Summary
هنا يصف لنا تقنية الموجات فوق الصوتية عالية التردد للتحليل في فيفو الأجنة في الفئران. هذا الأسلوب يتيح متابعة الأجنة وتحليل معلمات المشيمة، فضلا عن تدفق الدم الأم والجنين طوال فترة الحمل.
Abstract
التصوير بالموجات فوق الصوتية أسلوب واسع يستخدم للكشف عن أوجه الخلل في الجهاز وأورام في أنسجة الإنسان والحيوان. الأسلوب غير الغازية وغير مؤذية ومؤلمة، والتطبيق سهلة وسريعة، ويمكن القيام به في أي مكان، حتى مع الأجهزة المحمولة. أثناء فترة الحمل، والتصوير بالموجات فوق الصوتية يستخدم اصطلاحا أن ترصد عن كثب التطور الجنيني. هذا الأسلوب من المهم تقييم تقييد النمو داخل الرحم (IUGR)، مضاعفات حمل مع العواقب الصحية القصيرة الأجل والطويلة الأجل لكل من الأم والجنين. فهم عملية IUGR لا غنى عنه لوضع استراتيجيات علاجية فعالة.
نظام الموجات فوق الصوتية المستخدمة في هذه المخطوطة هو جهاز الموجات فوق الصوتية المنتجة للتحليل للحيوانات الصغيرة، ويمكن استخدامها في مختلف المجالات البحثية، بما في ذلك البحوث الحمل. هنا يصف لنا استخدام نظام التحليل في فيفو لاجنة من خلية خلية/الصاري (ناغورني كاراباخ) القاتل الطبيعي (MC)-قصور الأمهات التي تلد الجراء مقيدة بالنمو. البروتوكول يشمل إعداد النظام، والتعامل مع الفئران قبل وأثناء القياسات، واستخدام للوضع ب، لون وضع دوبلر، ووضع دوبلر موجه النبض. وجرى تحليل حجم الجنين وحجم المشيمة وإمدادات الدم إلى الجنين. وجدنا غرس انخفاض أحجام ومشيمه أصغر في ناغورني كاراباخ/MC-ناقص الفئران من منتصف الحمل فصاعدا. وبالإضافة إلى ذلك، كان مرتبطاً به في غياب MC/ناغورني كاراباخ-نقص وعكس تدفق نهاية الانبساطي في الجنين Arteria أومبيليكاليس(اتحاد المغرب العربي) وفهرس مقاومة مرتفعة. يمكن بسهولة استخدام الأساليب الموصوفة في البروتوكول للمواضيع البحثية ذات الصلة وغير ذات الصلة.
Introduction
الموجات فوق الصوتية هو الموجات الصوتية مع ترددات فوق النطاق مسموع للإذن البشرية، وأعلى من حوالي 20 كيلو هرتز1. الحيوانات مثل الخفافيش، ويلز، الدلافين2،3،4من الفئران، الجرذان5، و يمور الفأر6 جميع استخدام الموجات فوق الصوتية للتوجه أو الاتصال. البشر الاستفادة من الموجات فوق الصوتية للعديد من التطبيقات التقنية والطبية. جهاز الموجات فوق الصوتية غير قادرة على إنشاء الموجه الصوتية وتوزيعها، وتمثل الإشارة. إذا واجه الموجات فوق الصوتية عقبة، ينعكس، استوعبت الصوت أو يمكن أن تذهب من خلال ذلك. تطبيق الموجات فوق الصوتية كأسلوب تصوير، يسمى بالموجات فوق الصوتية، ويستخدم لتحليل الأنسجة العضوية في الإنسان أو الطب البيطري مثل القلب (ضربات القلب)7،8،9من الرئة، الغدة الدرقية10 ، الكلي11، و12،المسالك البولية والتناسلية13؛ الكشف عن حصى في المرارة14 وأورام15؛ وتقييم التروية الأوعية الدموية أو أجهزة16،17. الموجات فوق الصوتية أسلوب قياسي في الرعاية قبل الولادة خلال فترة الحمل، والعاهات الخلقية الجنينية أو العاهات يمكن التعرف عليه مبكرا. على وجه التحديد، يرصد عن كثب نمو الجنين على فترات منتظمة للتعرف IUGR ممكن. وأخيراً، يمكن رصد تدفق دم الجنين، كهذا يمكن أن نشير إلى تقييد النمو18،19،،من2021.
وميزة رئيسية للتصوير بالموجات فوق الصوتية مقارنة بالأساليب الأخرى مثل التصوير الشعاعي هو الفايروس للصوت في الأنسجة تحليلها. هذه طريقة سهلة وسريعة غير الغازية، ومؤلم، ويمكن استخدامه عدة مرات. مكلفة للنفقات المبدئية لجهاز الموجات فوق الصوتية؛ ومع ذلك، رخيصة والمواد الاستهلاكية اللازمة. نظام الموجات فوق الصوتية المستخدمة في هذه المخطوطة مناسبة لمجموعة من نماذج حيوانية (أي، الفئران والأسماك) بينما بالنسبة للبشر يتطلب جهاز الموجات فوق الصوتية تردد 3-15 ميغاهرتز، تردد ميغاهرتز 15-70 مطلوب للفئران.
ويصف المخطوط هذا بروتوكول لاستخدام الوضع ب-ووضع لون دوبلر، وطريقة دوبلر موجه النبض. ويتضمن الوصف إعداد الفئران، فضلا عن الأداء والحصول على البيانات، وتخزين. هذا الأسلوب كان سلالات الماوس تطبيقها بنجاح على مختلف أيام الحمل على الإطلاق، ويمكن استخدامها للتحقيق في وضع الجنين والمشيمة وكذلك المعلمات دم الأم والجنين. هنا، وقد شرحت كافة التطبيقات استناداً إلى على دراساتنا تستخدم الفئران الحوامل MC/ناغورني كاراباخ-ناقص والتحكم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
نالت موافقة جميع الأساليب الموصوفة هنا "لانديسفيروالتونجسامت Sachsen انهالت: 42502-2-1296UniMD."
1-الإجراء التجريبية
- 6 إلى 8 عاماً الأسبوع الإناث تفتقر إلى مولودية C57BL/6J-Cpa3 ورفيقهCre/+ (Cpa3Cre/+) الفئران ومولودية كافية C57BL/6J-Cpa3+/+ (مستعمرة الضوابط؛ Cpa3+/+) مع الذكور بالب/ج.
- تحديد اليوم من الحمل (gd) 0 بعد التأكد توصيل المهبل وعلاج الإناث فور تأكيد التوصيل.
ملاحظة: المكونات هو الحيوانات المنوية من الذكور في الفوهة المهبلية للإناث.- ضخ 250 ميليلتر من برنامج تلفزيوني في التحكم Cpa3 إينترابيريتونيلي+/+ الإناث.
- ضخ 250 ميليلتر لمكافحة--CD122 (0.25 مغ) إينترابيريتونيلي في Cpa3 تفتقر إلى MCCre/+ الإناث.
ملاحظة: حقن 0.25 مغ CD122 مكافحة يستنزف NKs الطرفية وأونكس في Cpa3 تفتقر إلى MCCre/+ الإناث كما هو موضح سابقا22.
- الانتظار حتى gd5.
ملاحظة: في gd5، هناك إمكانية أقرب لتحليل زرع.- تابع مع الخطوات من 2 إلى 5 لتحليل الموجات فوق الصوتية.
- إجراء التصوير بالموجات فوق الصوتية في gd5، 8، 10، 12، و 14.
2-إعداد نظام الموجات فوق الصوتية
- قم بتشغيل النظام (الشكل 1A؛ والطاقة الرئيسي على ظهره والكمبيوتر الاحتياطية في موقع اليسار)، منهاج ساخنة (الشكل 1B؛ وفي لوحة التحكم)، وهلام دفئا (الشكل 1).
ملاحظة: جل الموجات فوق الصوتية يحتاج إلى الحارة لحوالي 0.5 ح. - ضمان أن يتم ملء وحدة إيسوفلوراني بما فيه الكفاية (الشكل 1).
- فتح دراسة جديدة أو سلسلة جديدة في دراسة موجودة في المستعرض. تعبئة جميع المعلومات المطلوبة (مالك، اسم الدراسة، اسم السلسلة، البيانات الحيوانية) في إطار دراسة المعلومات . انقر فوق موافق.
- بعد النقر فوق موافق، ضمان أن تظهر نافذة ب-وضع التصوير والتصوير في الوضع ب-يبدأ تلقائياً.
3-التعامل مع الماوس
- أنيسثيتيزيشن الماوس
- ضع الماوس في المربع ضربة قاضية (الشكل 1E) وإغلاق المربع، فتح أنبوب إيسوفلوراني إلى مربع ضربة قاضية، وقم بتشغيل إيسوفلوراني (تركيز 3.5 ٪).
- عندما الماوس يتم تخديره، وانخفاض (بتركيز 1.5 ٪) وإعادة توجيه تدفق إيسوفلوراني بفتح الأنبوب باتجاه منصة التدفئة وإغلاق تدفق إلى مربع ضربة قاضية.
ملاحظة: للوصول إلى التخدير كافية، الانتظار 10 إضافية s بعد الماوس لم يعد يتحرك. - نقل الماوس بسرعة من المربع بالضربة القاضية إلى منصة التدفئة (الشكل 1F) في وضع الظهرية، ولطف ضع انفها في أنبوب الآنف التخدير يقع على رأس النظام الأساسي.
- تثبيت وإزالة الشعر، وإعداد الماوس لقياس
- ضع حماية العين كريم في كل عين من الماوس لمنع جفاف العين.
- ضع قطره واحدة من جل قطب كهربائي في كل مجال من المجالات الأربعة النحاس على منصة ساخنة (الشكل 1F).
- اضغط على الكفوف مع الشريط الجراحي على مجالات هلام المغلفة الكهربائي منصة التدفئة.
- فحص تخطيط القلب [قيمة مثلى = 450-550 نبضة في الدقيقة (بي بي أم)] وفسيولوجيا الجهاز التنفسي في جميع الأوقات.
ملاحظة: يتم قياس درجة حرارة الجسم باستخدام مجس المستقيم، ممكن، ولكن ليس من الضروري. - مكان مزيل الشعر كريم في بطن الماوس، فرك الكريم مع مسحه القطن والانتظار حوالي 1 دقيقة إزالة الكريم مع ضغط غارقة في المياه. كرر هذه الخطوة إذا لم كل الشعر قد ولت.
- تطبيق هلام المعالجون مسبقاً بالموجات فوق الصوتية على الجلد ديبيلاتيد.
4-القياسات واقتناء الصور وأشرطة الفيديو
- عقد محول (الشكل 1) في اليد أو المشبك في الجهاز القابضة (الشكل 1 ح؛ القابضة يوصي بالجهاز).
- تحديد المثانة مع محول، واستخدامها كنقطة مرجعية. نقل محول إلى مواقع اليسار واليمين من البطن لتتبع عللها.
- ب-وضع التصور للهياكل التشريحية في صورة درجات الرمادي 2D
- نقل محول أو تدفئة منصة الجدول حيث الفأر تركز اهتمامها حتى غرس أول مرئياً على الشاشة حجم أكبر.
- حدد تسمية الصورة وأدخل اسماً، أو مخزن الإطار (التخزين بدون اسم) لتخزين الإطارات واحدة، أو سينما مخزن لتخزين سينيلوب لغرس كل القياسات.
- نقل محول الطاقة أو الجدول أن المشيمة إلى موضع حيث يكون تدفق الدم في UmA مرئياً. تخزين إطار واحد أو سينيلوب (راجع الخطوة 4.3.1.1) لقياسات المشيمة.
ملاحظة: قياسات المشيمة ممكنة من gd10 فصاعدا. - تواصل مع جميع عللها باستخدام نفس الأسلوب.
- نقل محول أو تدفئة منصة الجدول حيث الفأر تركز اهتمامها حتى غرس أول مرئياً على الشاشة حجم أكبر.
- وضع لون دوبلر لتصور وتحديد اتجاه تدفق الدم
- اضغط على زر اللون .
- تحريك "مربع اللون" (في هذا المجال، الإشارة مرئية) إلى الموضع المطلوب باستخدام trackball. إذا لزم الأمر، تغيير حجم المربع بالضغط على التحديث ونقل trackball (على الجانب الأيمن/تصاعدياً = أكبر؛ وإلى اليسار الجانب/النزولي = أصغر). عندما يكون المربع الحجم الصحيح، اضغط على اختيار.
- تخزين إطارات واحد أو سينيلوبس كما هو موضح في الخطوة 4.3.1.1.
- نبض الموجه (PW) طريقة دوبلر لقياس تدفق الدم عن طريق السفن في Arteria أوتيرينا (الشريان الرحمي، تعميم الوصول إلى الخدمات)، واتحاد المغرب العربي
- قم بتحديد موقع منطقة الفائدة في اكتساب اللون دوبلر.
ملاحظة: يقع في تعميم الوصول إلى الخدمات والذيلية للمثانة، واتحاد المغرب العربي يقع بين الجنين والمشيمة. - وسوف تظهر الصحافة الأسبق، وخط متقطع. نقل هذا الخط إلى الأوعية الدموية للفائدة وضبط زاوية الخط باستخدام مقبض "دوبلر زاوية" تماشيا مع تدفق الدم. اضغط على تحديث.
ملاحظة: يجب أن تكون الزاوية بين اتجاه تدفق الدم ومحول متسقة في جميع الحيوانات، وبخاصة عند استخدام زوايا أكبر من 60 درجة (هنا، 70 ل UAs و 45 درجة اوماس استخدمت). - تخزين سينيلوب خطوط دوبلر يظهر في إطار اقتناء دوبلر الأسبق.
- قم بتحديد موقع منطقة الفائدة في اكتساب اللون دوبلر.
5-استعراض والانتهاء من الحصول على البيانات وحفظ سلسلة
- لمراجعة البيانات، اضغط "إدارة الدراسة". قم بالتمرير إلى صورة مصغرة للفائدة، وانقر نقراً مزدوجاً فوق تحديث.
- اضغط أولاً دراسة الإدارة ثم إغلاق في إطار المستعرض الانتهاء من الحصول على البيانات وحفظ سلسلة مسجل.
ملاحظة: بعد إغلاق سلسلة، من غير الممكن لتخزين الإطارات أو سينيلوبس في هذه السلسلة بعد الآن.
6-ماوس المناولة بعد الحصول على البيانات
- إزالة الجل من الحيوان أنايسثيتيزيد بمساعدة كمادات جافة.
- إزالة الشريط الجراحي بعناية من الكفوف.
- أغلق أنبوب إيسوفلوراني (التركيز 0%).
- المضي قدما في تحليل الموجات فوق الصوتية التالية في gd5، 8 و 10 و 12.
- ضع الحيوان وحدها في قفص لمدة 5 دقائق على الأقل حتى أنه لديه الوقت للاستيقاظ وتوجيه.
- ضع الماوس مرة أخرى في القفص الأصلي.
ملاحظة: عدم إيقاف تشغيل في إيسوفلوراني قبل إزالة جل والشريط الجراحي، كما تستيقظ الفئران بشكل سريع جداً (حوالي 20 ثانية) بعد إيقاف تشغيل في إيسوفلوراني.
- المضي قدما في تحليل الموجات فوق الصوتية التالية في gd14.
- التضحية بالأنثى قبل أن يستيقظ بخلع عنق الرحم. فتح الحيوان وإزالة الرحم، وفصل الأجنة والمشيمة، وقياس وزن الجنين والمشيمة.
7-نسخ واستيراد البيانات
- وضع علامة على سلسلة واحدة أو أكثر بالنقر فوق تصدير إلى واختر مساحة التخزين لنسخ البيانات على قرص الثابت.
- فتح البرنامج في جهاز كمبيوتر، وانقر فوق نسخ من وتحديد الدراسة/السلسلة من القرص الثابت لاستيراد سلسلة دراسة في البرنامج.
- تحليل البيانات مع البرنامج.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
وترد في الشكل 1المكونات الفردية لنظام الموجات فوق الصوتية المستخدمة في هذه المخطوطة. ويبين الشكل 2 الممثل صور الموجات فوق الصوتية المكتسبة في وضع ب-في gd5، 8 و 10 و 12 (ب) وقياس المساحة غرس المقابلة النتائج (ألف)، مما يدل على منطقة غرس انخفاض كبير في مكافحة--CD122--يعامل Cpa3Cre/+ الفئران من gd10 فصاعدا.
يبين الشكل 3 أجزاء مفردة من غرس (باساليس أوروبية، المشيمة، الجنين) المكتسبة في وضع ب (الشكل 3A) والدكتو القياس المشيمية (المنطقة، سمك، قطر) (الشكل 3). أدت إلى قياسات المشيمية في منطقة المشيمة انخفاضا كبيرا (الشكل 3 ألف)، سمك (الشكل 3B) وقطر (الشكل 3) في مكافحة--CD122--يعامل Cpa3Cre/+ الفئران مقارنة WTs في gd10 و gd12. وفي المقابل، منطقة المشيمة وقطرها قابلة للمقارنة بين المجموعات في gd14، وسمك قد زادت كثيرا في مكافحة--CD122--يعامل Cpa3Cre/+ الفئران بالمقارنة مع WTs في gd14.
ويبين الشكل 4 وزن الجنين والمشيمة في gd14. النتائج كشفت إلى حد كبير ديكريسيدفيتال الوزن (الشكل 4 أ)، ووزن المشيمة مماثلة (الشكل 4 باء)، وتناقص مؤشر الجنين المشيمة (الاستثمار في الحوافظ المالية) (الشكل 4) في مكافحة--CD122--يعامل Cpa3Cre/+ الفئران يظهر WTs الرقم 5 بالمقارنة مع صورة دوبلر ممثل الأسبق لتعميم الوصول إلى الخدمات بالماوس WT (الشكل 5A) ومقاييس السرعة القصوى الانقباضية (آيندهوفن) (الشكل 5 (ب))، وفي نهاية السرعة االنبساطي (ادف) (الشكل 5)، والمحسوب مقاومة مؤشر (الشكل 5)، حيث كانت جميع قيم قابلة للمقارنة بين المجموعات. ويبين الشكل 6 صورة دوبلر ملونة ممثل لوزن الجنين اتحاد المغرب العربي في gd14 (الشكل 6A) ونهاية الممثل الأسبق الصور دوبلر مع العادي، غير موجودة، أو عكس تدفق االنبساطي (الشكل 6B) وقياسات للمحاضر الحرفية (الشكل ج 6)، ادف (الشكل 6)، ونسبة انقباضي/الانبساطي (الرقم 6E)، ، ومقاومة مؤشر (6F الشكل). فهرس المقاومة المضادة-CD122-معاملة Cpa3Cre/+ الفئران كانت زيادة كبيرة مقارنة بوزن الفئران.
رقم 1: نظام التصوير- وحدة التحكم الرئيسية (A) مع تدفئة منصة تحكم لوحة (ب)، وهلام دفئا (ج)، وحدة تحكم إيسوفلوراني (د)، منصة مربع ضربة قاضية (ه) ساخنة مع أربع مناطق النحاس (و؛ واو-1)، محول الطاقة (ز)، ومحول الطاقة عقد الجهاز (ح). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
رقم 2: مقارنة بين مناطق زرع في gd5، 8 و 10 و 12- (أ) المناطق غرس من WT Cpa3+ + + برنامج تلفزيوني الفئران (n الفئران = n عللها 2-5، = 6-31 لليوم الواحد) و Cpa3 MC/ناغورني كاراباخ-تعاني من نقصCre/+ + CD122 مكافحة الفئران (n الفئران = 3، ن عللها = 8-16 لليوم الواحد) في gd5، 8 و 10 و 12. وترد نتائج القيم الفردية لكل زرع واحد ويعني. الاختلافات الإحصائية تم الحصول عليها باستخدام مزاوج تي-اختبار (* * ف < 0.01، * * * ف < 0.001). (ب) صور الموجات فوق الصوتية ممثل من Cpa3+ + + برنامج تلفزيوني الفئران في gd5 (ط)، gd8 (ثانيا)، gd10 (ثالثا)، و gd12 (رابعا). كلمة المدير العام، يوما من الحمل؛ WT، نوع البرية؛ مولودية، الصاري الخلية؛ ناغورني كاراباخ، خلايا القاتل الطبيعي. يتم إعادة نشر هذا الرقم من منشور سابق23. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 3: قياسات المشيمية في gd10، 12، و 14- (A) صورة بالموجات فوق الصوتية الممثل لغرس WT في gd10 تظهر باساليس أوروبية، والمشيمة والجنين. (ب) ممثل بالموجات فوق الصوتية صورة لغرس WT في gd12 عرض سمك المشيمة (سميك) وقطرها المشيمية (dia). المشيمة المنطقة (ج) وسمك المشيمة (د) وقطرها المشيمية (ه) من WT Cpa3+ + + برنامج تلفزيوني الفئران (n الفئران = n المشيمة 3-5، = 12-22 لليوم الواحد) ومولودية/Cpa3 تفتقر إلى ناغورني كاراباخCre/+ + CD122 مكافحة الفئران (n الفئران = n المشيمة 3-4، = 8-14 لليوم الواحد) في gd10، 12، و 14-نتائج تعرض القيم الفردية لكل واحد من المشيمة ويعني. الاختلافات الإحصائية تم الحصول عليها باستخدام مزاوج تي-اختبار (* p < 0.05، * * ف < 0.01). كلمة المدير العام، يوما من الحمل؛ WT، نوع البرية؛ سمك سميكة،؛ ضياء، والقطر؛ مولودية، الصاري الخلية؛ ناغورني كاراباخ، خلايا القاتل الطبيعي. يتم إعادة نشر هذا الرقم من منشور سابق23. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 4: قياسات وزن الجنين والمشيمة والجنين المشيمة مؤشر (الاستثمار في الحوافظ المالية) في gd14- أوزان الأجنة (A)، المشيمة الأوزان (ب)، وفبيس (ج) من ذرية WT Cpa3+ + + برنامج تلفزيوني الفئران (n الفئران = 4، ن مشيمة الجنين/= 35) و Cpa3 MC/ناغورني كاراباخ-تعاني من نقصCre/+ + CD122 مكافحة الفئران (n الفئران = 3، ن مشيمة الجنين/= 28) في gd14. وترد نتائج القيم الفردية ويعني. الاختلافات الإحصائية تم الحصول عليها باستخدام اختبار t مزاوج (* p < 0.05، * * ف < 0.01). كلمة المدير العام، يوما من الحمل؛ WT، نوع البرية؛ مولودية، الصاري الخلية؛ ناغورني كاراباخ، خلايا القاتل الطبيعي. يتم إعادة نشر هذا الرقم من منشور سابق23. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الرقم 5: تحليل للسرعات الشريان الرحمي في gd10- (A) صور دوبلر موجه النبض الممثل من وزن Cpa3+ + + الفئران برنامج تلفزيوني عرض آيندهوفن وادف. فهرس آيندهوفن (ب)، EDV (C)، والمقاومة (د) الشرايين الرحم من Cpa3+ + + برنامج تلفزيوني (n = 3) و Cpa3لجنة المساواة العرقية/+ + CD122 مكافحة (n = 3) الفئران في gd10 حمل. يتم عرض البيانات كما تم إجراء يعني بالتحليل الإحصائي sem. باستخدام اختبار مان-ويتني U. كلمة المدير العام، يوما من الحمل؛ WT، نوع البرية؛ مولودية، الصاري الخلية؛ ناغورني كاراباخ، خلايا القاتل الطبيعي؛ آيندهوفن، السرعة القصوى الانقباضية؛ ادف، نهاية الانبساطي السرعة. يتم إعادة نشر هذا الرقم من منشور سابق23. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
رقم 6: تحليل للسرعات الشريان السري في gd14- (A) ممثلة لون دوبلر صورة أوما الجنين في gd 14. (ب) صور دوبلر موجه النبض ممثل من Cpa3+ + + برنامج تلفزيوني (ط) و Cpa3Cre/+ + الفئران مكافحة--CD122 (الثاني والثالث)، عرض عادي في نهاية تدفق االنبساطي (ط)، في غياب تدفق نهاية الانبساطي (ثانيا)، أو نهاية عكس تدفق االنبساطي (ثالثا). آيندهوفن (ج)، (د) ادف، الانقباضي/الانبساطي نسبة (ه)، ومقاومة مؤشر (و) اوماس للأجنة من Cpa3+ + + برنامج تلفزيوني (ن الفئران = 3، أوما القياسات n = 7) و Cpa3Cre/+ + CD122 مكافحة (ن الفئران = 3، أوما القياسات n = 10) الفئران في gd14. يتم عرض البيانات كما يعني بالتحليل الإحصائي sem. تم إجراء باستخدام مزاوج تي-اختبار (* p < 0.05). اتحاد المغرب العربي، الشريان السري؛ كلمة المدير العام، يوما من الحمل؛ آيندهوفن، السرعة القصوى الانقباضية؛ ادف، نهاية الانبساطي السرعة. يتم إعادة نشر هذا الرقم من منشور سابق23. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
استخدام نظام الموجات فوق الصوتية، أثبتنا تقييد نمو الجنين في الأمهات MC/ناغورني كاراباخ-ناقص من gd10 على. وعلاوة على ذلك، في gd10 و 12، لاحظنا انخفاض الأبعاد المشيمة، في gd14، وغياب أو الارتداد من تدفق نهاية الانبساطي في اوماس لبعض الأجنة من الفئران uMC/uNK-تعاني من نقص. وكان هذا علامة على ضعف الأوعية الدموية المقترن مع مؤشر مقاومة كبيرة من الشرايين التي تشير إلى IUGR. وتؤكد النتائج الدور الهام أومكس وأونكس في الحمل وسلامة الجنين وفي فهم مسار IUGR.
البروتوكول المطبق في كل يوم من الحمل من gd5 فصاعدا (بعد زرع). وهناك بعض الخطوات الحاسمة في البروتوكول الذي يجب أن تؤخذ في الاعتبار. أولاً، يجب أن يتم إزالة الشعر بعناية. على سبيل المثال، قد يتسبب الإفراط الاتصال مع كريم إزالة الشعر تهيج الجلد. ومع ذلك، إزالة الشعر غير مكتملة يؤدي إلى إشارة تدخل مرئياً كظل على الشاشة. يمكن أن يكون سببا آخر لإشارة غير كافية (الظلال أو صور مشوشة) كمية منخفضة جداً من جل وضع بين شعاع الماوس والموجات فوق الصوتية. في تجربتنا، بدلاً من ذلك على كمية عالية من هلام (حوالي 10 مل) ضروري للرؤية إشارة كافية. القياسات وثانيا، 2D يمكن على نحو ما عرضه لعدم دقتها. للتقليل من قياس الاختلافات بين عللها، ننصحك باستخدام أكبر حجم متاح عند تطويق غرس. للمشيمة دقة القياسات، تمركزت كل عللها في طريقة التي يمكن أن ينظر إليه تدفق الدم اتحاد المغرب العربي. بالإضافة إلى ذلك، من أجل تقليل مصادر الأخطاء، القياسات ينبغي أن دائماً يؤديها نفس المشغل. ثالثا، من المهم للقياسات دوبلر موجه النبض، مشاهدة الزاوية بين اتجاه تدفق الدم وأشعة الموجات فوق الصوتية. زاوية عالية جداً أو زوايا مختلفة بين الحيوانات في تجربة واحدة قد يؤدي إلى قياسات السرعة غير دقيقة. وينبغي أيضا إيلاء اهتمام خطر أنيسثيتيزيشن المتكررة من الإناث. للحد من هذا الخطر والإجهاد للأم، قياسات الموجات فوق الصوتية ينبغي أن لا يزيد كل يوم الثاني.
إمكانية متابعة الأجنة في أيام الحمل ذات الصلة طوال فترة الحمل ميزة كبيرة لتكنولوجيا الموجات فوق الصوتية. خلافا للتضحية بالفئران في مراحل الحمل المختلفة، التكنولوجيا تمكننا من إجراء تحليلات دقيقة طولية للفئران الحوامل الفردية. وعلى الرغم من هذه القوة، وهناك بعض القيود المفروضة على النظام الذي ينبغي النظر. على سبيل المثال، قد تتغير الأجنة المواقف أثناء فترة الحمل. ومن ثم فقد يصعب على تخصيص بعض مجموعات البيانات التي تم الحصول عليها في أوقات مختلفة للأجنة الفردية. بالإضافة إلى ذلك، في بعض الأحيان أنه لا يمكن رصد بعض الأجنة في أيام الحمل لاحقاً، كما ط) مركزها يمكن أن يصعب الوصول إليها مع الحزم، والثاني) الأجنة قد تكون كبيرة جداً لاحتوائه الشاشة، أو الثالث) أنها قد تكون مخفية أسفل الأمعاء. اعتماداً على سلالة الماوس، يتم غرس كل القياسات ممكن حتى gd12 أو gd14. وفي وقت لاحق الأجهزة واحد فقط من الأجنة، بما في ذلك القلب، ويمكن قياسها وتسجيلها. غرس كله نفسه كبير جداً في مراحل متأخرة من الحمل تحتويها الشاشة.
على حد علمنا، هو التصوير بالموجات فوق الصوتية (جنبا إلى جنب مع التصوير بالرنين المغناطيسي والتصوير المقطعي بالكمبيوتر) الأسلوب الوحيد المتاح لتحليل المحددات المشار إليها أثناء الحمل دون التضحية بالعديد من الحيوانات في مختلف الحملي أيام. وهذا ينطبق بشكل خاص لتصوير دوبلر، وهو الأسلوب الوحيد قادرة على دقة تقييم تدفق الدم والاتجاه (أحمر = التدفق في اتجاه الموجات فوق الصوتية شعاع؛ الأزرق = تدفق في الاتجاه المعاكس لشعاع الموجات فوق الصوتية). أثناء تصوير دوبلر موجه النبض، يرسل شعاع الموجات فوق الصوتية عدة من البقول التي يتم إرجاعها بواسطة الأنسجة وتوفير السرعة من المعلومات حول تدفق الدم24.
كما يبدو أن الموجات فوق الصوتية نفسها غير ضارة على الأم والجنين، التصوير بالموجات فوق الصوتية مناسبة تماما للحمل للبحث. ومع ذلك، يمكن تطبيق الأساليب الموصوفة في هذه المخطوطة إلى عدة مجالات البحث الأخرى، كذلك؛ على سبيل المثال، ويتيح هذا النظام أيضا لقياسات ثلاثية الأبعاد والتصور والتقدير الكمي لحركة الأنسجة بمرور الوقت، تصور دم يتدفق في الأورام، والكشف عن المؤشرات الحيوية في الخلية السطحية، قياسات ضغط الدم، والموجهة بالموجات فوق الصوتية الحقن.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
Acknowledgments
شكرا جزيلا للشركة "أداة التصوير" (لا سيما إلى ماغدالينا شتاينر وكاترين سبيلة وساندرا ماير) لدعمهم ممتعة وسريعة والإجابة على جميع أسئلتنا المتعلقة "نظام التصوير" واستعماله فورا وبشكل كامل. ونحن ممتنون للبروفيسور هانس-رايمر روديوالد والدكتور تورستن فايراباند (هذا هايدلبرغ، ألمانيا) لتوفير مستعمرة Cpa3. بالإضافة إلى ذلك، ونحن نشكر ستيفاني لانجويش، الذي كان مسؤولاً عن المستعمرات الماوس والذي ولدت الصور في الشكل 1.
العمل و "نظام التصوير" ومولت منحا من الأوقيانوغرافية الألمانية (DFG) إلى A.C.Z. (ZE526/6-1 و AZ526/6-2) التي كانت المشاريع جزءا لا يتجزأ من DFG أولوية برنامج 1394 "الصاري الخلايا في الصحة والمرض."
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| LEAF anti-Maus CD122 (IL-2Rb) | BioLegend | 123204 | Klon TM-β1; 500 µg |
| Vevo 2100 System | FujiFilm VisualSonics Inc. | Transducer MS550D-0421 | |
| Vevo LAB Software | FujiFilm VisualSonics Inc. | ||
| Isoflurane | Baxter | PZN: 6497131 | |
| Electrode gel | Parker | 12_8 | |
| Surgical tape | 3M Transpore | 1527-1 | |
| Eye cream | Bayer | PZN: 1578675 | |
| Cotton tipped applicators | Raucotupf | 11969 | 100 pieces |
| Depilatory cream | Reckitt Benckiser | 2077626 | |
| Compresses | Nobamed Paul Danz AG | 856110 | 10 x 10 cm |
| Ultrasound gel | Gello GmbH | 246000 |
References
- Abramowicz, J. S., Kremkau, F. W., Merz, E. Ultraschall in der Geburtshilfe: Kann der Fötus die Ultraschallwelle hören und die Hitze spüren? Ultraschall in der Medizin. 33 (3), Stuttgart, Germany. 215-217 (1980).
- Jones, G. Echolocation. Current Biology. 15 (13), R484-R488 (2005).
- Simmons, J. A. The sonar receiver of the bat. Annals of the New York Academy of Sciences. 188, 161-174 (1971).
- Zala, S. M., Reitschmidt, D., Noll, A., Balazs, P., Penn, D. J. Sex-dependent modulation of ultrasonic vocalizations in house mice (Mus musculus musculus). Public Library of Science ONE. 12 (12), e0188647 (2017).
- Wöhr, M., Seffer, D., Schwarting, R. K. W. Studying Socio-Affective Communication in Rats through Playback of Ultrasonic Vocalizations. Current Protocols in Neuroscience. 75, 1-8 (2016).
- Hasiniaina, A. F., et al. High frequency/ultrasonic communication in a critically endangered nocturnal primate, Claire's mouse lemur (Microcebus mamiratra). American Journal of Primatology. , e22866 (2018).
- Yeo, L., Romero, R. Color and power Doppler combined with Fetal Intelligent Navigation Echocardiography (FINE) to evaluate the fetal heart. Ultrasound in Obstetrics & Gynecology. 50 (4), 476-491 (2017).
- Teichholz, L. E. Echocardiography in valvular heart disease. Progress in Cardiovascular Diseases. 17 (4), 283-302 (1975).
- Zechner, P. M., et al. Lungensonographie in der Akut- und Intensivmedizin. Der Anaesthesist. 61 (7), 608-617 (2012).
- Blank, W., Schuler, A. Sonografie der Schilddrüse - Update 2017. Praxis. 106 (12), 631-640 (2017).
- Hansen, K. L., Nielsen, M. B., Ewertsen, C. Ultrasonography of the Kidney: A Pictorial Review. Diagnostics. 6 (1), Basel, Switzerland. (2015).
- Older, R. A., Watson, L. R. Ultrasound anatomy of the normal male reproductive tract. Journal of Clinical Ultrasound. 24 (8), 389-404 (1996).
- Reeves, J. J., Rantanen, N. W., Hauser, M. Transrectal real-time ultrasound scanning of the cow reproductive tract. Theriogenology. 21 (3), 485-494 (1984).
- Sharma, M., Somani, P., Sunkara, T. Imaging of gall bladder by endoscopic ultrasound. World Journal of Gastrointestinal Endoscopy. 10 (1), 10-15 (2018).
- Weskott, H. -P. Ultraschall in der Diagnostik maligner Lymphome. Der Radiologe. 52 (4), 347-359 (2012).
- Shirinifard, A., Thiagarajan, S., Johnson, M. D., Calabrese, C., Sablauer, A. Measuring Absolute Blood Perfusion in Mice Using Dynamic Contrast-Enhanced Ultrasound. Ultrasound in Medicine & Biology. 43 (8), 1628-1638 (2017).
- Quaia, E. Assessment of tissue perfusion by contrast-enhanced ultrasound. European Radiology. 21 (3), 604-615 (2011).
- Saw, S. N., Poh, Y. W., Chia, D., Biswas, A., Zaini Mattar, C. N., Yap, C. H. Characterization of the hemodynamic wall shear stresses in human umbilical vessels from normal and intrauterine growth restricted pregnancies. Biomechanics and Modeling in Mechanobiology. , (2018).
- Kessler, J., Rasmussen, S., Godfrey, K., Hanson, M., Kiserud, T. Fetal growth restriction is associated with prioritization of umbilical blood flow to the left hepatic lobe at the expense of the right lobe. Pediatric Research. 66 (1), 113-117 (2009).
- Laurin, J., Lingman, G., Marsál, K., Persson, P. H. Fetal blood flow in pregnancies complicated by intrauterine growth retardation. Obstetrics and Gynecology. 69 (6), 895-902 (1987).
- Arduini, D., Rizzo, G., Romanini, C., Mancuso, S. Fetal blood flow velocity waveforms as predictors of growth retardation. Obstetrics and Gynecology. 70 (1), 7-10 (1987).
- Meyer, N., et al. Chymase-producing cells of the innate immune system are required for decidual vascular remodeling and fetal growth. Scientific Reports. 7, 45106 (2017).
- Meyer, N., Schüler, T., Zenclussen, A. C. Simultaneous Ablation of Uterine Natural Killer Cells and Uterine Mast Cells in Mice Leads to Poor Vascularization and Abnormal Doppler Measurements That Compromise Fetal Well-being. Frontiers in Immunology. 8, 1913 (2017).
- Evans, D. H., Jensen, J. A., Nielsen, M. B. Ultrasonic color Doppler imaging. Interface Focus. 1 (4), 490-502 (2011).
