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Biology

गोजातीय स्तन ग्रंथि बायोप्सी तकनीक

doi: 10.3791/58602 Published: December 23, 2018

Summary

यह लेख एक गोजातीय स्तन ग्रंथि बायोप्सी प्रस्तुत करता है कोर और सुई बायोप्सी उपकरण का उपयोग । काटा ऊतक सेल संस्कृति के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है या स्तन शरीर विज्ञान और जीन अभिव्यक्ति, प्रोटीन अभिव्यक्ति, प्रोटीन संशोधनों, immunohistochemistry, और metabolite सांद्रता सहित चयापचय का आकलन करने के लिए ।

Abstract

गोजातीय स्तन ग्रंथि बायोप्सी शोधकर्ताओं ने जीन अभिव्यक्ति, ऊतकवैज्ञानिक विश्लेषण, संकेत मार्ग, और प्रोटीन अनुवाद सहित सेल जीवविज्ञान के अध्ययन के लिए ऊतक के नमूनों को इकट्ठा करने के लिए अनुमति देते हैं । इस लेख गोजातीय स्तन ग्रंथि (एमजी) की बायोप्सी के लिए दो तकनीकों का वर्णन करता है । तीन स्वस्थ Holstein दुधारू गायों के विषय थे । बायोप्सी से पहले गायों को दूध पिलाया गया और बाद में एक मवेशी छुटे हुए में फिर से रोक दिया गया । एक एनाल्जेसिक (flunixin meglumine, १.१ करने के लिए २.२ मिलीग्राम/किलोग्राम शरीर के वजन) jugular द्वारा प्रशासित किया गया था नसों में [IV] इंजेक्शन 15-20 मिनट बायोप्सी से पहले । स्थाई बेहोशी के लिए, xylazine हाइडरोक्लॉराइड (0.01-0.05 मिलीग्राम/शरीर के वजन के किलोग्राम) अनुत्रिक जहाजों के माध्यम से इंजेक्शन था 5-10 ंयूनतम प्रक्रिया से पहले । एक बार पर्याप्त रूप से बेहोश, बायोप्सी साइट aseptically तैयार किया गया था और स्थानीय स्तर पर 2% lidocaine हाइडरोक्लॉराइड के 6 मिलीलीटर के साथ anaesthetized चमड़े के नीचे इंजेक्शन के माध्यम से । अपूतित तकनीक का प्रयोग, एक 2 से 3 सेमी ऊर्ध्वाधर चीरा एक संख्या 10 स्केलपेल का उपयोग किया गया था । कोर और सुई बायोप्सी उपकरण का इस्तेमाल किया गया । कोर बायोप्सी उपकरण एक ताररहित ड्रिल से जुड़ा हुआ था और एक घड़ी वार ड्रिल कार्रवाई का उपयोग कर चीरा के माध्यम से एमजी ऊतक में डाला गया था । सुई बायोप्सी उपकरण मैन्युअल रूप से चीरा साइट में डाला गया था । तुरंत प्रक्रिया के बाद, एक सहायक 20 से 25 मिनट के लिए चीरा साइट पर दबाव लागू करने के लिए रक्तस्तम्भन प्राप्त करने के लिए एक बाँझ तौलिया का उपयोग कर. स्टेनलेस स्टील सर्जिकल स्टेपल त्वचा चीरा का विरोध करने के लिए इस्तेमाल किया गया । प्रधानों को 10 दिन बाद निकाला गया सामा. कोर और सुई बायोप्सी का मुख्य लाभ यह है कि दोनों दृष्टिकोण ंयूनतम इनवेसिव प्रक्रिया है कि सुरक्षित रूप से स्वस्थ गायों में प्रदर्शन किया जा सकता है । बायोप्सी के बाद दूध की पैदावार अप्रभावित रही । इन प्रक्रियाओं एक छोटी वसूली समय की आवश्यकता है और जटिलताओं के कम जोखिम में परिणाम । विशिष्ट सीमाओं बायोप्सी और बायोप्सी साइट पर संक्रमण के बाद खून बह रहा शामिल हो सकते हैं । इन तकनीकों के अनुप्रयोगों में नैदानिक निदान और अनुसंधान प्रयोजनों, जैसे प्राथमिक कोशिका संस्कृति के लिए ऊतक संग्रह शामिल हैं ।

Introduction

एक बायोप्सी चिकित्सा या अनुसंधान प्रयोजनों के लिए विषयों से ऊतक के एक प्रमुख खंड फसल के लिए एक प्रक्रिया है । यह एक ंयूनतम इनवेसिव और व्यापक रूप से इस्तेमाल तकनीक को इच्छामृत्यु के लिए एक विकल्प के रूप में ऊतक इकट्ठा करने के लिए1 उपचार या ब्याज के अंय कारकों के लिए ऊतक प्रतिक्रियाओं के विश्लेषण की अनुमति है । गोजातीय स्तन ग्रंथि के नमूने (MG) ऊतकों को जीन और प्रोटीन अभिव्यक्ति, प्रोटोकॉल, सेलुलर organelles के संगठन का अध्ययन करने के लिए डेयरी अनुसंधान के लिए आवश्यक हैं, मार्ग संकेत, और प्रबंधन में परिवर्तन के जवाब में चयापचय प्रक्रियाओं या वातावरण. इसके अतिरिक्त, इस तरह के जीवाणु संक्रमण2के कारण गोजातीय स्तन के रूप में कुछ संक्रामक रोगों का निदान और अनुसंधान करने के लिए मिलीग्राम ऊतक की जरूरत है ।

मवेशियों के थन में चार पृथक ग्रंथियाँ होती हैं और प्रत्येक ग्रंथी में एक स्वतंत्र दुग्ध स्रावी प्रणाली होती है जिसे सामूहिक रूप से पैरेन्काइमा कहा जाता है. alveoli, नलिकाएं, और संयोजी ऊतक स्तन पैरेन्काइमा में मौजूद हैं । alveoli सूक्ष्म गोलाकार खोखले संरचनाओं कि आंतरिक सतह (चमकीले) और बाहरी सतह (बेसल) पर विशेष myoepithelial कोशिकाओं में उपकला कोशिकाओं से बना रहे हैं । alveoli दूध के संश्लेषण और स्राव के लिए जिंमेदार हैं । पैरेन्काइमा में मौजूद रेशेदार संयोजी ऊतक alveoli के अन्य समूहों से alveoli के एक समूह को अलग कर सकते हैं, और प्रत्येक समूह को छोटि3कहा जाता है । कई कारकों के विकास और पशु फिजियोलॉजी, पोषण, प्रबंधन, आनुवंशिकी सहित एमजी के समारोह को प्रभावित कर सकते हैं, और पर्यावरण4। स्तन भी एक महत्वपूर्ण कारक है कि नकारात्मक एमजी समारोह और दूध गुणवत्ता5को प्रभावित करता है । mastitic रोगजनकों द्वारा जारी विषाक्त पदार्थों alveoli को नुकसान का कारण बन सकता है और जैव रासायनिक और एमजी ऊतक6में ऊतकवैज्ञानिक परिवर्तन में जिसके परिणामस्वरूप परिगलन पैदा करता है । इस प्रकार, मिलीग्राम में प्रत्येक alveoli या छोटि की प्रोटोकॉल और चयापचय की प्रक्रिया दूसरों से काफी अलग हो सकता है । जैसे, बायोप्सी कि पूरे स्तन ग्रंथि के प्रतिनिधि नमूने वांछनीय हैं । छोटे बायोप्सी केवल एक ही छोटि या व्यक्तिगत alveolus, परिणामी वैज्ञानिक या नैदानिक जानकारी सीमित कैप्चर कर सकते हैं । अनुसंधान प्रयोजनों के लिए, यह पता होना आवश्यक है कि एक स्तन बायोप्सी ऊतक विशेषताओं का एक ' स्नैपशॉट ' प्रदान करता है, लेकिन एक बायोप्सी पर्याप्त रूप से कुल स्तन ग्रंथि मास के अनुमान के अभाव में कुल स्तन समारोह की विशेषताएं नहीं कर सकते हैं ।

कई बायोप्सी उपकरण मानव उपयोग के लिए पिछले 30 वर्षों में विकसित किया गया है । वर्तमान में, उन उपकरणों के रूपांतरों जानवरों के साथ प्रयोग के लिए उपलब्ध हैं । दुधारू मवेशियों के लिए, मिलीग्राम ऊतक के नमूनों सर्जिकल उत्पाद (कुंद विच्छेदन)7, बायोप्सी सुई1,8, और कोर बायोप्सी उपकरणों9,10सहित विभिन्न तकनीकों का उपयोग कर प्राप्त किया गया है । इस प्रकार, स्तनपान कराने वाली डेयरी गायों में मिलीग्राम बायोप्सी तकनीक प्रक्रियाओं से संक्रमण का उपयोग कर लेटा हुआ बेहोशी की शल्य चिकित्सा विच्छेदन के साथ १९९२7 में electrocautery रक्तस्तम्भन का उपयोग कोर बायोप्सी के संग्रह के लिए खड़े9, 10,11,12. सर्जिकल बायोप्सी एक इनवेसिव तरीका है, जो महंगा हो सकता है और रक्तगुल्म, घाव समस्याओं, और ट्यूमर13प्रसार के रूप में जटिलताओं की एक उच्च घटना है । वर्तमान में, कोर बायोप्सी और सुई बायोप्सी (एक tru-कट बायोप्सी के रूप में भी जाना जाता है) व्यापक रूप से शल्य चिकित्सा बायोप्सी के लिए विकल्प के रूप में अपनाया गया है । शल्य बायोप्सी की तुलना में कोर और सुई बायोप्सी के लाभ में शामिल हैं: प्रक्रिया न्यूनतम इनवेसिव है; प्रमुख जटिलताओं दुर्लभ हैं; सामान्य संज्ञाहरण की आवश्यकता नहीं है; प्रक्रिया तेजी से relativley है; वसूली समय कम है; वहां ंयूनतम नकारात्मक प्रभाव है पर थन स्वास्थ्य, और केवल अल्पकालिक प्रभाव पर दूध की उपज और संरचना8,9,10; और लागत शल्य बायोप्सी13से कम है ।

एक कोर बायोप्सी प्रक्रिया १९९६ में वर्णित एक बाँझ, एक हटाने योग्य ब्लेड के साथ स्टेनलेस स्टील प्रवेशनी इस्तेमाल सामान्य संज्ञाहरण9,10,11 के बिना गोजातीय मिलीग्राम से ऊतक के एक प्रतिनिधि राशि को दूर करने के लिए ,12. प्रक्रिया के दौरान, साधन एक ताररहित ड्रिल करने के लिए एक कम गति, रोटेशन गति है जो साफ रूप से एक ऊतक कोर में कटौती के रूप में उपकरण ऊतक में उंनत बनाया गया था बनाने के लिए जुड़ा हुआ था । लाभ एक बड़ा ऊतक नमूना था (७० मिमी x 4 व्यास में मिमी, के बारे में ०.७५ के लिए 1 जी) 9. एक ताजा अध्ययन10 से पता चला कि बायोप्सी Farrएट अल द्वारा वर्णित प्रक्रिया । 9 के प्रदर्शन और स्तनपान कराने वाली डेयरी गायों के थन स्वास्थ्य पर नकारात्मक प्रभाव के बिना दोहराया मिलीग्राम ऊतक संग्रह करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । सबसे हाल ही में, एक अध्ययन14 डेयरी गायों में किया गया था एक बड़ा trocar (31 सेमी लंबी, ९.५ mm के बाहरी व्यास, 8 मिमी के भीतरी व्यास) वैक्यूम के साथ एक आंतरिक स्टेनलेस स्टील प्रवेशनी के लिए लागू करने के लिए उपयोग मिलीग्राम की दोहराया बायोप्सी मूल्यांकन करने के लिए बायोप्सी इकट्ठा . इस विधि बेहोश (xylazine) और स्थानीय संज्ञाहरण (2% lidocaine हाइडरोक्लॉराइड) इस्तेमाल किया ।

सुई बायोप्सी स्तन ऊतक इकट्ठा करने के लिए एक और तकनीक है । कई अध्ययनों ने इस तकनीक को अपनाया है । एक अध्ययन1 प्रक्रिया में बेहोशी (detomidine) और स्थानीय संवेदनाहारी (1% lidocaine) का इस्तेमाल किया । बायोप्सी के बाद गायों को नियत्रंण एंटीबायोटिक ट्रीटमेंट मिला । स्तन ग्रंथि मैंयुअल रूप से पहले और दूध देने के बाद मालिश की गई थी । दूध में रक्त बायोप्सी के बाद ८४ ज तक के लिए मनाया गया था । दूध की मात्रा और संरचना थोड़े समय के लिए प्रभावित हुई । हाल ही में, एक अध्ययन एक बायोप्सी सुई का उपयोग करने के लिए दोहराया मिलीग्राम बायोप्सी डेयरी गायों में8. बेहोशी (1% acepromazine, इंट्रामस्क्युलर) और स्थानीय संज्ञाहरण (2% lidocaine हाइडरोक्लॉराइड, चमड़े के नीचे) जानवरों के लिए प्रशासित किया गया । पशुओं intramammary दवाओं या एंटीबायोटिक्स से पहले या प्रक्रिया के बाद प्राप्त नहीं किया था, और शल्य चिकित्सा अवधि के बाद के दौरान बायोप्सी स्थल पर संक्रमण के कोई संकेत नहीं थे । इस अध्ययन में, दोहराया गोजातीय मिलीग्राम बायोप्सी एक सुई का उपयोग दूध उत्पादन और डेयरी गायों के थन स्वास्थ्य पर एक मामूली नकारात्मक प्रभाव पड़ा । सामान्य में, सुई बायोप्सी कोर बायोप्सी साधन से एक कम इनवेसिव विधि होने लगता है । हालांकि, जैसा कि पहले उल्लेख किया है, यह बायोप्सी तकनीक के लिए आवश्यक है के लिए मिलीग्राम ऊतक के एक प्रतिनिधि नमूना फसल । एक सुई बायोप्सी की सीमा गोजातीय मिलीग्राम के ऊतकों की एक छोटी राशि (के बारे में 20 से 25 मिलीग्राम)8,15प्राप्त की है ।

लगभग सभी अध्ययनों से α-2 एगोनिस्ट बेहोशी और स्थानीय संवेदनाहारी8,9,10का एक संयोजन करते थे, चाहे बायोप्सी एक सुई या एक बड़ा कोर के माध्यम से किया गया था । गोजातीय मिलीग्राम में, सबसे तंत्रिका अंत त्वचा के साथ जुड़े रहे हैं । parenchymal ऊतक के लिए इन्नेर्वतिओन काफी हद तक स्पार्स प्रकार एक तंत्रिका तंतुओं के साथ खिंचाव रिसेप्टर्स के माध्यम से है तेज शल्य चिकित्सा दर्द का पता लगाने । एक परिणाम के रूप में, एमजी के सर्जिकल हेरफेर के कारण दर्द के शारीरिक तंत्र त्वचा और चमड़े के नीचे ऊतक के माध्यम से है3 और नहीं गहरे ऊतकों parenchymal ऊतक के रूप में । इसलिए, बायोप्सी प्रक्रियाओं के लिए, यह केवल स्थानीय रूप से त्वचा और चमड़े के नीचे के ऊतकों anesthetize करने के लिए आवश्यक है, के रूप में गहरे ऊतकों में स्थानीय संवेदनाहारी की घुसपैठ शल्य चिकित्सा दर्द को कम नहीं करता है । बायोप्सी क्षेत्र की एक उपयुक्त तैयारी के बाद, पशु असुविधा, मुख्यतः, संयम के साथ जुड़ा हुआ है ।

बड़ा कोर नमूनों का संग्रह रक्तगुल्म गठन में वृद्धि और मिलीग्राम पैरेन्काइमा के भीतर संक्रमण के जोखिम में वृद्धि हो सकती है । इसलिए, पेरि-ऑपरेटिव प्रोटोकॉल अक्सर प्रशासन शामिल है आंत्रेतर एंटीबायोटिक्स7, हालांकि है कि सार्वभौमिक8नहीं है । रक्तस्तम्भन को प्राप्त करना भी गाय की रुग्णता को कम करने के लिए एक महत्वपूर्ण कारक है । aforementioned अध्ययन में एक बड़ी कोर बायोप्सी साधन14का उपयोग करते हुए, मैनुअल दबाव बायोप्सी साइट पर लागू किया गया था और एक गाय ब्रा प्रक्रिया के बाद कम से 2 ज के लिए घावों के लिए बर्फ लागू करने के लिए इस्तेमाल किया गया था । ऊतक काटा की बड़ी राशि के बावजूद, केवल फ़ीड का सेवन और दूध की उपज में मामूली कटौती मनाया गया, और प्रक्रिया गाय के स्वास्थ्य पर नकारात्मक प्रभाव के बिना हर तीन सप्ताह दोहराया गया था ।

डेयरी गायों में एमजी बायोप्सी प्रदर्शन शोधकर्ताओं के परिणामस्वरूप बायोप्सी के नैदानिक या विश्लेषणात्मक गुणवत्ता पर विचार करने की जरूरत, तकनीक की आसानी, और गाय रुग्णता. इन लक्ष्यों को प्राप्त करने के लिए सटीक और पूर्व नियोजित शल्य तकनीक अनिवार्य हैं । तारीख करने के लिए, मिलीग्राम बायोप्सी अध्ययन बायोप्सी परिणामों का वर्णन पर ध्यान केंद्रित किया है, के रूप में बायोप्सी तकनीक का वर्णन करने के लिए विरोध किया, और स्तनपान कराने वाले दुधारू गायों के लिए विवरण प्रतिकृति की अनुमति देने के लिए पर्याप्त विस्तार की कमी है । इस प्रकार, इस काम का उद्देश्य पर्याप्त विस्तार में दोनों सुई बायोप्सी और बड़ा कोर बायोप्सी तकनीक का वर्णन करने के लिए सुरक्षित और पशु की मिलीग्राम बायोप्सी के मानवीय प्रतिकृति अनुमति देने के लिए किया गया था ।

Protocol

सभी वर्णित तरीके वर्जीनिया टेक संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) द्वारा अनुमोदित किया गया ।

1. कार्मिक

  1. शल्य चिकित्सा और गाय से निपटने के अनुभव के साथ कम से कम दो सहायक है ।
  2. सभी सहायकों को प्रशिक्षित करें, यदि संभव हो तो cadaveric सामग्री का उपयोग करते हुए, जीवित पशुओं पर इस प्रोटोकॉल से संबद्ध प्रक्रियाएं निष्पादित करने से पहले, कम से तीन बार ।
    नोट: प्रशिक्षण एक प्रशिक्षक है कि पहले से प्रशिक्षित किया गया है और तकनीक प्रदर्शन द्वारा आयोजित किया जाना चाहिए ।
  3. दवा प्रशासन के लिए हाथ पर एक बड़ी पशु पशुचिकित्सा और घटना है कि आपातकालीन उपचार प्रक्रिया के दौरान आवश्यक हो जाता है में है । आपात स्थिति है कि इस प्रक्रिया के दौरान हो सकता है शामिल हैं, लेकिन करने के लिए सीमित नहीं हैं: नकसीर, α-2 एगोनिस्ट अधिक मात्रा और फेफड़े के शोफ, regurgitation और खाद्य सामग्री, दर्द की आकांक्षा, और रोगी और आगे बेहोशी की आवश्यकता प्रतिरोध ।

2. शल्य चिकित्सा उपकरणों, आपूर्ति, और सुविधा की तैयारी

  1. माल और खरीद सभी उपकरण और आपूर्ति ( सामग्री की तालिकादेखें) ।
  2. स्वच्छ और आटोक्लेव सर्जिकल पर्दे, बायोप्सी उपकरण, स्केलपेल धारकों, शल्य तौलिए, और संदंश ।
  3. गायों को नियंत्रित करने के लिए एक अच्छी तरह से निचोड़ ढलान और सिर के गेट आकार है ।
  4. निचोड़ ढलान के पास एक मेज के साथ एक काम की जगह की स्थापना ।
  5. सुनिश्चित करें कि कार्य क्षेत्र स्वच्छ है और इसके माध्यम से गाय सीमित है-यातायात ।
  6. आसान पहुंच के लिए कार्य स्थान में उपकरण और आपूर्तियां व्यवस्थित करें ।
  7. काम की जगह के अंदर उचित प्रकाश व्यवस्था है ।

3. जानवरों की तैयारी

  1. एक दिन पहले अनुसूचित बायोप्सी, धोने और धोने जानवर, विशेष रूप से थन खाद और मिट्टी की सामग्री को हटाने के लिए ।
  2. मवेशियों के सुरक्षित और मानवीय संयम के लिए प्रक्रियाओं का पालन करें ।
  3. बायोप्सी के अग्रिम में और फिर बायोप्सी के समय, स्वास्थ्य, शारीरिक स्थिति और पशु के व्यवहार का आकलन करें ।
    नोट: एक ंयूनतम परीक्षा प्रस्तावित शल्य चिकित्सा साइट या जीवाणु संक्रमण के अंय क्षेत्रों पर जिल्द की सूजन के लिए तापमान, नाड़ी, और श्वसन दर के रूप में अच्छी तरह से परीक्षा शामिल है । प्रत्येक तिमाही से दूध के नमूने लीजिए और स्तन के लिए जांच करें ।
  4. केवल स्वस्थ गायों का प्रयोग करें ।
  5. गाय को पूरी तरह से दूध ।
  6. निचोड़ ढलान में पशु ले जाएं, आदर्श रूप में दूध देने के 2 ज के भीतर ग्रंथियों में दूध की उपस्थिति को कम करने के लिए ।
  7. सिर का गेट लगाकर पशु को छलनी कर रहे हैं ।

4. Analgesia और बेहोशी

  1. पिछड़े व आगे आंदोलन को रोकने के लिए गाय के सिर पर रस्सी का लगाम लगाएं ।
  2. एक तरफ जानवर के सिर खींचो, और निचोड़ ढलान को रस्सी टाई एक त्वरित रिलीज गाँठ का उपयोग करने के लिए जगह में सिर पकड़ ।
  3. एक ७०% isopropyl शराब झाड़ू के साथ इंजेक्शन के क्षेत्र को साफ और jugular नस 15-20 मिनट के माध्यम से नसों के द्वारा flunixin meglumine (१.१ शरीर के वजन के २.२ मिलीग्राम/
    नोट: कुछ प्रोटोकॉल में, गैर-स्टेरॉयड विरोधी भड़काऊ दवाओं बायोप्सी के बाद प्रशासित रहे हैं अगर विरोधी भड़काऊ दवाओं के अनुसंधान के परिणाम को प्रभावित नहीं करेगा.
    1. jugular नस की स्थिति जानें ।
    2. jugular नाली के आधार पर दबाव के आवेदन द्वारा jugular नस उठाएं ।
    3. सिरिंज में कोई बुलबुले हैं कि यह सुनिश्चित करने के लिए जाँच करें.
    4. उठाया jugular नस में सुई डालें, और दो बार सिरिंज में रक्त की ०.५ मिलीलीटर आकर्षित और सामग्री के साथ मिश्रण. यदि कोई सिरिंज में रक्त दिखाता है, सुई स्थानांतरित । सुई नस में निवासी है, तो सामग्री इंजेक्षन ।
    5. धीरे सुई निकालें ।
    6. रक्तस्राव को रोकने के लिए इंजेक्शन साइट के लिए कोमल दबाव के साथ धुंध लागू करें ।
  4. प्रशासन xylazine हाइडरोक्लॉराइड नसों में (०.०१ से ०.०५ मिलीग्राम/अनुत्रिक पोत में लगभग 5-10 मिनट से पहले बायोप्सी करने के लिए पर्याप्त समय के लिए बेहोशी की स्थापना के लिए अनुमति देते हैं ।
    चेतावनी: फेफड़े के सूजन के लक्षण के लिए पशु की जांच करें । फुफ्फुसीय सूजन के नैदानिक लक्षण श्वसन संकट, गंभीर dyspnea, श्वास कठिनाइयों, खांसी, फेन थूक, और नीली जीभ शामिल हैं । फुफ्फुसीय शोफ के लक्षण मनाया जाता है, तो यह tolazine का उपयोग करने के लिए सिफारिश की है (2 करने के लिए 4 मिलीग्राम/किलोग्राम शरीर के वजन) xylazine प्रभाव रिवर्स करने के लिए ।
    1. पूंछ उठाएं और एक ७०% isopropyl शराब झाड़ू के साथ इंजेक्शन के क्षेत्र को साफ ।
    2. सिरिंज में कोई बुलबुले हैं कि यह सुनिश्चित करने के लिए जाँच करें.
    3. पूंछ पोत में सुई डालें, सिरिंज में रक्त की ०.२ मिलीलीटर ड्रा और सुई सुनिश्चित करने के लिए सामग्री के साथ मिश्रण पोत में निवास है । सुई पोत में निवासी है, तो सिरिंज सामग्री सुई.
    4. धीरे सुई निकालें ।
    5. इंजेक्शन साइट के लिए कोमल दबाव के साथ धुंध लागू करें ।

5. बायोप्सी साइट की तैयारी

  1. एक सहायक प्रक्रिया के लिए पूंछ टाई है ।
  2. थन पर बायोप्सी साइट का चयन करें (आमतौर पर एक ऊपरी क्षेत्र में संयोजी ऊतक के संग्रह को कम करने के लिए और ग्रंथि गड़हे, 1 चित्रामें प्रवेश से बचने के लिए), और चयनित बायोप्सी साइट से किसी भी मिट्टी सामग्री या खाद को हटा दें ।

Figure 1
चित्रा 1 . गोजातीय बायोप्सी साइट illustrating के थन की छवि । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए । 

  1. निरीक्षण और टटोलना विशेष ध्यान के साथ त्वचा के लिए किसी भी बड़े चमड़े के नीचे रक्त वाहिकाओं की पहचान के क्रम में इन जहाजों से बचने के लिए बायोप्सी के दौरान ।
  2. एक 15 सेमी x 15 सेमी क्षेत्र बायोप्सी साइट के आसपास से बाल क्लिप ।
  3. povidone-आयोडीन (०.७५% उपलब्ध आयोडीन) या chlorhexidine gluconate सफ़ाई के साथ बायोप्सी क्षेत्र तैयार करें । ७०% isopropyl शराब के साथ वैकल्पिक सभी दृश्य और अदृश्य मलबे को हटाने के लिए कम से तीन बार । लागू अपूतित सफ़ाई समाधान और एक परिपत्र गति में isopropyl शराब अंदर का उपयोग कर बाहर दृष्टिकोण । सुनिश्चित करें कि एंटीसेप्टिक सफ़ाई समाधान के लिए त्वचा के साथ संपर्क में रहता है कम से कम 5 मिनट ।
  4. एक तितली अर्क का उपयोग एक 18 जी सुई के साथ सेट 2% lidocaine के 6 मिलीलीटर जमा करने के लिए चीरा साइट पर चमड़े के नीचे एक लाइन ब्लॉक बनाने के लिए । गहरे ऊतकों में घुसना नहीं है ।
    नोट: lidocaine की खुराक 3 और 8 मिलीलीटर के बीच भिन्न होता है ।
  5. स्थानीय संवेदनाहारी 3 से 5 मिनट के लिए फैलाना करने के लिए अनुमति दें सफ़ाई समाधान और शराब की एक और पुनरावृत्ति करने से पहले चीरा करने के लिए । प्रतीक्षा करते हुए, बायोप्सी उपकरण तैयार करते हैं ।

6. बायोप्सी प्रक्रिया

  1. अपूतित तकनीक का प्रयोग करें जब बायोप्सी उपकरण हैंडलिंग और चीरा के लिए ।
  2. सभी दृश्यमान संदूषण को हटाने और बाँझ सर्जिकल दस्ताने लागू करने के लिए हाथ धोएं ।
  3. उपयोग के क्रम में एक बाँझ क्षेत्र में शल्य चिकित्सा उपकरणों की व्यवस्था. एक संख्या 10 स्केलपेल, बाँझ धुंध, एक इकट्ठे बायोप्सी साधन, और रक्तस्तम्भन के लिए एक बाँझ तौलिया है ।
    नोट: एक सुई बायोप्सी प्रदर्शन करने के लिए एक कोर बायोप्सी या प्रक्रिया 2 प्रदर्शन करने के लिए प्रक्रिया 1 का पालन करें ।

Figure 2
चित्रा 2 . विधानसभा के योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व और कोर बायोप्सी उपकरण के सेटअप वी. सी. Farr, एट अल द्वारा वर्णित है9 स्केल बार 1 सेमी है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए

  1. कोर बायोप्सी साधन (Farr एट अल.9)
    1. मूल बायोप्सी बाँझ दस्ताने (चित्रा 2) का उपयोग साधन को इकट्ठा ।
      1. एक बाँझ कपड़ा (चित्रा 2a) पर 7 बाँझ टुकड़े प्लेस.
      2. ब्लेड (टुकड़ा 1) डालें 2 टुकड़ा पर डॉकिंग प्रणाली (चित्रा 3 बी ) में ।
        सावधानी: उंगलियों को ब्लेड लाइन में सीधे न रखें ।
      3. 2 टुकड़ा के शीर्ष पर डालें टुकड़ा 3 (चित्रा 2c) सुनिश्चित करना है कि डॉकिंग स्टेशन संरेखित होगा ।
        नोट: 4 टुकड़ा (चित्रा 2d) के इंटीरियर दीवार में एक डॉकिंग प्रणाली का पालन करें ।
      4. 4 टुकड़ा (चित्रा 2d) के डॉकिंग प्रणाली में ब्लेड (टुकड़ा 1) के अंतिम छोर संलग्न ।
      5. पुश आगे टुकड़ा 4 और निरीक्षण अगर 4 टुकड़ा 3 (चित्रा 2E) के बगल में है ।
      6. डिवाइस (ब्लेड + टुकड़ा 2) (चित्रा 2F) पर 5 टुकड़ा डालें ।
      7. सुनिश्चित करें कि डॉकिंग स्टेशन संरेखित है (चित्र 2g) ।
      8. 2 टुकड़ा के शीर्ष में डालें टुकड़ा 6 (ब्लेड के विपरीत पक्ष) (चित्रा 2H)
      9. सुनिश्चित करें कि डॉकिंग स्टेशन संरेखित (चित्रा 2H) है ।
      10. डॉकिंग स्टेशन (चित्रा 2I) में लॉकिंग पेंच (टुकड़ा 7) डालें ।
      11. आगे पुश 3 टुकड़ा (काला) लॉकिंग पेंच को कवर करने के लिए ।
        सावधानी: अंगुलियों को ब्लेड से बाहर निकलने पर न लगाएं ।
      12. आगे 4 टुकड़ा धक्का उपकरण को सक्रिय करने और उपकरण के बाहर ब्लेड निरीक्षण ।
      13. टुकड़ा 4 वापस खींचो उपकरण में ब्लेड मुकर (उपयोग करने के लिए तैयार) ।
        नोट: ब्लेड सक्रिय किया जाना चाहिए जब उपकरण biopsied किया होने के लिए ऊतक के अंदर वांछित दूरी प्रवेश किया है ।
    2. सुनिश्चित करें कि गाय पर्याप्त बेहोश है और बायोप्सी साइट पर्याप्त anesthetized है । त्वचा चुटकी कोई प्रतिक्रिया सुनिश्चित करने के लिए ।
    3. एक संख्या 10 स्केलपेल का उपयोग कर बाहर के लिए समीपस्थ से त्वचा और चमड़े के नीचे के ऊतकों के माध्यम से एक 2 से 3 सेमी ऊर्ध्वाधर चीरा बनाओ ।
    4. बाँझ तकनीक का उपयोग कर एक ताररहित ड्रिल करने के लिए बायोप्सी साधन देते हैं ।
    5. बायोप्सी उपकरण के खिलाफ ड्रिल प्लेस और अगर उपकरण दृढ़ता से ड्रिल करने के लिए संलग्न है की जाँच करें ।
    6. एक व्यक्ति सभी प्रक्रिया के दौरान पूंछ तरक्की होने से पर्याप्त संयम सुनिश्चित करते हैं ।
    7. दक्षिणावर्त रोटेशन और एक कम गति का उपयोग कर ड्रिल पर बारी ।
      नोट: ड्रिल बाँझ नहीं है, और ऑपरेटर बाँझ नहीं रह जब ड्रिल का उपयोग कर ।
    8. जब ड्रिल टोल घूर्णन है पूरे बायोप्सी उपकरण (लगभग ७.५ सेमी) चीरा के माध्यम से थन में अग्रिम ।
    9. ड्रिल बंद करें और मैंयुअल रूप से उपकरण का टुकड़ा 4 का विस्तार ।
    10. दक्षिणावर्त रोटेशन और कम गति का उपयोग कर ड्रिल पर बारी ।
    11. थन से टिश्यू कोर वाले यंत्र को हटा दें ।
    12. एक बाँझ तौलिया का उपयोग कर घाव करने के लिए तुरंत मजबूत दबाव लागू करें 20 मिनट.
      नोट: एक सहायक पर्याप्त दबाव लागू किया जाता है यह सुनिश्चित करने के लिए उनकी मुट्ठी का उपयोग कर इस प्रदर्शन है ।
    13. बायोप्सी उपकरण से ऊतक निकालें चिमटी का उपयोग कर ।
    14. नमूना 1x फॉस्फेट में रखें खारा बफर और ऊतक की राशि का मूल्यांकन ।
    15. गाय की महत्वपूर्ण लक्षण हर 10 मिनट के लिए बायोप्सी के बाद कम से 30 मिनट ले लो ।
    16. बायोप्सी साइट पर दबाव के 20 मिनट के बाद खून बह रहा है के लिए जांच करें । अगर वहां खून की ड्रिप के लिए एक अतिरिक्त 5-10 मिनट के लिए दबाव लागू जारी है ।
    17. बंद सभी रक्तस्राव बंद कर दिया है के बाद 5 मिमी अंतराल पर स्टेनलेस स्टील स्टेपल का उपयोग कर चीरा. 5 और 8 स्टेपल के बीच उपयोग करें ।
    18. बायोप्सी क्षेत्र के लिए एक एयरोसोल पट्टी लागू करें ।
    19. प्रक्रिया के बाद ५० मिनट के लिए पशु का निरीक्षण ।
  2. सुई बायोप्सी साधन
    1. डिवाइस के लिए निर्माता के निर्देशों का पालन करें ।
    2. बाँझ तकनीक का उपयोग कर पैकेज से बायोप्सी सुई निकालें.
    3. किसी भी नुकसान मनाया जाता है तो सुई त्यागें ।
    4. डिवाइस के लिए सुई अनुलग्न करें ।
    5. कवर और मुर्गा डिवाइस बंद करें ।
    6. सुनिश्चित करें कि गाय पर्याप्त बेहोश है और बायोप्सी साइट पर्याप्त anesthetized है । त्वचा चुटकी कोई प्रतिक्रिया सुनिश्चित करने के लिए ।
    7. एक संख्या 10 स्केलपेल का उपयोग कर बाहर के लिए समीपस्थ से त्वचा और चमड़े के नीचे के ऊतकों के माध्यम से एक 1 से 2 सेमी ऊर्ध्वाधर चीरा बनाओ ।
      नोट: बायोप्सी सुई साधन के लिए चीरा कोर बायोप्सी साधन के लिए है कि तुलना में छोटे (1-2 सेमी) हो सकता है ।
    8. चीरा साइट (त्वचा से लगभग 10 से 13 सेमी) में बायोप्सी सुई डालें.
    9. ऊतक इकट्ठा करने के लिए बायोप्सी सुई डिवाइस को सक्रिय करें ।
    10. सुई को थन से निकाल लें ।
    11. एक बाँझ तौलिया का उपयोग कर घाव करने के लिए तत्काल, मजबूत दबाव लागू करें 20 मिनट.
    12. बायोप्सी सुई से ऊतक निकालें चिमटी का उपयोग कर ।
    13. नमूना 1x फॉस्फेट में रखें खारा बफर और ऊतक की राशि का मूल्यांकन ।
    14. महत्वपूर्ण संकेत हर 10 मिनट के लिए बायोप्सी के बाद कम से 30 मिनट ले लो ।
    15. बायोप्सी साइट पर दबाव के 20 मिनट के बाद खून बह रहा है के लिए जांच करें ।
    16. बंद सब खून बह रहा है के बाद स्टेनलेस स्टील स्टेपल का उपयोग कर चीरा ।
    17. बायोप्सी क्षेत्र के लिए एक एयरोसोल पट्टी लागू करें ।
    18. प्रक्रिया के बाद ५० मिनट के लिए पशु का निरीक्षण ।

7. बाद बायोप्सी पशु देखभाल

  1. दस्तावेज़ सभी दवाओं जानवरों के लिए प्रशासित ।
    नोट: दूध प्रक्रिया के बाद ३६ ज की अवधि के दौरान छोड़ दिया गया था; मांस आहरण 4 डी था । दूध और मांस के लिए वापसी की अवधि देश या क्षेत्राधिकार और इस्तेमाल किया दवाओं के आधार पर भिन्न हो सकते हैं । कृपया स्थानीय नियमों और विनियमों की जांच करें ।
  2. बायोप्सी के बाद 7 से 10 डी के लिए दूध में रक्त की उपस्थिति के लिए जांच करें ।
  3. हाथ बाद दूधings पर biopsied किया तिमाही से रक्त के थक्के पट्टी और यह सुनिश्चित करें कि पूरा दूध निकालना होता है ।
    नोट: प्रक्रिया के बाद 1-3 दुहना के लिए biopsied किया तिमाही से रक्त के थक्के की उपस्थिति की उंमीद है । दूध में रक्त की बायोप्सी के बाद 1 से 6 डी के लिए मनाया जा सकता है ।
  4. दूध की उपज का निरीक्षण करें, और यदि संभव हो तो, व्यक्तिगत दैनिक फीड सेवन को सर्जिकल स्टेपल्स को हटा दिया गया है ।
  5. शल्य स्टेपल हटा दिया गया है जब तक शरीर के तापमान, श्वसन और दिल की दर, और आचरण के लिए एक दिन में दो बार पशु की निगरानी ।
  6. बायोप्सी साइट की जांच दो बार सूजन, कोमलता के लिए दैनिक, और जल निकासी के किसी भी संकेत जब तक शल्य स्टेपल हटा दिया गया है । यदि ये मनाया जाता है, एक पशुचिकित्सा परामर्श ।
    नोट: बायोप्सी साइट को साफ रखने और एयरोसोल पट्टी हर एक को तीन दिन के रूप में जरूरत के अनुसार फिर से लागू ।
  7. चीरा साइट से स्टेपल निकालें 10 करने के लिए 14 डी बायोप्सी के बाद, चिकित्सा दर पर निर्भर करता है.
  8. एक पशुचिकित्सा परामर्श अगर स्थानीय या प्रणालीगत संक्रमण के किसी भी लक्षण मनाया जाता है ।

Representative Results

वर्तमान प्रोटोकॉल में, कोर बायोप्सी तकनीक ऊतक नमूने का उत्पादन किया २०० करने के लिए ६०० मिलीग्राम जबकि सुई बायोप्सी के नमूनों का उत्पादन 10 से 30 बायोप्सी प्रति मिलीग्राम. जानवरों की प्रक्रिया के बाद 10 डी के लिए एक दिन में दो बार मनाया गया । कोई जटिलता प्रक्रिया के दौरान या बाद में ऑपरेटिव अवधि के दौरान हुई, सामांय सीमा के भीतर शेष गायों के महत्वपूर्ण मापदंडों के साथ (औसत श्वसन दर = ३१.४ ± ७.०४ (एसडी) प्रति मिनट सांस, औसत दिल दर = ७५.९ ± ८.९ बीट्स प्रति मिनट, और औसत मलाशय के तापमान = ३८.२ ± ०.६८ ° c, चित्रा 3) ।

रक्तस्तम्भन को प्राप्त करने के लिए बायोप्सी क्षेत्र पर मैनुअल दबाव के बाद (के बारे में 25 मिनट), खुले घाव न्यूनतम रक्तस्राव दिखाया (चित्रा 4). गायों को ही डाइट एड libitum खिलाया जाता था, और पोस्ट-ऑपरेटिव अवधि के दौरान पशुओं को समान आवास की सुविधा में रखा जाता था । जानवरों बायोप्सी साइट पर संक्रमण के लक्षण नहीं दिखा था; कोई दर्द नहीं था, खून बह रहा है, सूजन, जल निकासी, या ऊंचा तापमान (चित्रा 5) । घाव बायोप्सी (चित्रा 5C) के 8 से 10 डी के भीतर चंगा ।

एक जानवर छोटे त्वचा की प्रक्रिया के बाद 8 दिन पर रगड़ घाव के कारण जलन विकसित की है । इस गाय povidone-आयोडीन समाधान और ७०% isopropyl शराब का उपयोग कर बायोप्सी साइट सफाई द्वारा इलाज किया गया था । स्टेनलेस स्टील स्टेपल जल निकासी की अनुमति के लिए हटा दिया गया था और povidone आयोडीन मरहम (1%) 2 से 3 डी के लिए बायोप्सी साइट पर एक दिन में दो बार लागू किया गया था । त्वचा जलन povidone-आयोडीन मरहम और कोई आगे की जटिलताओं के साथ चंगा घाव लगाने के बाद 2 डी गायब हो गया ।

मशीन को दूध देने से पूर्व biopsied किया तिमाही से दूध के हाथ से अलग करके खून के थक्के निकाले गए थे । वर्तमान प्रोटोकॉल में, दूध में रक्त के थक्के की उपस्थिति के लिए तीन दूध के लिए मनाया गया था (के बारे में ३६ एच) बायोप्सी के बाद. दूध के रक्त संदूषण को बायोप्सी के बाद ४८ ज तक के लिए मनाया गया । वहां कोई दृश्य अंतर कोर और सुई दूध में रक्त की मात्रा के सापेक्ष बायोप्सी के बीच मनाया गया । जानवरों की प्रक्रिया (चित्रा 6) के बाद दूध की उपज में एक महत्वपूर्ण कमी नहीं दिखा था । औसत दूध संरचना ४.३७% वसा, ३.३४% प्रोटीन, और ४.६४% लैक्टोज था । औसत दूध दैहिक कोशिका गिनती (SCC) २००,००० प्रति मिलीलीटर कोशिकाओं से कम था ।

मिलीग्राम ऊतक प्राप्त प्राथमिक सेल संस्कृतियों (चित्रा 7) के रूप में विभिंन अनुसंधान प्रयोजनों के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है ।

Figure 3
चित्रा 3 . पशु स्वास्थ्य संकेतकों का मूल्यांकन गोजातीय स्तन ग्रंथि बायोप्सी के बाद । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए । 

Figure 4
चित्र 4 . मैनुअल दबाव के बाद बायोप्सी साइट उपस्थिति रक्तस्तम्भन प्राप्त करने के लिए बायोप्सी क्षेत्र के लिए लागू किया गया था कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 5
चित्रा 5 . बायोप्सी साइट फोटोग्राफ्स । (एक) प्रक्रिया के बाद बायोप्सी साइट 3 डी () प्रक्रिया के बाद बायोप्सी साइट 6 डी () बायोप्सी साइट 10 डी समझाने की प्रक्रिया के बाद कि घाव पर्याप्त रूप से चंगा किया गया था । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 6
चित्रा 6 . दैनिक दूध उत्पादन से पहले और गोजातीय स्तन ग्रंथि बायोप्सी के बाद (n = 3 गायों). एक रैखिक मॉडल का अनुमान है कि 10 दिनों की बायोप्सी से पहले जानवरों प्रति दिन २३.३५ किलो दूध का उत्पादन किया. दूध की उपज में काफी परिवर्तन नहीं हुआ (पी > ०.०५) 10 दिनों से पहले 10 दिनों से बायोप्सी के बाद हालांकि दूध की उपज में मामूली वृद्धि मनाया गया था (10 दिन से प्रत्येक दिन के लिए दूध के ०.०००५ किग्रा/डी की वृद्धि बायोप्सी से पहले) । इस प्रोटोकॉल में तीन जानवरों का इस्तेमाल किया गया; एक जानवर दो बार biopsied किया था (पशु 1: थन के बाईं ओर पर कोर बायोप्सी और थन के दाईं ओर सुई बायोप्सी) और दो जानवरों एक बार biopsied किया थे (पशु 2 और 3: केवल थन के दाईं ओर कोर या सुई प्रक्रिया का उपयोग कर) । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 7
चित्र 7 . प्राथमिक गोजातीय स्तन उपकला कोशिकाओं संस्कृति के प्रतिनिधि छवियाँ. स्केल बार १०० µm है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए

Discussion

कोर और सुई बायोप्सी तरीकों इस प्रोटोकॉल9,16में वर्णित किया गया था । पशु स्वास्थ्य और स्तन14 की घटना की एक विस्तृत मूल्यांकन से पहले बायोप्सी दोनों प्रक्रियाओं के लिए आवश्यक है । अनुसंधान प्रयोजनों के लिए, पशुओं में सूजन या संक्रामक रोगों के स्पष्ट संकेत के साथ तकनीक प्रदर्शन से परहेज किया जाना चाहिए । यह जटिलताओं के जोखिम के दौरान और एक बायोप्सी के बाद कम हो जाएगा । सभी बायोप्सी उपकरणों और उपकरणों को साफ किया जाना चाहिए, संक्रमित, और बायोप्सी साइट के संदूषण से बचने के लिए निष्फल । प्रक्रिया से पहले, यह शल्य साइट संक्रमण (लघु उद्योग) को कम करने के लिए आवश्यक है । सामांय में, लघु उद्योग पशु रुग्णता, खोया प्रदर्शन, और डेयरी गायों में अधिक उत्पादन लागत के साथ जुड़ा हुआ है । अध्ययन पहले तरीके चीरा साइट के आसपास बाल कतरन सहित बायोप्सी के कारण लघु उद्योग को रोकने के लिए, बायोप्सी क्षेत्र धोने के लिए प्रदूषित9,14, और एंटीसेप्टिक एजेंटों (७०% शराब, आयोडीन शल्य चिकित्सा का उपयोग कर हटाने की सूचना दी सफ़ाई9, 2% chlorhexidine एसीटेट समाधान14, 10% povidone-आयोडीन8) त्वचा की तैयारी के लिए । कुछ अध्ययनों में, एंटीबायोटिक दवाओं के प्रशासन के दौरान7 या तुरंत बायोप्सी9के बाद अपनाया गया था; हालांकि, एंटीबायोटिक प्रोफिलैक्सिस वर्तमान काम में इस्तेमाल नहीं किया गया था, और बायोप्सी साइट का कोई संक्रमण मनाया गया । बायोप्सी घाव के संक्रमण को रोकने के लिए, पूंछ एयरोसोल पट्टी लागू किया गया है जब तक बायोप्सी साइट के साथ संपर्क को रोकने के लिए सुरक्षित किया जाना चाहिए । इस प्रोटोकॉल में, स्टेपल के बारे में 10 से 14 डी हटा रहे है बायोप्सी के बाद ।

एक कोर बायोप्सी करने से पहले, यह ठीक से उपकरण की स्थापना और यह ड्रिल करने के लिए संलग्न करने के लिए महत्वपूर्ण है; एक धीमी रोटेशन गति चुनें, आगे रोटेशन का चयन करें, और ड्रिल के रिवर्स मोड का उपयोग नहीं करते । प्रक्रिया के दौरान, यह त्वचा किनारों के अलावा रखने के लिए चीरा के दोनों किनारों पर डिजिटल दबाव का उपयोग करने के लिए महत्वपूर्ण है और त्वचा या संयोजी ऊतक से संपर्क के बिना उपकरण प्रविष्टि की अनुमति देने के लिए एक लंबे समय चीरा है । इस प्रक्रिया नहीं किया जाता है, तो कोर बायोप्सी यंत्र के रोटेशन के दौरान चीरा किनारों पर एक खींचें हो सकता है और अतिरिक्त त्वचा ऊतक आघात है जो संक्रमण का खतरा बढ़ जाएगा और घाव भरने में देरी हो सकती है कारण । इस प्रोटोकॉल में वर्णित वर्तमान बायोप्सी प्रक्रियाओं एक बोर्ड द्वारा प्रदर्शन किया गया प्रमाणित बड़े पशु सर्जन. प्रक्रियाओं को सफलतापूर्वक किया गया (चित्रा 5) । दोनों तकनीकों के रूप में शल्य चिकित्सा उत्पाद प्रक्रिया की तुलना में प्रदर्शन करने के लिए अपेक्षाकृत आसान और तेजी से कर रहे हैं ।

बायोप्सी साइट से खून बह रहा है डेयरी में मिलीग्राम बायोप्सी के बाद आम हैं गायों8,9,10,14. वर्तमान प्रोटोकॉल में मनाया खून बह रहा है ंयूनतम (चित्रा 4) है, जो तुरंत प्रक्रिया के बाद घाव पर पर्याप्त (मजबूत) दबाव के आवेदन के कारण हो सकता है । अधिक से अधिक कम 20 मिनट के लिए मजबूत दबाव की आवश्यकता है, और यह कुछ मामलों में अधिक से अधिक 30 मिनट के लिए आवश्यक हो सकता है । अगर गंभीर रक्तस्राव के लिए उदार बायोप्सी साइट के दबाव के आवेदन के बाद मनाया जाता है, यह दबाव जारी रखने के लिए सिफारिश की है, और तुरंत एक पशुचिकित्सा से संपर्क करें ।

के रूप में रक्तस्तम्भन गाय की रुग्णता को कम करने के लिए एक महत्वपूर्ण कारक है, एक अध्ययन बायोप्सी साइट में hemostatic पैड पैक को नियंत्रित करने के लिए9रक्तस्राव । हालांकि, इस तरह के hemostatic पैड का उपयोग डेयरी फार्म पर्यावरण में सूक्ष्मजीवविज्ञानी संदूषण के लिए एक उच्च संभावित जोखिम है । एक अंय अध्ययन14 दोहराया बायोप्सी और बायोप्सी और त्वचा बंद करने के बाद के बीच बायोप्सी साइट के लिए मैनुअल दबाव लागू किया है, और बायोप्सी के बाद कम से कम 2 ज के लिए साइट के लिए बर्फ लागू किया । वर्तमान प्रोटोकॉल में, मजबूत दबाव 20 से 25 मिनट के लिए बायोप्सी साइट पर लागू करने के लिए रक्तस्राव को नियंत्रित करने के लिए पर्याप्त था ।

एक सफल बायोप्सी तकनीक की प्रक्रिया के बाद समय की एक छोटी अवधि के लिए बनी रहती है जो दूध में न्यूनतम रक्त में परिणाम चाहिए । दूध letdown और स्तन संक्रमण के दौरान दूध स्राव के एक रुकावट से बचने के लिए, intramammary रक्त के थक्के biopsied किया तिमाही10,14से हाथ अलग करना द्वारा हटाया जाना चाहिए । वर्तमान प्रोटोकॉल में, रक्त ४८ एच तक दूध में बायोप्सी के बाद मनाया गया था । हालांकि, एक अध्ययन है कि पशुओं की एक बड़ी संख्या में इस्तेमाल किया में, दूध में रक्त कम 6 दिनों के लिए गायों के बहुमत में मनाया गया । कुछ जानवरों ने 6 दिन8के बाद दूध में खून दिखाया । इस कारण के लिए, दूध उपस्थिति के दैनिक अवलोकन प्रक्रिया के बाद 6 डी के लिए आवश्यक है । जानवरों स्तन संक्रमण के किसी भी लक्षण प्रदर्शित नहीं किया था जब एक बड़े ऊतक नमूने14प्राप्त किया गया था । हालांकि, पिछले अनुसंधान जो एक ही जानवर पर दोहराया बायोप्सी प्रदर्शन एक सुई का उपयोग कर पाया कि स्तन संक्रमण घटना लगभग 12% प्रक्रिया8के बाद किया गया । वर्तमान प्रोटोकॉल में, न तो पशु नैदानिक स्तन संक्रमण की प्रक्रिया के बाद दृश्य लक्षण था । वहां भी एक मामूली मौका है कि चीरा साइट बायोप्सी के बाद संक्रमित हो सकता है ।

Tolazoline हाइडरोक्लॉराइड, एक दवा है कि बेहोशी के प्रभाव को रिवर्स, xylazine से अधिक मात्रा की स्थिति में उपलब्ध होना चाहिए । xylazine की एक अत्यधिक खुराक फुफ्फुसीय शोफ का कारण हो सकता है । फुफ्फुसीय सूजन के नैदानिक लक्षण श्वसन संकट, गंभीर dyspnea, श्वास कठिनाइयों, खांसी, और फेन थूक शामिल हैं । फुफ्फुसीय शोफ के लक्षण मनाया जाता है, तो यह tolazine का उपयोग करने के लिए सिफारिश की है (2 करने के लिए 4 मिलीग्राम/किलोग्राम शरीर के वजन) xylazine प्रभाव रिवर्स करने के लिए ।

वर्तमान प्रोटोकॉल तकनीक दोनों एक सुई बायोप्सी और कोर बायोप्सी प्रदर्शन करने के लिए वर्णन करता है । सामांय में, सुई बायोप्सी की तुलना में एक कोर बायोप्सी के लाभ के रूप में बड़ा ऊतक का नमूना है (०.७५ करने के लिए 1 जी)9 थन स्वास्थ्य पर न्यूनतम नकारात्मक प्रभाव के साथ. सुई बायोप्सी कोर बायोप्सी साधन से एक कम इनवेसिव विधि है । हालांकि, एकाधिक बायोप्सी एक सुई बायोप्सी प्रक्रिया का उपयोग कर ऊतक की एक बड़ी राशि प्राप्त करने के लिए प्रयास प्रक्रिया के बाद प्रमुख रक्तस्राव का खतरा बढ़ सकता है, साथ ही दूध में रक्त के थक्के. दोनों तकनीकों ंयूनतम गाय रुग्णता का कारण बना है और आसानी से शल्य चिकित्सा कर्मियों के ंयूनतम प्रशिक्षण के साथ प्राप्त किया गया । दैनिक दूध की उपज में अल्पकालिक परिवर्तन (8 से 10% कमी) और इसकी संरचना9 और आहार का सेवन कमी14 कोर और सुई बायोप्सी, क्रमशः के बाद की उंमीद है । सुई बायोप्सी प्रक्रिया की सीमाएं सुई के साथ हटाया ऊतक की छोटी मात्रा है । साधन की जरूरत है केवल जब सुई ऊतक के भीतर है biopsied किया और कई प्रयास अक्सर ऊतक की पर्याप्त मात्रा में प्राप्त करने के लिए आवश्यक हैं, जो दूध में रक्त का खतरा बढ़ जाता है और प्रक्रिया के बाद स्तन । कोर बायोप्सी की सीमाओं ऊतक की एक बड़ी राशि (> 200 मिलीग्राम) प्राप्त की है, तो प्रक्रिया के बाद खून बह रहा है की एक उच्च जोखिम शामिल हैं । इसके अलावा, बायोप्सी उपकरण का उपयोग करने से पहले पर्याप्त प्रशिक्षण की आवश्यकता को इकट्ठा करने के लिए और अधिक कठिन है ।

Disclosures

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

इस शोध को राष्ट्रीय पशु पोषण कार्यक्रम और वर्जीनिया टेक ने समर्थन दिया था. सुश्री तारा Pilonero, डॉ जूली Settlage की तकनीकी सहायता और डॉ Izabelle Teixeira आभार स्वीकार कर रहे हैं ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
70% Isopropyl alcohol  Walmart  565106257 1 L
Aerosol spray to kill and repel flies MWI 14339 1 bottle (if necessary)
Biopsy needles, 12 G × 16 cm C. R. Bard MN1216 2
Butterfly infusion set (18 G needle) Fisher 22-258087 1
Cell culture dishes Fisher 08-772E 4
Cordless drill (low speed) Hitachi   DS10DFL  1
Core biopsy instrument, Farr et al. (1996) 2, custom metal fabrication. To request the tool contact the authors.
Cows cattle healthy
Flunixin meglumine MWI/VetOne 501018 1.1 to 2.2 mg/kg of body weight
Folding table   Amazon 1
Forceps Fisher 09-753-50 1
Gloves non-sterile  Fisher 17-200-845 9, size dependent
Hard brush  Sullivan Supply 18270 1, to wash the cows
Head gate  1, customized for dairy cows
Lidocaine hydrochloride 2% injectable  MWI/VetOne 510212 6 mL was used,  from 3 to 8 mL
Livestock body wash eZall Technologies 39384 1, to wash the cows
Needle 18 G  (1 to 1/5“) Fisher 14-821-15A 6
Needle 20 G (1 to 1/5“) Fisher 14-815-526 6
Phosphate buffered saline (0.9%) Fisher 20-012-043 1 L
Povidone Iodine ointment Jeffers #VED1A 500 g (if necessary)
Povidone iodine scrub solution (0.75% iodine) MWI/VetOne 510094 1 L
Reusable biopsy instrument  C. R. Bard MG1522 1
Rope halter Nasco farm and ranch C10852 2, cow size
Scalpel blades (#10) MWI 033870 2
Scalpel holders (#3) MWI 602008 1
Self seal autoclave pouch 10 x 5.5 in. Fisher 19-130-0038 1 case of 800
Sterile cotton gauze sponges Fisher 22-037-986 4
Sterile gauze pads Fisher 19-090-735 4
Sterile surgical gloves  Surgical gloves 19-166-679 3,  size dependent
Sterile surgical towels Fisher 50-118-0339 6
Stethoscope Littmann Master Classic II 1392 1
Surgical clipper Oster A5 078005-010-003 1, preparation of the animal for biopsy
Surgical clipper blades (#40 ) Oster  78919-016 1, preparation of the animal for biopsy
Surgical staple remover MWI 541 1
Surgical stapler pre-loaded MWI 17713 5
Syringes of 10 mL Fisher 14-823-224 3
Syringes of 2 mL Fisher 22-028854 3
Syringes of 20 mL Fisher 22-034507 3
Syringes of 5 mL Fisher 22-028855 3
Thermometer Agri-Pro Enterprises Inc 72000 1
Tolazine hydrochloride Akorn Animal Health 61311-486-10 2 to 4 mg/kg of body weight (if necessary)
Tweezer  Fisher 14-955-025 1, for handle the tissue sample
Water hose Miracle-Gro, Walmart 554990501 1, to wash the cows
Water-resistant aerosol bandage (aluminum powder 40 mg) MWI 010728 1 bottle 
Xylazine hydrochloride MWI/VetOne 510650 0.01 to 0.05 mg/kg of body weight

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References

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गोजातीय स्तन ग्रंथि बायोप्सी तकनीक
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Daley, V. L., Dye, C., Bogers, S. H., Akers, R. M., Rodriguez, F. C., Cant, J. P., Doelman, J., Yoder, P., Kumar, K., Webster, D., Hanigan, M. D. Bovine Mammary Gland Biopsy Techniques. J. Vis. Exp. (142), e58602, doi:10.3791/58602 (2018).More

Daley, V. L., Dye, C., Bogers, S. H., Akers, R. M., Rodriguez, F. C., Cant, J. P., Doelman, J., Yoder, P., Kumar, K., Webster, D., Hanigan, M. D. Bovine Mammary Gland Biopsy Techniques. J. Vis. Exp. (142), e58602, doi:10.3791/58602 (2018).

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