Summary
Her presenterer vi en protokoll for implantatet brystkreft celler i mammary fett blokken i en enkel, mindre invasiv og lett å håndtere veien, og denne musen orthotopic bryst kreft modellen med et riktig mammary fett pad miljø kan brukes til å undersøke ulike sider ved kreft.
Abstract
En riktig dyr modell er avgjørende for en bedre forståelse av sykdommer. Dyr modeller av forskjellige metoder (subcutaneous injeksjoner, xenografts, genetisk manipulasjon, kjemiske reagenser induksjon, etc.) har ulike patologisk tegn og spille viktige roller i å undersøke bestemte aspekter ved sykdommer. Selv om ingen enkelt modell kan helt etterligne hele menneskelig sykdomsprogresjon, spiller orthotopic organer sykdom modeller med en riktig stromal miljø en uerstattelige rolle i å forstå sykdommer og screening for potensielle narkotika. I denne artikkelen beskriver vi hvordan å implantatet brystkreft celler i mammary fett blokken i en enkel, mindre invasiv og lett å håndtere måte, og følger metastasering til fjerne organer. Med riktig funksjonene i primære tumor vekst, bryst og brystvorte patologiske forandringer, og en høy forekomst av andre organer metastasering etterligner denne modellen maximumly menneskelig bryst kreft progresjon. Primære svulst vekst i situ, lang-Fjern metastasering og svulst microenvironment av brystkreft kan undersøkes ved hjelp av denne modellen.
Introduction
Brystkreft er den ledende årsaken til kvinnelige dødelighet over hele verden. Med sin stadig økende forekomst, har brystkreft blitt en alvorlig utfordring til folkehelsen1. Murine kreft modeller er god broer mellom prekliniske og kliniske studier, og en god etterligne murine sykdom modell vil øke nøyaktigheten av sykdom og medisin.
Primære tumorveksten starter fremdriften for ondartet sykdom, metastasering og komplikasjoner er de viktigste årsakene til død og dårlig livet kvaliteter i de fleste kreftpasienter. Flere murine modeller brukes til å etterligne patologi menneskelig bryst kreft2,3,4. Xenograft modeller er mye brukt for kreft studier å forstå patologisk tegnene og skjermen narkotika for sikkerhet og effekt5,6,7. Genmodifiserte mus (GEM) genereres for å etterligne menneskelige brystkreft ved å målrette bestemte oncogenes eller tumor suppressor gener8. GEM har en relativt enkel og uniformerte bakgrunn for å forstå rollen av gener kreft pågår; men kunstig miljø og bakgrunn er begrenset å undersøke metastasering patologi og relaterte terapier9. Menneskelige kreftceller, men med menneskelige patologisk funksjoner, kan bare bli implantert i immun mangelfull mus, og insuffisiens av svulst vert immun samspillet kan føre til forutinntatte resultater10.
Hvor solid svulst starter har en direkte påvirkning på biologiske og patologiske tegn sykdom11,12,13. Siden kreft fremgangen er komplisert utfallet av interaksjon mellom kreftceller, stromal celler, immunologi celler, inflammatoriske celler, vekstfaktorer og proteaser, primære svulster implantert i situ vil gi bedre innsikt og etterligne det prosess kreft celler mer nøyaktig enn svulster av kjemiske stoffer eller en injeksjon av tumor. Kjemiske stoffer brukt for å indusere svulster kan være skadelig for forskere og miljø og er også forbudt i noen land. På grunn av fravær av et mammary fett pad miljø, kan patologisk fremdriften en injeksjon variere med ekte brystkreftpasienter med kreft stammer og irriterer fra mammary fett pad. Ulempene ved subcutaneous injeksjoner anbefaler bruk av orthotopic modeller å studere tumor vekst. I tidligere forskning indikerte svært metastatisk MDA-MB-231 svulster, utviklet etter syv orthotopic transplantasjoner, betydningen av injeksjon sted14. Nylig var orthotopic implantering av brystkreft celler inn i mammary fett pute med kirurgi rapporterte15,16. Mammary pad miljøet, tumor vekst og migrering i fjerne organer dekker hele prosessen av brystkreft på pathologically relevante nettsteder, som gjør denne modellen en miniatyr av utviklingen av menneskelige sykdommer. Imidlertid etter kirurgi forsøk huden automatisk på å helbrede seg selv, som kan ta den potensielle risikoen for forstyrrer vanlig bryst kreft opprinnelse og kan påvirke resultatene.
Vi har sammenlignet noen bryst kreft modeller og etablert en minimal invasiv orthotopic modell for å undersøke den potensielle effekten av legemidler på bryst kreft progresjon17,18. I denne studien, en video protokollen om hvordan du orthotopically injisere brystkreft celler i mammary fett blokken i en enkel, mindre invasiv måte er presentert. Denne orthotopic injeksjon metoden uten kirurgi er fordelaktig på mange måter. Først er operasjonen enkel og rask, ca 1 minutt per musen. Andre med primære svulst fokus fra webområdene rett patologisk, den dekker hele tumorigenic prosessen av bryst kreft progresjon fra tumor vekst til andre organer metastasering, som gir en god eksperimentelle dyr modell for å studere den samspillet av kreftceller og svulst microenvironment. Dessuten, det kan være en verdifull modell å anslå behandling effekter i alle stadier av brystkreft. Målet med denne metoden er å gi en dyremodell til maximumly etterligne menneskelig bryst kreft progresjon.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Dyreforsøk ble utført i henhold til bestemmelser og generell anbefaling av kinesiske eksperimentelle dyr administrasjon lovgivning og ble godkjent av institusjonen av Animal Care og bruk komiteen av hovedstaden Medical University (Ref ingen. AEEI-2014-052). Kvinnelige Balb/c mus alderen 6 til 8 uker ble brukt.
1. forberedelse av celler og dyrene
- En dag før operasjonen barbere håret rundt fjerde brystvortene å avsløre driftsområdet.
- Bruke en hånd for å holde musen tett bak musen vil ikke bevege seg fritt, slå opp musen å avsløre dens vommen til operatør, og deretter bruke en annen hånd for å barbere pelsen rundt fjerde brystvortene med en elektronisk barbermaskin.
- Legg et tynt lag med hårfjerning krem rundt brystvortene for 30-60 s, rydde bort kremen med destillert vann, og tørk musen med mykt papir.
- På dagen for operasjonen, samle murine brystkreft celler (4T1-luc2), beregne celle, og justere celle tettheten til 2 x 105 celler/mL i fosfat-bufret saltvann (PBS) i sterilt microcentrifuge rør og holde dem på isen. For hver musen, er 1 x 104 celler/50 µL i en 1-mL sprøyte forberedt.
2. Orthotopic injeksjon
-
Anestesi mus
- Indusere anestesi. Sette mus i en lukket gjennomsiktig beholder og slå på 2% isoflurane gass til å bedøve musene i ca 5 min, til alle ligge og falle sovende.
- Opprettholde anestesi. Overføre mus fra beholderen til individuelle anestesi masker, sette noen vet salve på øynene å unngå tørrhet, holde mus supinely med brystvortene sine utsatt for operatøren og la dem fortsette å inhalere isoflurane gass i noen minutter før den injeksjon er utført.
- Bekrefte suksessen med anestesi for en tå knipe uttak refleks.
- Ophthalmica salve gjelde øynene til mus å hindre øye tørrhet.
Merk: Ifølge beholder størrelsen og antall individuelle anestesi masker tilgjengelig, en gruppe mus kan være anesthetized sammen og injisert én etter én under personlige anestesi.
-
Ytelsen til injeksjon
- Bruk én hånd til telt opp huden rundt fjerde brystvorten med pinsett, sette opp en hevet "tunnel" for sprøyten å følge. Bruk derimot å holde sprøyten med nålen vendt oppover inn huden subcutaneously på 5-10 mm fra brystvorte; deretter følger "tunnel" til pinne-spissen kommer nær brystvorten, Flytt forsiktig nålen tips til mammary fett puten till nål øyet kommer under brystvorte spissen, forkaste pinsett og injisere cellene sakte.
- Snu nålen litt og trekke sprøyten langsomt; Bruk en bomullspinne for å presse nålen sår for 10-20 s det skal ingen væske seepage.
- Observere fjerde brystvorten å bekrefte en vellykket injeksjon: en hvit gjennomsiktig flat sfære med brystvorten som kan observeres (figur 1).
- Hold musene anesthetized for et minutt til å unngå å la musene gjenopprette og flytte for fort, noe som vil forårsake injeksjon sår for å åpne og kreftceller å lekke ut.
3. analyse av Tumor vekst og metastasering
Merk: Primære svulster identifiseres som gjennomsiktig eller blemme som støt etter injeksjoner og som sfærisk eller ellipsoid solid klumper med brystvorten noen dager senere. Tumor vekst er evaluert av svulst volum og svulst bioluminescens.
- For å etablere svulst volumet, holder du musen med én hånd. Avsløre dens vommen til operatøren og bruk derimot for å caliper svulst lengden (L) og bredden (B). Beregne svulst volumet (V) som følger.
V = (L x M2) / 2 - For å fange svulst bioluminesens, injisere 150 mg/kg D-luciferin bak på musen er halsen, 10 min før bildebehandling. Bedøve mus med 2% isoflurane gass i 5 min og overføre dem til individuelle anestesi masker for å la dem puste inn isoflurane gass for 5 min lenger. Etter produsentens instruksjoner, ta bioluminescens bilder av den primære svulsten og metastasering, auto eksponeringstid, middels binning og f/stopper på 1.
4. høsting av den primære svulsten og metastasering organer for analyse
Merk: Når oppnå hensikten med dette eksperimentet, eller nå det humane sluttpunktet, den primære svulsten kan høstes for videre studier. I denne studien fjernes svulster på 4-5 uker etter injeksjon, når svulst volum når 800 mm3. Lungene fjernes på uke 8.
-
Høsting av den primære svulsten
- Utføre operasjonen i sterilt hette å opprettholde en steril atmosfære. Bedøve dyrene ved isoflurane. Bekrefte suksessen med anestesi for tå knipe uttak reflekser. Ophthalmica salve gjelde øynene til mus å hindre at de tørker ut.
- Distansere svulsten fra huden med saks, dropwise painkiller (1 mg/mL tramadol, 1 dråpe 50 µL per mus) for å lindre postoperativ smerte.
- Sy huden med en kirurgisk Sutur, avskåret overflødig Sutur, drapere av innsnitt.
- Halvert den primære svulsten med skalpell, 1/2 av svulsten inn 4% paraformaldehyde for ytterligere hematoxylin og eosin (H & E) flekker og immunohistochemistry og umiddelbart fryse den andre 1/2 med flytende nitrogen for vestlige blotting eller en RNA isolasjon studie senere.
- Etter suturing, varm mus med en lampe til de komme seg, holde musene i enkelt bur til helt frisk. Kontinuerlig administrere 10 mg/kg tramadol med en muntlig gavage for 3 d etter operasjonen.
-
Høsting av metastasering organer
- Euthanize mus med en overdose av pentobarbital, åpne sine kister med saks, forsiktig ta ut lungene og vaske dem med PBS. Lunge metastasering foci kan identifiseres som hvit gjennomsiktig støt som er morphologically forskjellige og skilles fra normale rosa lungevev.
- Lungene inn 4% paraformaldehyde å bekrefte metastasering av H & E flekker.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Etter en vellykket injeksjon, en hvit gjennomsiktig flat sfære med nippel som det ut overflaten rundt center kan observeres (figur 1). Primære tumorveksten kan måles ved svulst volum og levende svulst celle bioluminescens (figur 2). Både svulst volumet og den totale flux økt under eksperimentet før resection. På et tidlig stadium finner metastasering fordi ingen sekundær svulst har skjedd eller sterk bioluminescent signaler av den primære svulsten hindre oppdagelsen av små metastasering foci med svake signaler. Etter eksisjon, kan bioluminescent signalet fra metastatisk fokuspunktene fjerne organer oppdages og analysert. Morfologi av både primære brystet svulsten og lunge delene ble studert med H & E flekker, mens angiogenese ble undersøkt av flekker svulst med fartøyet markør CD31 til microvessel tetthet (MVD) (Figur 3).
Figur 1: bilder før og etter orthotopic injeksjon ved mammary fett pad kvinnelige Balb/c mus. Operasjonen ble utført, og bildene ble tatt mens mus var under isoflurane anestesi. A, før injeksjon, B etter injeksjon.
Figur 2: volum og total forandring av den primære svulsten ble målt fra 7 dager etter implantation. Cellen suspensjon implantation generert en økt primære svulst både i volum, som var visualisert og bestemmes ved hjelp av markører, og total forandring, som ble målt av spekteret systemet. Figuren viser bioluminescent bilder av primære svulster og metastasering observert på ulike tidspunkt etter dag 7 av implantasjon. p/s = fotoner/sekund. Dette tallet har blitt endret fra Zhang et al. 17. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3: H & E flekker og immunohistochemical flekker analyse av primære svulster og lunge metastasering. Vev ble løst i 4% paraformaldehyde, innebygd i parafin og farget. (A og B) deler var farget med hematoxylin og eosin (H & E). (C og D) deler var farget med antiCD31 antistoffer. Brun flekk angitt CD31 + fartøy. Paneler A og C nåværende primære tumor vev, presentere paneler B og D lunge metastasering. CD = cluster for differensiering. Forstørrelsen brukes = 200 X. Baren skala = 50 µm. Dette tallet har blitt endret fra Zhang et al. 17. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Cellene som brukes i denne studien er 4T1-luc2, murine trippel-negativ brystkreft celler med luciferase merking, som er et nyttig verktøy for å investere antitumor og antimetastatic effekten av legemidler på grunn av deres svært invasiv Art2,19 . Luciferases, stabil til neste celle generasjon, brukes til å angi lever svulsten celler, melkekjertlene og andre fjerne organer20. I noen tilfeller, hypoksi og næringsstoffer mangel i svulst resultatet i en nedgang i bioluminescent signalet, og volumet av den primære svulsten er ikke uforenlig med bioluminescent signalet på et senere stadium av svulst progresjon. Teknikken av mobilnettet orthotopic injeksjon (COI) av cellen suspensjoner kan også utføres med andre bryst kreftcelle linjer, som menneskelige celler MDA-MB-231 (upubliserte data). I denne studien, med melkekjertlene som omgivelsene, det er en riktig dyr modell å studere svulst microenvironment, krysset snakker mellom kreftceller og stromal celler. Under svulst utviklingen, i noen mus kan brystvorten ulcerate, skorpe, vokse røde korning vev, flat eller selv forsvinne, ligner på hva som skjer i menneskelig brystvorter under brystkreft. Mus kan oppleve ubehag med sår; Human forsiktighet bør utvises. Mer brystvorte endre har blitt funnet i mus benytter denne COI teknikk enn med mikro-invasiv kirurgi teknikken. Kirurgisk orthotopic implantering (SOI) av histologisk intakt menneskelige tumor vev, sammenlignet med cellular orthotopic injeksjon (COI) av cellen suspensjoner, viser høyere ondartet kreft i blæren, lunge, mage, nyre og kolon21 som etterligne det er sett i pasienter22.
Med en høy forekomst av metastasering, spesielt lunge metastasering, murine bryst kreft modellen i denne studien er en god syngeneic kreft modell å utforske spontan migrasjon og invasjon, sammenlignet med en kunstig metastasering modell, som en hale blodåre injeksjon. Svulst celle aktiviteter og tegn også spille viktige roller i metastasering. Andre linjer, har for eksempel menneskelig bryst kreftcelle MCF-7, selv implantert av en orthotopic injeksjon ved mammary fett pad immun mangelfull Balb/c mus, en lavere metastatisk evne. Med endring av celler eller mus, som over-uttrykk eller ned-uttrykk for en bestemt genet, kan denne teknologien brukes i flere forskningsfelt.
Avgjørende for driften av denne injeksjon er sakte og forsiktig flytte opp pinne-spissen, fra subkutan i mammary fett puten. Når sprøyte spissen kommer nær brystvorten, vil operatør føle insistering fra vevet. Siden musen kjertel er svært liten, er bare litt mer press nødvendig å la sprøyte spissen passere krav. For mye press vil føre spissen passerer gjennom kjertel og bryte huden, som fører til en feil på injeksjon. Logaritmisk-fase celler, en enkeltcelle suspensjon, standardoperasjon protokollen (SOP) og dyktige operatører er må redusere variasjonen blant mus. Svulst er celle viktig for dannelsen og repeterbare svulst modeller. Høste logaritmisk-fase celler når de vokser til ca 80-90% samløpet; for lav eller for høy tettheten vil påvirke svulst modellen og føre variasjoner mellom eksperimenter. Encellede suspensjon er også viktig siden cellen grupperer føre til feilberegninger antall cellen. Trypsin, en EDTA løsning eller andre egnede metoder er valgt å koble cellene etter eksperiment målene og målene forskeren er interessert i. Avhengig av sprøyte skala og celle tetthet, injeksjon volumet kan variere fra 25 til 100 µL. Mengden av 1 x 104 til 1 x 106 celler brukes ofte til å irritere tumor vekst etter forskjellige celletyper. Trypan blå flekker brukes til å skille levedyktige cellers fra døde seg. Mer enn 95% celle levedyktighet regnes som en god situasjon å indusere en rask tumor vekst og metastasering i vivo. Disse er også egnet for noen andre svulst modeller når forbereder kreftceller. Å korrekt caliper primære svulst størrelsen og få et nøyaktig bioluminescent signal, bør pelsen rundt brystvorten fjernes igjen når det vokser tilbake. Når den primære svulsten vokser til en stor masse og dens bioluminescent signalet er for sterk for forskere å observere andre organ metastaser (f.ekslungekreft metastasering), dekke det med svart elektrisk tape før bioluminescens bilder tatt, eller fjerne det ved kirurgi. Smertestillende kan brukes for post-kirurgiske smerte.
Vellykket vaksinering kan resultere i lunge metastasering: med en forekomst rate på mer enn 90%, metastatisk fokus på ikke-injisert bryst, bein eller lymfeknuter er helt vanlig, mens cøliaki metastasering er sjelden. Den sekundære svulst er en gjennomskinnelig masse og kan skilles fra omkringliggende normalt vev. Upresise bruk av injeksjon kan føre til eksperimentelle feil tumor størrelse og form og metastasering steder. Noen lekkasje fra flat sfæren etter injeksjon vil forminske svulst, noen lekkasje fra melkekjertlene i "tunnel" vil resultere i en lang sylindriske svulst som vil hindre fastsettelse av svulst volumet når vi bruker en digital caliper til måle det. Subcutaneous injeksjoner rundt mammary fett puten sjelden føre til lunge metastasering og er ikke egnet for Fjern metastasering-assosiert studie. For å gjøre inoculation stabil og redusere risikoen for lekkasje, kan Matrigel brukes ved hvilemodus kreftceller. Men Matrigel er ikke et enkelt løsemiddel, det er ansett som en slags ekstracellulær matrix (ECM) og noen typer gel inneholde selv faktorer som kan påvirke eksperimenter. I eksperimentet rettet mot svulst microenvironment, ECM, krysset snakker kreftceller eller stromal celler, er det bedre å unngå å bruke Matrigel. For injisert celler med luciferase koden D-luciferin, underlaget av luciferase injiseres for å binde levende kreftceller i mus. I denne studien dynamikken i bioluminescens i vivo foreslo at 10 minutter etter D-luciferin injeksjon, bioluminescent signalet når toppen og kan være stabil i ca 10-15 minutter (varierer mellom ulike mus), enten med en intraperitoneal injeksjon eller en injeksjon. Vurderer testet stoffet injiseres intraperitoneally, å unngå samspillet av testet med D-luciferin og redusere peritoneal irritasjon, er en subcutaneous injeksjon foreslått.
Avslutningsvis er orthotopic injeksjon av brystkreft celler i dette papiret en svært nyttig og kraftig verktøy i å studere patologi og progresjon av brystkreft. Det er lett å håndtere og kan utføres raskt. Den primære svulsten stammer på melkekjertlene med en høy forekomst av metastasering, som maximumly etterligner patofysiologiske prosessen av menneskelig bryst karsinom.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne ikke avsløre.
Acknowledgments
Forfatterne ønsker å takke de National Natural Science Foundation i Kina (grant nr. 81873111, 81673924, 81774039, 81503517), Beijing Natural Science Foundation (grant nr. 7172095, 7162084, 7162083), og Xu Xia grunnlaget for Beijing sykehuset av Tradisjonell kinesisk medisin (gi nei, xx201701). Vi takker Prof Chang-Zhen Liu, fra Experimental Research Center, Kina Academy of kinesiske medisinske fag, for bioluminescent bilder.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| anesthesia machine | Midmark Corporation, Dayton, OH, USA | Matrx VMS | anesthesia |
| In-Vivo Imaging System | PerkinElmer | IVIS Spectrum | used for bioluminescence detecion |
| isoflurane | Hebei yipin chemical reagents company | O21400 | anesthesia |
| 1 ml syringe | Becton,Dickinson and Company | A257 | cell injection |
| digital caliper | Shang Hai Shen Han Measuring Tools Co., Ltd. | S-H | volume measurement |
| tramadol | Mundipharma company | - | pain killer |
| D-luciferin | Gold Biotechnology Inc. | LUCK-1G | used for bioluminescence detecion |
| The primary antibody against cluster of differentiation (CD) 31 | Abcam | ab28364 | used for MVD detection |
| hematoxylin and eosin staining kit | Beijing Zhong Shan Jinqiao Biotechnology Co., Ltd. | ZLI-9615 | histology |
| hair removal cream | Veet | - | hair removal cream |
| Carbomer Eye Gel | Dr.GerhardMannChem-Pharm.FabrikGmbH | - | ophthalmic ointment |
| sewing needle | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd. | 17U0302J | suture |
References
- Torre, L. A., et al. Global cancer statistics. CA: A Cancer Journal for Clinicians. 65 (2), 87-108 (2012).
- Rashid, O. M., Takabe, K. Animal models for exploring the pharmacokinetics of breast cancer therapies. Expert Opinion on Drug Metabolism & Toxicology. 11 (2), 221-230 (2015).
- Wagner, K. U. Models of breast cancer: quo vadis, animal modeling. Breast Cancer Research. 6 (1), 31-38 (2004).
- Horas, K., Zheng, Y., Zhou, H., Seibel, M. J. Animal models for breast cancer metastasis to bone: opportunities and limitations. Cancer Investigation. 33 (9), 459-468 (2015).
- Kawaguchi, T., Foster, B. A., Young, J., Takabe, K. Current Update of Patient-Derived Xenograft Model for Translational Breast Cancer Research. Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia. 22 (2), 131-139 (2017).
- Wright, L. E., et al. Murine models of breast cancer bone metastasis. BoneKEy Reports. 5, 804 (2016).
- Cassidy, J. W., Batra, A. S., Greenwood, W., Bruna, A. Patient-derived tumour xenografts for breast cancer drug discovery. Endocrine-Related Cancer. 23 (12), T259-T270 (2016).
- Stiedl, P., Grabner, B., Zboray, K., Bogner, E., Casanova, E. Modeling cancer using genetically engineered mice. Methods in Molecular Biology. 1267, 3-18 (2015).
- Menezes, M. E., et al. Genetically engineered mice as experimental tools to dissect the critical events in breast cancer. Advances in Cancer Research. 121, 331-382 (2014).
- Talmadge, J. E., Singh, R. K., Fidler, I. J., Raz, A. Murine models to evaluate novel and conventional therapeutic strategies for cancer. The American Journal of Pathology. 170 (3), 793-804 (2007).
- Spaw, M., Anant, S., Thomas, S. M. Stromal contributions to the carcinogenic process. Molecular Carcinogenesis. 56 (4), 1199-1213 (2017).
- Joyce, J. A., Pollard, J. W. Microenvironmental regulation of metastasis. Nature Reviews Cancer. 9 (4), 239-252 (2009).
- Hanahan, D., Weinberg, R. A. Hallmarks of cancer: the next generation. Cell. 144 (5), 646-674 (2011).
- Yano, S., et al. Tumor-targeting adenovirus OBP-401 inhibits primary and metastatic tumor growth of triple-negative breast cancer in orthotopic nude-mouse models. Oncotarget. 7 (51), 85273-85282 (2016).
- Kocaturk, B., Versteeg, H. H. Orthotopic injection of breast cancer cells into the mammary fat pad of mice to study tumor growth. Journal of Visualized Experiments. (96), e51967 (2015).
- Tavera-Mendoza, L. E., Brown, M. A less invasive method for orthotopic injection of breast cancer cells into the mouse mammary gland. Lab Animal. 51 (1), 85-88 (2017).
- Zhang, Y., et al. Establishment of a murine breast tumor model by subcutaneous or orthotopic implantation. Oncology Letters. 15 (5), 6233-6240 (2018).
- Zhang, Y., et al. Gubenyiliu II Inhibits Breast Tumor Growth and Metastasis Associated with Decreased Heparanase Expression and Phosphorylation of ERK and AKT Pathways. Molecules. 22 (5), (2017).
- Kwon, Y. S., Lee, K. S., Chun, S. Y., Jang, T. J., Nam, K. S. Suppressive effects of a proton beam on tumor growth and lung metastasis through the inhibition of metastatic gene expression in 4T1 orthotopic breast cancer model. International Journal of Oncology. 49 (1), 336-342 (2016).
- Kalra, J., et al. Validating the use of a luciferase labeled breast cancer cell line, MDA435LCC6, as a means to monitor tumor progression and to assess the therapeutic activity of an established anticancer drug, docetaxel (Dt) alone or in combination with the ILK inhibitor, QLT0267. Cancer Biology & Therapy. 11 (9), 826-838 (2011).
- Hoffman, R. M. Orthotopic metastatic mouse models for anticancer drug discovery and evaluation: a bridge to the clinic. Investigational New Drugs. 17 (4), 343-359 (1999).
- Hoffman, R. M. Patient-derived orthotopic xenografts: better mimic of metastasis than subcutaneous xenografts. Nature Reviews Cancer. 15, 451 (2015).
