Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

Sığır meme bezi biyopsisi teknikleri

doi: 10.3791/58602 Published: December 23, 2018

Summary

Bu makale sığır meme bezi biyopsi çekirdek ve iğne biyopsisi araçlarını kullanarak sunar. Hasat doku hücre kültürü için veya meme fizyolojisi ve metabolizma gen ekspresyonu, protein ifade, protein değişiklikler, immünhistokimya ve metaboliti konsantrasyonları gibi değerlendirmek için kullanılabilir.

Abstract

Sığır meme bezi biyopsi araştırmacılar hücre biyolojisi gen ekspresyonu, yollar ve protein çeviri sinyal histolojik analizi de dahil olmak üzere çalışmaya doku örnekleri toplamak için izin verir. Bu makalede iki Teknik sığır Meme bezinin (MG) biyopsisi için. Üç sağlıklı Holstein süt ineği Konu bulunmuştur. Biyopsi daha önce inek milked ve daha sonra sığır paraşüt içinde kendine hakim olsun. Bir ağrı kesici (flunixin meglumin, 1.1-2.2 mg/kg vücut ağırlığı) yolu ile şah damardan [IV] enjeksiyon 15-20 dk önceden biyopsi yapmak yönetiliyordu. Ayakta sedasyon, xylazine hidroklorür için (0,01-0,05 mg/kg vücut ağırlığı) Koksigeal damarları enjekte 5-10 dk önce yordamı. Bir kez yeterince sakin, biyopsi sitesi aseptik hazırlanan ve yerel olarak %2 lidokain hidroklorür subkutan enjeksiyon yolu ile 6 mL ile anaesthetized. Aseptik teknik kullanılarak, 2-3 cm dikey kesi 10 numara neşter kullanılarak yapıldı. Çekirdek ve iğne biyopsisi araçlar kullanıldı. Çekirdek biyopsi aracı için Akülü matkap bağlı ve MG doku bir saat matkap eylemini kullanarak kesi ile eklenen. İğne biyopsisi Aracı el ile kesi siteye eklenmiştir. İşlemden hemen sonra bir asistan için 20-25 dk hemostaz ulaşmak için steril bir havlu kullanarak kesi sitesinde basınç uygulanır. Paslanmaz çelik cerrahi zımba cilt kesi karşı çıkmak için kullanılmıştır. Zımba kaldırıldı 10 gün sonrası yordamı vardı. Çekirdek ve iğne biyopsileri başlıca avantajları olduğunu her iki yaklaşım sağlıklı inekler güvenli bir şekilde gerçekleştirilebilir minimal invaziv yordamlar vardır. Biyopsiyi izleyen süt verim etkilenmedi. Bu yordamları kısa iyileşme süresi gerektirir ve komplikasyonlar daha az risk neden. Belirli sınırlamalar biyopsi ve biyopsi sitede enfeksiyon sonra kanama içerebilir. Uygulamalar bu tekniklerin klinik tanı ve araştırma amaçlı, birincil hücre kültürü gibi doku koleksiyonu içerir.

Introduction

Biyopsi ana bölümü için tıbbi konular veya araştırma amaçlı doku hasat için bir işlemdir. Doku analizi tedaviye doku tepkilerin veya diğer faktörler ilgi izin vermek için ötenazi1 alternatif olarak toplamak için minimal invaziv ve yaygın olarak kullanılan bir tekniktir. Sığır meme bezi (MG) doku örnekleri gen ve protein ifade, histoloji, hücre organelleri, sinyal yolları ve metabolik süreçleri değişiklikler yönetim organizasyonu çalışmaya süt araştırma için gerekli olan veya çevre. Ayrıca, MG doku sığır mastit bakteriyel enfeksiyonlar2tarafından neden olduğu gibi bazı bulaşıcı hastalıklar araştırma ve teşhis için gereklidir.

Sığır meme dört ayrı bezleri ve her bezi birlikte parankimi olarak adlandırılan bir bağımsız süt salgı sistemi içerir. Alveoller, oluklar ve bağ dokusu meme parankimi mevcuttur. Alveoller (luminal) iç yüzey epitel hücrelerinde oluşan mikroskobik küresel içi boş yapılar ve özel myoepithelial (bazal) dış yüzeyinde hücreleri. Alveoller sentezi ve süt salgılanmasını sorumludur. Fibröz bağ doku parankimi içinde mevcut bir grup alveoller alveoller diğer gruplardan ayırabilirsiniz ve her grup bir kulak3denir. Çeşitli faktörler geliştirme ve hayvan fizyolojisi, beslenme, yönetim, genetik ve çevre4MG işlevini etkiler. Meme iltihabı da MG işlevi ve süt kalitesi5olumsuz etkileyen önemli bir faktördür. Mastitic patojenler tarafından yayımlanan toksinlerin alveoller zarar ve biyokimyasal ve histolojik değişiklikler MG doku6sonuçlanan nekroz neden. Böylece, Histoloji ve metabolik süreçleri her alveoller veya lobül mg diğerlerinden önemli ölçüde farklı olabilir. Bu nedenle, tüm meme bezi temsilcisi örneklerdir biyopsi arzu edilir. Küçük biyopsi yalnızca bir tek kulak veya bireysel yabancılığımız, elde edilen bilimsel veya tanılama bilgileri sınırlama yakalamak. Araştırma amaçlı doku bir 'görüntüsünü' meme biyopsisi sağlar ancak biyopsi yeterince tahminleri toplam Meme bezinin yokluğunda toplam meme işlevi karakterize olamaz unutmayın gereklidir kitle.

İnsan kullanmak için son 30 yılda birkaç biyopsi araçları geliştirilmiştir. Şu anda, bu aletleri adaptasyonu hayvanlar ile kullanılabilir. Süt sığır için MG doku örnekleri cerrahi eksizyon (künt diseksiyon)7, biyopsi iğneleri1,8ve çekirdek biyopsi aletleri9,10da dahil olmak üzere farklı yöntemlerle elde edilmiştir. Böylece, MG biyopsi teknikleri laktasyondaki Süt ineklerin yaslanmış sedasyon cerrahi disseksiyon elektrokoter hemostaz 19927 çekirdek biyopsi ayakta sedasyon9altında toplanması için kullanma ile kullanarak yordamlar gelen geçiş, 10,11,12. Cerrahi biyopsi sorunları hematom gibi komplikasyonlar daha yüksek insidansı olması ve pahalı olması, invaziv bir yöntem, yara ve tümör13yaymak olduğunu. Şu anda, çekirdek biyopsi ve iğne biyopsisi (olarak da bilinen tru-cut biyopsi) yaygın olarak cerrahi biyopsi alternatif olarak benimsenmiştir. Çekirdek ve iğne biyopsileri cerrahi biyopsi yapmak karşılaştırıldığında avantajları şunlardır: yordamı minimal invaziv; büyük komplikasyonlar nadirdir; Genel anestezi gerekli değildir; relativley hızlı bir yöntemdir; Kurtarma süresi kısadır; meme sağlığı üzerinde en az olumsuz etkileri ve sadece kısa vadeli etkileri süt verim ve kompozisyon8,9,10olduğunu; ve maliyeti daha az cerrahi biyopsi13.

1996 yılında açıklanan bir çekirdek biyopsi yordam steril, paslanmaz çelik kanül çıkarılabilir bir geri çekilebilir bıçak ile genel anestezi9,10,11 olmadan sığır MG temsilcisi bir miktar doku kaldırmak için kullanılan ,12. İşlem sırasında araç düşük hız, aracın dokusu içine ilerledikçe hangi temiz bir doku çekirdek kesmek dönme hareketi oluşturmak için Akülü matkap bağlıydı. Büyük bir doku yararı oldu örnek (70 mm x 4 mm çapında, yaklaşık 0,75-1 g) 9. Bir son çalışmada10 gösterdi ki V. C. Farrvd tarafından açıklanan biyopsi prosedürü 9 laktasyondaki süt inekleri performans ve meme sağlığı üzerinde olumsuz etkisi olmadan tekrarlanan MG doku koleksiyonları gerçekleştirmek için kullanılabilir. Son olarak, bir çalışma14 süt inekleri tekrarlanan biyopsileri biyopsi toplamak için bir iç paslanmaz çelik kanül uygulanan vakum ile daha büyük bir trokar (31 cm uzun, dış çapı 9,5 mm, 8 mm iç çap) kullanarak mg değerlendirmek için yapılmıştır . Sedasyon (xylazine) ve lokal anestezi (%2 lidokain hidroklorür) kullanılan bu yöntem.

İğne biyopsisi meme dokusu toplamak için başka bir tekniktir. Çeşitli çalışmalarda bu tekniği benimsemiştir. Bir çalışmada1 sedasyon (detomidine) ve lokal anestezik (%1 lidokain) yordamda kullanılan. Biyopsiyi sonra inekler profilaktik antibiyotik tedavisi aldı. Meme bezi el ile önce ve sağım sonra masaj. Kan sütteki kadar 84 h için biyopsi sonra gözlendi. Miktarı ve süt kompozisyonu kısa bir süre için etkilendi. Son zamanlarda, bir çalışma bir Biyopsi iğnesini tekrarlanan MG biyopsi süt inekleri8' gerçekleştirmek için kullanılır. Sedasyon (%1 acepromazine, kas içi) ve lokal anestezi (%2 lidokain hidroklorür, subkutan) hayvanlar için idare. Hayvanlar İçmamari uyuşturucu veya antibiyotik önce veya sonra yordamı almadı ve ameliyat sonrası dönemde biyopsi yerinde enfeksiyon belirtisi yok edildi. Bu çalışmada, bir iğne kullanarak yinelenen sığır MG biyopsi süt üretim ve meme sağlığı süt inekleri üzerinde küçük bir negatif etkisi olmuştur. Genel olarak, iğne biyopsisi çekirdek biyopsi enstrümanı daha az invaziv bir yöntem gibi görünüyor. Ancak, daha önce belirtildiği gibi bu MG doku temsil edici bir örnek hasat biyopsi tekniği için önemlidir. Sığır MG doku az miktarda (yaklaşık 20-25 mg) elde edilen bir iğne biyopsisi kısıtlamasıdır8,15.

Biyopsi bir iğne veya daha büyük bir çekirdek olup olmadığı hemen hemen tüm çalışmalar α-2 agonist sedasyon ve lokal anestezik8,9,10, bir arada kullanılmış. Sığır MG, en sinir uçlarının cilt ile ilişkilidir. İnnervasyon parenkima dokusu için büyük ölçüde seyrek türüyle streç reseptörleri üzerinden keskin cerrahi ağrı algılamak için bir sinir lifleri gerçekleştirilir. Sonuç olarak, fizyolojik ağrı nedeniyle mg cerrahi işleme mekanizmalarının olduğunu yolu ile deri ve subkutan doku3 ve parenkima dokusu gibi değil derin doku. Lokal anestezik infiltrasyonu içine daha derin dokulara önemli ölçüde cerrahi ağrı azaltmak değildir bu nedenle, biyopsi yordamları için yalnızca yerel olarak deri ve subkutan doku, anestezi için gerekli gibi. Sonra uygun bir hazırlık biyopsi çevrenin hayvan rahatsızlık, öncelikle, kısıtlama ile ilişkili olan.

Koleksiyon daha büyük çekirdek örnekleri hematom oluşumu artırmak ve MG parankimi içinde enfeksiyon riskini artırır. Bu nedenle, bu evrenselleri8olmamasına rağmen peri-operatif iletişim kuralları kez parenteral antibiyotik7, yönetim içerir. Hemostazın ulaşmak da inek morbidite azaltmak için önemli bir faktördür. Söz konusu çalışmada kullanarak büyük çekirdek biyopsi enstrümanı14, el ile basınç biyopsi siteye uygulandı ve inek sütyen buz yaralar için en az 2 h aşağıdaki yordamı uygulamak için kullanıldı. Rağmen hasat doku büyük miktarda, yem alımı ve süt verim sadece hafif düşüşler gözlendi ve yordamı üç haftada inek sağlık üzerinde olumsuz etkileri olmadan tekrarlandı.

Süt inekleri MG biyopsi performans araştırmacılar elde edilen biyopsi tanılama veya analitik kalite, teknik ve inek morbidite kolaylığı dikkate almak gerekir. Doğru ve önceden planlanmış cerrahi teknikleri bu hedeflere ulaşmak için zorunludur. Bugüne kadar MG biyopsi çalışmalar biyopsi tekniği kendisi, açıklayan karşı biyopsi sonuçları açıklayan üzerinde odaklanmıştır ve laktasyondaki süt inekleri için açıklamalar çoğaltmasına izin vermek için yeterli detay eksikliği. Böylece, bu çalışmanın amacı iğne biyopsisi ve daha büyük çekirdek biyopsi teknikleri MG biyopsi sığır güvenli ve insanca çoğaltılması izin vermek için yeterli ayrıntılı olarak açıklamak için oldu.

Protocol

Tüm yöntem tanımlamak Virginia Tech kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC) tarafından kabul edildi.

1. personel

  1. Cerrahi ve inek işleme tecrübesi ile en az iki görevlileri var.
  2. Tüm yardımcılar en az üç kez, mümkünse canlı hayvanlar üzerinde bu iletişim kuralı ile ilgili yordamları gerçekleştirmeden önce kadavra malzeme kullanarak yetiştirmek.
    Not: Eğitim olmuştur bir eğitmen tarafından yapılmalıdır daha önce eğitim almış ve tekniği uygulandı.
  3. Bir büyük hayvan veteriner eldeki ilaç idaresi için var ve olay bu acil tedavi sırasında yordamı gerekli olur. Bu işlem sırasında ortaya çıkabilecek acil durumlar dahil ancak bunlarla sınırlı değildir: kanama, α-2 agonist aşırı doz ve akciğer ödemi, regürjitasyon ve aspirasyon gıda malzemesi, ağrı ve hasta direnç daha fazla sedasyon gerektiren.

2. cerrahi aletler, sarf malzemeleri ve tesis hazırlanması

  1. Stok ve tüm malzeme ve ek malzemeler ( Tablo malzemelerigörmek) satın almak.
  2. Temiz ve basınçlı kap cerrahi perdeler, biyopsi aletleri, neşter sahipleri, cerrahi havlu ve forseps.
  3. Bir uygun ebatlarda sıkmak oluğu ve baş inek tutmaya kapısı var.
  4. Sıkmak oluğu yakınındaki bir tabloyla bir çalışma alanı oluşturun.
  5. Çalışma alanının temiz ve inek aracılığıyla trafik sınırlıdır emin olun.
  6. Malzeme ve ek malzemeler kolay erişim için çalışma alanı içinde düzenleyin.
  7. Doğru aydınlatma içinde çalışma alanı var.

3. hayvanlar hazırlanması

  1. Bir gün önce zamanlanmış biyopsi, yıkama ve hayvan, özellikle meme gübre ve kirli malzeme kaldırmak için fırçalayın.
  2. Güvenli ve insana ilişkin kısıtlama sığır yordamları izleyin.
  3. Biyopsi öncesinde ve tekrar biyopsi esnasında, sağlık, fiziksel durumu ve hayvan davranışını değerlendirmek.
    Not: Sıcaklık, nabız ve solunum oranları gibi sınav dermatit için önerilen cerrahi sitesi veya diğer alanlarda bakteriyel enfeksiyon üzerinde en az bir muayene içerir. Her üç aylık dönem--dan süt örnekler toplamak ve mastit için kontrol edin.
  4. Yalnızca sağlıklı inek kullanın.
  5. Tamamen ineği sağacağım.
  6. Hayvan süt bezleri huzurunda en aza indirmek için sağım 2 h içinde ideal sıkmak oluk içine taşıyın.
  7. Bir kafa kapı hayvanla dizginlemek.

4. analjezi ve sedasyon

  1. Bir ip askılı hareket ileri ve geriye doğru önlemek için inek başına yerleştirin.
  2. Bir yana hayvanın kafanı çıkar ve kafa tutmak için bir hızlı yayın düğüm kullanarak sıkmak oluğu ip bağlamak.
  3. Bir % 70 izopropil alkol bez ile enjeksiyon alanı temizleyin ve flunixin meglumin (1.1-2.2 mg/kg vücut ağırlığı) intravenöz yolu ile belgili tanımlık juguler ven 15-20 dk önce biyopsi yapmak yönetmek..
    Not: anti-inflamatuar ilaçlar araştırma sonuçları etkilemez bazı protokoller, steroid olmayan anti-inflamatuar ilaçlar biyopsiyi sonra uygulanmaktadır.
    1. Juguler ven bulun.
    2. Şah groove temelini baskı uygulama tarafından juguler ven yükseltmek.
    3. Şırıngada hava kabarcığı yok olduğundan emin olmak için denetleyin.
    4. İğne yükseltilmiş juguler ven yerleştirin ve kan 0.5 mL şırınga iki kez çizmek ve içeriği ile karıştırın. Kan yok şırıngada gösteriyorsa, iğne konumlarını değiştirin. İğne damar içinde yerleşik ise, içeriği enjekte et.
    5. Yavaşça iğneyi çıkarın.
    6. Gazlı bez ile hafif basınç kanama önlemek için enjeksiyon siteye uygulanır.
  4. İntravenöz xylazine hidroklorür yönetmek (0.01-0.05 mg/kg vücut ağırlığı) Koksigeal gemi içinde yaklaşık 5-10 dk önce biyopsi sedasyon kurulması için yeterli zaman ayırmak.
    Dikkat: akciğer ödemi belirtileri için hayvan kontrol edin. Akciğer ödemi klinik belirtileri solunum güçlüğü, şiddetli dispne, solunum zorlukları, öksürük, köpüklü balgam ve mavi dil içerir. Akciğer ödemi belirtileri gözlenen, xylazine etkilerini tersine çevirmek için tolazine (2-4 mg/kg vücut ağırlığı) kullanmak için önerilir.
    1. Kuyruk yükseltmek ve % 70 izopropil alkol bez ile enjeksiyon alanı temizleyin.
    2. Şırıngada hava kabarcığı yok olduğundan emin olmak için denetleyin.
    3. İğne kuyruğu damar yerleştirin, 0.2 mL kan şırınga çizmek ve iğne gemi içinde yerleşik olduğundan emin olmak için içeriği ile karıştırın. İğne gemi içinde yerleşik ise, şırınga içeriği enjekte et.
    4. Yavaşça iğneyi çıkarın.
    5. Gazlı bez ile hafif basınç enjeksiyon siteye uygulanır.

5. biyopsi sitesi hazırlanması

  1. Kuyruk yordamlara bağlamak bir yardımcınız olabilir.
  2. (Genellikle bir alanda üst bağ dokusu topluluğu en aza indirmek için ve penetrasyon bezi sarnıca Şekil 1önlemek için) meme biyopsisi sitesinde seçin ve tüm kirli malzeme ve gübre seçili biyopsi sitesinden kaldırın.

Figure 1
Resim 1 . Sığır meme biyopsisi sitesi gösteren görüntü. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız. 

  1. Gözlemlemek ve bu gemiler biyopsi sırasında önlemek için herhangi bir büyük deri altı kan damarları tanımlamak için özel dikkat ile cildi muayene et.
  2. Biyopsi sitesi 15 cm x 15 cm çevresi saç kırpın.
  3. Povidone-iyot (% 0.75 kullanılabilir iyot) veya KLORHEKSİDİN GLUKONAT maki ile biyopsi alan hazırlamak. % 70 izopropil alkol ile en az üç kez tüm görünen ve görünmeyen enkaz kaldırmak için alternatif. Aseptik fırçalayın çözüm ve izopropil alkol Inside-out yaklaşımı kullanarak dairesel bir hareketle geçerlidir. Antiseptik fırçalayın çözüm en az 5 min için cilt ile temasında kalmasını sağlamak.
  4. %2 lidokain hidroklorür 6 mL subkutan bir satır bloğu oluşturmak için kesi sitesinde yatırmak için bir 18 G iğne ile ayarla bir kelebek infüzyon kullanın. Daha derin dokulara nüfuz değil.
    Not: Doz Lidocaine 3 ve 8 mL arasında değişir.
  5. 3-5 dk. gerçekleştirmek için fırçalayın çözüm ve alkol kesi önce başka bir tekrarı diffüz lokal anestezi sağlar. Beklerken, biyopsi aletleri hazırlayın.

6. biyopsi prosedürü

  1. Aseptik teknikler biyopsi araçları işlerken ve belgili tanımlık kesme için kullanın.
  2. Tüm görünür kirlilik ve steril cerrahi eldiven uygulamak için ellerinizi yıkayın.
  3. Cerrahi aletler steril alanda kullanım sırasına göre düzenleyin. 10 numara neşter, steril gazlı bez, birleştirilmiş biyopsi enstrüman ve hemostaz için steril bir havlu var.
    Not: Yordam çekirdek biyopsi gerçekleştirmek için 1 veya yordam iğne biyopsi gerçekleştirmek için 2 uygulayın.

Figure 2
Resim 2 . Derleme ve kurulum, V. C. Farr, et al. tarafından açıklanan çekirdek biyopsi aracın şematik gösterimi 9 ölçek çubuğu 1 cm. olan Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

  1. Çekirdek biyopsi enstrümanı (Farr vd.9)
    1. Steril eldiven (Şekil 2) kullanarak çekirdek biyopsi enstrümanı bir araya getirin.
      1. 7 steril adet steril bir örtüsü (Şekil 2A) yerleştirin.
      2. Blade (parça 1) içine belgili tanımlık rıhtım sistem parça 2 (Şekil 2B ) yerleştirin.
        Dikkat: parmak doğrudan blade satırında koymayın.
      3. Yerleştirme istasyonundaki hizalar sağlanması parça 3 parça 2 (Şekil 2C) üzerine yerleştirin.
        Not: iç duvarında bir rıhtım sistem parça 4 (Şekil 2B) gözlemlemek.
      4. Blade (1 adet), nihai kenarına parça 4 (Şekil 2B) yerleştirme sistemi içine girerler.
      5. Parça 4 ileri itin ve parça 4 parça yanındaki 3 (Şekil 2E) olup olmadığını gözlemlemek.
      6. Parça üstünde belgili tanımlık aygıt (bıçak + parça 2) 5 (Şekil 2F) yerleştirin.
      7. Yerleştirme istasyonundaki hizalanır sağlamak (Şekil 2 g).
      8. Parça 6 parça 2 ekleyebilir (karşı tarafında bıçak) (Şekil 2 H)
      9. Yerleştirme istasyonundaki hizalanır sağlamak (Şekil 2 H).
      10. Kilitleme vidası (7 adet) belgili tanımlık rıhtım istasyon (Şekil 2I) yerleştirin.
      11. Parça kilitleme vidalı kapak-3 (siyah) ileri itin.
        Dikkat: parmak üzerinde bıçak çıkış yeri yok.
      12. Parça 4 ileri iterek aracını etkinleştirmek ve bıçak aracın dışında gözlemlemek.
      13. Parça 4 bıçak (kullanmaya hazır) araca geri çekmek için geri çek.
        Not: yalnızca aracın biyopsi olmak doku içinde istenilen mesafe nüfuz zaman bıçak aktif.
    2. İnek yeterince sakin ve biyopsi site yeterince anestezi emin olun. Derinin herhangi bir tepki emin olmak için çimdik.
    3. 2-3 cm dikey kesi deri ve subkutan doku proksimal için distal 10 numara neşter kullanarak üzerinden üzerinden yapmak.
    4. Biyopsi enstrümanı steril tekniği kullanarak bir Akülü matkap iliştirin.
    5. Biyopsi aracı karşı matkap yerleştirin ve araç için matkap sıkıca bağlı olmadığını kontrol edin.
    6. Yeterli kısıtlama kuyruk tüm işlem sırasında yükseltmek bir birey alarak olun.
    7. Saat yönünde döndür ve düşük hızlı kullanarak matkap açın.
      Not: Matkap steril değildir ve operatör matkap kullanırken steril kalmaz.
    8. Matkap ve ücretli dönen iken tüm biyopsi Aracı (yaklaşık 7.5 cm) içine belgili tanımlık kesme yoluyla meme ilerlemek.
    9. Sondayı devre dışı açın ve el ile parça 4 araç uzatma.
    10. Saat yönünde döndür ve düşük hızlı kullanarak matkap açın.
    11. Meme dokusu çekirdeğinden içeren araç kaldırın.
    12. Güçlü basınç en az 20 dk için steril bir havlu kullanarak yara hemen uygulamak.
      Not: Bu yeterli basınç uygulanır sağlamak için onların yumruk kullanarak gerçekleştirmek bir yardımcınız olabilir.
    13. Doku biyopsisi aracından Cımbız kullanarak kaldırın.
    14. Örnek 1 x fosfat tamponlu tuz tutmak ve doku miktarını değerlendirmek.
    15. Biyopsi için en az 30 dk sonra inek hayati belirtileri her 10 min al.
    16. Biyopsi site üzerinde baskı 20 dk sonra kanama için kontrol edin. Varsa ek bir 5-10 dk için basınç kan damlar sürdürür.
    17. Ne de olsa kanama durdu 5 mm aralıklarla Paslanmaz Çelik zımba kullanarak insizyon kapatın. Arasında 5 ve 8 zımba kullanmam.
    18. Bir sprey sargı bezi biyopsisi alanına uygulamak.
    19. 50 dk için hayvan işlemden sonra gözlemlemek.
  2. İğne biyopsisi enstrüman
    1. Aygıt için üreticinin yönergelerini izleyin.
    2. Biyopsi iğnesini steril teknikleri kullanarak paketini kullanarak kaldırın.
    3. Herhangi bir hasar gözlem yapılırsa iğne atmak.
    4. İğne cihaza takın.
    5. Kapağı kapatın ve aygıtı horoz.
    6. İnek yeterince sakin ve biyopsi site yeterince anestezi emin olun. Derinin herhangi bir tepki emin olmak için çimdik.
    7. 1-2 cm dikey kesi deri ve subkutan doku proksimal için distal 10 numara neşter kullanarak üzerinden üzerinden yapmak.
      Not: Bu çekirdek biyopsi araç için daha küçük (1-2 cm) biyopsisi iğne araç için belgili tanımlık kesme olabilir.
    8. Biyopsi iğnesini kesi sitesi (yaklaşık 10-13 cm cilt) takın.
    9. Doku toplamak için biyopsi iğnesi aygıtı etkinleştirin.
    10. İğne meme kaldırın.
    11. En az 20 dk için steril bir havlu kullanarak yara için anında, güçlü basınç uygulayın.
    12. Doku biyopsisi iğne Cımbız kullanarak kaldırın.
    13. Örnek 1 x fosfat tamponlu tuz tutmak ve doku miktarını değerlendirmek.
    14. Biyopsi için en az 30 dk sonra hayati belirtileri her 10 min al.
    15. Biyopsi site üzerinde baskı 20 dk sonra kanama için kontrol edin.
    16. Ne de olsa kanama durdu Paslanmaz Çelik zımba kullanarak insizyon kapatın.
    17. Bir sprey sargı bezi biyopsisi alanına uygulamak.
    18. 50 dk için hayvan işlemden sonra gözlemlemek.

7. sonrası biyopsi hayvan bakımı

  1. Tüm ilaçların hayvanlar için yönetilen belge.
    Not: Süt işlemden sonra 36 h bir dönemde atıldı; et çekme yapıldı. süt ve et için 4 ö. para çekme dönem ülke veya yargı ve kullanılan ilaçlar göre değişiklik gösterebilir. Yerel kuralları ve düzenlemeleri gözden geçirin.
  2. 7-10 d biyopsi sonra süt kan varlığı için kontrol edin.
  3. Sonraki sağım, biyopsi çeyreğinden şerit kan pıhtıları el ve tam süt sağlamak kaldırma oluşur.
    Not: Aşağıdaki yordamı 1-3 sağım için biyopsi çeyreğinden kan pıhtıları varlığı bekleniyor. Kan süt 1-6 d için biyopsi sonra gözlenen.
  4. Süt verim gözlemlemek ve mümkünse, cerrahi zımba kaldırıncaya kadar bireysel günlük alımı yem.
  5. Cerrahi zımba kaldırıncaya kadar hayvan vücut ısısı, solunum ve kalp hızı ve tavır için günde iki kez izlemek.
  6. Cerrahi zımba kaldırıncaya kadar günde iki kez şişlik, hassasiyet için biyopsi site ve drenaj belirtileri kontrol edin. Bunlar gözlenir, veteriner danışın.
    Not: biyopsi sitesi temiz tutmak ve aerosol bandaj her bir ila üç gün gerektiği gibi yeniden uygulayın.
  7. Zımba kesi alanında 10-14 d bağlı olarak iyileşme oranı biyopsi sonra temizleyin.
  8. Lokal veya sistemik enfeksiyon belirtileri gözlenen bir veteriner danışın.

Representative Results

10-30 mg-de biyopsi örnekleri iğne biyopsisi üretilen mevcut protokolünde, çekirdek biyopsi tekniği doku örneği 200-600 mg üretti. Hayvanlar günde 10 d için işlemden sonra tespit edildi. İşlemi sırasında veya ameliyat sonrası dönemde, normal sınırlar içinde kalan ineklerin hayati parametreleri ile herhangi bir komplikasyon oluştu (ortalama solunum hızı = 31,4 ± 7.04 (SD) min, ortalama kalp hızı başına nefes 75.9 ± 8.9 dövmek-de dakika ve ortalama = Rektal sıcaklık = 38,2 ± 0,68 ° C, Şekil 3).

Hemostaz (yaklaşık 25 dk) elde etmek için biyopsi alan üzerinde el ile basınç en az (Şekil 4) kanama açık yara gösterdi. İnekler ad libitum aynı diyet beslenen edildi ve hayvanlar ameliyat sonrası dönemde aynı konut tesiste tutuldu. Hayvanlar biyopsi yerinde enfeksiyon belirtileri yoktu; hiçbir ağrı, kanama, şişme, drenaj veya yüksek sıcaklık (Şekil 5) yapıldı. Biyopsi (Şekil 5C) içinde 8-10 d yara iyileşti.

Bir hayvan üzerinde gün 8 prosedür sonra sürtünme yaralamaya küçük deri tahrişi nedeniyle geliştirdi. Bu inek povidone-iyot çözüm ve % 70 izopropil alkol kullanarak biyopsi sitesi temizlik tarafından tedavi edildi. Paslanmaz Çelik zımba drenaj izin vermek için kaldırılmıştır ve povidone iyot merhem (% 1) günde 2-3 d için biyopsi sitesinde uygulandı. Cildi tahriş 2 d povidone-iyot merhem uygulandıktan sonra ortadan kayboldu ve başka komplikasyon ile yara iyileşti.

Kan pıhtıları Süt Sağım Makinesi önce biyopsi çeyreğinde sıyırma el tarafından çıkarıldı. Mevcut iletişim kuralında, kan pıhtıları sütteki varlığı en çok üç sağım (yaklaşık 36 h) biyopsi sonra gözlendi. Kan kirlenme süt en fazla 48 saat için biyopsi sonra gözlendi. Çekirdek ve iğne biyopsileri kan sütteki miktarına göre arasında gözlenen hiçbir görsel farklılıklar vardı. Hayvanlar süt verimi önemli bir azalma (Şekil 6) işlemden sonra belli etmedi. Ortalama süt kompozisyon %4.37 yağ, %3,34 protein ve %4,64 laktoz oldu. Ortalama süt somatik hücre sayısı (SCC) mL başına daha az 200.000 hücre yapıldı.

Elde edilen MG doku birincil hücre kültürleri (Şekil 7) gibi farklı araştırma amacıyla kullanılabilir.

Figure 3
Şekil 3 . Hayvan sağlık göstergelerinin değerlendirilmesi sığır meme bezi biyopsisi sonra. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız. 

Figure 4
Şekil 4 . Biyopsi site görünümü sonra . el ile basınç hemostaz elde etmek için biyopsi bölgesine uygulanır Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 5
Şekil 5 . Biyopsi sitesi fotoğraf. (A)biyopsi prosedürü. sonra 3 d site (B) biyopsi prosedürü. sonra 6 d site (C) biyopsi yara yeterince iyileşmiş olarak gösteren işlemden sonra 10 d site. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 6
Şekil 6 . Günlük süt üretim öncesi ve sonrası sığır meme bezi biyopsisi (n = 3 inek). Bir doğrusal model 10 gün önce biyopsi hayvanlar 23.35 kg süt günlük üretilen tahmin. Süt verimi önemli ölçüde değişmedi (P > 0,05) biyopsi sonra 10 gün önce 10 gün hafif bir artış olmasına rağmen süt verim gözlenmiştir (0.0005 kg/d süt her gün 10 gün önce biyopsi için artış). Üç hayvan bu protokol için kullanılmıştır; bir hayvan biyopsi iki kez (hayvan 1: biyopsi meme sol tarafındaki çekirdek ve iğne biyopsisi meme sağ tarafında) ve iki hayvan biyopsi bir kez (hayvan 2 ve 3: yalnızca çekirdek veya iğne yordamı kullanarak meme sağ tarafta). Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 7
Şekil 7 . Birincil sığır meme epitel hücre kültürünün temsilcisi görüntüler. Ölçek çubuğu var. 100 µm Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Discussion

Çekirdek ve iğne biyopsi yöntemleri bu protokolü9,16' tarif edildi. Hayvan sağlığı ve mastit14 önce biyopsi insidansı ayrıntılı bir değerlendirme her iki yordamlar için gereklidir. Araştırma amaçlı izi iltihap veya enfeksiyon hastalıkları ile hayvanlarda teknik gerçekleştirme kaçınılmalıdır. Bu ve biyopsi sonrası komplikasyon riski azaltır. Tüm biyopsi ve aygıtlar temiz, dezenfekte ve sterilize biyopsi sitesinin kirlenmesini önlemek için olmalıdır. Önce prosedür, cerrahi sitesi enfeksiyonlar (SSI) en aza indirmek gereklidir. Genel olarak, SSI hayvan morbidite, kayıp performans ve yüksek üretim maliyetleri içinde süt inekleri ile ilişkilidir. Çalışmalar daha önce yöntemleri nedeniyle saç kirlenme9,14kaldırmak için biyopsi alan yıkama ve antiseptik ajanlar (% 70 alkol, iyot cerrahi kullanarak kesi site kırpma da dahil olmak üzere biyopsi SSI önlemek için rapor ameliyata9, %2 KLORHEKSİDİN asetat çözüm14, % 10 povidone-iyot8) cilt hazırlık için. Bazı çalışmalarda, yönetim antibiyotik7 sırasında veya hemen sonra biyopsi9kabul edilmiştir; Ancak, antibiyotik profilaksi mevcut çalışmalarında kullanılan değildi ve hiçbir enfeksiyonlar biyopsi sitesinin gözlendi. Yara biyopsi kontaminasyonu önlemek için kuyruk aerosol bandaj uygulanan kadar biyopsi sitesi ile temas önlemek için güvenliği sağlanmalıdır. Bu protokol için zımba yaklaşık 10-14 d biyopsiyi sonra kaldırılır.

Çekirdek biyopsi öncesinde, düzgün kadar araç seti ve detaya gitmeyi eklemek önemlidir; yavaş dönme hızı seçin, ileri döndürme seçin ve matkap ters modunu kullanmayın. İşlem sırasında cilt kenarları ayrı tutmak ve deri ya da bağ dokusu ile bağlantı kurmadan aracı giriş izin vermek için yeterince uzun bir kesi belgili tanımlık kesme her iki tarafında dijital baskı kullanmak önemlidir. Bu yordamı yapılmazsa bir sürükle kesi kenarları çekirdek biyopsi enstrümanı dönüşü sırasında oluşur ve enfeksiyon riski artacak ve yara iyilesmesinde gecikme olabilir ek cilt doku travması neden. Bu protokol için açıklanan mevcut biyopsi işlemler onay belgeli yapay organ büyük hayvan cerrah tarafından gerçekleştirilmiştir. Yordamları başarılı bir şekilde gerçekleştirilmiştir (Şekil 5). Her iki tekniğin de nispeten kolay ve hızlı olarak karşılaştırıldığında cerrahi eksizyon yordamı gerçekleştirmek için.

Biyopsi sitesinden kanama ortak süt inekleri8,9,10,14MG biyopsi sonra. Mevcut protokolünde gözlenen kanama oldu en az (Şekil 4), hangi-ebilmek var olmak yeterli (güçlü) yaraya uygulama hemen sonra prosedür nedeniyle. En az 20 dk için yoğun baskı gerekir ve bazı durumlarda daha--dan 30 dk için gerekli olabilir. Orta şiddetli kanama için biyopsi sitesine baskı uygulamadan sonra gözlem yapılırsa, bu baskı devam etmek ve hemen bir veteriner iletişim için tavsiye edilir.

Hemostazın inek morbidite azaltmak için önemli bir faktör olduğu gibi bir çalışmada9kanama kontrolü biyopsi siteye kan durdurucu sargı yastıkları paketlenmiş. Ancak, böyle bir şekilde kan durdurucu sargı yastıkları kullanımı süt grubu ortamında Mikrobiyolojik kontaminasyon için yüksek potansiyel risk vardır. Başka bir çalışmada14 arasında yinelenen biyopsi ve biyopsi ve cilt kapatma sonra biyopsi sitesine el ile basınç uygulanır ve en az 2 h biyopsiyi izleyen sitesine buz uygulanır. Mevcut iletişim kuralında, 20-25 dk için biyopsi sitesine uygulanan güçlü basınç kanamayı kontrol edecek kadar yeterli.

Başarılı biyopsi tekniği en az kan prosedürü sonra kısa bir süre için devam ederse süt sonuçlanmalıdır. Süt salgı süt hayal kırıklığı ve mastit enfeksiyonları sırasında bir kesinti önlemek için İçmamari kan pıhtıları biyopsi çeyrek10,14sıyırma el tarafından kaldırılması gerekir. Mevcut protokolünde kan 48 s kadar süt biyopsiyi sonra gözlendi. Ancak, hayvanlar daha çok sayıda kullanılan bir çalışmada, kan süt inekleri çoğunda 6 günden az gözlendi. Az hayvan kan içinde süt 6 gün8' den sonra gösterdi. Bu nedenle, günlük süt görünüm gözlenmesi işlemden sonra 6 d için gereklidir. Hayvanlar büyük doku örneği14elde edildi zaman mastit enfeksiyon belirtisi sergi değil. Ancak, tekrarlanan biyopsisi iğne kullanarak aynı hayvan üzerinde gerçekleştirilen önceki araştırma o mastit enfeksiyon görülme oranı yaklaşık % 128yordamı takip bulundu. Mevcut iletişim kuralında, ne hayvan klinik mastit enfeksiyon sonra yordam görsel işaretler vardı. Ayrıca hafif bir şey kesi sitesi biyopsiyi sonra enfekte olma şansı.

Tolazoline hidroklorid, sedasyon, etkilerini tersine çevirir bir uyuşturucu aşırı dozdan xylazine durumunda bulunması gerekir. Xylazine aşırı doz akciğer ödemi neden olabilir. Akciğer ödemi klinik belirtileri solunum güçlüğü, şiddetli dispne, solunum zorlukları, öksürük ve köpüklü balgam içerir. Akciğer ödemi belirtileri gözlenen, xylazine etkilerini tersine çevirmek için tolazine (2-4 mg/kg vücut ağırlığı) kullanmak için önerilir.

Mevcut iletişim kuralı bir iğne biyopsisi ve çekirdek biyopsi gerçekleştirmek için teknik anlatılmaktadır. Genel olarak, çekirdek biyopsi iğne biyopsisi ile karşılaştırıldığında daha büyük doku örneği (0.75-1 g)9 meme sağlığı üzerinde en az olumsuz etkisi ile avantajdır. İğne biyopsisi çekirdek biyopsi enstrümanı daha az invaziv bir yöntemdir. Ancak, birden çok biyopsisi iğne biyopsisi yordamı yordam yanı sıra kan pıhtıları sütteki sonra büyük kanama riskini artırabilir doku kullanarak daha büyük bir miktar almak çalışır. Her iki teknikleri ve en az inek morbidite neden kolayca cerrahi personel en az eğitim ile elde edildi. Günlük süt verimi (% 8-10 azalış) ve kompozisyon9 ve yem alımını azaltma14 kısa vadeli bir değişiklik çekirdek ve iğne biyopsileri sonra sırasıyla bekleniyor. İğne biyopsisi yordamı iğneyle kaldırıldı doku küçük hacimli sınırlamalardır. Araç sadece iğne biyopsi olmak doku içinde ve birden çok deneme kez işlemden sonra süt ve mastit kan riskini artırır doku yeterli miktarda elde etmek gerekli olduğunda etkinleştirilmesi gerekir. Çekirdek biyopsi sınırlamaları dahil işlem sonrası kanama doku büyük miktarda varsa, daha yüksek bir risk (> 200 mg) elde edilir. Buna ek olarak, biyopsi aracı kullanmadan önce yeterli eğitim gerektiren bir araya daha zordur.

Disclosures

Yazarlar ifşa gerek yok.

Acknowledgments

Bu araştırma ulusal hayvan beslenme programı ve Virginia Tech tarafından desteklenmiştir. Bayan Tara Pilonero, Dr. Julie Settlage ve Dr. Izabelle Teixeira teknik yardımı minnetle kabul vardır.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
70% Isopropyl alcohol  Walmart  565106257 1 L
Aerosol spray to kill and repel flies MWI 14339 1 bottle (if necessary)
Biopsy needles, 12 G × 16 cm C. R. Bard MN1216 2
Butterfly infusion set (18 G needle) Fisher 22-258087 1
Cell culture dishes Fisher 08-772E 4
Cordless drill (low speed) Hitachi   DS10DFL  1
Core biopsy instrument, Farr et al. (1996) 2, custom metal fabrication. To request the tool contact the authors.
Cows cattle healthy
Flunixin meglumine MWI/VetOne 501018 1.1 to 2.2 mg/kg of body weight
Folding table   Amazon 1
Forceps Fisher 09-753-50 1
Gloves non-sterile  Fisher 17-200-845 9, size dependent
Hard brush  Sullivan Supply 18270 1, to wash the cows
Head gate  1, customized for dairy cows
Lidocaine hydrochloride 2% injectable  MWI/VetOne 510212 6 mL was used,  from 3 to 8 mL
Livestock body wash eZall Technologies 39384 1, to wash the cows
Needle 18 G  (1 to 1/5“) Fisher 14-821-15A 6
Needle 20 G (1 to 1/5“) Fisher 14-815-526 6
Phosphate buffered saline (0.9%) Fisher 20-012-043 1 L
Povidone Iodine ointment Jeffers #VED1A 500 g (if necessary)
Povidone iodine scrub solution (0.75% iodine) MWI/VetOne 510094 1 L
Reusable biopsy instrument  C. R. Bard MG1522 1
Rope halter Nasco farm and ranch C10852 2, cow size
Scalpel blades (#10) MWI 033870 2
Scalpel holders (#3) MWI 602008 1
Self seal autoclave pouch 10 x 5.5 in. Fisher 19-130-0038 1 case of 800
Sterile cotton gauze sponges Fisher 22-037-986 4
Sterile gauze pads Fisher 19-090-735 4
Sterile surgical gloves  Surgical gloves 19-166-679 3,  size dependent
Sterile surgical towels Fisher 50-118-0339 6
Stethoscope Littmann Master Classic II 1392 1
Surgical clipper Oster A5 078005-010-003 1, preparation of the animal for biopsy
Surgical clipper blades (#40 ) Oster  78919-016 1, preparation of the animal for biopsy
Surgical staple remover MWI 541 1
Surgical stapler pre-loaded MWI 17713 5
Syringes of 10 mL Fisher 14-823-224 3
Syringes of 2 mL Fisher 22-028854 3
Syringes of 20 mL Fisher 22-034507 3
Syringes of 5 mL Fisher 22-028855 3
Thermometer Agri-Pro Enterprises Inc 72000 1
Tolazine hydrochloride Akorn Animal Health 61311-486-10 2 to 4 mg/kg of body weight (if necessary)
Tweezer  Fisher 14-955-025 1, for handle the tissue sample
Water hose Miracle-Gro, Walmart 554990501 1, to wash the cows
Water-resistant aerosol bandage (aluminum powder 40 mg) MWI 010728 1 bottle 
Xylazine hydrochloride MWI/VetOne 510650 0.01 to 0.05 mg/kg of body weight

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Khatun, M., Sorensen, P., Ingvartsen, K. L., Bjerring, M., Rontved, C. M. Effects of combined liver and udder biopsying on the acute phase response of dairy cows with experimentally induced E. coli mastitis. Animal. 7, (10), 1721-1730 (2013).
  2. Buitenhuis, B., Rontved, C. M., Edwards, S. M., Ingvartsen, K. L., Sorensen, P. In depth analysis of genes and pathways of the mammary gland involved in the pathogenesis of bovine Escherichia coli-mastitis. BMC Genomics. 12, 130 (2011).
  3. Nickerson, S. C., Akers, R. M. Mammary Gland | Anatomy. Fuquay JW, Fox PF and McSweeney PLH (eds.), Encyclopedia of Dairy Sciences, Second Edition. 3, Academic Press. San Diego. 328-337 (2011).
  4. Akers, R. M. A 100-Year Review: Mammary development and lactation. Journal of Dairy Science. 100, (12), 10332-10352 (2017).
  5. Ruegg, P. L. A 100-Year Review: Mastitis detection, management, and prevention1. Journal of Dairy Science. 100, (12), 10381-10397 (2017).
  6. Zhao, X., Lacasse, P. Mammary tissue damage during bovine mastitis: Causes and control. Journal of Animal Science. 86, (13), 57-65 (2008).
  7. Knight, C. H., Hillerton, J. E., Teverson, R. M., Winter, A. Biopsy of the bovine mammary gland. British Veterinary Journal. 148, (2), 129-132 (1992).
  8. Lima, J. A., et al. Effects of bovine mammary gland biopsy and increased milking frequency on post-procedure udder health, histology, and milk yield. Animal. 10, (5), 838-846 (2016).
  9. Farr, V. C., et al. An improved method for the routine biopsy of bovine mammary tissue. Journal of Dairy Science. 79, (4), 543-549 (1996).
  10. Weng, X., et al. Short communication: Repeated mammary tissue collections during lactation do not alter subsequent milk yield or composition. Journal of Dairy Science. 100, (10), 8422-8425 (2017).
  11. Peterson, D. G., Matitashvili, E. A., Bauman, D. E. Diet-induced milk fat depression in dairy cows results in increased trans-10, cis-12 CLA in milk fat and coordinate suppression of mRNA abundance for mammary enzymes involved in milk fat synthesis. Journal of Nutrition. 133, (10), 3098-3102 (2003).
  12. Baumgard, L. H., Matitashvili, E., Corl, B. A., Dwyer, D. A., Bauman, D. E. trans-10, cis-12 conjugated linoleic acid decreases lipogenic rates and expression of genes involved in milk lipid synthesis in dairy cows. Journal of Dairy Science. 85, (9), 2155-2163 (2002).
  13. Kasraeian, S., Allison, D. C., Ahlmann, E. R., Fedenko, A. N., Menendez, L. R. A comparison of fine-needle aspiration, core biopsy, and surgical biopsy in the diagnosis of extremity soft tissue masses. Clinical Orthopaedics and Related Research. 468, (11), 2992-3002 (2010).
  14. de Lima, L. S., et al. A new technique for repeated biopsies of the mammary gland in dairy cows allotted to Latin-square design studies. Canadian Journal of Veterinary Research-Revue Canadienne De Recherche Veterinaire. 80, (3), 225-229 (2016).
  15. Ollier, S., et al. Whole intact rapeseeds or sunflower oil in high-forage or high-concentrate diets affects milk yield, milk composition, and mammary gene expression profile in goats. Journal of Dairy Science. 92, (11), 5544-5560 (2009).
  16. Soberon, F., et al. Effects of increased milking frequency on metabolism and mammary cell proliferation in Holstein dairy cows. Journal of Dairy Science. 93, (2), 565-573 (2010).
Sığır meme bezi biyopsisi teknikleri
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Daley, V. L., Dye, C., Bogers, S. H., Akers, R. M., Rodriguez, F. C., Cant, J. P., Doelman, J., Yoder, P., Kumar, K., Webster, D., Hanigan, M. D. Bovine Mammary Gland Biopsy Techniques. J. Vis. Exp. (142), e58602, doi:10.3791/58602 (2018).More

Daley, V. L., Dye, C., Bogers, S. H., Akers, R. M., Rodriguez, F. C., Cant, J. P., Doelman, J., Yoder, P., Kumar, K., Webster, D., Hanigan, M. D. Bovine Mammary Gland Biopsy Techniques. J. Vis. Exp. (142), e58602, doi:10.3791/58602 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter