Summary
Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll zur Brustkrebs-Zellen in der Mamma Fettpolster in einer einfachen, weniger invasiv und einfach zu handhabende Möglichkeit, einzupflanzen und dieses orthotopen Brust Krebs Mausmodell mit einer richtigen Mamma Fettlappen Umgebung kann verwendet werden, um verschiedene Aspekte zu untersuchen Krebs.
Abstract
Eine ordnungsgemäße Tiermodell ist entscheidend für ein besseres Verständnis der Krankheiten. Animal Modelle hergestellt durch verschiedene Methoden (subkutane Injektionen, Xenotransplantate, Genmanipulation, chemische Reagenzien Induktion, etc.) haben verschiedene pathologische Charaktere und spielen eine wichtige Rolle bei der Untersuchung bestimmte Aspekte der Krankheiten. Obwohl kein einheitliches Modell der ganzen menschlichen Krankheitsverlauf völlig nachahmen kann, spielen orthotopen Organe Krankheitsmodelle mit geeigneten Stromazellen Rahmenbedingungen eine unersetzliche Rolle bei Krankheiten zu verstehen und mögliche Drogen-screening. In diesem Artikel beschreiben wir, wie zu implantieren Brustkrebszellen in Mamma Fettpolster in einer einfachen, weniger invasiv und einfach zu handhabende Weg und folgen der Metastasierung zu entfernten Organen. Mit den richtigen Funktionen Primärtumor Wachstum, Brust und Brustwarze pathologischen Veränderungen, und ein hohes Auftreten von anderen Organen Metastasen ahmt dieses Modell maximumly menschlichen Brust Krebs fortschreiten. Primärtumor Wachstum in Situ, lang-Fernmetastasen und der Tumor Mikroumgebung von Brustkrebs können durch die Verwendung dieses Modells untersucht werden.
Introduction
Brustkrebs ist die häufigste Ursache für weibliche Sterblichkeit weltweit. Mit seiner progressiv steigender Inzidenz ist Brustkrebs eine ernste Herausforderung für die öffentliche Gesundheit1geworden. Murine Krebs Modelle sind gute Brücken zwischen präklinischen und klinischen Studien, und eine gute mimische murinen Krankheitsmodell erhöhen die Genauigkeit der Forschung zur Krankheit und Medizin.
Primärtumor Wachstum beginnt den Fortschritt der malignen Erkrankungen, Metastasen und Komplikationen die Hauptursachen des Todes und der Armen Lebensqualitäten in den meisten Krebspatienten sind. Mehrere murinen Modelle werden verwendet, um die Pathologie der menschlichen Brust Krebs2,3,4zu imitieren. Xenograft-Modelle sind für Krebs-Studie, die pathologischen Zeichen zu verstehen und zu Bildschirm Drogen für die Sicherheit und Wirksamkeit5,6,7verbreitet. Gentechnisch veränderte Mäuse (GEM) werden generiert, um menschlichen Brustkrebs zu imitieren, indem Sie auf bestimmte Onkogene oder Tumor-Suppressor-Gene-8. GEM haben einen relativ einfachen und uniformierten Hintergrund zu verstehen, die Rolle der Gene Krebs Fortschritte; künstlichen Umwelt und Hintergrund sind jedoch begrenzt, die Metastasen Pathologie zu untersuchen und verwandte Therapien9. Menschlichen Krebszellen, wobei menschliche pathologische Züge können nur implantiert werden in immundefiziente Mäuse, und die Unzulänglichkeit der Tumor-Host immun Interaktion zu verzerrten Ergebnissen10führen kann.
Wo die soliden Tumoren initiiert hat einen direkten Einfluss auf die biologische und pathologischen Zeichen der Krankheit11,12,13. Da Krebs Fortschritte der komplizierten Interaktionen zwischen Tumorzellen, stromale Zellen, Zellen der Immunologie, Entzündungszellen, Wachstumsfaktoren und Proteasen ergibt sich, Primärtumoren implantiert in Situ besseren Einblick und imitieren die kanzerösen Prozess Zellen genauer als Tumoren induziert durch chemische Mittel oder eine subkutane Injektion des Tumors. Chemische Mittel verwendet, um Tumore zu induzieren, Forscher und Umwelt schädlich sein können und sind in einigen Ländern sogar verboten. Wegen des Fehlens einer Mamma Fettlappen Umgebung kann der pathologische Fortschritt eine subkutane Injektion mit unterscheiden sich in echten Brustkrebs-Patientinnen, deren Krebs stammt und von der Mamma Fettlappen reizt. Die Nachteile des subkutanen Injektionen Heranziehung die orthotopen Modelle Tumorwachstum zu studieren. In früheren Untersuchungen angegeben hoch metastatische Tumoren der MDA-MB-231, entwickelt nach sieben orthotopen Transplantationen, die Bedeutung der Injektion Lage14. Vor kurzem war die orthotopen Implantation von Brustkrebs-Zellen in der Mamma Fettpolster mit Chirurgie gemeldeten15,16. Mit der Mamma Pad-Umwelt, das Tumorwachstum und die Migration in entfernte Organe decken den gesamten Prozess von Brustkrebs bei pathologisch relevanten Websites wodurch dieses Modell eine Miniatur des Fortschritts der menschlichen Krankheiten. Allerdings versucht die Haut nach der Operation automatisch zur Selbstheilung, die bringen des potenziellen Risikos einer Störung der normalen Brust-Krebs-Entstehung und die Ergebnisse beeinflussen können.
Wir haben einige Brust-Krebs-Modelle verglichen und gründete eine minimalinvasive orthotopen Modell zur Untersuchung der Auswirkungen der Medikamente auf Brust Krebs Fortschreiten17,18. In dieser Studie ein video Protokoll zum Orthotopically injizieren Brustkrebs-Zellen in der Mamma Fettpolster in einer einfachen, weniger invasive Weise präsentiert. Diese orthotopen Injektion Methode ohne Operation ist in vielerlei Hinsicht vorteilhaft. Zuerst, die Bedienung ist einfach und schnell, ca. 1 Minute pro Maus. Zweitens mit Primärtumor Herde direkt pathologischen Websites ab, es deckt den ganzen tumorigenic Prozess der Brust Tumorprogression aus dem Wachstum des Tumors in anderen Organen Metastasen, bietet eine gute experimentellen Tiermodell für das Studium der Zusammenspiel von Tumorzellen und Tumor Mikroumgebung. Es kann außerdem ein wertvolles Modell, die Behandlungseffekte in allen Stadien von Brustkrebs zu schätzen. Das Ziel dieser Methode ist zu einem Tiermodell zu maximumly mimischen menschlichen Brust Krebs fortschreiten.
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Protocol
Tierversuche wurden im Einklang mit der Bereitstellung und allgemeine Empfehlung der chinesischen experimentelle Tier Verwaltung Gesetzgebung und durch die Einrichtung von Animal Care und Nutzung Ausschuss der Hauptstadt Medical University angenommen wurden (Ref keine. AEEI-2014-052). Weibliche Balb/c Mäusen im Alter von 6 bis 8 Wochen dienten.
1. Vorbereitung der Zellen und Tieren
- Rasieren Sie einen Tag vor der Operation die Haare rund um die vierte Brustwarzen, im OP-Bereich verfügbar zu machen.
- Verwenden Sie eine Hand, halten Sie die Maustaste fest auf der Rückseite um sicherzustellen, dass die Maus nicht frei bewegen, drehen Sie die Maus, um seinen Bauch an den Betreiber zu entlarven, und verwenden Sie dann eine andere Hand, um das Fell um die vierte Brustwarzen mit einem elektronischen Rasierer zu rasieren.
- Legte eine dünne Schicht der Haarentfernung Creme um die Brustwarzen für 30-60 s, entfernen Sie die Creme mit destilliertem Wasser und trocknen Sie die Maus mit weichem Papier.
- Am Tag der Operation sammeln Sie murinen Brustkrebszellen (4T1-luc2) zu, zählen Sie, Zelle, und passen Sie die Zelldichte, 2 x 105 Zellen/mL in Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung (PBS) in sterilen Mikrozentrifugenröhrchen und halten sie auf dem Eis. Für jede Maus ist 1 x 104 Zellen/50 µL in einer 1-mL-Spritze bereit.
(2) orthotopen Injektion
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Betäubung von Mäusen
- Anästhesie zu induzieren. Setzen Sie die Mäuse in einem geschlossenen transparenten Behälter und schalten Sie 2 % Isofluran Gas um die Mäuse für ca. 5 min zu betäuben, bis sie alle hinlegen und fallen schlafend.
- Pflegen Sie Anästhesie. Übertragen Sie die Mäuse aus dem Behälter auf individuelle Anästhesie-Masken, einige Vet-Salbe auf ihre Augen zu Trockenheit zu vermeiden, halten die Mäuse supinely mit ihren Nippel an den Betreiber ausgesetzt, und lassen weiterhin Isofluran Gas einatmen, für ein paar Minuten, bis die Injektion durchgeführt worden.
- Bestätigen Sie den Erfolg der Anästhesie durch den Mangel an einer Zehe Prise Rückzug Reflex.
- Gelten Sie ophthalmologischen Salbe für die Augen der Mäuse, Augentrockenheit zu verhindern.
Hinweis: Je nach Größe des Containers und die Anzahl der einzelnen Anästhesie-Masken zur Verfügung, eine Gruppe von Mäusen kann zusammen betäubt und eins nach dem anderen in einzelnen Betäubung eingespritzt.
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Leistung der Injektion
- Verwenden Sie Zelt die Haut mit einer Hand um die vierte Brustwarze mit einer Pinzette, zum Einrichten eines erhobenen "Tunnels" für die Spritze zu folgen. Verwendung der anderen Hand halten Sie die Spritze mit der Nadel nach oben gedreht, geben Sie die Haut subkutan bei 5-10 mm aus Brustwarze; dann folgen Sie den "Tunnel", bis die Nadelspitze in der Nähe der Brustwarze kommt, ziehen Sie vorsichtig die Nadel Tipp oben in der Mamma Fettlappen, bis das Nadelöhr kommt unter der Brustwarze-Spitze, verwerfen die Pinzette und die Zellen langsam zu injizieren.
- Die Nadel ein wenig umdrehen und die Spritze langsam zurückziehen; Drücken Sie die Nadel gewickelt für 10-20 s, um sicherzustellen, gibt es keine Flüssigkeit sickern mit einem Wattestäbchen.
- Die vierte Brustwarze bestätigen eine erfolgreiche Injektion zu beobachten: eine weiße transparente flache Kugel mit der Brustwarze als Zentrum beobachtet werden (Abbildung 1).
- Halten Sie die Mäuse betäubt für eine weitere Minute zu vermeiden, dass die Mäuse zu erholen und zu schnell zu bewegen, die wird dazu führen, dass der Spritze aufgezogen, um zu öffnen und die Tumorzellen zu entweichen.
3. Analyse der Tumorwachstum und Metastasierung
Hinweis: Primärtumoren sind transparent oder Blister-wie Beulen nach Injektionen sowie als Kugel oder Ellipsoid feste Klumpen mit der Brustwarze ein paar Tage später identifiziert. Tumorwachstum wird vom Tumorvolumen und Tumor Biolumineszenz ausgewertet.
- Um das Tumorvolumen zu etablieren, halten Sie die Maus mit einer Hand. Setzen Sie ihren Bauch an den Betreiber und verwenden Sie der anderen Seite, um den Tumor Länge (L) und Breite (W) caliper. Das Tumorvolumen (V) wie folgt zu berechnen.
V = (L x W2) / 2 - Um den Tumor Biolumineszenz zu erfassen, zu injizieren 150 mg/kg D-Luciferin auf der Rückseite der Maus Hals, 10 min vor der Bildgebung. Betäuben Sie die Mäuse mit 2 % Isofluran Gas für 5 min zu und übertragen Sie sie auf einzelnen Anästhesie-Masken zu Isofluran Gas für 5 min länger inhalieren lassen. Nach den Anweisungen des Herstellers die Aufnahmen Sie Biolumineszenz der Primärtumor und Metastasen, mit Auto-Belichtungs-Dauer, mittlere binning und f/Stop am 1.
4. Ernte der Primärtumor und Metastasen Organe für die Analyse
Hinweis: Wenn den Zweck dieses Experiment, oder erreichen die humaneren Endpunkt zu erreichen, kann der Primärtumor für weitere Studie geerntet werden. In dieser Studie werden Tumoren bei 4 bis 5 Wochen nach der Injektion entfernt, wenn das Tumorvolumen ca. 800 mm3erreicht. Die Lungen sind in Woche 8 entfernt.
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Ernte des Primärtumors
- Führen Sie die Operation in einem sterilen Abzug eine sterile Atmosphäre beibehalten. Die Tiere von Isofluran zu betäuben. Bestätigen Sie den Erfolg der Anästhesie durch den Mangel an Zehe Prise Rückzug Reflexe. Gelten Sie ophthalmologischen Salbe für die Augen der Mäuse, damit sie nicht austrocknen.
- Distanzieren Sie den Tumor von der Haut mit Schere, tropfenweise Schmerzmittel (1 mg/mL Tramadol, 1 Tropfen etwa 50 µL pro Maus), um postoperative Schmerzen zu lindern.
- Nähen Sie die Haut mit einer chirurgischen Naht zu, schneiden Sie überschüssiges Naht, aus der Schnitt drapieren.
- Halbierung der Primärtumor mit einem Skalpell, 1/2 des Tumors in 4 % Paraformaldehyd für weitere Hämatoxylin und Eosin (H & E) Färbung und Immunohistochemistry genommen und sofort Einfrieren der anderen 1/2 mit flüssigem Stickstoff für das westliche Beflecken oder einer RNA Isolierung-Studie später.
- Nach nähen, wärmen die Mäuse mit einer Lampe, bis sie sich erholen, halten Sie die Mäuse in einzelne Käfige bis vollständig erholt. Verwalten Sie kontinuierlich 10 mg/kg Tramadol mit einer oralen Magensonde für 3-d nach der Operation.
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Ernte der Metastasierung Organe
- Einschläfern Sie die Mäuse mit einer Überdosis von Pentobarbital, öffnen Sie ihre Brust mit einer Schere vorsichtig herausnehmen Sie der Lunge und mit PBS waschen. Lungenkrebs Metastasen Brennpunkte können identifiziert werden, wie weiß transparent Beulen, die morphologisch unterschiedlich und von normalen rosa Lungengewebe zu unterscheiden sind.
- Legen Sie die Lungen in 4 % Paraformaldehyd, die Metastase durch H & E Färbung zu überzeugen.
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Representative Results
Nach einer erfolgreichen Injektion, eine weiße transparente flache Kugel mit der Brustwarze als die out-Oberfläche hindurch Zentrum beobachtet werden (Abbildung 1). Wachstum des primären Tumors kann gemessen werden Tumorvolumen und lebendigen Tumor Zelle Biolumineszenz (Abbildung 2). Das Tumorvolumen und den Gesamtfluss erhöht während des Experiments vor Resektion. In einem frühen Stadium kann nicht Metastasen gefunden werden, weil keine sekundären Tumor geschehen ist oder die starke Biolumineszenz Signale des primären Tumors die Erkennung von kleinen Metastasen Brennpunkte mit schwachen Signalen behindern. Nach der Resektion kann die biolumineszente Signal aus der metastatischen Herde von entfernten Organen erkannt und analysiert werden. Die Morphologie der primären Brusttumor und die Lunge Abschnitte wurden mit H & E Färbung, studiert, während Angiogenese untersucht wurde, durch Färbung des Tumors mit Schiff Marker CD31 für kapilläre Dichte (MVD) (Abbildung 3).
Abbildung 1: Bilder vor und nach der orthotopen Injektion bei Mamma Fettpolster des weiblichen Mäusen Balb/c. Der Vorgang wurde ausgeführt, und die Bilder wurden während der Mäuse Isoflurane Narkose waren. A, vor der Injektion, B, nach der Injektion.
Abbildung 2: Volumen und Gesamtfluss des Primärtumors ab 7 Tage nach der Implantation gemessen wurden. Die Zelle Aussetzung Implantation erzeugt eine erhöhte Primärtumor, sowohl im Volumen, das wurde visualisiert und anhand Bremssättel, Gesamtfluss, die durch das Spektrum-System gemessen wurde. Die Abbildung zeigt die Biolumineszenz Bilder von Primärtumoren und Metastasen zu verschiedenen Zeitpunkten nach der 7. Tag der Implantation beobachtet. p/s = Photonen pro Sekunde. Diese Zahl wurde von Zhang Et Al. modifiziert 17. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 3: H & E Färbung und immunhistochemische Färbung Analyse von Primärtumoren und Metastasen Lunge. Gewebe wurden in 4 % Paraformaldehyd fixiert, in Paraffin eingebettet und gebeizt. (A und B) Abschnitte wurden gefärbt mit Hämatoxylin und Eosin (H & E). (C und D) Abschnitte waren voller Flecken mit antiCD31 Antikörper. Bräunliche Färbung CD31 + Schiffe angegeben. Seitenteile A und C vorhanden primäre Tumorgewebe präsentieren Platten B und D Lunge Metastasen. CD = Cluster der Differenzierung. Die Vergrößerung verwendet = 200 X. Die Maßstabsleiste = 50 µm. Diese Zahl wurde von Zhang Et Al. modifiziert 17. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
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Discussion
In dieser Studie verwendeten Zellen sind 4T1-luc2, murine Triple-negativem Brustkrebs-Zellen mit Luciferase zu beschriften, sind ein nützliches Werkzeug für die Investierung Antitumor- und antimetastatic Wirkungen von Medikamenten aufgrund ihrer sehr invasive Natur2,19 . Luciferases, stabil, um die nächste Zellgeneration werden verwendet, um den lebenden Tumor zeigen Zellen, sowohl bei der Brustdrüse und bei anderen entfernten Organen20. In einigen Fällen steht Hypoxie und Nährstoffmangel in der Tumor-Ergebnis zu einem Rückgang der Biolumineszenz-Signal und die Lautstärke des primären Tumors nicht im Widerspruch mit der Biolumineszenz Signal zu einem späteren Zeitpunkt der Tumorprogression. Die Technik der zellulären orthotopen Injektion (COI) von Zellsuspensionen kann auch mit anderen Brustkrebszelllinien, wie menschliche Zellen MDA-MB-231 (unveröffentlichte Daten) durchgeführt werden. In dieser Studie mit der Brustdrüse als seine Umgebung, ist es eine richtige Tiermodell Tumor Mikroumgebung, studieren Kreuzung zwischen Tumorzellen und Stromazellen Zellen sprechen. Verlauf der Tumor bei einigen Mäusen kann die Brustwarze eitern, Schorf, rote Granulationsgewebe wachsen, glätten oder sogar verschwinden, ähnlich wie was im menschlichen Brustwarzen während Brustkrebs passiert. Mäuse können Beschwerden im Zusammenhang mit Ulzerationen auftreten; humane darauf sollte geachtet werden. Weitere Nippel Änderung wurde bei Mäusen mit dieser COI-Technik als mit der Mikro-invasive Operationstechnik gefunden. Die chirurgische orthotopen Implantation (SOI) histologisch intakten menschlichen Tumorgewebe, verglichen mit der zellulären orthotopen Injektion (COI) von Zellsuspensionen, zufolge höheren malignen Tumoren in der Blase, Lunge, Magen, Niere und Dickdarm21 imitieren Sie das gesehene Patienten22.
Mit einer hohen Inzidenz von Metastasen, vor allem Lunge Metastasen der murinen Brust Krebs gegründet in dieser Studie ist ein gute Phänomen Krebs Modell zur Erkundung der spontane Migration und Invasion, im Vergleich mit einem künstlichen Metastasen-Modell, wie z. B. eine Tail Vene Injektion. Der Tumor Zellaktivitäten und Zeichen auch eine wichtige Rolle in Metastasen. Anderen Zelllinien, haben wie Muttermilch Krebszelle MCF-7, sogar von einer orthotopen Injektion bei Mamma Fettpolster immundefiziente Balb/c Mäuse implantiert eine niedrigere metastasierendem Fähigkeit. Mit der Änderung von Zellen oder Mäuse, wie die Überexpression oder Down-Ausdruck eines bestimmten Gens kann diese Technologie in weitere Forschungsbereiche angewendet werden.
Diese Injektion verfährt entscheidend zu der Spitze der Nadel aus in der Mamma Fettlappen subkutane vorsichtig und langsam bewegen. Wenn die Spitze der Spritze in der Nähe der Brustwarze kommt, fühlen sich die Betreiber drängen aus dem Gewebe. Da die Maus Drüse sehr klein ist, braucht man nur ein wenig mehr Druck, die Spritze Spitze drängen durchlaufen zu lassen. Zuviel Druck führt die Spitze der Drüse auf der Durchreise und die Haut, die Ergebnisse in ein Versagen der Injektion zu brechen. Logarithmisch-Phase Zellen, eine einzellige Aussetzung der Standardbetrieb Protokoll (SOP) und qualifiziertes Personal sind alle verpflichtet, die Unterschiede zwischen den Mäusen zu reduzieren. Tumor Zelle Verhalten ist wichtig für die Bildung und die wiederholbare Tumormodellen. Logarithmischen Phase Zellen zu ernten, wenn sie zu etwa 80 % - 90 % wachsen Zusammenfluss; zu niedrigen oder zu hohen Zelldichten werden das Tumor-Modell stören und führen zu Abweichungen zwischen Experimente. Die einzelligen Aussetzung ist auch wichtig, da Zellen führen zu Fehleinschätzungen der Zellenzahl Klumpen. Trypsin, eine EDTA-Lösung oder andere geeigneten Methoden werden ausgewählt, um die Zellen nach dem Experiment Zielsetzungen zu lösen und die Ziele des Forschers interessiert. Abhängig von der Spritze Skala und Zelle Dichte, könnte das Injektionsvolumen von 25 bis 100 µL variieren. Der Betrag von 1 x 104 bis 1 x 106 Zellen wird häufig verwendet, um Tumorwachstum nach verschiedenen Zelltypen zu reizen. Trypan blau Färbung wird verwendet, um lebensfähige Zellen von Toten zu unterscheiden. Mehr als 95 % Zellviabilität gilt als eine gute Lage, eine schnelle Tumor Wachstum und Metastasierung in Vivozu induzieren. Diese eignen sich auch für alle anderen Modelle der Tumor bei der Vorbereitung von Tumorzellen. Um richtig caliper Primärtumor Größe und eine genaue Biolumineszenz Signal zu bekommen, sollte das Fell um die Brustwarze wieder entfernt werden, sobald es wieder wächst. Wenn der Primärtumor zu einer großen Masse wächst und seine biolumineszente Signal zu stark für Forscher ist, andere Organ Metastasen (z. B.Lunge Metastasen) zu beobachten, bedecken Sie es mit schwarzem Isolierband bevor Biolumineszenz Bilder stammen, oder entfernen Sie sie durch Chirurgie. Schmerzmittel kann Schmerzen nach der Operation zur Verfügung.
Erfolgreiche Impfung kann dazu führen, dass Lungenkrebs Metastasen: mit einer Häufigkeit von mehr als 90 % metastatischen Herde nicht injiziert Brüste, Knochen oder Lymphknoten sind durchaus üblich, während Zöliakie Metastasierung selten ist. Die sekundäre Tumoren sind eine durchscheinende Masse und von den umliegenden normalen Gewebe unterschieden werden können. Eine ungenaue Anwendung der Injektion kann zu experimentellen Fehler im Tumor Größe und Form und Metastasierung Standorten führen. Eine Leckage aus dem flachen Bereich nach die Injektion wird die Größe des Tumors reduzieren, eine Leckage aus der Brustdrüse in den "Tunnel" einen langen zylindrischen Tumor führt die Bestimmung der das Tumorvolumen behindern, wenn wir eine digitale Bremssattel zu verwenden Messen sie. Subkutane Injektionen um die Mamma Fettlappen selten zu Lungenkrebs Metastasen führen und eignen sich nicht für entfernte Metastasen-assoziierten Studie. Um die Impfung stabil und reduzieren das Risiko von Leckagen, kann Matrigel verwendet werden, wenn Tumorzellen angehalten. Jedoch Matrigel ist kein einziges Lösungsmittel, es gilt als eine Art der extrazellulären Matrix (ECM) und einige Arten von Gel enthalten auch Faktoren, die die Experimente stören können. Im Experiment zur Tumor Mikroumgebung, ECM, überqueren im Gespräch zwischen Tumorzellen oder mit Stromazellen Zellen, es ist besser zu vermeiden, mit Matrigel. Für injizierte Zellen mit der Luciferase D-Luciferin markierst, wird das Substrat der Luciferase eingespritzt, um die lebenden zu binden Tumorzellen bei Mäusen. In dieser Studie, die Dynamik der Biolumineszenz in Vivo vorgeschlagen, dass 10 Minuten nach der Injektion von D-Luciferin biolumineszente Signal den Gipfel zu erreichen und kann stabil für ca. 10-15 Minuten (variierend zwischen verschiedenen Mäusen), ob mit einer intraperitoneale Injektion oder eine subkutane Injektion. Wenn man bedenkt, dass das getestete Medikament, das Zusammenspiel von das getestete Medikament mit D-Luciferin zu vermeiden und reduzieren Sie die peritoneale Reizung, intraperitoneal, eingespritzt wird, wird eine subkutane Injektion empfohlen.
Zusammenfassend ist die orthotopen Injektion von Brustkrebszellen, die in diesem Dokument beschriebenen ein sehr nützliches und mächtiges Werkzeug in die Pathologie und Progression von Brustkrebs zu studieren. Es ist leicht zu handhaben und können schnell durchgeführt werden. Der Primärtumor entsteht an der Brustdrüse mit ein hohes Auftreten von Metastasen, die maximumly den pathophysiologischen Prozess der menschlichen Brust Karzinom imitiert.
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Disclosures
Die Autoren haben nichts preisgeben.
Acknowledgments
Die Autoren möchte der National Natural Science Foundation of China (Grant Nr. 81873111, 81673924, 81774039, 81503517), der Beijing Natural Science Foundation (Grant Nr. 7172095, 7162084, 7162083), und Xu Xia Stiftung des Beijing Hospital of Traditionelle chinesische Medizin (gewähren, Nein, xx201701). Wir danken Prof. Chang-Zhen Liu, Experimental Research Center, China Academy of Chinese Medical Sciences für Biolumineszenz Bilder.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| anesthesia machine | Midmark Corporation, Dayton, OH, USA | Matrx VMS | anesthesia |
| In-Vivo Imaging System | PerkinElmer | IVIS Spectrum | used for bioluminescence detecion |
| isoflurane | Hebei yipin chemical reagents company | O21400 | anesthesia |
| 1 ml syringe | Becton,Dickinson and Company | A257 | cell injection |
| digital caliper | Shang Hai Shen Han Measuring Tools Co., Ltd. | S-H | volume measurement |
| tramadol | Mundipharma company | - | pain killer |
| D-luciferin | Gold Biotechnology Inc. | LUCK-1G | used for bioluminescence detecion |
| The primary antibody against cluster of differentiation (CD) 31 | Abcam | ab28364 | used for MVD detection |
| hematoxylin and eosin staining kit | Beijing Zhong Shan Jinqiao Biotechnology Co., Ltd. | ZLI-9615 | histology |
| hair removal cream | Veet | - | hair removal cream |
| Carbomer Eye Gel | Dr.GerhardMannChem-Pharm.FabrikGmbH | - | ophthalmic ointment |
| sewing needle | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd. | 17U0302J | suture |
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