Aquí, evaluamos los efectos del extracto de agua de Ruta graveolens en la formación de la red de recipientes mediante el uso de un ensayo de formación de tubos en una matriz de sótano gelizado.
La angiogénesis es un fenómeno que incluye diferentes procesos, como la proliferación de células endoteliales, la diferenciación y la migración, que conducen a la formación de nuevos vasos sanguíneos e implican varias vías de transducción de señales. Aquí mostramos que el ensayo de formación de tubos es un método in vitro simple para evaluar el impacto de los productos naturales en la angiogénesis e investigar los mecanismos moleculares involucrados. En particular, en presencia del extracto de agua de Ruta graveolens (RGWE), las células endoteliales ya no son capaces de formar una red celular y que los efectos RGWE sobre la formación de tubos de células endoteliales de venas umbilicales humanas (HUVEC) son abolidos por la formación de tubos de células sociales humanas (HUVEC) activación constitutiva de MEK.
La angiogénesis es un proceso fisiológico que conduce a la formación de nuevos vasos sanguíneos a partir de los preexistentes y se produce durante la embriogénesis y el crecimiento de órganos. En la edad adulta, la angiogénesis se activa sólo en el ovario de ciclismo, en la placenta durante el embarazo y durante la cicatrización y reparación de heridas. La angiogénesis depende de la capacidad de las células endotelialespara proliferar, diferenciar y migrar para formar una red vascular intacta 1. Sin embargo, en varios trastornos, como enfermedades inflamatorias, metabólicas y reumáticas, los procesos angiogénicos se alteran y la angiogénesis se vuelve excesiva. Además, los procesos angiogénicos no controlados también estimulan la progresión tumoral y la metástasis1. Por estas razones, en la última década, los estudios de investigación se centran en el desarrollo de nuevasestrategias terapéuticas dirigidas a la inhibición de la angiogénesis excesiva en trastornos del cáncer, ocular, articular o cutáneo 2,3.
El factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) representa elobjetivo principal de las terapias antiangiogénicas actuales 4, y se han desarrollado y sintetizado varios anticuerpos monoclonales anti-VEGF para prevenir la angiogénesis excesiva. Sin embargo, estas drogas sintéticas muestran efectos secundarios graves y tienen una relación costo-beneficio desfavorable5,6. Por lo tanto, es imperativo encontrar nuevas estrategias terapéuticas para limitar la angiogénesis excesiva con efectos secundarios mínimos para complementar y combinar con los fármacos utilizados actualmente. Estos nuevos fármacos se pueden encontrar entre los productos naturales que se caracterizan por una alta diversidad química y especificidad bioquímica.
En este artículo, proponemos un método sencillo para evaluar el impacto de la RGWE en la capacidad delos HUVEC para formar túbulos en una matriz de sótano gelificada in vitro 5. De hecho, RGWE es una mezcla de metabolitos secundarios como flavonoides y polifenoles entre los que la rutina es el componente principal5. Muchos de ellos ya han sido probados como agentes antiinflamatorios y vasoprotectores7,8,9,10,11. Además, recientemente hemos demostrado que RGWE, pero no la rutina, es capaz de inhibir la capacidad de HUVEC para formar túbulos en una matriz de sótano gelizada y que este fenómeno está mediado por la vía MEK-ERK, lo que indica RGWE como una herramienta terapéutica potencial capaz de evitar la formación excesiva de nuevos vasos sanguíneos5.
Los compuestos naturales se caracterizan por una alta diversidad química y especificidad bioquímica y representan una fuente de moléculas potencialmente terapéuticas. Aquí, mostramos cómo obtener extracto de agua de la planta R. graveolens y proponemos el ensayo de formación de tubos como un método fácil de realizar, confiable y cuantitativo útil para investigar los efectos de RGWE en la angiogénesis. Es importante hervir las hojas de R. graveolens durante 1 h para asegurarse de obtener el ex…
The authors have nothing to disclose.
Este trabajo ha sido financiado por Fondi di Ateneo a los fondos del Programa Luca Colucci-D’Amato y VALERE a Maria Teresa Gentile y al fondo AIRC IG18999 a Maurizio Bifulco.
HUVEC cells | Clontech | C2519A | |
FBS | Invitrogen | 10270106 | |
EBM-2 basal medium | Clontech | cc3156 | |
Single quot kit- supplemets and growth factors | clontech | cc4147 | |
Matrigel | Corning | 354234 | |
96-well plates | Thermo Scientific | 167008 | |
15 mL conical tubes | Sarstedt | 62,554,502 | |
10 mL disposable serological pipette | Sarstedt | 861,254,001 | |
5 mL disposable serological pipette | Sarstedt | 861,253,001 | |
1000 μL pipette | Gilson | Pipetman classic | |
100 μL pipette | Gilson | Pipetman classic | |
20 μL pipette | Gilson | Pipetman classic | |
p1000 pipette tips | Sarstedt | ||
p20-200 pipette tips | Sarstedt | 70,760,502 | |
Burker chamber | Fortuna | ||
Trypan blu stain | Gibco | 15250-061 | |
DPBS | Gibco | 14190-094 | |
mill-ex 0.22 um filters | Millipore | SLGS033SS | |
Lyophilizer | VirTis-SP Scientific | ||
Incubator | Thermo Scientific | ||
CO2 | AirCos | ||
Pen-Strep | Gibco | 15070-063 | |
100 mm dish | Sarstedt | 833,902 | |
pcDNA3 | Invitrogen | v79020 | |
Lipofectamine-2000 | Invitrogen | 11668027 | |
Opti-MEM | Gibco | 31985070 | Reduced serum medium |
Rutin | Sigma-Aldrich | R5143-50G | |
Axiovert 25 microscope | Zeiss | ||
AmScope MD500 camera | AmScope | ||
Dispase | Thermo Scientific | D4818 | |
Lab heater | Falc | ||
ParaFilm | American National Can |