Summary
इस अनुच्छेद के लक्ष्य के विकास और जिगर कैंसर के लिए VX2 कार्सिनोमा खरगोश मॉडल के उपयोग के लिए एक किताब प्रदान करना है ।
Abstract
खरगोश VX2 ट्यूमर आमतौर पर hepatocellular कार्सिनोमा (HCC) के हस्तक्षेप रेडियोलॉजी के क्षेत्र में के बारे में शोधों के अनुसंधान के लिए उपयोग एक पशु मॉडल है । इस मॉडल को एक anaplastic स्क्वैमस सेल कार्सिनोमा कि आसानी से और मज़बूती से अंततः फसल और allograft आरोपण के लिए दाता खरगोश के कंकाल की मांसपेशी में भोली प्राप्तकर्ताओं के जिगर में प्रचारित कार्यरत हैं । इस ट्यूमर भ्रष्टाचार तेजी से एक angiographically एक व्यवहार्य hypervascular कैप्सूल से घिरा हुआ कोर द्वारा विशेषता एक पहचान योग्य ट्यूमर में प्राप्तकर्ता खरगोश के जिगर के भीतर बढ़ता है । खरगोश शरीर रचना विज्ञान के शारीरिक आकार संवहनी उपकरण की सुविधा के लिए आवेदन और विभिंन हस्तक्षेप तकनीकों के परीक्षण के लिए अनुमति पर्याप्त है । इन लाभों के बावजूद, वहां तकनीकी संसाधनों की एक धनाभाव के लिए मॉडल के साथ काम कर रहे शोधकर्ताओं के लिए एक ठोस संदर्भ के रूप में कार्य मौजूद है । इस के साथ साथ, हम विकास, विकास, प्रचार के तकनीकी पहलुओं के लिए एक व्यापक दृश्य रूपरेखा मौजूद है, और एक जैसे नौसिखिए और अनुभवी शोधकर्ताओं द्वारा उपयोग के लिए खरगोश VX2 ट्यूमर मॉडल के angiographic उपयोग ।
Introduction
खरगोश VX2 ट्यूमर मॉडल १९३५1,2में अपने विकास के बाद से प्रयोगात्मक ऑन्कोलॉजी में एक भूमिका निभाई है । इस ट्यूमर एक वायरस प्रेरित anaplastic स्क्वैमस सेल कार्सिनोमा hypervascularity, तेजी से विकास, और कंकाल की मांसपेशी3,4में आसान प्रचार के द्वारा विशेषता है । जबकि खरगोश VX2 ट्यूमर मॉडल कैंसर की एक भीड़ की जांच करने के लिए इस्तेमाल किया गया है5,6,7,8; इस पेपर का फोकस लिवर कैंसर9है ।
वर्णित विधि के प्रयोजन के लिए प्राथमिक यकृत कैंसर, या hepatocellular कार्सिनोमा (HCC), कि शोधों अनुसंधान के लिए हस्तक्षेप Radiologists द्वारा इस्तेमाल किया जा सकता है के लिए एक मॉडल मौजूद है । यह pharmacokinetic अध्ययन, चिकित्सकीय जांच, और पंचमी विभक्ति विधि परीक्षण10,11,12,13,14,15के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है ।
इस विधि के साथ साथ इस तरह चूहों, चूहों की तरह कुतर मॉडल के रूप में एक ही क्षेत्र के भीतर अन्य मॉडलों पर कई लाभ पैदावार, और woodchucks, या रहनुमाओं की तरह बड़ा मॉडल16. प्राथमिक लाभों में से एक तेजी से और विश्वसनीय ट्यूमर विकास है जो शोधकर्ताओं ने पहले हिंद अंग प्रचार17के एक महीने के भीतर एक सक्रिय ट्यूमर लाइन स्थापित करने के लिए अनुमति देता है । इसके अतिरिक्त, इस ट्यूमर सीधी sonographic दृश्यता और एक hypervascular परिधि जो दोनों transarterial locoregional उपचार और पंचमी विभक्ति चिकित्सा के लिए अनुमति देता है । अंत में, और सबसे महत्वपूर्ण बात, खरगोश vasculature के आकार संवहनी इंस्ट्रूमेंटेशन18के संभव और तकनीकी रूप से आसान उपयोग परमिट ।
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Protocol
निंनलिखित प्रोटोकॉल सभी आवश्यकताओं और दिशानिर्देश इलिनोइस विश्वविद्यालय के द्वारा अनिवार्य-शिकागो अनुवर्ती । इसकी समीक्षा की गई तथा निष्पादन से पूर्व स्थानीय संस्थागत पशु परिचर्या एवं उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित किया गया.
1. VX2 हिंद अंग ट्यूमर विकास
- कैंसर उपचार निदान और उपचार ट्यूमर के राष्ट्रीय कैंसर संस्थान प्रभाग से VX2 ट्यूमर सेल लाइन की खरीद/
नोट: इस समय, आदेश कैटलॉग निंन लिंक पर पाया जा सकता है: https://dtp.cancer.gov/repositories/। - इंजेक्शन के लिए सेल सस्पेंशन तैयार करने के लिए जमे हुए VX2 सैंपल और methylcellulose मीडियम को गुनगुने पानी में तब तक लगाएं जब तक वे गल न जाएं ।
- महाप्राण 0.5 \ गल सेल निलंबन के u20121 मिलीलीटर और एक 5 मिलीलीटर सिरिंज में गल methylcellulose माध्यम की एक बराबर मात्रा ।
नोट: यह सेल सस्पेंशन और methylcellulose मीडियम को महाप्राण करने के लिए एक बड़ा गेज सुई को महाप्राण करने के लिए एक 21 या 22 जी सुई का इस्तेमाल करने में मदद कर सकता है । सीरिंज को बर्फ पर लगाएं ।
- महाप्राण 0.5 \ गल सेल निलंबन के u20121 मिलीलीटर और एक 5 मिलीलीटर सिरिंज में गल methylcellulose माध्यम की एक बराबर मात्रा ।
- , सेल निलंबन के टीका के लिए हिंद अंग ट्यूमर दाता खरगोश तैयार 1 मिलीग्राम/kg acepromazine और ०.०२ मिलीग्राम/buprenorphine दी पेशी का उपयोग कर बेहोशी के साथ शुरू । कतरनी के साथ टीका साइट (हिंद अंग) दाढ़ी और साफ मुंडा एक शराब या आयोडीन आधारित एजेंट के साथ कर रहे हैं ।
नोट: Meloxicam ०.२ मिलीग्राम/analgesia के लिए चमड़े के नीचे की एक खुराक पर दिया जा सकता है । खरगोश फर दाढ़ी बनाना मुश्किल है । यह सिफारिश की है कि शोधकर्ता एकाधिक गुजरता प्रदर्शन, पहले फर के एक थोक समाशोधन पर ध्यान केंद्रित करने और फिर त्वचा के खिलाफ कतरनी और अनाज के खिलाफ जा रहा दबाने । - 5-मिलीलीटर सेल निलंबन युक्त सिरिंज के लिए एक 16 जी सुई देते हैं और दाता खरगोश की हिंद अंग मांसपेशी के पेट में निलंबन के 1 मिलीलीटर सुई, लगभग 1 सेमी गहरी. फीमर साथ एक स्पष्ट नाली के भीतर चल रहे sciatic तंत्रिका गार्ड करने के लिए सुनिश्चित करें ।
नोट: ताजा VX2 सफलतापूर्वक विषयों का ८८% inoculates जबकि जमे हुए और गल VX2 है केवल सफल ३३% समय19।
सावधानी: VX2 ट्यूमर जल्दी बढ़ेगा । ट्यूमर की प्रगति के रूप में ध्यान दिया जा सकता है कि साइड इफेक्ट हैं: वृद्धि की श्वसन दर, सुस्ती, कम सतर्कता, और/या व्यवहार परिवर्तन (जैसे, असामान्य आक्रामकता). नतीजतन, सिफारिशों को जानवरों की बारीकी से निगरानी और टीका के बाद दो सप्ताह के भीतर ट्यूमर फसल के लिए योजना है ।
2. VX2 हिंद अंग ट्यूमर विकास और कटाई
नोट: सफल टीका संभालने, 2 सप्ताह के भीतर इंजेक्शन साइट पर एक स्पष्ट (3 \ u20124 सेमी) ट्यूमर पिंड होना चाहिए । आमतौर पर, इस पिंड 1 सप्ताह के आसपास साफ हो जाएगा; हालांकि, यह दो ट्यूमर पर्याप्त ऊतक संग्रह के लिए अनुमति देने के लिए विकसित करने के लिए बेहतर है । आमतौर पर, इस पिंड फर्म, indurated, और मांसपेशियों के स्तर से ऊपर उठाया जाएगा । यदि
- टीका से 2 सप्ताह में inoculated क्षेत्र टटोलना । 2 सप्ताह में कोई ट्यूमर वृद्धि का पता चला है, तो चरण 1 फिर से निष्पादित करें । चित्र 1देखें ।
नोट: ट्यूमर की उपस्थिति भी अल्ट्रासाउंड के माध्यम से मूल्यांकन किया जा सकता है । हालांकि वहां कोई अध्ययन किया गया है ट्यूमर वृद्धि मैट्रिक्स में अंतर का आकलन जब जमे हुए शेयर से प्रचार के रूप में ताजा स्टॉक की तुलना में, यह हमारा अनुभव रहा है कि जमे हुए शेयर ट्यूमर थोड़ा धीमा बढ़ता है और अपने ताजा स्टॉक के बाद detectable हो जाएगा काउंटर-भाग । चाहे, या तो विधि 2 सप्ताह से एक फसल का ट्यूमर उपज चाहिए । - ट्यूमर फसल के लिए हिंद अंग ट्यूमर दाता तैयार करें । Anesthetize खरगोश के साथ ४५ मिलीग्राम/किलो ketamine और 5 मिलीग्राम/kg xylazine । Euthanize सोडियम pentobarbital की एक नसों (IV) खुराक से अधिक ३९० मिलीग्राम/
- एक बार खरगोश euthanized गया है, चमड़े के नीचे और चमड़े के नीचे ऊतक जो भी आकार ब्लेड शोधकर्ता फिट देखता है के साथ एक स्केलपेल का उपयोग कर ट्यूमर पिंड को दूर करके ट्यूमर कटाई शुरू । चित्र 2देखें ।
- एक बार जब ट्यूमर पिंड हिंद अंग की मांसपेशी के भीतर की पहचान की गई है, व्यापक वक्रीय मार्जिन का उपयोग कर ब्लॉक एन ट्यूमर को हटा दें । इस के लिए, समीपस्थ और मांसपेशी के बाहर के सिरों पर tendinous लगाव अंक में कटौती और फिर अंतर्निहित हड्डी के साथ स्केलपेल ब्लेड का पता लगाने । Bisect ट्यूमर कैप्सूल और गल कोर को उजागर explanted नमूना है । चित्र 3देखें ।
नोट: VX2 ट्यूमर एक अत्यधिक गल कोर है । ट्यूमर की कटाई करते समय उचित नेत्र सुरक्षा और अन्य व्यक्तिगत सुरक्षात्मक उपकरणों का उपयोग करना सुनिश्चित करें, क्योंकि ट्यूमर कैप्सूल के लिए किसी भी क्षति के बाद से गल चुके मलबे का उच्च दबाव इंजेक्शन में परिणाम कर सकते हैं । - धीरे से एक कुंद वस्तु (जैसे संदंश, hemostats) ट्यूमर को साफ करने के साथ गल कोर परिमार्जन । यह ट्यूमर कैप्सूल और कैप्सूल और आसपास की मांसपेशी के बीच संक्रमण बिंदु के बेहतर दृश्य के लिए अनुमति चाहिए । चित्रा 4देखें ।
- इस नमूने से, फसल के ट्यूमर के कई टुकड़े लगभग 1 \ u20122 mm3 और तुरंत उंहें एक कप कमरे के तापमान बाँझ खारा युक्त में स्टोर ।
नोट: इन ट्यूमर के नमूनों को बाद में intrahepatic आरोपण के लिए इस्तेमाल किया जाएगा । - एक बाँझ पेट्री पकवान में शेष ट्यूमर प्लेस और यह Dulbecco है संशोधित ईगल मध्यम (DMEM) के साथ स्नान । यदि यह नमूना बर्फ पर ठंडा रखा है, यह 2 के लिए हैंडलिंग के लिए संरक्षित किया जा सकता है \ u20123 h बाद में ।
3. Laparotomy के माध्यम से जिगर ट्यूमर आरोपण
- laparotomy के लिए प्राप्तकर्ता खरगोश तैयार करें । Anesthetize ४५ मिलीग्राम/kg ketamine और 5 मिलीग्राम/kg xylazine का उपयोग कर इंटुबैषेण और रखरखाव के साथ 1%--3% isoflurane के साथ प्रेरण के लिए आवश्यकतानुसार । जब खरगोश anesthetized है, बाल कतरनी का उपयोग कर शल्य साइट दाढ़ी । तपसिल धोने का उपयोग करके चीरा क्षेत्र को साफ करें betadine सफ़ाई, ७०% इथेनॉल समाधान, और betadine समाधान, और एक बाँझ शल्य चिकित्सा फैशन में पेट में लिपटी ।
- एक #15-ब्लेड का प्रयोग, असिरूप प्रक्रिया से शुरू खरगोश की त्वचा के माध्यम से एक छोटे से नीचे ऊर्ध्वाधर midline चीरा बनाने के द्वारा laparotomy शुरू करते हैं । यह आसानी से palpated होना चाहिए और मोटे तौर पर एक अमेरिकी पैसा का आकार हो जाता है । चित्र 5देखें ।
- त्वचा को प्रतिबिंबित और लीनिया अल्बाकी पहचान । यह midline में हीन यात्रा ऊतक के एक चिंतनशील सफेद बैंड होना चाहिए । लीनिया अल्बा को पार करने के लिए कुंद विच्छेदन का उपयोग करें और आँख का पर्दाफाश । चित्र 6देखें ।
नोट: यह आसानी से मल है, जो श्वसन के साथ चलती देखा जा सकता है, पर ध्यान दिया जाएगा के बाद से मूत्र की पहचान की है ।
चेतावनी: मूत्र सतह तनाव के कारण अंतर्निहित आंत्र के लिए अनुयाई हो जाता है । लीनिया अल्बा काटना को कुंद आघात का उपयोग अंतर्निहित आंत्र वेध के जोखिम को नष्ट करने में मदद करता है । - एक बार आँख खुल जाने के बाद, ध्यान से काटना पेरिटोनियल गुहा में प्रवेश करने के लिए । अब लिवर की पहचान की जा सकती है । बेहतर उदर अंतरिक्ष नेविगेट करने के लिए, midline चीरा 1 \ u20122 सेमी अवर त्वचा, मांसपेशी, और आँख के माध्यम से विस्तार ।
नोट: midline चीरा का विस्तार आसानी से किया जा सकता है और सुरक्षित रूप से ध्यान से एक घुमावदार hemostat घुमावदार टिप के साथ पेरिटोनियल अंतरिक्ष में डालने के द्वारा किया जाता है सतही रूप से आँख की ओर. फिर hemostat थोड़ा खुला और hemostat के दो हथियारों के बीच ऊतक प्यारा करने के लिए एक ब्लेड का उपयोग करें । - जिगर की बाईं पालि की पहचान के क्रम में ट्यूमर आरोपण के लिए एक साइट का चयन करने के लिए । बाएं पालि infero है-औसत दर्जे का पालि जो midline में बैठता है पार्श्व ।
- पेरिटोनियल अंतरिक्ष से बाहर जिगर आकर्षित करने का प्रयास करने से पहले, चीरा के अवर पहलू पर धुंध का एक सूखा टुकड़ा जगह है ।
नोट: धुंध एक अनुयाई सतह प्रदान करने के लिए यह पेट में वापस मुकर से रोकने पर जिगर रखना होगा । - या तो atraumatic संदंश या उंगलियों पर गीला धुंध का एक टुकड़ा का उपयोग करना, ध्यान से चीरा के माध्यम से पेट के बाहर जिगर की बाईं पालि आकर्षित और यह सूखी धुंध पहले रखा पर नीचे रखना । चित्र 7देखें ।
चेतावनी: लिवर कैप्सूल संवेदनशील है और आसानी से टूटना कर सकते हैं । यह कोमल होना महत्वपूर्ण है जब इस अंग को संभालने के लिए संपुटी खून, जिगर में चोट, और/
नोट: आमतौर पर, जिगर पेरिटोनियल अंतरिक्ष में प्रवेश करने पर ही नेत्रहीन घोषित करेगा; हालांकि, अगर खरगोश के पेट की आदत है, जिगर की दृष्टि से बाहर कपाल धक्का दिया जा सकता है । यदि यह मामला है, धीरे एक कुंद जांच का उपयोग कर पेट की दीवार उठा । इस परिदृश्य में, जिगर एक कुंद जांच का उपयोग कर जिगर अलग तो ध्यान से सतह तनाव के कारण डायाफ्राम के ventral पहलू का पालन करने के लिए आदत है और यह अलग करना चाहिए । फिर लिवर को बाहर खींचने के लिए atraumatic संदंश का इस्तेमाल करें । - इस बिंदु पर, प्रत्यारोपण के लिए ट्यूमर ऊतक तैयार करने और इसे बचाने के लिए जिगर पर गीला धुंध का एक टुकड़ा जगह है ।
- एक 1 \ u20122 mm3 ट्यूमर ऊतक है कि जिगर में आरोपण के लिए कदम २.६ के दौरान उत्पंन किया गया था के टुकड़े का चयन करें । चित्र 8देखें ।
- एक #11-ब्लेड का प्रयोग, एक ४५ ° कोण एक ०.५ सेमी गहरी जेब बनाने में जिगर ऊतक पंचर, देखभाल लेने के लिए जिगर कैप्सूल के पृष्ठीय पहलू घुसना नहीं है । पंचर बनाने के बाद ब्लेड को जगह पर छोड़ दें । चित्र 9देखें ।
- धीरे जिगर बिस्तर में एक छोटी जेब बनाने के लिए एक ventral दिशा में ब्लेड उठा । संदंश का उपयोग कर ट्यूमर टुकड़ा ले लो, इस जेब में ट्यूमर टुकड़ा जगह है और फिर ब्लेड हटा दें ।
नोट: ब्लेड ट्यूमर टुकड़ा डालने से पहले हटाया जा सकता है, तथापि, जिगर भरो और यह पंचर यह मुश्किल की पहचान बनाने साइट अस्पष्ट कर सकते हैं ।
सावधानी: किसी भी अन्य संरचनाओं के साथ ट्यूमर के संपर्क को कम करने के लिए जानबूझकर ट्यूमर बोने को रोकने के लिए सुनिश्चित करें । यह भी बाद में आरोपण के साथ सहायता करने के लिए इस्तेमाल किया किसी भी उपकरण अलग स्थापित करने से बचा जा सकता है । - इस बिंदु पर, इस तरह के जेल फोम के रूप में hemostatic एजेंट, का एक टुकड़ा जगह ट्यूमर जेब पर रक्तस्तम्भन को बढ़ावा देने के लिए और ट्यूमर टुकड़ा के इंजेक्शन को रोकने के लिए ।
- लिवर को पेट में बदले, एक बार रक्तस्तम्भन की पुष्टि हो जाती है ।
- एक सरल सतत सिलाई का उपयोग कर एक शंकु सुई पर 3-0 polydioxanone टांका के साथ पेट की दीवार को बंद करें और सतत subcuticular सिलाई का उपयोग कर एक काटने सुई पर 4-0 polyglactin ९१० टांके के साथ त्वचा को बंद ।
चेतावनी: जब पेट की दीवार को बंद करने, एक टांका फेंक में ओमेंटम या अंय आंत्र संरचनाओं को नुकसान नहीं ध्यान रखना ।
नोट: हालांकि इस ट्यूमर कम 2 सप्ताह लेने के लिए निश्चित रूप से पहचाने जाने योग्य radiographically होगा, यह 1.5 विकास के 3 सप्ताह में u20122 सेमी व्यास के एक आकार तक पहुंचता है । यकृत ट्यूमर की अनुमति नहीं सावधान रहना 3.5 u20124 सप्ताह के बाद से ट्यूमर एक exophytic जन फार्म और आक्रामक स्थानीय रूप से फैल जाएगा ।
4. VX2 ट्यूमर सस्पेंशन की तैयारी
- एक ५० एमएल शंकु propylene ट्यूब के मुंह में एक ४० µm छलनी प्लेस । २.७ कदम से ट्यूमर का उपयोग, एक #15-ब्लेड का उपयोग करने के लिए व्यवहार्य ट्यूमर इकट्ठा और छलनी में इन स्क्रैप जगह ट्यूमर की सतह परिमार्जन ।
- DMEM का उपयोग कर एक छलनी के माध्यम से व्यवहार्य ट्यूमर scrapings धोने और फिर 8 मिनट के लिए १६०० rpm पर propylene ट्यूब केंद्रापसारक ।
- केंद्रापसारक पूरा होने के बाद, supernatant निकालें और इसे त्यागें । उसके बाद शेष कक्ष ब्लॉक करने के लिए एक 1:1 volumetric अनुपात में methylcellulose जोड़ें ।
- एक हिंद अंग दाता खरगोश में इस सस्पेंशन इंजेक्षन कदम 1.3 \ यू 20121.4 के बाद । क्रायोजेनिक ट्यूबों में 1 मिलीलीटर aliquots में शेष निलंबन प्लेस और बाद में उपयोग के लिए तरल नाइट्रोजन में उंहें फ्रीज ।
5. VX2 जिगर ट्यूमर के Angiographic उपयोग
- खरगोश चरण ३.१ में वर्णित के रूप में तैयार करें ।
- कमर में ऊरु नाली टटोलना । नाली की पहचान की गई है, नाली के साथ एक 2 \ u20123 सेमी रैखिक चीरा बनाओ । चित्र 10देखें ।
- कुंद विच्छेदन का प्रयोग, पता लगाने और ऊरु नस, धमनी, और तंत्रिका युक्त ऊरु बंडल अलग । चित्र 11देखें ।
- फिर, कुंद विच्छेदन का उपयोग करने के लिए बंडल में संरचनाओं के आराम से ऊरु धमनी अलग और एक स्केलपेल संभाल के ऊपर धमनी को अलग । चित्र 12देखें ।
- एक 3-फ्रांसीसी प्रचार किट के साथ, एक सुई के साथ पहुँच प्राप्त करने के लिए Seldinger तकनीक का उपयोग । एक guidewire डालें और पोत में 3-फ्रांसीसी म्यान अग्रिम करने के लिए सुई को हटा दें । चित्र 13देखें ।
सावधानी: 3-फ्रांसीसी म्यान को आगे बढ़ाने में अत्यधिक बल प्रयोग करने से बचें, क्योंकि यह ऊरु धमनी के transection में परिणाम दे सकता है । - fluoroscopic मार्गदर्शन के तहत और एक कैथेटर, guidewire, और iohexol विपरीत एजेंट का उपयोग कर, सीलिएक ट्रंक के लिए का चयन करें-आम तौर पर T12 स्तर पर स्थित है-और फिर छोड़ दिया यकृत धमनी में सामांय यकृत और उचित यकृत के द्वारा कैथेटर अग्रिम ।
- इस बिंदु पर, कैथेटर के माध्यम से चुनाव के एजेंट प्रशासन । एक बार एजेंट प्रशासित है, कैथेटर निकालें ।
- 3-0 रेशम सीवन का प्रयोग, ligate ऊरु धमनी और म्यान के संमिलन बिंदु को लंबा । यह रक्तस्राव को रोकने के लिए वापस ले लिया है के रूप में म्यान को समीपस्थ गाँठ कस सुनिश्चित करें ।
- एक subcuticular सिलाई का उपयोग कर एक काटने सुई पर 4-0 polyglactin ९१० टांके के साथ कमर चीरा बंद करें ।
- मानक पोस्ट-ऑपरेटिव देखभाल और पशु वसूली की निगरानी बनाए रखें । इच्छामृत्यु और necropsy के रूप में मानक तकनीक का उपयोग करने की जरूरत है ।
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Representative Results
जब चित्रा 1को देखते हुए यह स्पष्ट होता है कि खरगोश की quadricep में इजाफा हुआ है । इसके अतिरिक्त, कई छोटे असतत पिंड, आमतौर पर प्रावरणी के माध्यम से ट्यूमर के विकास के साथ correlating, दिखाई दे रहे हैं । टटोलने का कार्य पर, इंजेक्शन अंग गैर इंजेक्शन अंग से दिखाई देना चाहिए । यदि एक शोधकर्ता ट्यूमर उपस्थिति के अधिक निश्चित आश्वासन की आवश्यकता है, अल्ट्रासाउंड इमेजिंग मांसपेशी में एंबेडेड ट्यूमर की पहचान करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । अगर एक ट्यूमर का पता नहीं है, हिंद अंग फिर से होना चाहिए एक ट्यूमर सेल निलंबन के साथ इंजेक्शन ।
आदेश में सफल संवहनी उपयोग की पुष्टि करने के लिए, म्यान में रक्त वापसी आकांक्षा पर मनाया के रूप में चित्रा 13Dमें देखा जाता है । संवहनी का उपयोग असफल था, तो प्रयास आकांक्षा म्यान में हवा निकलेगा या जब सिरिंज के गोताख़ोर खींच महत्वपूर्ण प्रतिरोध के साथ मौजूद होगा ।
जिगर ट्यूमर के विकास के लिए, वहाँ दो तरीके सफल प्रचार की पुष्टि करने के लिए कर रहे हैं: angiographically और necropsy पर. एंजियोग्राफी पर, ट्यूमर की पहचान तुरंत के रूप में चित्रा 14A में मामला है जहां ट्यूमर आम यकृत धमनी से सीधे रक्त की आपूर्ति ड्रॉ हो सकता है । यह भी मामलों में कुछ समय लग सकता है जहां ट्यूमर पार्श्व है के रूप में चित्रा 14Dमें मामला है । ट्यूमर आम यकृत धमनी में इसके विपरीत इंजेक्शन के बाद आसानी से दिखाई नहीं देता है, तो शोधकर्ता ट्यूमर पर प्रकाश डाला की संभावना में सुधार करने के लिए छोड़ दिया और सही यकृत धमनियों में इसके विपरीत सुई करने का प्रयास करना चाहिए. यह भी ंयायपालिका के रूप में चित्रा 14Cमें देखा जिगर के बाहर के किनारे की ओर बाद में यात्रा धमनियों के लिए देखने के लिए मदद कर सकते हैं । necropsy पर, ट्यूमर आसानी से चित्र 15B में देखा के रूप में दिखाई जानी चाहिए ( चित्रा 15Aकी तुलना) ।
चित्रा 1: खरगोश हिंद अंग । ट्यूमर के विकास के बड़े पैमाने पर संकेत के साथ मुंडा खरगोश हिंद अंग । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 2: उजागर हिंद अंग । दिखाया के रूप में एक ही अंग के रूप में एक त्वचा पर hypervascularity और रंग के ट्यूमर (सफेद बिंदीदार रेखा) के स्थान का प्रतिनिधित्व करने की मांसपेशी चारों ओर से अलग disease का एक बड़ा क्षेत्र खुलासा प्रतिबिंबित । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 3: ट्यूमर हटा दिया और bisected ब्लॉक । (क) ट्यूमर और आसपास की मांसपेशी को हटा दिया । (ख) ट्यूमर को अपनी संपुटी दीवार (ऐरोहेड) और गल कोर प्रकट करने के लिए bisected गया है । ट्यूमर प्रक्रिया दोनों हिस्सों में देखा जा सकता है और साथ ही कुछ गल मलबे । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 4: ट्यूमर कैप्सूल । ऐरोहेड ट्यूमर (टी) का एक टुकड़ा है, जो आसंन मांसपेशी (एम) से ट्यूमर कैप्सूल (डैश्ड व्हाइट लाइन) द्वारा delineated है निरूपित । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 5: उजागर असिरूप प्रक्रिया । त्वचा और अंतर्निहित मांसपेशी को असिरूप प्रक्रिया (काला तीर) और आंत (सफेद तीर) के दृश्य के लिए अनुमति देने के लिए परिलक्षित किया गया है । व्हाइट स्टार कपाल दिशा को ध्यान में रखें । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 6: लीनिया अल्बा । प्रावरणी त्वचा और लीनिया अल्बा के दृश्य के लिए अनुमति देने के लिए परिलक्षित किया गया है (काला तीर) caudal दिशा में एक कपाल में चल रहा है । यह क्षेत्र avascular है और पेरिटोनियल अंतरिक्ष के रक्त-हानि मुक्त पहुंच के लिए प्रदान करता है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 7: जिगर के बाहर योनि के पालि । इस छवि को धीरे से पेरिटोनियल अंतरिक्ष से निकाला गया था और धुंध के एक टुकड़े पर रखा गया था कि जिगर की एक पालि से पता चलता है. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 8: प्रत्यारोपण के लिए बाद संसाधित ट्यूमर टुकड़ा । ट्यूमर का एक टुकड़ा पैमाने के लिए एक #11-ब्लेड के टिप के बगल में रखा आरोपण के लिए उचित आकार के लिए संसाधित । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 9: ट्यूमर आरोपण के लिए जिगर में एक जेब बनाना । एक #11-ब्लेड जिगर की निकाली पालि में उचित गहराई में डाला जाता है । यह आंकड़ा 8से ट्यूमर के टुकड़े के आरोपण के लिए एक उचित आकार pocked पैदा करेगा । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 10: ऊरु नाली और प्रारंभिक चीरा. (क) हिंद अंग की टटोलने का कार्य ऊरु नाली के दृश्य के लिए अनुमति देता है (सफेद बिंदीदार रेखा) । (ख) हिंद ऊरु नाली के साथ बनाया अंग में प्रारंभिक चीरा । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 11: ऊरु बंडल की पहचान । प्रारंभिक चीरा के कुंद विच्छेदन ऊरु नस (काला तीर) से पता चलता है. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 12: ऊरु बंडल और ऊरु धमनी के अलगाव की विच्छेदन । (एक) ऊरु बंडल के विच्छेदन हमें व्यक्तिगत रूप से भेद करने की अनुमति देता है (बाएं से दाएं) ऊरु नस (FV), ऊरु धमनी (एफए), और ऊरु तंत्रिका (एफ एन) । (ख) ऊरु धमनी एक स्केलपेल संभाल पर पृथक । रक्त ऊरु तंत्रिका से भेद के लिए अनुमति कॉलम ध्यान दें । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 13: संवहनी पहुंच । (क) एक guidewire (छ) ऊरु धमनी (एफए) में प्रवेश सुई (एन) जो पहले ऊरु धमनी में डाला गया था के माध्यम से उंनत है । (ख ) एक म्यान (एस) और फैलावर (डी) ऊरु धमनी (एफए) में guidewire (जी) से अधिक उन्नत हैं. (ग) म्यान (एस) और फैलाव को म्यान हब तक ऊरु धमनी (एफए) में पूरी तरह से उन्नत कर रहे हैं । (घ) म्यान के बाद रेशम के साथ सुरक्षित है फैलाव और guidewire हटा दिया गया है । आकांक्षा की पैदावार रक्त (काले तीर) म्यान में । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 14: यकृत ट्यूमर के Angiographic इमेजिंग । (एक) कैथेटर टिप (सफेद तीर) ट्यूमर (व्हाइट स्टार) खिला धमनी में सीधे इसके विपरीत पहुंचाने. (ख) कैथेटर टिप (सफेद तीर) पार्श्व ट्यूमर (व्हाइट स्टार) द्वारा बाहर छोड़ दिया यकृत धमनी और उदारवादी विपरीत ऊपर में इसके विपरीत पहुंचाने. (ग) ट्यूमर (व्हाइट स्टार) कैथेटर (सफेद तीर) से यात्रा एक ंयायपालिका धमनी (सफेद रेखा) का प्रदर्शन बी से ट्यूमर में आगे विपरीत इंजेक्शन. (घ) आगे कंट्रास्ट के बाद बी से ट्यूमर । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 15: खरगोश जिगर । (एक) एक स्वस्थ खरगोश जिगर छोड़ दिया औसत दर्जे का पालि (सफेद सितारा) बाएं पार्श्व पालि (काले स्टार) झूठ बोल रही है । (ख) एक पूरी तरह से विकसित यकृत ट्यूमर (सफेद तीर) के साथ एक खरगोश जिगर । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
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Discussion
VX2 ट्यूमर पद्धति में पहला महत्वपूर्ण कदम एक दाता खरगोश के हिंद अंग में एक ट्यूमर के सफल प्रसार है । इस चरण के बारे में अधिक जानकारी के लिए "प्रतिनिधि परिणाम" अनुभाग में पहले अनुच्छेद को देखें ।
अगले महत्वपूर्ण कदम यह सुनिश्चित करना है कि व्यवहार्य ट्यूमर कैप्सूल ठीक से पहचान की है । न केवल यह ट्यूमर निलंबन की तैयारी के लिए आवश्यक हो जाएगा, लेकिन यह भी यकृत आरोपण के लिए ट्यूमर के टुकड़ों को चुनने और पैदा करने के लिए महत्वपूर्ण है । व्यवहार्य ट्यूमर और आसपास के मांसपेशी ऊतक के बीच सीमांकन चित्रा 4में व्याख्या की है । निलंबन की तैयारी के दौरान गलत ऊतक नमूने स्क्रैप है, तो बाद हिंद अंग प्रचार विफल हो जाएगा । यदि यह यकृत प्रत्यारोपण के दौरान होता है, जिगर में ट्यूमर के विकास नहीं हो जाएगा । यह एंजियोग्राफी तक स्पष्ट नहीं होगा ।
यकृत आरोपण प्रक्रिया के दौरान, देखभाल जब जिगर के बाईं पालि निकट आ लिया जाना चाहिए । अक्सर, अगर जिगर आसानी से स्पष्ट है जब योनि में प्रवेश, यह वास्तव में जिगर की औसत दर्जे का पालि है कि ऑपरेटरों देख रहे हैं । जिगर के औसत दर्जे के पालि में आरोपण angiographic उपयोग के लिए मुद्दों की एक मुट्ठी भर प्रस्तुत करता है । पहले रीढ़ की हड्डी के साथ औसत दर्जे का है पालि शारीरिक संबंध है । एक औसत दर्जे का ट्यूमर अक्सर पुष्टि और ट्यूमर मुश्किल के उपचार बनाने प्रतिदीप्तिदर्शन पर रीढ़ की हड्डी से धुँधला किया जा सकता है । इसके अतिरिक्त, gastroduodenal धमनी अधिक बार vasculature औसत दर्जे का पालि की आपूर्ति के साथ जुड़ा हुआ है । इस आंत के गैर लक्ष्य embolization का खतरा बढ़ जाता है और संभावित आंत्र ischemia के लिए नेतृत्व कर सकते है/ जैसा कि पहले कहा गया है, यह एक विफलता के रूप में योग्य नहीं होगा; हालांकि, यह दृश्य और उपचार के दौरान अधिक देखभाल वारंट करता है ।
अंतिम महत्वपूर्ण कदम सफल और स्थिर ऊरु धमनी का उपयोग है । 12 चित्रामें देखा के रूप में, ऊरु धमनी एक स्केलपेल ब्लेड संभाल के ऊपर अलग किया जाना चाहिए । हालांकि यह ज्यादातर के लिए और अधिक सही Seldinger20तकनीक प्रदर्शन करने के लिए शोधकर्ता की अनुमति के लिए किया जाता है, यह प्रक्रिया भर में बनाए रखा जाना चाहिए । यह है क्योंकि स्केलपेल हैंडल को हटाने के एक बार म्यान शुरू किया गया है vasculature के भीतर म्यान की अवांछित गति का कारण बन सकता रोड़ा और vasculature और आसपास के संरचनाओं के संभावित नुकसान । यदि म्यान प्रक्रिया के दौरान बेदखल हो जाता है, ऊरु नाली में प्रवेश करने के लिए पहुंच साइट के लिए समीपस्थ में दबाव लागू करने के लिए खून बह रहा है, और फिर ligated जा सकता है धमनी । म्यान को फिर से डालने का प्रयास न करें । शोधकर्ता contralateral ऊरु धमनी से पहुंच प्राप्त करने का प्रयास कर सकते हैं ।
जबकि VX2 मंच HCC के संबंध में शोधों के अनुसंधान के लिए वर्तमान उपयोग में एक मजबूत मॉडल है, यह प्रासंगिक कमियों है । इस मॉडल की प्राथमिक कमजोरी यह है कि इसकी बीमारी राज्य एक मानव HCC की नकल नहीं करता है । ट्यूमर प्रेरित रोग मानव HCC के समान नहीं है और न ही गैर cirrhotic जिगर parenchymal microenvironment है । इसके अलावा, VX2 ट्यूमर पर्याप्त आंतरिक परिगलन, जो उपचार प्रभावकारिता अध्ययन के लिए उपयोग से इस मॉडल को शामिल नहीं दिखाता है । कुछ वैकल्पिक मॉडलों में चूहे, चूहे, और woodchucks या सूअर और रहनुमा जैसे बड़े पशु मॉडल जैसे कुतर मॉडल शामिल हैं । 16 , 21 ये विकल्प सभी विभिंन लाभ और हानि प्रदान करते हैं; हालांकि, लेखकों की राय में, angiographic उपयोग और लागत प्रभावकारिता के लिए, VX2 खरगोश प्रमुख रहता है ।
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Disclosures
इस रिपोर्ट में चित्रित काम Guerbet LLC से एक अनुसंधान अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था ।
Acknowledgments
हम इलिनोइस विश्वविद्यालय में पशु चिकित्सा कर्मचारियों को स्वीकार करना चाहते है-शिकागो जैविक संसाधन प्रयोगशाला ।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| MethoCult (Methycellulose) | Stemcell Technologies | M3134 | |
| VX2 Cell Line | NCI | VX-2 | |
| 5 mL Syringe | BD | 309646 | |
| 16 G Needle | BD | 305197 | |
| 22 G Needle | BD | 305155 | |
| Hair Clippers | Wahl | 41870-0438 | |
| Foam Insulated Box | Mr. Box Online | 10 x 10 x 4 | |
| Acepromazine | Henry Schein | 003845 | |
| Buprenorphine | Par | 42023-179-05 | |
| Meloxicam | Henry Schein | 049755 | |
| Alcohol Pads | Covidien | 5033 | |
| Ketamine | Henry Schein | 056344 | |
| Xylazine | Akorn | 59399-110-20 | |
| Pentobarbital (Fatal-Plus) | Vortech | 9373 | |
| Sterile Petri Dish | Thermo Fisher | 172931 | |
| DMEM | Gibco | 11965092 | |
| Saline | Baxter | 2F7124 | |
| 15-Blade | Steris | 02-050-015 | |
| Scalpel Handle x 2 | Steris | 22-2381 | |
| Curved Hemostat | WPI | 501288 | |
| Atraumatic Forceps | Sklar | 52-5077 | |
| Gauze | Medline | NON21430LF | |
| 11-Blade | Steris | 02-050-011 | |
| Surgicel | Ethicon | 1951 | |
| 3-0 PDS / Taper | Ethicon | Z305H | |
| 4 - 0 Vicryl / Cutting | Ethicon | J392H | |
| 40 μm strainer | BD | 352340 | |
| 50 mL conical tube | Thermo Fisher | 339652 | |
| plastic pipette | Thomas Scientific | HS206371B | |
| Centrifuge | Sorvall | 75004240 | |
| 1.40 mL Tubes (Internal Thread) | Micronic | MP32131-Z20 | |
| 3-F VSI Micro-HV Introducer Kit | Vascular Solutions | Custom Order (P15180391) | |
| .018 45° angle glidewire | Terumo | RG*GA1818SA | |
| Direxion bern-shape microcatheter | Boston Scientific | M001195230 | |
| Omnipaque | GE | Y510 |
References
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