Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Developmental Biology

Høj frekvens ultralyd til analyse af føtal og placenta udvikling In Vivo

doi: 10.3791/58616 Published: November 8, 2018

Summary

Her beskriver vi teknikken med høj frekvens ultralyd i vivo analyse af fostre i mus. Denne metode gør det muligt for opfølgningen af fostre og analyse af placenta parametre samt moderens og fostrets blod flow i hele graviditeten.

Abstract

Ultralyd imaging er en udbredt metode til at registrere orgel misdannelser og tumorer i menneskers og dyrs væv. Metoden er non-invasiv, ufarlig og smertefri, og programmet er let, hurtig, og kan ske hvor som helst, selv med mobile enheder. Under graviditet bruges ultrasound imaging standardly til nøje at overvåge fostrets udvikling. Teknikken er vigtigt at vurdere intrauterin vækst begrænsning (IUGR), en graviditet komplikation med kort og lang sigt sundhedsmæssige konsekvenser for både mor og foster. Forstå processen af IUGR er uundværlige for at udvikle effektive terapeutiske strategier.

Ultralyd systemet anvendes i dette håndskrift er en ultralyd enhed produceret til analyse af små dyr og kan bruges i forskellige forskningsområder, herunder graviditet forskning. Her beskriver vi brugen af ordningen for i vivo analyse af fostre fra natural killer (NK) celler/mast celle (MC)-mangelfuld mødre, der føder vækst-begrænset unger. Protokollen omfatter udarbejdelse af systemet, håndtering af musene før og under målingerne, og brugen af B-mode, farve doppler tilstand og puls-bølge doppler tilstand. Fostrets størrelse, placenta størrelse og blodforsyningen til fosteret blev analyseret. Vi fandt reducerede implantation størrelser og mindre placenta i NK/MC-mangelfuld mus fra midten drægtighed og fremefter. Derudover NK-MC-mangel var tilknyttet fraværende og vendt ende diastolisk flow i den føtale Arteria umbilicalis(UmA) og et forhøjet modstand indeks. Metoderne beskrevet i protokollen kan nemt bruges til beslægtede og ikke-relateret forskningsemner.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Ultralydsscanning er lydbølger med frekvenser over det hørbare område af det menneskelige øre, højere end ca. 20 kHz1. Dyr som flagermus, wales, delfiner2,3, mus4, rotter5, og musen lemurer6 alle bruger ultralyd til orientering eller kommunikation. Mennesker tager fordel af ultralyd til flere tekniske og medicinske applikationer. En ultralydsscanning enhed er købedygtig skabe lydbølge og distribuere og repræsenterer signalet. Hvis ultralyd støder på en hindring, lyden er reflekteret, absorberet eller kan gå igennem den. Anvendelsen af ultralyd som en billedbehandling metode, kaldet Sonografi, bruges til analyse af organiske væv i menneskelige eller veterinærmedicin som af hjertet (ekkokardiografi)7,8, lunge9, skjoldbruskkirtlen10 , nyrer11og urin og reproduktive skrifter12,13; afsløre galdesten14 og tumorer15; og evaluere perfusion af blodkar eller organer16,17. Ultralyd er en standard metode i prænatal pleje under graviditeten, og føtal udviklingsmæssige handicap eller handicap kan anerkendes tidligt. Specifikt, er vækst af et foster fulgt med jævne mellemrum at genkende et muligt IUGR. Endelig kan føtal blodgennemstrømning overvåges, da dette kan påpege vækst restriktioner18,19,20,21.

En stor fordel ved ultralyd imaging sammenlignet med andre metoder som radiografi er den lyd uskadeligheden af væv analyseres. Denne let og hurtig metode er non-invasiv, smertefri, og kan bruges flere gange. Den første udlæg af en ultralyd enhed er dyrt; men de nødvendige forbrugsartikler materialer er billige. Ultralyd systemet anvendes i dette håndskrift er velegnet til en række dyremodeller (dvs. mus og fisk) mens for mennesker en ultralyd enhed kræver en frekvens på 3-15 mHz, en frekvens på 15-70 mHz er påkrævet for mus.

Det nuværende manuskriptet beskrives en protokol til brug i B-mode, farve doppler tilstand og puls-bølge doppler mode. Beskrivelsen omfatter forberedelse af mus samt ydeevne, dataopsamling og opbevaring. Denne metode er blevet med held anvendes på forskellige mus stammer på alle svangerskabsuge dage og kan bruges til at undersøge fosterets og placenta udvikling samt moderens og fostrets blodparametre. Her, er alle programmer forklaret baseret på vores undersøgelser beskæftiger gravid MC/NK-mangelfuld og kontrol mus.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Alle metoder beskrevet her er blevet godkendt af den "Landesverwaltungsamt Sachsen Anhalt: 42502-2-1296UniMD."

1. eksperimentel Procedure

  1. Mate 6 til 8-uge-forhenværende kvindelige MC-mangelfuld C57BL/6J-Cpa3Cre /+ (Cpa3Cre /+) mus og MC-tilstrækkelig C57BL/6J-Cpa3+/+ (kolonien kontrol; Cpa3+/+) med BALB/c hanner.
  2. Definere drægtighed dag (gd) 0 efter bekræftelse af vaginal stikket og behandle hunnerne umiddelbart efter plug bekræftelse.
    Bemærk: Et stik er sæd af mandlige i vaginal åbning af kvindelige.
    1. Injicér 250 µL af PBS intraperitoneal i kontrol Cpa3+/+ hunner.
    2. Injicér 250 µL af anti-CD122 (0,25 mg) intraperitoneal i MC-mangelfuld Cpa3Cre /+ hunner.
      Bemærk: En indsprøjtning af 0,25 mg af anti-CD122 udtømmer perifere NKs og uNKs i MC-mangelfuld Cpa3Cre /+ hunner som tidligere beskrevet22.
  3. Vente til gd5.
    Bemærk: På gd5, der er den tidligste mulighed for implantation analyse.
    1. Fortsæt med trin 2-5 for ultralyd analyse.
  4. Udføre ultrasound imaging på gd5, 8, 10, 12 og 14.

2. forberedelse af ordningen med ultralyd

  1. Drej på systemet (figur 1A; hovedafbryderen på bagsiden og computer standby på den venstre side), opvarmet platformen (figur 1B; på kontrolpladen), og gelen varmere (figur 1 c).
    Bemærk: Ultralyd gel skal varme op for ca. 0,5 h.
  2. Sikre at isofluran enhed påfyldning tilstrækkeligt (fig. 1 d).
  3. Åbn en Ny undersøgelse eller en Ny serie i en eksisterende undersøgelse i browseren. Udfyld alle de påkrævede oplysninger (ejer, undersøgelse navn, Serienavn, dyrs data) i vinduet Studere Info . Klik på Ok.
  4. Når du klikker på Ok, sikre, at B-mode imaging vindue vises og billedbehandling i B-tilstand starter automatisk.

3. mus håndtering

  1. Anesthetization af musen
    1. Placere musen i boksen knockdown (figur 1E), lukke boksen, åbne isofluran tube til boksen knockdown og tænde isofluran (koncentration 3,5%).
    2. Når musen er bedøvede, lavere (til koncentration 1,5%) og omdirigere isofluran strømmen ved at åbne tuben i retning af den varme platform og lukker for strømmen til boksen knockdown.
      Bemærk: For at opnå tilstrækkelig anæstesi, vente en ekstra 10 s efter musen er ikke længere omflytning.
    3. Overføre musen hurtigt fra boksen knockout til varme platform (figur 1F) i en dorsale holdning, og forsigtigt placere sin næse i anæstesi næse røret findes øverst på platformen.
  2. Fiksering, hårfjerning og forberedelse af musen til at måle
    1. Placer øjenbeskyttelse fløde i hvert øje af musen til at forhindre tørre øjne.
    2. Anbring en dråbe af elektrode gel på hvert af de fire kobber områder på den opvarmede platform (figur 1F).
    3. Tryk på poterne med kirurgisk tape på gel-belagte elektrodeområder varme platform.
    4. Kontrollere ECG [optimale værdi = 450-550 slag/min (BPM)] og respiratoriske fysiologi på alle tidspunkter.
      Bemærk: Ved hjælp af en rektal sonde, krop temperaturmåling er mulig, men ikke nødvendig.
    5. Sted rigtige spørgsmål creme på maven af musen, rub fløde med en vatpind og vente ca 1 min. fjerne cremen med en vand-gennemblødt komprimere. Gentag dette trin, hvis ikke alle hårene er væk.
    6. Anvend pre varmede ultralyd gel på skrabet huden.

4. målinger og erhvervelse af billeder og videoer

  1. Hold transducer (figur 1 g) i hånden eller klemme det i bedriften enheden (figur 1 H; holder enheden anbefales).
  2. Identificere blæren med transduceren og bruge det som referencepunkt. Bevæge transduceren til de venstre og højre steder i maven til at spore implantations.
  3. B-mode for visualisering af de anatomiske strukturer i 2D gråtonebillede
    1. Bevæge transduceren eller varme platform tabel hvor musen er fikseret, indtil den første implantation er synlige på skærmen på den største størrelse.
      1. Vælg Billedet etiketten og angive et navn, eller Ramme butik (opbevaring uden navn) for at gemme enkelt billeder eller Cine butik til at gemme en cineloop for hele implantation målinger.
    2. Flytte transducer eller tabel til at bringe moderkagen til en position, hvor blodgennemstrømningen i UmA er synlige. Gemme et enkelt billede eller cineloop (Se trin 4.3.1.1) for placenta målinger.
      Bemærk: Placenta målinger er muligt fra gd10 og fremefter.
    3. Fortsæt med alle implantations med den samme metode.
  4. Farve doppler tilstand til at visualisere og bestemme retning af blodgennemstrømningen
    1. Tryk på knappen farve .
    2. Flytte boksen farve (i dette område, signalet er synligt) til den ønskede position ved hjælp af trackball. Om nødvendigt, ændre størrelsen på boksen ved at trykke på Opdater og flytte trackballen (til højre side/opadgående = større; til den venstre side/nedadgående = mindre). Når boksen har den rigtige størrelse, skal du trykke på Vælg.
    3. Gemme enkelt billeder eller cineloops, som beskrevet i trin 4.3.1.1.
  5. Puls-bølge (PW) doppler mode at kvantificere blodgennemstrømning gennem fartøjer i Arteria uterina (uterine arterie, UA) og UmA
    1. Find regionen af interesse i den farve doppler erhvervelse.
      Bemærk: UA ligger caudale til blæren, og UmA er beliggende mellem fosteret og placenta.
    2. Tryk på PW, og en stiplet linje vises. Flytte denne linje til blodkar af interesse og justere vinklen på linjen ved hjælp af "Doppler vinkel" knop i blodgennemstrømningen. Tryk på Opdater.
      Bemærk: Vinkel mellem retning af blodgennemstrømningen og transduceren skal være konsekvent i alle dyr, især når du bruger vinkler større end 60° (her, 70° for UAs og 45° for UmAs blev brugt).
    3. Gemme en cineloop vises doppler linjer i vinduet PW-doppler erhvervelse.

5. gennemgå og efterbehandling dataopsamling og gemme en serie

  1. Hvis du vil gennemgå data, skal du trykke på undersøgelse forvaltning. Rul til det miniaturebillede af interesse og dobbeltklik på opdatering.
  2. Tryk først Undersøgelse forvaltningLuk i browservinduet at afslutte dataopsamling og gemme en indspillet serie.
    Bemærk: Når du har lukket en serie, det er ikke muligt at gemme billeder eller cineloops i denne serie længere.

6. mus håndtering efter erhvervelse af Data

  1. Fjerne gel fra det bedøvet dyr ved hjælp af tørre komprimerer.
  2. Fjern den kirurgisk tape omhyggeligt fra poterne.
  3. Luk isofluran tube (koncentration 0%).
  4. Fortsæt med følgende ultralyd analyse på gd5, 8, 10 og 12.
    1. Placere dyret alene i et bur i mindst 5 min. så det har tid til at vågne op og orientere.
    2. Placer musen tilbage i den oprindelige bur.
      Bemærk: Sluk ikke for isofluran før du fjerner gel og kirurgisk tape, som mus vågne op meget hurtigt (omkring 20 s) efter ombøjning ned af isofluran.
  5. Fortsætte med de følgende ultralyd analyse på gd14.
    1. Ofre kvindelige, før det vågner op af cervikal dislokation. Åbn dyret, fjerne livmoderen, adskille fostre og placenta og måle fosterets og placenta vægte.

7. kopiere og importere Data

  1. Marker en eller flere serier ved at klikke på Eksporter til og vælge lagerplads til at kopiere data til en harddisk.
  2. Åbn softwaren på en computer og klik på Kopier fra og vælge den undersøgelse/serie fra harddisken til at importere en undersøgelse/series i softwaren.
  3. Analysere data med softwaren.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Individuelle komponenter af ultralyd systemet anvendes i dette håndskrift er vist i figur 1. Figur 2 viser repræsentant ultralyd billeder erhvervet i B-mode på gd5, 8, 10 og 12 (B) og tilsvarende implantation område måling resultater (A), viser en signifikant reduceret implantation område af anti-CD122-behandlet Cpa3Cre / + mus fra gd10 og fremefter.

Figur 3 viser enkelte dele af en implantation (decidua basalis, placenta, embryo) erhvervede i B-mode (figur 3A) og fodres placenta måling (område, tykkelse, diameter) (figur 3B). Placenta målinger resulterede i et betydeligt reduceret placenta område (figur 3A), tykkelse (figur 3B) og diameter (figur 3 c) i anti-CD122-behandlet Cpa3Cre / + mus i forhold til WTs på gd10 og gd12. Derimod placenta område og diameter var sammenlignelig mellem grupper på gd14, og tykkelsen var steget betydeligt i anti-CD122-behandlet Cpa3Cre / + mus i forhold til WTs på gd14.

Figur 4 viser føtal og placenta vægt på gd14. Resultaterne viste en signifikant decreasedfetal vægt (figur 4A), sammenlignelige placenta vægt (figur 4B), og faldt betydeligt feto-placenta indeks (FPI) (fig. 4 c) i anti-CD122-behandlet Cpa3Cre / + mus i forhold til WTs. figur 5 viser et repræsentativt PW doppler billede af UA WT musen (figur 5A) og målinger af peak systolisk hastighed (PSV) (figur 5B), ende diastolisk hastighed (EDV) (figur 5 c), og den beregnede modstand indeks (fig. 5 d), hvorved alle værdier kunne sammenlignes mellem grupperne. Figur 6 viser en repræsentativ doppler farvebillede af en WT føtal UmA på gd14 (fig. 6A) og repræsentative PW doppler billeder med normal, fraværende, eller tilbageførte ende diastolisk flow (fig. 6B) og målinger af PVS (figur 6 C), EDV (figur 6D), systolisk/diastolisk ratio (figur 6E), og modstand indeks (figur 6F). Modstand indekset for anti-CD122-behandlet Cpa3Cre / + mus blev væsentligt forøget i forhold til WT mus.

Figure 1
Figur 1: den billedbehandlingssystem. Vigtigste styreenheden (A) med varme platform kontrol pad (B), gel varmere (C), isofluran styreenheden (D), knockdown boks (E), opvarmet platform med fire kobber områder (F; F.1), transducer (G) og transducer holder enhed (H). Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 2
Figur 2: sammenligning af implantation områder på gd5, 8, 10 og 12. (A) implantation områder fra WT Cpa3+/ + + PBS mus (mus n = 2-5, implantations n = 6-31 pr. dag) og MC/NK-mangelfuld Cpa3Cre / + + anti-CD122 mus (mus n = 3, implantations n = 8-16 hver dag) på gd5, 8, 10 og 12. Resultaterne præsenteres som individuelle værdier for hver enkelt implantation og middelværdi. Statistiske forskelle blev opnået ved hjælp af en uparret t-test (** p < 0,01, *** p < 0,001). (B) repræsentative ultralyd billeder fra Cpa3+/ + + PBS mus på gd5 (i), gd8 (ii), gd10 (iii) og gd12 (iv). GD, drægtighed dag; WT, vildtype; MC, masten celle; NK, natural killer celle. Dette tal er genudgives fra en tidligere publikation23. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 3
Figur 3: placenta målinger på gd10, 12 og 14. (A) repræsentative ultralyd billede af en WT implantation på gd10 viser decidua basalis, moderkagen og embryo. (B) repræsentative ultralyd billede af en WT implantation på gd12 viser placenta tykkelse (tyk) og placenta diameter (dia). Placenta område (C), placenta tykkelse (D) og placenta diameter (e) fra WT Cpa3+/ + + PBS mus (mus n = 3-5, placenta n = 12-22 pr. dag) og MC / NK-mangelfuld Cpa3Cre / + + anti-CD122 mus (mus n = 3-4, placenta n = 8-14 pr. dag) på gd10, 12, og 14. Resultaterne præsenteres som individuelle værdier for hver enkelt moderkagen og middelværdi. Statistiske forskelle blev opnået ved hjælp af en uparret t-test (* p < 0,05, ** p < 0,01). GD, drægtighed dag; WT, vildtype; tyk, tykkelse; Dia, diameter; MC, masten celle; NK, natural killer celle. Dette tal er genudgives fra en tidligere publikation23. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 4
Figur 4: føtal og placenta vægt målinger og feto-placenta indeks (FPI) på gd14. Fosterets vægt (A), placenta vejer (B) og FPIs (C) fra afkom af WT Cpa3+/ + + PBS mus (mus n = 4, fosteret/placenta n = 35) og MC/NK-mangelfuld Cpa3Cre / + + anti-CD122 mus (mus n = 3, fosteret/placenta n = 28) på gd14. Resultaterne præsenteres som individuelle værdier og middelværdi. Statistiske forskelle blev opnået ved hjælp af uparret t-test (* p < 0,05, ** p < 0,01). GD, drægtighed dag; WT, vildtype; MC, masten celle; NK, natural killer celle. Dette tal er genudgives fra en tidligere publikation23. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 5
Figur 5: analyse af uterine arterie hastigheder på gd10. (A) repræsentative pulse-bølge doppler billeder fra WT Cpa3+/ + + PBS mus viser PSV og EDV. PSV (B), EDV (C) og modstand indeks (D) af uterine arterier fra Cpa3+/ + + PBS (n = 3) og Cpa3Cre / + + anti-CD122 (n = 3) mus på gd10 af graviditet. Data præsenteres som middelværdi med SEM. statistisk analyse blev udført ved hjælp af Mann-Whitney U test. GD, drægtighed dag; WT, vildtype; MC, masten celle; NK, natural killer celle; PSV, peak systolisk hastighed; EDV, ende diastolisk hastighed. Dette tal er genudgives fra en tidligere publikation23. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 6
Figur 6: analyse af navlestrengen arterie hastigheder på gd14. (A) repræsentant Color Doppler afbildning af en føtal UmA på gd 14. (B) repræsentative pulse-bølge doppler billeder fra Cpa3+/ + + PBS (i) og Cpa3Cre / + + anti-CD122 (ii, iii) mus, viser normal ende diastolisk flow (i), fraværende ende diastolisk flow (ii), eller omvendt ende diastolisk flow (iii). PSV (C), EDV (D), systolisk/diastolisk forholdet (E) og modstand indeks (F) af UmAs af fostre fra Cpa3+/ + + PBS (mus n = 3, UmA målinger n = 7) og Cpa3Cre / + + anti-CD122 (mus n = 3, UmA målinger n = 10) mus på gd14. Data præsenteres som middelværdi med SEM. statistisk analyse blev udført ved hjælp af en uparret t-test (* p < 0,05). UmA, navlestrengen arterie; GD, drægtighed dag; PSV, peak systolisk hastighed; EDV, ende diastolisk hastighed. Dette tal er genudgives fra en tidligere publikation23. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Bruge vores ultralyd system, viste vi fostrets vækst begrænsning i MC/NK-mangelfuld mødre fra gd10 på. Desuden på gd10 og 12, vi observeret nedsat placenta dimensioner, og på gd14 fravær eller reversion af slutningen diastolisk flow i UmAs af nogle fostre af uMC/uNK-mangelfuld mus. Dette tegn på dårlig vascularization var forbundet med en betydelig modstand indeks af arterierne, der angiver IUGR. Resultaterne bekræfte vigtigheden af uMCs og uNKs i graviditet og fosterets velbefindende og forståelse løbet af IUGR.

Protokollen er gældende på hver drægtighed dag fra gd5 og fremefter (efter implantation). Der er nogle vigtige skridt i den protokol, der skal tages i betragtning. For det første, hårfjerning skal udføres omhyggeligt. For eksempel, kan overdreven kontakt med hårfjerning fløde forårsage hudirritation. Men ufuldstændig hårfjerning fører til signal interferens synlig som en skygge på skærmen. En anden grund for utilstrækkeligt signal (skygger eller kornede billeder) kan også være en alt for lav mængde af gel placeret mellem mus og ultralyd stråle. Vores erfaring, snarere er en høj mængde af gel (ca. 10 mL) nødvendige for tilstrækkeligt signal synlighed. Andet, 2D målinger kan være en eller anden måde udsat for unøjagtighed. For at minimere måling forskelle mellem implantations, anbefaler vi brug af den største tilgængelige størrelse når omkranser implantation. For præcis moderkagen målinger, var alle implantations placeret på en måde som UmA blodgennemstrømning kunne ses. Derudover for at minimere kilder til fejl, bør målinger altid gennemføres af samme driftsleder. For det tredje for puls-bølge doppler målinger er det vigtigt at se vinklen mellem retning af blodgennemstrømningen og ultralyd stråle. En alt for høj vinkel eller forskellige vinkler mellem dyr i en enkelt eksperiment kan medføre unøjagtige hastighed målinger. Også bør fokuseres på risikoen for gentagne anesthetization af hunnerne. For at mindske denne risiko og stress for moderen, bør ultralyd målinger gøres ikke mere end hver anden dag.

Muligheden for at opfølgende fostre på relevante svangerskabsuge dage under graviditeten er en stor fordel ved ultralyd-teknologi. I modsætning til offerdød mus på forskellige graviditet stadier, teknologien giver os mulighed at udføre nøjagtige langsgående analyser af enkelte gravide mus. Trods denne styrke er der nogle begrænsninger i systemet, der bør overvejes. For eksempel kan fostre ændre holdninger i løbet af graviditeten. Derfor kan det være svært at afsætte visse datasæt, der er opnået på forskellige tidspunkter til enkelte fostre. Desuden, nogle gange er det ikke muligt at overvåge nogle fostre på senere drægtighed dage, som i) deres position kan være vanskelige at nå med strålen, ii) fostre kan være for stor til at passe til skærmen, eller iii) de kan være skjult under tarmen. Afhængigt af mus stamme er hele implantation målinger muligt indtil gd12 eller gd14. Senere kan kun indre organer af fostre, herunder hjertet, måles og registreres. Hele implantation, selv er for stor i senere graviditet faser til at passe ind i skærmen.

Til bedste af vores viden er ultrasound imaging (sammen med magnetisk resonans og computertomografi) metoden kun tilgængelig til at analysere de angivne parametre under graviditet uden at ofre flere dyr på forskellige svangerskabsuge dage. Dette gælder især for doppler afbildning, som er den eneste metode kunne præcist vurdere blodgennemstrømningen og retning (rød = flow i retning af ultralyd fjernlys; blå = flow i den modsatte retning af ultralyd bom). Under pulse-bølge doppler imaging udsender ultralyd beam flere korte pulser, som returneres af vævet og give hastighed oplysninger om blod flow24.

Da ultralyd selv synes at være ufarlig for mor og Foster, er ultrasound imaging perfekt egnet til graviditet forskning. Ikke desto mindre, de metoder, der beskrives i dette håndskrift kan anvendes til mange andre forskningsområder, som godt; f.eks systemet også giver mulighed for 3D-målinger, visualisering og kvantificering af væv bevægelse over tid, visualisering af blod flyde i tumorer, påvisning af biomarkører på celle overflade, blodtryksmålinger, og ultralyd-styrede injektioner.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne har ikke noget at oplyse.

Acknowledgments

Mange tak til firmaet Imaging Instrument (især til Magdalena Steiner, Katrin Suppelt, og Sandra Meyer) for deres behagelige og hurtig støtte og for at besvare alle vores spørgsmål vedrørende Imaging System og dens skik hurtigt og fuldstændigt. Vi er taknemmelige for Prof. Hans-Reimer Rodewald og Dr. Thorsten Feyerabend (DKFZ Heidelberg, Tyskland) for at give Cpa3 koloni. Derudover takker vi Stefanie Langwisch, der var ansvarlig for musen kolonier og der genereres billederne i figur 1.

Arbejdet og den Imaging System blev finansieret af tilskud fra Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) til A.C.Z. (ZE526/6-1 og AZ526/6-2) der var projekter indlejret i DFG prioriterede program 1394 "Mast celler i sundhed og sygdom."

Materials

Name Company Catalog Number Comments
LEAF anti-Maus CD122 (IL-2Rb) BioLegend 123204 Klon TM-β1; 500 µg
Vevo 2100 System  FujiFilm VisualSonics Inc. Transducer MS550D-0421
Vevo LAB Software  FujiFilm VisualSonics Inc.
Isoflurane Baxter PZN: 6497131
Electrode gel Parker 12_8
Surgical tape 3M Transpore 1527-1
Eye cream Bayer PZN: 1578675
Cotton tipped applicators Raucotupf 11969 100 pieces
Depilatory cream Reckitt Benckiser 2077626
Compresses Nobamed Paul Danz AG 856110 10 x 10 cm
Ultrasound gel Gello GmbH 246000

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Abramowicz, J. S., Kremkau, F. W., Merz, E. Ultraschall in der Geburtshilfe: Kann der Fötus die Ultraschallwelle hören und die Hitze spüren? Ultraschall in der Medizin. 33, (3), Stuttgart, Germany. 215-217 (1980).
  2. Jones, G. Echolocation. Current Biology. 15, (13), R484-R488 (2005).
  3. Simmons, J. A. The sonar receiver of the bat. Annals of the New York Academy of Sciences. 188, 161-174 (1971).
  4. Zala, S. M., Reitschmidt, D., Noll, A., Balazs, P., Penn, D. J. Sex-dependent modulation of ultrasonic vocalizations in house mice (Mus musculus musculus). Public Library of Science ONE. 12, (12), e0188647 (2017).
  5. Wöhr, M., Seffer, D., Schwarting, R. K. W. Studying Socio-Affective Communication in Rats through Playback of Ultrasonic Vocalizations. Current Protocols in Neuroscience. 75, 1-8 (2016).
  6. Hasiniaina, A. F., et al. High frequency/ultrasonic communication in a critically endangered nocturnal primate, Claire's mouse lemur (Microcebus mamiratra). American Journal of Primatology. e22866 (2018).
  7. Yeo, L., Romero, R. Color and power Doppler combined with Fetal Intelligent Navigation Echocardiography (FINE) to evaluate the fetal heart. Ultrasound in Obstetrics & Gynecology. 50, (4), 476-491 (2017).
  8. Teichholz, L. E. Echocardiography in valvular heart disease. Progress in Cardiovascular Diseases. 17, (4), 283-302 (1975).
  9. Zechner, P. M., et al. Lungensonographie in der Akut- und Intensivmedizin. Der Anaesthesist. 61, (7), 608-617 (2012).
  10. Blank, W., Schuler, A. Sonografie der Schilddrüse - Update 2017. Praxis. 106, (12), 631-640 (2017).
  11. Hansen, K. L., Nielsen, M. B., Ewertsen, C. Ultrasonography of the Kidney: A Pictorial Review. Diagnostics. 6, (1), Basel, Switzerland. (2015).
  12. Older, R. A., Watson, L. R. Ultrasound anatomy of the normal male reproductive tract. Journal of Clinical Ultrasound. 24, (8), 389-404 (1996).
  13. Reeves, J. J., Rantanen, N. W., Hauser, M. Transrectal real-time ultrasound scanning of the cow reproductive tract. Theriogenology. 21, (3), 485-494 (1984).
  14. Sharma, M., Somani, P., Sunkara, T. Imaging of gall bladder by endoscopic ultrasound. World Journal of Gastrointestinal Endoscopy. 10, (1), 10-15 (2018).
  15. Weskott, H. -P. Ultraschall in der Diagnostik maligner Lymphome. Der Radiologe. 52, (4), 347-359 (2012).
  16. Shirinifard, A., Thiagarajan, S., Johnson, M. D., Calabrese, C., Sablauer, A. Measuring Absolute Blood Perfusion in Mice Using Dynamic Contrast-Enhanced Ultrasound. Ultrasound in Medicine & Biology. 43, (8), 1628-1638 (2017).
  17. Quaia, E. Assessment of tissue perfusion by contrast-enhanced ultrasound. European Radiology. 21, (3), 604-615 (2011).
  18. Saw, S. N., Poh, Y. W., Chia, D., Biswas, A., Zaini Mattar, C. N., Yap, C. H. Characterization of the hemodynamic wall shear stresses in human umbilical vessels from normal and intrauterine growth restricted pregnancies. Biomechanics and Modeling in Mechanobiology. (2018).
  19. Kessler, J., Rasmussen, S., Godfrey, K., Hanson, M., Kiserud, T. Fetal growth restriction is associated with prioritization of umbilical blood flow to the left hepatic lobe at the expense of the right lobe. Pediatric Research. 66, (1), 113-117 (2009).
  20. Laurin, J., Lingman, G., Marsál, K., Persson, P. H. Fetal blood flow in pregnancies complicated by intrauterine growth retardation. Obstetrics and Gynecology. 69, (6), 895-902 (1987).
  21. Arduini, D., Rizzo, G., Romanini, C., Mancuso, S. Fetal blood flow velocity waveforms as predictors of growth retardation. Obstetrics and Gynecology. 70, (1), 7-10 (1987).
  22. Meyer, N., et al. Chymase-producing cells of the innate immune system are required for decidual vascular remodeling and fetal growth. Scientific Reports. 7, 45106 (2017).
  23. Meyer, N., Schüler, T., Zenclussen, A. C. Simultaneous Ablation of Uterine Natural Killer Cells and Uterine Mast Cells in Mice Leads to Poor Vascularization and Abnormal Doppler Measurements That Compromise Fetal Well-being. Frontiers in Immunology. 8, 1913 (2017).
  24. Evans, D. H., Jensen, J. A., Nielsen, M. B. Ultrasonic color Doppler imaging. Interface Focus. 1, (4), 490-502 (2011).
Høj frekvens ultralyd til analyse af føtal og placenta udvikling <em>In Vivo</em>
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Meyer, N., Schüler, T., Zenclussen, A. C. High Frequency Ultrasound for the Analysis of Fetal and Placental Development In Vivo. J. Vis. Exp. (141), e58616, doi:10.3791/58616 (2018).More

Meyer, N., Schüler, T., Zenclussen, A. C. High Frequency Ultrasound for the Analysis of Fetal and Placental Development In Vivo. J. Vis. Exp. (141), e58616, doi:10.3791/58616 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter