.64 ve 0,52, sırasıyla). Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Discussion

Bu el yazması ve beraberindeki eğitim video pratik kurallar farelerde GFR monitörler için transdermal kullanımını sağlar. En kritik yordamdaki hayvanın arka, ambalajlama ve güvenli bir şekilde karın çevresinde teyp aygıtı doğru eki adımlardır. En iyi göğüs kafesi biraz sol veya sağ orta hat, konumdur. Yama ve cihaz cilde sıkıca bağlı gerekiyor, ama bu hatalı/yanlış ölçümleri için yol açacak gibi onlar nefes alıyor, hareketi kısıtlamak veya cilt kan dolaşımını cihazın altında etkiler çok sıkı olmamalıdır. Anesteziden iyileşti sonra izleme bilinçli fareler oluşur beri Ayrıca, cihazın küçük hareket eserler ile transdermal ölçümlerde hareketi sonuçlarından en düşük müdahale ile vücut parçası üzerinde yerleşimini düzeltin. Bu nedenle, bu aygıt değil yerleştirilir önemlidir böylece fareler omuzlarının özgürce hareket edebilirsiniz yakın üst bacaklarda.

Depilasyon transdermal artırır GFR ölçümü hemen önce o Depilasyon gösteren ilk veri ile FITC-sinistrin geçiş izni, ölçüm etkiler gibi bir-iki gün önce GFR ölçümü, fareler depilate önemlidir belirgin half-life FITC-sinistrin. Bunun için mekanizması bilinmiyor. Bu nedenle, birden çok kez noktalarının ve deneyler arasında güvenilir ölçümler elde etmek için cilt GFR ölçümleri ile devam etmeden önce bu işlem kurtarmak izin vermek için önceden, fareler depilate önerilir. Depilasyon krem cilt cilt için kimyasal zarar görmemesi için bir önceki uygulamasının 72 h içinde aynı alana uygulanmamalıdır. Birçok durumda, kürk yeniden büyüme birkaç gün veya bir hafta kadar sürer ve bu yüzden Depilasyon içinde 72 h krem yeniden başvuru kolayca önlenebilir.

Kadar % 50'ye serum kreatinin borulu fareler13bölümünde tarafından atılır ve fareler susuz14olduğunda üre böbrek tübüllerin üzerinden artan emiliminin çünkü serum kreatinin düzeyinde ve BUN böbrek işlevinin zavallı işaretleri vardır çünkü. Ancak, onların kolaylık nedeniyle, bu deneyleri farelerde AKI ve CKD preklinik çalışmalarda böbrek işlevinin ana ölçü birimi olarak kullanılmaya devam. Ancak, normal veya normal renal fonksiyon13yakınındaki farelerde kreatinin atılımı için borulu salgılanması büyük katkısı ile tutarlı, serum kreatinin düzeyinde az korelasyon FITC-sinistrin izni ile yüksek temizleme oranları (düşük gösterdi FITC-sinistrin half-life), o kreatinin hafif böbrek yaralanma ile fareler böbrek işlevinde büyük küçük harf duyarlı bir ölçüsü olduğunu gösteren. Buna ek olarak, çörek de hafif böbrek bozukluğu olan farelerde FITC-sinistrin izni ile ilişkili olan ise zavallı korelasyon topuz ve FITC-sinistrin izni ile daha şiddetli böbrek yaralanma (yüksek FITC-sinistrin half-life) farelerde arasında. Bu büyük olasılıkla üre emiliminin dehydration içinde hasta hayvanlara şiddetli böbrek yaralanması ile ilgili etkileri nedeniyle oluşur.

Transdermal GFR ölçümü, bütün diğer bolus izni veya GFR ölçümü, sürekli infüzyon teknikleri ile karşılaştırıldığında önemli bir avantajı bu dikkatle zamanlı kan veya idrar koleksiyonları gerektirmez var. Onlar düşük toplam kan birimleri ve idrar çıkışı ile karşılaştırıldığında fareler gibi bu farelerde özellikle zor olabilir. Ayrıca, fare sadece aygıt ve enjeksiyon eki için ancak klasik bolus izni deneyler15için gerektiği gibi birden çok venipunctures için ele alınması gerekir. Ayrıca, anestezi süresi kısadır ve bu nedenle tekrarlanan ölçüler bireysel farelerde zaman içinde gerçekleştirmek mümkündür. Hangi öncelikle ölçümleri gerçekleştirilen frekans üzerinde tekrarlanan anestezi oturumları fareler, araştırmacı yetenek İntravenöz enjeksiyonlar ve yerel kurumsal düzenlemeler için sağlık durumunu bağlıdır. Sağlıklı, zarar görmemiş farelerde transdermal GFR ölçümleri günlük, en küçük veya Hayır olumsuz etkileri üzerinde fare ile gerçekleştirilebilir. Ancak, yaralı fareler acı AKI veya CKD tekrarlanan anestezi oturumları yanı sıra sağlıklı fareler tahammül etmek olası değildir ve böylece ölçümleri sıklığını azaltılmalıdır.

Ana transdermal GFR ölçümü, GFR farelerde ölçmek için bolus temizleme yöntemleri ile karşılaştırıldığında atılımı kinetik yalnızca ölçülen göreli floresan yoğunluğu değişim zaman içinde ve mutlak izleyici konsantrasyonları olarak olduğunu kısıtlamasıdır. Bu nedenle, bu sadece ekstraselüler hacim16tarihinde normalleştirilmiş GFR çok yakın bir tahmindir atılımı kinetik, tek üstel çürüme oranı sabit ölçmek mümkündür. GFR mL/dk hızlı için hayvan ekstrasellüler hacmi olan FITC-sinistrin plazma konsantrasyonları ile eşzamanlı ölçümler olduğunu önceki çalışmalarda kurulmuş bir dönüştürme faktörü kullanarak gerçekleştirilen1tahmin edilebilir vardır. Ancak, bu dönüştürme faktörünü doğru ekstraselüler sıvı birimleri aynı derecede tahmin değil de tüm farelerde, sıvı hacmi konu dışı etkenler yaş dahil olmak üzere çeşitli tarafından etkilenebilir beri seks, (hangi cerrahi tarafından etkilenebilir hidrasyon durumu müdahaleler yanı sıra böbrek yaralanma) ve17kilo. Ancak, yöntem GFR farelerde değerlendirmek için dozaj bolus, dozaj hataları veya kan koleksiyonları zamanlama hataları etkilenmiş değil olarak daha az operatöre bağlı değişkenlik Transkutanöz GFR ölçümü tabidir.

Başka bir Transkutanöz GFR ölçme tekniğini temel sinyal vardiya ağartma, deri fluorophores ve aygıt eki ve izleyici enjeksiyon için gerekli anestezi nedeniyle ölçüm seyri sırasında oluşabilir kısıtlamasıdır. Bu sınırlama bir düzeltme algoritması3uygulayarak Friedemann ve meslektaşları tarafından ele alındı. Bu algoritma uygulaması hassas bir iyileşme GFR değerlendirme sürekli infüzyon tekniği için karşılaştırılabilir transdermal tekniğin yol açtı.

Deri pigmentasyonu farklı fare suşları içinde transdermal FITC-sinistrin izni etkileyip etkilemediğini bir sık sorulan sorudur. Deri pigmentasyonu azaltır FITC-sinistrin sinyal şiddeti koyu pigmentler emer beri mavi uyarma ve yeşil emisyon FITC-sinistrin ölçümleri gelen sinyalleri. Ancak, boşaltım FITC-sinistrin genel bağımsız oranıdır sinyal şiddeti. Ölçülen sinyalin daha düşük olmakla birlikte, Ayrıca, arka plan sinyal de pigmentli farelerde düşüktür. Arka plan sinyal autofluorescence, deri fluorophores ve uyarma ışığın yansıması bir karışımı olduğu için arka plan maksimum sinyal oranı karşılaştırılabilir veya pigmentli hayvanlarda bile geliştirilmiş olduğunu bulduk. Buna ek olarak, çevresindeki deri maruz kalma nedeniyle hareket eserler ışık yansıması, yansıyan ışık da pigmentli cilt tarafından emilir beri pigmentli farelerde azaltılır.

Sonuç olarak, biz sundu tekniği GFR hassas ölçüm bilinçli, tüm cilt tipleri fareler serbestçe hareket sağlar. Teknik kan örnekleme bağımsız olduğu için bu tekrar tekrar aynı hayvan üzerinde CKD modellerinde boyuna gözlemler, yanı sıra AKI indüksiyon sonra meydana gelen hızlı değişiklikler, GFR ölçümü için kullanılabilir.

Disclosures

D S-K, JF ve YS MediBeacon GmbH üretici çalışanları ve transdermal GFR monitör distribütörü vardır.
D S-K ve JF mucitler patent ve patent başvuruları için sunulan teknoloji vardır.

Acknowledgments

Bu eser Vanderbilt Merkezi tarafından böbrek hastalığı (VCKD) için destek verdi ve kısmen aşağıdaki hibe tarafından finanse edildi: DOD PR161028 ve R01DK112688 (Mark de Caestecker)

Biz destek için LS, PM kabul ve MRC, EPSRC ve BBSRC tarafından finanse edilen UK rejeneratif tıp platformu "Güvenlik ve görüntüleme teknolojileri Hub üzerinde odaklama yeterlik," BW (Bay/K026739/1).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Transdermal GFR monitor (comes with 1 device, 2 batteries and 1 charger) MediBeacon GmbH TDM-MH001 Reading software: MPD Lab; Analysis software: MPD Studio
Additional Batteries MediBeacon GmBH PWR-BT0001
Attachment patches MediBeacon GmbH small: PTC-SM001; large: PTC-LG001
FITC-sinistrin MediBeacon GmbH FTC-FS001
Hypoallergenic silk tape e.g. Durapore (1538-2), or Kendall (7138C), or Leukosilk (01032-00)
Anaesthesia chamber, isoflurane, oxygen
Heat pad
Electric shaver
Depilatory (hair removal) cream e.g. Veet or Nair
Cotton buds
Cotton swabs
Timer
Scales
70% ethanol wipes

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Schreiber, A., et al. Transcutaneous measurement of renal function in conscious mice. American Journal of Physiology - Renal Physiology. 303 (5), F783-F788 (2012).
  2. MediBeacon. Related Publications. , Available from: http://www.medibeacon.com/preclinical/publications/ (2018).
  3. Friedemann, J., et al. Improved kinetic model for the transcutaneous measurement of glomerular filtration rate in experimental animals. Kidney International. 90 (6), 1377-1385 (2016).
  4. Schock-Kusch, D., et al. Reliability of transcutaneous measurement of renal function in various strains of conscious mice. PLoS One. 8 (8), e71519 (2013).
  5. Schock-Kusch, D., et al. Transcutaneous assessment of renal function in conscious rats with a device for measuring FITC-sinistrin disappearance curves. Kidney International. 79 (11), 1254-1258 (2011).
  6. Herrera Pérez, Z., Weinfurter, S., Gretz, N. Transcutaneous Assessment of Renal Function in Conscious Rodents. Journal of Visualized Experiments. (109), 53767 (2016).
  7. Cowley, A. W. Jr, et al. Progression of glomerular filtration rate reduction determined in conscious Dahl salt-sensitive hypertensive rats. Hypertension. 62 (1), 85-90 (2013).
  8. Scarfe, L., et al. Measures of kidney function by minimally invasive techniques correlate with histological glomerular damage in SCID mice with adriamycin-induced nephropathy. Scientific Reports. 5, 13601 (2015).
  9. Lazzeri, E., et al. Endocycle-related tubular cell hypertrophy and progenitor proliferation recover renal function after acute kidney injury. Nature Communications. 9 (1), 1344 (2018).
  10. Street, J. M., et al. The role of adenosine 1a receptor signaling on GFR early after the induction of sepsis. American Journal of Physiology - Renal Physiology. 314 (5), F788-F797 (2018).
  11. Skrypnyk, N. I., Harris, R. C., de Caestecker, M. P. Ischemia-reperfusion model of acute kidney injury and post injury fibrosis in mice. Journal of Visualized Experiments. (78), (2013).
  12. Wang, W., et al. Endotoxemic acute renal failure is attenuated in caspase-1-deficient mice. American Journal of Physiology - Renal Physiology. 288 (5), F997-F1004 (2005).
  13. Eisner, C., et al. Major contribution of tubular secretion to creatinine clearance in mice. Kidney International. 77 (6), 519-526 (2010).
  14. Bankir, L., Yang, B. New insights into urea and glucose handling by the kidney, and the urine concentrating mechanism. Kidney International. 81 (12), 1179-1198 (2012).
  15. Qi, Z., et al. Serial determination of glomerular filtration rate in conscious mice using FITC-inulin clearance. American Journal of Physiology - Renal Physiology. 286 (3), F590-F596 (2004).
  16. Peters, A. M. The kinetic basis of glomerular filtration rate measurement and new concepts of indexation to body size. European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 31 (1), 137-149 (2004).
  17. Chapman, M. E., Hu, L., Plato, C. F., Kohan, D. E. Bioimpedance spectroscopy for the estimation of body fluid volumes in mice. American Journal of Physiology - Renal Physiology. 299 (1), F280-F283 (2010).

Tags

Tıp sayı: 140 Glomerular filtrasyon oranı FITC-sinistrin transdermal fareler kemirgenler böbrek fonksiyonları
Farelerde Glomerular filtrasyon transdermal ölçümü
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Scarfe, L., Schock-Kusch, D.,More

Scarfe, L., Schock-Kusch, D., Ressel, L., Friedemann, J., Shulhevich, Y., Murray, P., Wilm, B., de Caestecker, M. Transdermal Measurement of Glomerular Filtration Rate in Mice. J. Vis. Exp. (140), e58520, doi:10.3791/58520 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter