Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Developmental Biology

Hög frekvens ultraljud för analys av foster och placenta utveckling In Vivo

doi: 10.3791/58616 Published: November 8, 2018

Summary

Här beskriver vi tekniken av högfrekvent ultraljud för in-vivo analys av foster hos möss. Denna metod kan uppföljningen av foster och analys av placenta parametrar samt moderns och fostrets blodflöde under hela graviditeten.

Abstract

Ultraljudsundersökningar är en utbredd metod som används för att upptäcka orgel anomalier och tumörer i människors och djurs vävnader. Metoden är icke-invasiv, ofarlig och smärtfri, och programmet är enkelt, snabbt och kan göras var som helst, även med mobila enheter. Ultraljudsundersökningar används standardmässigt att noga övervaka fostrets utveckling under graviditeten. Tekniken är viktigt att bedöma intrauterin tillväxt begränsning (Genanalys), en graviditet komplikation med kort - och långsiktiga konsekvenser för hälsan för både modern och fostret. Förstå processen för Genanalys är oumbärliga för att utveckla effektiva terapeutiska strategier.

Ultraljud systemet används i detta manuskript är en ultraljud enhet producerad för analys av små djur och kan användas i olika forskningsområden, inklusive graviditet forskning. Här beskriver vi användningen av systemet för in-vivo analys av foster från natural killer (NK) celler/mast cell (MC)-bristfällig mödrar som föder tillväxt-begränsad pups. Protokollet omfattar utarbetandet av systemet, hantering av mössen före och under mätningar och användningen av det B-läget, färg doppler och puls-wave doppler läge. Fostrets storlek, placenta storlek och blodtillförseln till fostret analyseras. Vi hittade reducerad implantation storlekar och mindre moderkakor i NK/MC-brist möss från mitten av dräktigheten och framåt. Dessutom MC/NK-brist var associerade med frånvarande och återföras slutet diastoliska flödet i det fetala Arteria umbilicalis(UmA) och en förhöjd resistens-index. De metoder som beskrivs i protokollet kan enkelt användas för och icke-relaterade forskningsämnen.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Ultraljud är ljud vågor med frekvenser ovanför hörbara intervallet i det mänskliga örat, högre än ca 20 kHz1. Djur som fladdermöss, wales, delfiner2,3, möss4, råttor5, och mus lemurer6 alla använda ultraljud för orientering eller kommunikation. Människor dra nytta av ultraljud för flera tekniska och medicinska tillämpningar. En ultraljud enhet kan skapa ljudvågen och distribuera och representera signalen. Om ultraljud stöter på ett hinder, ljudet reflekteras, absorberas eller kan gå igenom den. Tillämpningen av ultraljud som en tänkbar metod, som kallas sonography, används för analys av organiska vävnader i mänskliga eller veterinärmedicin som av hjärtat (ekokardiografi)7,8, lung9, sköldkörteln10 , njurar11och urinvägar och reproduktiv skrifter12,13; att upptäcka gallsten14 och tumörer15; och utvärdera perfusion blodkärl eller organ16,17. Ultraljud är en standardmetod i prenatal vård under graviditet och fostrets utvecklingsstörning eller funktionshinder kan identifieras tidigt. Tillväxten av ett foster är särskilt noga med jämna mellanrum att erkänna ett möjligt Genanalys. Slutligen, fostrets blodflöde kan övervakas, eftersom detta kan peka ut tillväxt begränsningar18,19,20,21.

En stor fördel med ultraljudsundersökningar jämfört med andra metoder som radiografi är ljudets ofarlighet vävnaderna att analyseras. Denna enkel och snabb metod är icke-invasiv, smärtfri, och kan vara används ett antal gånger. Den inledande utläggen av en ultraljud enhet är dyrt; förbrukningsbart material som krävs är dock billigt. Ultraljud systemet används i detta manuskript är lämplig för en rad djurmodeller (dvs. möss och fisk) medan för människor en ultraljud enhet kräver en frekvens av 3-15 mHz, en frekvens på 15-70 mHz krävs för möss.

Det nuvarande manuskriptet beskriver ett protokoll för användning av B-läge, färg doppler och puls-wave doppler läge. Beskrivningen omfattar utarbetandet av möss som prestanda, datainsamling och lagring. Denna metod har varit framgångsrikt tillämpas på olika mus stammar alls graviditetsdiabetes dagar och kan användas för att undersöka foster och placenta utveckling samt moderns och fostrets blod parametrar. Här förklaras alla program baserat på våra studier som sysselsätter gravid MC/NK-brist och kontroll möss.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Alla metoderna som beskrivs här har godkänts av den ”Landesverwaltungsamt Sachsen Anhalt: 42502-2-1296UniMD”.

1. experimentell förfarande

  1. Mate 6 till 8 veckor gamla kvinnliga MC-brist C57BL/6J-Cpa3Cre /+ (Cpa3Cre /+) möss och MC-tillräcklig C57BL/6J-Cpa3+/+ (koloni kontroller; Cpa3+/+) med BALB/c hanar.
  2. Definiera dräktigheten dagen (gd) 0 efter bekräftelse av vaginal pluggen och behandla honorna omedelbart efter plug bekräftelse.
    Obs: En plugg är sperma från manlign i vaginala öppningen av honan.
    1. Injicera 250 µL PBS intraperitonealt i kontroll Cpa3+/+ honor.
    2. Injicera 250 µL anti-CD122 (0,25 mg) intraperitonealt i MC-brist Cpa3Cre /+ honor.
      Obs: En injektion av 0.25 mg av anti-CD122 utarmar perifera NKs och uNKs i MC-brist Cpa3Cre /+ honor som tidigare beskrivits22.
  3. Vänta tills gd5.
    Obs: På gd5 finns det tidigaste möjligheten för implantation analys.
    1. Fortsätt med steg 2-5 för ultraljud analys.
  4. Utföra ultraljudsundersökningar på gd5, 8, 10, 12 och 14.

2. beredning av ultraljud systemet

  1. Slå på systemet (figur 1A; huvudströmmen på ryggen och dator standby på den vänstra platsen), uppvärmd plattformen (figur 1B; på spelkontrollen), och gelen varmare (figur 1 c).
    Obs: Ultraljud gel behöver värma upp i ca 0.5 h.
  2. Säkerställa att isofluran enheten fylls tillräckligt (figur 1 d).
  3. Öppna en Ny studie eller Nya serien i en befintlig studie i webbläsaren. Fyll i all nödvändig information (ägare, studie namn, serienamn, data från djurförsök) i fönstret Studera Info . Klicka på Ok.
  4. Klicka på Okoch säkerställa att visas fönstret B-läge imaging och bildtagning i B-läge börjar automatiskt.

3. mus hantering

  1. Anesthetization av musen
    1. Placera musen i rutan knockdown (figur 1E), Stäng rutan, öppna isofluran tuben till rutan knockdown och slå på isofluran (koncentrationen 3,5%).
    2. När musen är sövda, lägre (till koncentration 1,5%) och omdirigera isofluran flödet genom att öppna röret i riktning mot värme plattformen och stänga flödet till rutan knockdown.
      Obs: För att nå tillräcklig anestesi, vänta ytterligare 10 s efter att musen inte längre är rörliga.
    3. Överföra musen snabbt från rutan knockout till värme-plattformen (figur 1F) i dorsala ställning och försiktigt placera nosen i anestesi näsa röret ligger på toppen av plattformen.
  2. Fixering, hårborttagning och beredning av musen för att mäta
    1. Placera ögonskydd grädde i varje öga av musen för att förhindra torra ögon.
    2. Placera en droppe elektrodgel på varje av de fyra koppar områdena på uppvärmd plattformen (figur 1F).
    3. Tryck på tassarna med kirurgisk tejp på gel-belagd elektrodytorna på värme plattformen.
    4. Kontrollera ECG [optimalt värde = 450-550 slag/min (BPM)] och respirationsfysiologi hela tiden.
      Obs: Genom att använda en rektal sond, kroppen temperaturmätning är möjligt, men inte nödvändigt.
    5. Plats hårborttagningsprodukter grädde på magen av musen, gnugga krämen med en bomullspinne och vänta ca 1 min. ta bort krämen med en vatten-indränkt kompress. Upprepa detta steg om inte alla hårstrån är borta.
    6. Applicera pre värmde ultraljud gelen på avrakade huden.

4. mätningar och förvärv av bilder och videor

  1. Håll givaren (figur 1 g) i handen eller klämma den i enhetens innehav (figur 1 H; håller enheten rekommenderas).
  2. Identifiera blåsan med givaren och använda den som referenspunkt. Flytta givaren till vänster och höger platser av buken att spåra implantationer.
  3. B-läge för visualisering av anatomiska strukturer i 2D gråskalebild
    1. Flytta givaren eller värme plattform tabell där musen är fixerade tills den första implantationen är synliga på skärmen vid dess största storlek.
      1. Välj Bild etikett och ange ett namn eller Ram Store (lagring utan namn) för att lagra enskilda bildrutor eller Cine Store att lagra en cineloop för hela implantation mätningar.
    2. Flytta givaren eller tabell att moderkakan till en position där blodflödet i UmA är synliga. Lagra en enda bildruta eller cineloop (se steg 4.3.1.1) för placenta mätningar.
      Obs: Placenta mätningar är möjligt från gd10 och framåt.
    3. Fortsätt med alla implantationer med samma metod.
  4. Doppler färgläge att visualisera och bestämma riktningen för blodflödet
    1. Tryck på knappen färg .
    2. Flytta rutan färg (i detta område, signalen är synliga) till önskad position med hjälp av styrkulan. Om det behövs, ändra storlek på rutan genom att trycka på Uppdatera och flytta styrkulan (till höger/uppåt = större; till den vänstra sida/nedåt = mindre). När rutan har rätt storlek, tryck på Välj.
    3. Lagra enskilda bildrutor eller cineloops som beskrivs i steg 4.3.1.1.
  5. Puls-våg (PW) doppler läge att kvantifiera blodflödet genom fartyg i de Arteria uterina (livmodern artär, UA) och UmA
    1. Leta upp regionen sevärdheter i färg doppler förvärvet.
      Obs: På UA ligger kaudalt till urinblåsan och UmA ligger mellan fostret och moderkakan.
    2. Tryck på PWatt, en streckad linje visas. Flytta linjen till blodkärlet sevärdheter och justera vinkeln på linjen använder ”Doppler Angle” vredet i linje med blodflödet. Tryck på Uppdatera.
      Obs: Vinkeln mellan riktningen av blodflödet och givaren måste vara konsekvent i alla djur, särskilt när användande vinklar än 60° (här, 70° för UAs och 45° för UmAs användes).
    3. Lagra en cineloop av visasende doppler raderna i fönstret PW doppler förvärv.

5. granska och efterbehandling datainsamling och spara en serie

  1. För att granska data, tryck på studie Management. Rulla till miniatyrbilden av intresse och dubbelklicka på Update.
  2. Tryck på första Studie Management sedan Stäng i webbläsarfönstret att avsluta datainsamling och rädda en inspelade serien.
    Obs: Efter stängning en serie, det går inte att lagra ramar eller cineloops i denna serie längre.

6. mus hantering efter förvärvet av Data

  1. Ta bort gelen från de bedövat djuren med hjälp av torra kompresser.
  2. Ta bort kirurgiska tejpen noggrant från tassarna.
  3. Stäng isofluran röret (koncentration 0%).
  4. Fortsätt med följande ultraljud undersökning på gd5, 8, 10 och 12.
    1. Placera djuret ensam i en bur i minst 5 min på så det har tid att vakna upp och orientera.
    2. Placera musen tillbaka i den ursprungliga buren.
      Obs: Stäng inte av isofluran innan du tar bort i gel och kirurgisk tejp, som möss vakna upp mycket snabbt (20 s) efter att stänga av isofluran.
  5. Fortsätt med följande ultraljud analys på gd14.
    1. Offra honan innan den vaknar av cervikal dislokation. Öppna djuret, ta bort livmodern, separera foster och moderkakor och mäta vikter foster och placenta.

7. kopiera och importera Data

  1. Markera en eller flera serier genom att klicka på Exportera till och välj lagringsutrymmet att kopiera data på en hårddisk.
  2. Öppna programvaran på en dator och klicka på Kopiera från och välj studie/serien från hårddisken för att importera en studie/serie till programvaran.
  3. Analysera data med programvaran.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Individdelar av ultraljud systemet används i detta manuskript visas i figur 1. Figur 2 visar representant ultraljudsbilder förvärvade i B-läge på gd5, 8, 10 och 12 (B) och motsvarande implantation området mätning resultat (A), visar en signifikant minskad implantation området anti-CD122-behandlade Cpa3Cre / + möss från gd10 och framåt.

Figur 3 visar enstaka delar av en implantation (decidua basalis, moderkakan, embryo) förvärvade i B-läge (figur 3A) och Bibröd placenta mätning (område, tjocklek, diameter) (figur 3B). Placenta mätningar resulterade i ett betydligt reducerad placenta område (figur 3A), tjocklek (figur 3B) och diameter (figur 3 c) i anti-CD122-behandlade Cpa3Cre / + möss jämfört WTs vid gd10 och gd12. Däremot placenta område och diameter var jämförbar mellan grupperna vid gd14, och tjocklek ökades betydligt i anti-CD122-behandlade Cpa3Cre / + möss i jämförelse med WTs vid gd14.

Figur 4 visar foster och placenta vikt på gd14. Resultaten visade en betydligt decreasedfetal vikt (figur 4A), jämförbara placenta vikt (figur 4B), och minskade signifikant feto-placenta index (FPI) (figur 4 c) i anti-CD122-behandlade Cpa3Cre / + möss jämfört med WTs. figur 5 visar en representativ PW doppler bild på UA WT musklick (figur 5A) och mätningar av peak systoliskt hastighet (PSV) (figur 5B), avsluta diastoliskt velocity (EDV) (figur 5 c) och den beräknade motstånd index (figur 5 d), whereby alla värden var jämförbara mellan grupperna. Figur 6 visar en representativ doppler färgbild av en WT fostrets UmA vid gd14 (figur 6A) och representativa PW doppler bilder med normal, frånvarande, eller omvänd slut diastoliska flödet (figur 6B) och mätningar av PVS (figur 6 C), EDV (figur 6 d), systoliskt/diastoliskt baserat (figur 6E),, och motstånd index (figur 6F). Indexet motstånd av anti-CD122-behandlade Cpa3Cre / + möss var betydligt ökade jämfört med WT möss.

Figure 1
Figur 1: bildsystem. Huvudkontrollenheten (A) med värme plattformskontroll pad (B), gel varmare (C), isofluran styrenheten (D), knockdown box (E), uppvärmd plattform med fyra koppar områden (F; F.1), givaren (G), och givaren håller enheten (H). Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figure 2
Figur 2: jämförelse av implantation områden på gd5, 8, 10 och 12. (A) implantation områden från WT Cpa3+/ + + PBS möss (möss n = 2-5, implantationer n = 6-31 per dag) och MC/NK-brist Cpa3Cre / + + anti-CD122 möss (möss n = 3, implantationer n = 8-16 per dag) på gd5, 8, 10 och 12. Resultaten presenteras som enskilda värden för varje enskild implantation och medelvärdet. Statistiska skillnader erhölls med ett oparat t-test (** p < 0,01, *** p < 0,001). B representativa ultraljudsbilder från Cpa3+/ + + PBS möss vid gd5 (i), gd8 (ii), gd10 (iii) och gd12 (iv). GD, dräktigheten dag; WT, vilda typ; MC, mast cell; NK, natural killer cell. Denna siffra publiceras från en tidigare publikation23. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figure 3
Figur 3: placenta mätningar vid gd10, 12 och 14. (A) representativa ultraljud bild av en WT implantation på gd10 visar den decidua basalis, moderkakan och embryo. B representativa ultraljud bild av en WT implantation på gd12 visar placenta tjocklek (tjocka) och placenta diameter (dia). Placenta område (C), placenta tjocklek (D) och placenta diameter (e) från WT Cpa3+/ + + PBS möss (möss n = 3-5, moderkakor n = 12-22 per dag) och MC / NK-brist Cpa3Cre / + + anti-CD122 möss (möss n = 3-4, moderkakor n = 8-14 per dag) vid gd10, 12, och 14. Resultaten presenteras som enskilda värden för varje enskild moderkakan och medelvärdet. Statistiska skillnader erhölls med ett oparat t-test (* p < 0,05, ** p < 0,01). GD, dräktigheten dag; WT, vilda typ; tjock, tjocklek; dia, diameter; MC, mast cell; NK, natural killer cell. Denna siffra publiceras från en tidigare publikation23. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figure 4
Figur 4: foster och placenta vikt mätningar och feto-placenta index (FPI) vid gd14. Fostervikt (A), placenta vikter (B) och FPIs (C) från avkomma av WT Cpa3+/ + + PBS möss (möss n = 4, fostret/moderkakor n = 35) och MC/NK-brist Cpa3Cre / + + anti-CD122 möss (möss n = 3, fostret/moderkakor n = 28) på gd14. Resultaten presenteras som individuella värdena och medelvärdet. Statistiska skillnader erhölls med oparat t-test (* p < 0,05, ** p < 0,01). GD, dräktigheten dag; WT, vilda typ; MC, mast cell; NK, natural killer cell. Denna siffra publiceras från en tidigare publikation23. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figure 5
Figur 5: analys av livmodern artär hastigheter på gd10. (A) representativa puls-wave doppler bilder från WT Cpa3+/ + + PBS möss visar PSV och EDV. PSV (B), EDV (C) och motstånd index (D) av livmoder artärerna från Cpa3+/ + + PBS (n = 3) och Cpa3Cre / + + anti-CD122 (n = 3) möss vid gd10 av graviditet. Data presenteras som medelvärdet med SEM. statistisk analys utfördes med Mann-Whitney U test. GD, dräktigheten dag; WT, vilda typ; MC, mast cell; NK, natural killer cell; PSV, peak systoliskt hastighet; EDV, slutet diastoliskt hastighet. Denna siffra publiceras från en tidigare publikation23. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figure 6
Figur 6: analys av navelsträngen artär hastigheter på gd14. (A) representant Color Doppler bild av en fetal UmA på gd 14. B representativa puls-wave doppler bilder från Cpa3+/ + + PBS (i) och Cpa3Cre / + + anti-CD122 (ii, iii) möss, visar normala avsluta diastoliska flödet (i), frånvarande slutet diastoliska flödet (ii), eller omvänd slutet diastoliska flödet (iii). PSV (C), EDV (D), systoliskt/diastoliskt ratio (E) och motstånd index (F) på UmAs av foster från Cpa3+/ + + PBS (möss n = 3, UmA mätningar n = 7) och Cpa3Cre / + + anti-CD122 (möss n = 3, UmA mätningar n = 10) möss vid gd14. Data presenteras som medelvärdet med SEM. statistisk analys utfördes med hjälp av ett oparat t-test (* p < 0,05). UmA, navelsträngen artär; GD, dräktigheten dag; PSV, peak systoliskt hastighet; EDV, slutet diastoliskt hastighet. Denna siffra publiceras från en tidigare publikation23. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Använda vårt ultraljud system, visade vi fostertillväxt begränsning i MC/NK-brist mödrar från gd10 på. Dessutom vid gd10 och 12, vi observerade reducerad placenta dimensioner, och vid gd14 frånvaro eller återgång av slutet diastoliska flödet i UmAs av vissa foster uMC/uNK-brist möss. Detta tecken på dålig vaskularisering var associerat med en betydande motstånd index av artärerna som anger Genanalys. Resultaten bekräftar den viktiga rollen som uMCs och uNKs i graviditet och fostrets välbefinnande och förstå loppet av Genanalys.

Protokollet är tillämpligt vid varje dräktighet dag från gd5 och framåt (efter implantation). Det finns några kritiska steg i det protokoll som måste beaktas. För det första, hårborttagning måste göras noggrant. Exempelvis kan Överdriven kontakt med cellulite grädde orsaka hudirritation. Ofullständig hårborttagning leder dock till signal störningar syns som en skugga på skärmen. En annan orsak till en otillräcklig signal (skuggor eller korniga bilder) kan också vara en alltför låg mängd gel placeras mellan mus och ultraljud balken. Vår erfarenhet, snarare är en hög mängd gel (cirka 10 mL) nödvändigt för tillräcklig signal synlighet. Andra, 2D mätningar kan på något sätt vara benägna att felaktighet. För att minimera mätning skillnader mellan implantationer, rekommenderar vi användning av den största tillgängliga storleken när omringar implantation. För exakt moderkakan mätningar placerades alla implantationer på ett sätt som UmA blodflödet kan ses. Dessutom, för att minimera källor av misstag, bör mätningar alltid utföras av samma operatör. För det tredje för puls-wave doppler mätningar är det viktigt att titta på vinkeln mellan riktningen av blodflödet och ultraljud balken. En alltför hög vinkel eller olika vinklar mellan djuren i en enda experiment kan leda till felaktig hastighet mätningar. Uppmärksamhet bör också ägnas risken för repetitiva anesthetization av kvinnlina. För att minska denna risk och stress för mamman, bör ultraljud mätningar göras mer än varannan dag.

Möjligheten till uppföljning foster på relevanta graviditetsdiabetes dagar under hela graviditeten är en stor fördel av ultraljudsteknik. Tvärtemot offra möss i olika graviditet skeden, tekniken ger oss möjlighet att utföra korrekta longitudinella analyser av enskilda dräktiga möss. Trots denna styrka finns det vissa begränsningar i det system som bör övervägas. Foster kan till exempel ändra positioner under graviditet. Därför kan det vara svårt att fördela vissa datauppsättningar som erhålls vid olika tidpunkter att enskilda foster. Dessutom, är ibland det inte möjligt att övervaka vissa foster på senare dräktighet dagar, som i) sin position kan vara svårt att nå med balken, ii) foster kan vara för stor för att passa skärmen eller (iii) de kan vara dolda under tarmen. Beroende på mus stam är hela implantation mätningar möjligt fram till gd12 eller gd14. Senare kan endast enstaka organ av fostren, inklusive hjärtat, mätas och registreras. Hela implantation själv är för stort på senare graviditet stadier att passa in i skärmen.

Till bäst av vår kunskap är ultraljudsundersökningar (tillsammans med magnetisk resonanstomografi och datortomografi) endast tillgänglig metod att analysera de angivna parametrarna under graviditet utan att offra flera djur vid olika graviditetslängd dagar. Detta är särskilt sant för doppler imaging, som är den enda metoden att korrekt värdera blodflödet och riktning (röd = flöde i riktning mot Ultraljudet balk; blå = flöde i motsatt riktning av ultraljud balken). Under puls-wave doppler imaging skickar ultraljud balken ut flera pulser som returneras av vävnaden och ge hastighet information om blod flöde24.

Som ultraljud själv verkar vara ofarliga för modern och fostret, är ultraljudsundersökningar perfekt lämpad för graviditet forskning. Dock kan de metoder som beskrivs i detta manuskript tillämpas på många andra forskningsområden, samt; exempelvis systemet möjliggör också 3D-mätningar, visualisering och kvantifiering av vävnad rörelse över tiden, visualisering av blod flöde i tumörer, identifiering av biomarkörer på de cellen ytbehandlar, blodtrycksmätningar, och ultraljud-styrda injektioner.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Författarna har något att avslöja.

Acknowledgments

Stort tack till företaget Imaging Instrument (särskilt till Magdalena Steiner, Katrin Suppelt och Sandra Meyer) för deras trevliga och snabb support och för att besvara alla våra frågor som rör den Imaging System och dess användning omedelbart och fullständigt. Vi är tacksamma att Prof. Hans-Reimer Rodewald och Dr Thorsten Feyerabend (DKFZ Heidelberg, Tyskland) för att tillhandahålla Cpa3 kolonin. Dessutom, tackar vi Stefanie Langwisch, som var ansvarig för mus kolonierna och som genererade bilderna i figur 1.

Arbetet och den Imaging System har finansierats genom bidrag från Deutsche Forschungsgemeinschafts (DFG) till A.C.Z. (ZE526/6-1 och AZ526/6-2), som var projekt inbäddade i DFG prioriterade program 1394 ”mastceller i hälsa och sjukdom”.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
LEAF anti-Maus CD122 (IL-2Rb) BioLegend 123204 Klon TM-β1; 500 µg
Vevo 2100 System  FujiFilm VisualSonics Inc. Transducer MS550D-0421
Vevo LAB Software  FujiFilm VisualSonics Inc.
Isoflurane Baxter PZN: 6497131
Electrode gel Parker 12_8
Surgical tape 3M Transpore 1527-1
Eye cream Bayer PZN: 1578675
Cotton tipped applicators Raucotupf 11969 100 pieces
Depilatory cream Reckitt Benckiser 2077626
Compresses Nobamed Paul Danz AG 856110 10 x 10 cm
Ultrasound gel Gello GmbH 246000

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Abramowicz, J. S., Kremkau, F. W., Merz, E. Ultraschall in der Geburtshilfe: Kann der Fötus die Ultraschallwelle hören und die Hitze spüren? Ultraschall in der Medizin. 33, (3), Stuttgart, Germany. 215-217 (1980).
  2. Jones, G. Echolocation. Current Biology. 15, (13), R484-R488 (2005).
  3. Simmons, J. A. The sonar receiver of the bat. Annals of the New York Academy of Sciences. 188, 161-174 (1971).
  4. Zala, S. M., Reitschmidt, D., Noll, A., Balazs, P., Penn, D. J. Sex-dependent modulation of ultrasonic vocalizations in house mice (Mus musculus musculus). Public Library of Science ONE. 12, (12), e0188647 (2017).
  5. Wöhr, M., Seffer, D., Schwarting, R. K. W. Studying Socio-Affective Communication in Rats through Playback of Ultrasonic Vocalizations. Current Protocols in Neuroscience. 75, 1-8 (2016).
  6. Hasiniaina, A. F., et al. High frequency/ultrasonic communication in a critically endangered nocturnal primate, Claire's mouse lemur (Microcebus mamiratra). American Journal of Primatology. e22866 (2018).
  7. Yeo, L., Romero, R. Color and power Doppler combined with Fetal Intelligent Navigation Echocardiography (FINE) to evaluate the fetal heart. Ultrasound in Obstetrics & Gynecology. 50, (4), 476-491 (2017).
  8. Teichholz, L. E. Echocardiography in valvular heart disease. Progress in Cardiovascular Diseases. 17, (4), 283-302 (1975).
  9. Zechner, P. M., et al. Lungensonographie in der Akut- und Intensivmedizin. Der Anaesthesist. 61, (7), 608-617 (2012).
  10. Blank, W., Schuler, A. Sonografie der Schilddrüse - Update 2017. Praxis. 106, (12), 631-640 (2017).
  11. Hansen, K. L., Nielsen, M. B., Ewertsen, C. Ultrasonography of the Kidney: A Pictorial Review. Diagnostics. 6, (1), Basel, Switzerland. (2015).
  12. Older, R. A., Watson, L. R. Ultrasound anatomy of the normal male reproductive tract. Journal of Clinical Ultrasound. 24, (8), 389-404 (1996).
  13. Reeves, J. J., Rantanen, N. W., Hauser, M. Transrectal real-time ultrasound scanning of the cow reproductive tract. Theriogenology. 21, (3), 485-494 (1984).
  14. Sharma, M., Somani, P., Sunkara, T. Imaging of gall bladder by endoscopic ultrasound. World Journal of Gastrointestinal Endoscopy. 10, (1), 10-15 (2018).
  15. Weskott, H. -P. Ultraschall in der Diagnostik maligner Lymphome. Der Radiologe. 52, (4), 347-359 (2012).
  16. Shirinifard, A., Thiagarajan, S., Johnson, M. D., Calabrese, C., Sablauer, A. Measuring Absolute Blood Perfusion in Mice Using Dynamic Contrast-Enhanced Ultrasound. Ultrasound in Medicine & Biology. 43, (8), 1628-1638 (2017).
  17. Quaia, E. Assessment of tissue perfusion by contrast-enhanced ultrasound. European Radiology. 21, (3), 604-615 (2011).
  18. Saw, S. N., Poh, Y. W., Chia, D., Biswas, A., Zaini Mattar, C. N., Yap, C. H. Characterization of the hemodynamic wall shear stresses in human umbilical vessels from normal and intrauterine growth restricted pregnancies. Biomechanics and Modeling in Mechanobiology. (2018).
  19. Kessler, J., Rasmussen, S., Godfrey, K., Hanson, M., Kiserud, T. Fetal growth restriction is associated with prioritization of umbilical blood flow to the left hepatic lobe at the expense of the right lobe. Pediatric Research. 66, (1), 113-117 (2009).
  20. Laurin, J., Lingman, G., Marsál, K., Persson, P. H. Fetal blood flow in pregnancies complicated by intrauterine growth retardation. Obstetrics and Gynecology. 69, (6), 895-902 (1987).
  21. Arduini, D., Rizzo, G., Romanini, C., Mancuso, S. Fetal blood flow velocity waveforms as predictors of growth retardation. Obstetrics and Gynecology. 70, (1), 7-10 (1987).
  22. Meyer, N., et al. Chymase-producing cells of the innate immune system are required for decidual vascular remodeling and fetal growth. Scientific Reports. 7, 45106 (2017).
  23. Meyer, N., Schüler, T., Zenclussen, A. C. Simultaneous Ablation of Uterine Natural Killer Cells and Uterine Mast Cells in Mice Leads to Poor Vascularization and Abnormal Doppler Measurements That Compromise Fetal Well-being. Frontiers in Immunology. 8, 1913 (2017).
  24. Evans, D. H., Jensen, J. A., Nielsen, M. B. Ultrasonic color Doppler imaging. Interface Focus. 1, (4), 490-502 (2011).
Hög frekvens ultraljud för analys av foster och placenta utveckling <em>In Vivo</em>
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Meyer, N., Schüler, T., Zenclussen, A. C. High Frequency Ultrasound for the Analysis of Fetal and Placental Development In Vivo. J. Vis. Exp. (141), e58616, doi:10.3791/58616 (2018).More

Meyer, N., Schüler, T., Zenclussen, A. C. High Frequency Ultrasound for the Analysis of Fetal and Placental Development In Vivo. J. Vis. Exp. (141), e58616, doi:10.3791/58616 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter