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Immunology and Infection

利用机器人系统对结肠小鼠样本进行处理和嵌入进行组织学分析

Published: January 7, 2019 doi: 10.3791/58654
Automatic Translation
*1, *2, 1, 1, 1, 3,4, 1, 2
1Pathology Unit, Fondazione IRCCS Cà Granda, Ospedale Maggiore Policlinico, 2Department of Experimental Oncology, European Institute of Oncology, 3Gastroenterology and Endoscopy Unit, Fondazione IRCCS Cà Granda, Ospedale Maggiore Policlinico, 4Department of Pathophysiology and Transplantation, Università degli Studi di Milano
* These authors contributed equally

ERRATUM NOTICE

Summary

与人体标本相比, 小鼠组织处理缺乏标准化, 降低了小鼠组织病理学分析的质量。在这里, 我们提出了一个方案, 以进行组织病理学检查小鼠发炎和非炎症结肠组织, 以显示机器人系统的可行性, 通常用于处理和嵌入人体样本。

Abstract

由于对动物模型的研究, 对人类疾病的了解大大扩展。尽管如此, 对实验模型的组织病理学评价需要像人类样本一样严格。事实上, 得出可靠和准确的结论是关键的影响组织切片准备的质量。在这里, 我们描述了一种小鼠组织组织病理学分析的协议, 该协议在过程中实现了几个自动化步骤, 从最初的准备工作到小鼠样本的石蜡嵌入。通过严格的协议标准化从自动化程序减少方法变量有助于提高小鼠病理分析的整体可靠性。具体而言, 该协议描述了利用自动处理和嵌入机器人系统, 通常用于组织处理和石蜡嵌入人体样本, 以处理肠道炎症的小鼠标本。我们的结论是, 在采用标准化和自动化技术后, 小鼠组织组织病理学检查的可靠性显著提高。

Introduction

在过去的几十年里, 已经开发了几个实验模型来剖析导致人类疾病的致病机制 1,2。为了评估疾病的严重程度, 研究人员必须评估治疗的效果, 并研究细胞学和组织学建筑变化或炎症的数量 3。为了在这些实验模型上进行, 需要进行详细的组织病理学分析, 通常比较小鼠和人体样本 4,5。

此外, 人类样本通常由组织病理学核心设施和经验丰富的人类病理学家通过标准化的组织病理学标准和方法进行处理和评分。相反, 小鼠组织通常是固定的, 嵌入和分析的研究人员有有限的经验, 组织病理学方案。组织病理学检查的质量和可靠性始于高质量组织切片的制备。有几个因素对提高或降低最终分析的质量有重要的作用, 包括固定、宏观切片、处理、石蜡嵌入和样本6、7 的嵌入。

所有这些涉及操作样品的段落都会出现手动错误, 包括手工嵌入样品, 以及在较小程度上进行人工微胶卷切片和染色。目前, 用于组织学评价的小鼠组织制备的整个过程依赖于从实验室到实验室和人工的规程。本研究的目的是实施标准化的自动化协议, 以减少小鼠组织病理学检查中的错误和变异性。

据我们所知, 我们在这里描述了用于全自动组织处理和嵌入的用于小鼠组织组织学评估的第一个协议;这些通常用于病理单位的人体标本的分析。作为该方法可行性的一个实例, 分析了肠道炎症的小鼠模型, 即饮用水中反复给药的硫酸右旋酯钠 (dss) 引起的慢性结肠炎模型8 ,9。这个实验设置非常类似于人类炎症性肠病 (ibd)10 , 因为 dss 治疗的动物表现出肠道炎症的迹象, 如体重减轻, 大便松动或腹泻, 结肠缩短, 以及纤维化8,9,11。正如对人类 ibd 患者所观察到的, dss 治疗会产生复杂的疾病过程。在此背景下, 需要进行详细的组织学评估, 以了解组织结构的深刻改变。因此, 实施所述提高样品制备质量的方案可能有利于研究人员依靠对小鼠实验设置的组织学和免疫组织化学分析的解释。小鼠疾病的实验模型涉及组织结构的改变、细胞组织浸润或不同组织和器官 (肠道、大脑、肝脏、皮肤) 中的炎症, 可以使用增加的质量。组织病理学检查的样品制备。

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Protocol

动物程序得到意大利卫生部的批准 (auth. 127/15, 27/13), 并遵循了欧洲肿瘤学研究所 (机构动物护理和使用委员会) 的动物护理指南

1. 重复 dss 诱导慢性结肠炎

  1. 两组分别对小鼠进行年龄和性别匹配 (治疗 dss 与对照h2o, 每个实验组至少5只小鼠分类)。
  2. 在饮用水中对治疗组进行7天的2.5% 的 dss (40 kda), 并向对照组进行水分处理。
    请注意:这种模式诱发慢性经膜肠道炎症9。
  3. 7天后, 停止 dss 处理, 给两组人供水 1 4天。重复此过程3次。
    注: 重复给药 dss 会引起与人类 ibd 非常相似的结肠黏膜的改变, 即纤维化9。
  4. 根据机构 iacuc 授权的程序, 即通过吸入二氧化碳来牺牲小鼠.
  5. 用手术刀打开老鼠的腹部和腹膜。
    请注意:建议使用无菌, 但不是严格要求。
  6. 用钳子和推子将结肠从小肠分开。用钳子和钳子把结肠吃了。
    请注意:结肠长度测量 (图 1a) 是一种确定是否发生在 dss 治疗小鼠的结肠炎的方法。
  7. 用10毫升冷的1x 磷酸盐缓冲碱 (pbs) 在培养皿中冲洗结肠, 然后轻轻按压以去除粪便材料。

2. 小鼠组织固定

  1. 将每个小鼠结肠标本浸泡在10毫升的10% 中性缓冲福尔马林 (nbf) 在 rt (室温)。
    请注意:建议使用无菌, 但不是严格要求。
  2. 在 rt 将组织固定18-24小时。

3. 结肠切片和组织准备

  1. 用小推拿器从 nbf 容器中取出固定组织, 放入培养皿中。用小子把结肠放在切片工作板上。
  2. 用无菌手术刀将冒号切成碎片 (0.2 厘米至0.3 厘米长)。为了不超过盒式磁带的厚度, 此片段长度是最佳的。
  3. 拿起一个结肠段与小推子 (图 2a)。将一个冒号段插入定向石蜡用小推拿包盒的塑料凸出尖端 (图 2b)。
  4. 重复操作 (3.2–3.3), 每盒磁带增加3个冒号段。避免将节段插入相邻的凸起提示, 以最大限度地减少组织的重叠
  5. 小心地推四个边 (图 2c), 将盒式磁带紧紧地合上。避免挤压组织, 以防止组织损伤。
  6. 将网格插入塑料支撑架。标记支持框架以标识示例。对每个生物样本重复此操作。

4. 组织加工

  1. 按下电源按钮打开自动处理器 (图 3 a, 3A)。
  2. 加热 1小时, 确保石蜡融化。通过观察专用图标的存在, 等待仪器确认石蜡完全融化 (图 3c)。
  3. 将每个定向盒式磁带 (包含组织标本) 手动插入自动处理器提供的金属篮 (图 3d)。将盒式磁带垂直放置, 将其排列在靠近一个的地方, 以优化篮筐的占用率。
  4. 关闭金属篮子 (图 3e)。
  5. 打开蒸馏器的盖子 (图 3f)。反驳是将篮子插入机器的地方。将购物篮插入处理器的专用外壳 (图 3g)。合上蒸馏器的盖子 (图 3h)。
  6. 使用仪表计算机上的触摸屏定义工作协议 (图 3i)。根据表 1提供的方案选择要实现的解决方案、时间和温度的顺序。
  7. 通过单击专用计算机图标 (图 3j), 将在包含购物篮的蒸馏器上运行的协议分配给您。通过单击"开始" 按钮启动协议 (图 3l)。
  8. 通过观察专用图标的存在和听到来自机器的报警音, 等待仪器确认协议的结束。
  9. 打开反驳盖。从处理器中取出购物篮 (图 3m)。

5. 组织嵌入

  1. 按下电源按钮打开自动嵌入器 (图 4 a)。
  2. 加热 1小时, 确保石蜡融化。通过观察仪器内部温度计指示的石蜡浴温度, 等待仪器确认石蜡完全熔化。
  3. 手动将所有已处理过的盒式磁带从处理器篮转移到嵌入式机架。每个机架最多可以包含32盒磁带。(图 4b, 4B)。
  4. 打开主盖盖 (图 4c、 4C、4C)。
  5. 使用仪表计算机上的触摸屏向机器人系统发出正在插入机架的信号 (图 4f)。
  6. 打开进气盖 (图 4g)。将机架插入进气口。每个嵌入式器最多可以同时包含4个机架 (图 4h, 4H)。关闭进气盖 (图 4j)。
  7. 根据表 2 (图 4k), 使用仪表计算机上的触摸屏开始嵌入过程。
    注: 每个32个盒式磁带的机架需要45分钟才能嵌入。
  8. 通过观察专用图标的存在 (图 4l), 等待仪器确认协议的结束。
  9. 卸下出口机架 (图 4m)。合上主盖盖。
  10. 从机架中取出嵌入的块 (包含方向网格)。将嵌入的方块转移到存储纸板箱中。

6. 千分尺分割

  1. 打开微孔的冷却板。设置-8 到-10°c 之间的温度。
  2. 打开含有2升蒸馏水的微晶的恒温水浴。将水浴温度设置在42–45°c 之间。
  3. 将石蜡嵌入块放在冷却板上。等待至少 5分钟, 让方块冷却。
  4. 从冷却板上取下一个方块, 并将其放入微孔块支架中。
  5. 将微孔切割厚度设置为 10μm. 在10微米的厚度下切割 6次, 将块修剪。
  6. 将微晶的厚度设置从10μm 改为 3μm, 为血液中氧乙烯和 eosin (h & e) 染色切割一个3μm 的部分。
  7. 用小刷子收集3微米的部分。将3μm 部分放入水浴中, 小心地放置在水面上, 以减少组织皱纹。在一个玻璃滑梯上收集恒温控制的水浴中的组织部分。
    1. 如果需要, 请剪切其他部分。
  8. 通过编写样品标识来标记玻璃滑块。
  9. 将幻灯片放入37°c 的烤箱中至少10分钟。
  10. 将玻璃滑块放入机架中进行即时分析或放入储物箱中。

7. 血红素和 eosin (h & e) 染色

  1. 按下电源按钮, 打开自动着色器。通过观察仪器监视器上加载杆的变化, 允许机器人手臂的初始化。
  2. 将玻璃滑块插入污渍架, 垂直插入多达30张幻灯片。
  3. 用适当的射频识别 (rfid) 塑料标签标记机架。rfid 标签是一种识别加载到着色器计算机中的正确染色协议的系统。
  4. 将机架插入污渍。允许计算机根据 rfid 标签的识别自动加载和启动染色协议。
    请注意:h & e 染色的方法见表 3.

8. 免疫组织化学染色

  1. 进行免疫组织化学和马罗里三色体染色, 如前面所述7。

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Representative Results

在饮用水中反复给药 dss 引起的实验性慢性结肠炎是一种与人类 ibd8,9非常相似的肠道炎症小鼠模型。图 1描述了 dss 治疗的效果, 包括结肠缩短 (图 1a), 这是一个广泛使用的参数, 用于评分 dss 引起的炎症的存在, 以及包括cxcl10 在内的促炎症基因的结肠表达, tnf和mcp-1 (图 1b)。dss 治疗可大大增强炎症细胞的浸润, 显示细胞荧光法分析的肠道自身免疫反应的吸收 (图 1c)。

图 2描述了结肠组织是如何被分割并插入定向盒式磁带中的。这些盒式磁带设计为包含带有挤压尖端的网格, 允许垂直插入组织并具有适当的方向, 即内部有流明 , 墙体外部 (图 2a、 2A、 2A)).一旦盒式磁带被关闭, 组织方向就会被网格保存, 这与传统的组织学盒式磁带 (图 2b) 相反。

组织处理使用自动处理器执行 (图 3-3m和表 1) , 而嵌入过程使用自动嵌入器执行 (图 4a-4m和表 2).在后一种仪器中, 机器人收集磁带并分配正确数量的石蜡。最后, 通过使用微孔, 从每个石蜡块上剪下部分。然后准备好幻灯片进行进一步分析。

图 5描述了自动 h & e 染色的主要段落 (图 5a-5e和表 3), 以及 h & e 染色后的幻灯片显示方式 (图 5A).图 6和7显示了自动化处理和嵌入协议的实施如何显著提高小鼠结肠标本组织病理学分析的质量。比较了未经处理的小鼠 (图 6a) 中使用的自动协议制备的样品的 h & e 污渍 (图 6A).通过评估肠道黏膜中不同参数的变化来评估组织病理学评分, 包括炎症细胞浸润、上皮改变和黏膜结构的变化, 如表 4。图 6c显示了人工加工并包含在传统盒式磁带中的结肠组织的有代表性的 h & e 染色。在图 7中, cd20 的 ihc 染色和结肠中的 mallory trichrome 染色 8, 9 进一步证实了通过自动化仪器进行的小鼠组织制备和嵌入的质量未处理的部分 (图 7a, 7A) 和 dss 处理的小鼠 (图 7A, 7A)。

图 8描述了此方法的实际相关性。同样的结肠样本是手动或通过自动方法处理和嵌入的。每个样品 (控制或 dss 处理) 被切割成2个相等的部分, 并与手册或自动方法并行处理。然后进行 h & e 染色, 并对所有病理参数进行完整的显微评价, 以解决黏膜结构、粒度、免疫细胞浸润、黏膜厚度、腺体正常发生的变化在肠道炎症过程中观察到, 对每个样本进行了人工和自动协议评估 (图 8a 和表 4)。使用自动协议制备样品, 一致可以评估比人工方法更高比例的组织学参数。此外, 还对不同的组织学参数进行了单独分析 (图 8b)。采用自动法制备样品, 对结构和基底浸润评价有积极影响, 特别是未经处理的小鼠。

目前用于人类组织病理学分析的自动样品处理和嵌入方法可成功地应用于小鼠标本的分析。采用自动化方法生成了高质量的标本, 证明了在评价小鼠结肠组织的结构和基础免疫浸润方面优于人工方法。

Figure 1
图 1: 慢性肠道炎症评估.(a) 结肠长度测量。(b) 在 dss 处理的小鼠 (黑条、ncs12)和未经处理的小鼠 (白条, nacs6) 中, 促炎症基因 (cxcl10、tnf、mcp-1) 的结肠表达。(c) dss 处理的结肠层内膜自体细胞 (闭合符号, n示 12) 和未经处理的小鼠 (开放符号, ntac 6) 的免疫表型。CD11b+Ly6G+ 中性粒细胞, CD11b+F4/80+ 巨噬细胞 (左面板), cd4 + 和 CD8+T 细胞 (右面板) 浸润在控制 (开放符号, n示 10) 和 dss 处理的小鼠 (封闭符号, n示 10)。利用威尔科克森匹配对签名等级 t 检验计算统计意义。* p ≤0.05 * * p ≤0.01。报告平均值±sem。请点击这里查看此图的较大版本.

Figure 2
图 2: 样品制备的说明.(a) 组织制备所需的仪器和定向盒式磁带的图像, 由外部盒式磁带 (白色) 和带有挤压方向提示的内部网格组成。(B、C)在 (b) 和 (c) 网格关闭之前和 (c) 之后, 将小鼠冒号插入盒式磁带的内部网格中。在面板 b 中描绘了朝下的盒式磁带 (左) 或传统的盒式磁带 (右)。请点击这里查看此图的较大版本.

Figure 3
图 3: 自动处理的说明.(a、b) 自动化处理器。(c) 描述正确的石蜡熔融温度的图标。(D, E)将盒式磁带插入金属篮 (d) 及其闭合 (e)。(F、G、H)将金属篮插入蒸馏器中。(I, J, K)处理协议的选择。(l) 协议的运行。(m) 从反驳中取出篮子。请点击这里查看此图的较大版本.

Figure 4
图 4: 自动嵌入的说明. (a) 自动嵌入器的图片。(B、C)将盒式磁带插入机架中。(D, E)盖的开口 (d) 和关闭 (e)。(f) 向机器发出机架存在的信号。(G, H)将机架插入进气口外壳。(i, j) 关闭盖子。(k) 嵌入协议的启动。(l) 打开出口外壳盖。(m) 从出口外壳中拆除机架。请点击这里查看此图的较大版本.

Figure 5
图 5: 自动 h & e 污渍的说明.(a) 幻灯片支架的图片。(B、C)将滑块插入机器中。(d) 关闭机器。(e) 开始染色协议。(f) 微孔切割和 h & e 染色后的幻灯片的典型图像。右侧面板, h & e 染色, 描绘样品的方向。请点击这里查看此图的较大版本.

Figure 6
图 6:h & e 色着色的结肠样品形成未经处理和 dss 处理的小鼠.h & e 染色未经处理 (a) 和 dss 处理 (b) 样品用自动 (a, b) 或手动 (c) 方法制备 (处理、嵌入、染色)。刻度条 = 100 纳米。请点击这里查看此图的较大版本.

Figure 7
图 7:mallory trichrome (a, b) 和 ihc 对未经治疗的 cd20 + 细胞 (c, d) 和 dss (b, d) 小鼠的污渍.马罗礼染色: 蓝色, 胶原蛋白, 深粉色, 细胞核, 深红色, 细胞质。刻度条 = 100 纳米。请点击这里查看此图的较大版本.

Figure 8
图 8: 组织病理学分析与手动和自动协议的比较.(a) 在用手册 (白条) 或自动方法 (紫色条) 编制的所有部分中可评估的组织病理学参数总数。(b) 用手册 (白条) 或自动方法 (紫色条) 制备的样品中, 未处理的 (普通条) 或经过 dotted 处理的小鼠 (虚线) 中指示的参数的百分比。利用威尔科克森匹配对签名等级 t 检验计算统计意义。* p < 0.05;* *p < 0.005。报告平均值±sem。请点击这里查看此图的较大版本.

试剂 时间 (分钟) 温度 (°c) 压力
nbf 1 Rt 环境
乙醇95% 1 Rt 环境
乙醇95% 1 Rt 环境
乙醇95% 1 Rt 环境
绝对乙醇 1 45 环境
绝对乙醇 11 45 环境
绝对乙醇 30 Rt 环境
二甲苯 1 Rt 环境
二甲苯 1 45 环境
二甲苯 28 45 环境
石蜡 5 65 真空

表 1: 自动组织处理协议。

每个盒式磁带的动作由机器人完美的
从机架上取下一个盒式磁带
识别盒式磁带
预加热模具
将盒式磁带放在预热模具上
为盒式磁带分配石蜡量
冷却模具
让石蜡凝固
从模具中取出固化的石蜡块
将块显示为高质量的传感器
将石蜡块放置在输出门

表 2: 自动嵌入协议。

类别 标准 定义 得分值
炎症细胞浸润 严重程度(hpf 浸润的原生层白细胞密度) 无渗透 0
最低急性 (lt;10%) 0.25
轻度慢性 (10-25, 分散中性粒细胞) 0。5
中度慢性 (26–50%) 0.75
标记 (gt;51%, 密集渗透) 1
范围(白细胞浸润的膨胀) 粘膜 0。5
黏膜和黏膜下 0.75
上皮变化 增生症(增加上皮细胞数量在纵向墓穴, 可看见作为隐窝伸长) 无增生 0
最低 (lt;25%) 0.25
温和 (26–35%) 0。5
中等 (36-50%, 在隐窝上皮的上三分之一有丝分裂) 0.75
标记 (& gt;51%, 在远离隐窝基地的隐窝上皮有丝分裂) 1
小块细胞丢失(减少杯状细胞数相对于基线杯状细胞数每个密码) 无损失 0
最低 (lt;25%) 0.25
温和 (26–35%) 0。5
中等 (36–50%) 0.75
标记 (gt;51%) 1
黏膜建筑 溃疡(上皮缺损超出了粘液瘤) 无溃疡 0
溃疡 0.25
造粒组织(结缔组织修复与新的毛细血管, 周围浸润细胞, 肥大的区域) 无肉芽组织 0
造粒组织 0.25
黏膜厚度和隐窝深度 无增厚 0
增 厚 0。5
腺体稀疏 无稀疏性 0
稀疏 0。5
发育 不良 无发育不良 0
发育 不良 0。5
最大成绩 6

表 3: 自动染色协议。

每张幻灯片的着色器所吸引的动作 试剂 时间 (s) 温度 (°c)
ess留住 180元 60
ess留住 180元 60
德法菲泽 二甲苯 1120 Rt
德法菲泽 二甲苯 1120 Rt
水合物 乙醇96% 1120 Rt
水合物 乙醇96% 1120 Rt
洗 蒸馏 wtaer 240 Rt
染色血红素 carazzi 的 hematoxylin 540 Rt
冲洗 自来水 360 Rt
污渍 eosin eosin y1% aqueos 解决方案 60 Rt
冲洗 自来水 1120 Rt
脱水 乙醇96% 20 Rt
脱水 乙醇96% 20 Rt
脱水 绝对乙醇 15 Rt
脱水 绝对乙醇 15 Rt
清楚 二甲苯 30 Rt
清楚 二甲苯 30 Rt

表 4: 肠道炎症评价评分方案。

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Discussion

我们在准备小鼠组织的过程中使用不同的自动化步骤进行组织病理学分析。该方案旨在提供技术提示, 以提高整个过程的重现性和标准化, 从而提高最终组织病理学评价的整体质量。我们实施了制备和嵌入组织的自动化仪器和方法, 这些仪器和方法通常用于病理核心设施中, 用于人体标本的研究。

为了证明这种方法的潜在适用性, 我们选择了一种慢性小鼠肠道炎症实验设置, 称为 dss 诱导的慢性结肠炎模型。这种情况类似于在 ibd 患者中观察到的复杂疾病过程, 需要详细的组织学评估, 以调查慢性肠道炎症后组织结构的深刻变化。总之, 这些过程的组织学评价可能会大大受益于样品制备质量的提高。需要注意的是, 该方案可应用于其他小鼠组织 (即脾脏、淋巴结、肝脏、大脑), 唯一的区别是没有腔的组织不需要定向盒式磁带。

最重要的观察是, 由于使用带网格的盒式磁带和消除了嵌入的盒式磁带重新打开 (这是手动过程中通常执行的步骤), 减少了手动错误 (即样品的方向)协议), 有力地增强了分析的整体重现性。使用此处描述的协议, 只有在准备开始时, 当实验者将组织插入定向盒式磁带时, 才会对样品进行操作。一旦关闭, 盒式磁带永远不会重新打开, 从而确保保持正确的方向, 减少手动错误3,11。这两个关键步骤的标准化提高了随后分析的整体质量, 减少了丢失或无法评估的样本数量, 这些问题既与盒式磁带的重新打开有关, 也与样品的错误方向有关3 ,11。

我们还通过实施自动协议, 成功地评估了一个复杂的生物事件, 如纤维化 (图 7), 这在小鼠实验肠道炎症模型中经常被低估。在协议的设置过程中, 我们严格规范了固定时间等技术细节, 我们意识到固定时间不得超过 2 4小时, 以避免组织改变。通过这样做, 我们可以保持随后免疫组织化学分析的质量。

自动方法改进了与组织结构改变相关的参数的评估, 特别是在未经治疗的小鼠中。事实上, 正确的病理组织与健康对应的比较是至关重要的最终评估的实验模型3。

关于组织处理, 我们测试了在实验室可用的自动化处理器中运行的不同协议。这里描述的协议给出了健全和高度一致的结果。我们还实现了协议的时间长度。由于小鼠样本的大小可与人类小型生物标本相媲美, 较短的处理方案足以处理小鼠 (肠道, 在这种情况下) 组织。最后, 整个自动化过程减少了总实验时间。从加工开始到微胶卷切割和切片制备, 我们计算出所需的总时间为5小时。相反, 根据操作人员的技术能力, 手动完成相同的协议可能需要两倍以上的时间, 特别是在处理和嵌入过程中。这项技术的一个限制是, 它需要在实验室中执行自动处理器和嵌入式处理器。

总之, 我们认为, 这些自动化协议的实施可以极大地改善翻译研究人员处理人类疾病的小鼠实验模型的工作。

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Disclosures

作者没有什么可透露的。

Acknowledgments

我们感谢米兰 irccs 警察医院病理学系的技术支持和 ieo 动物设施在畜牧业方面的援助。

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Absolute Ethanol anhydrous Carlo Erba 414605 reagent
Absolute ETOH Honeywell 02860-1L reagent
Aluminium Potassium Sulfate SIGMA A6435 reagent
Aniline Blue SIGMA 415049 reagent
carbol Fuchsin SIGMA C4165 reagent
CD11b (clone M1/70) TONBO biosciences 35-0112-U100 antibody
CD20 IHC (clone SA275A11) Biolegend 150403 antibody
CD3 (17A2) TONBO biosciences 35-0032-U100 antibody
CD4 (GK1.5) BD Biosciences 552051 antibody
CD45.2 (clone 104) BioLegend 109837 antibody
CD8 (53-6.7) BD Biosciences 553031 antibody
Citrate Buffer pH 6 10x SIGMA C9999 reagent
Dab Vector Laboratories SK-4100 reagent
DPBS 1x Microgem L0615-500 reagent
DSS TdB Consultancy DB001 reagent
EDTA SIGMA E9884 reagent
EnVision Flex Peroxidase-Blocking Reagent DAKO compreso in GV80011-2
EnVision Flex Substrate DAKO compreso in GV80011-2
EnVision Flex/HRP DAKO compreso in GV80011-2
EnVision Flex+ Rat Linker DAKO compreso in GV80011-2
Eosin VWR 1.09844 reagent
F4/80 (clone BM8) BioLegend 123108 antibody
Formalin PanReac 2,529,311,215 reagent
glacial acetic acid SIGMA 71251 reagent
Goat-anti-Rat-HRP Agilent DAKO P0448 antibody
Haematoxylin DIAPATH C0303 reagent
LEICA Rotary microtome (RM2255) Leica RM2255 equipment
Ly6g (clone 1A8) BD Biosciences 551459 antibody
Mercury II Oxide SIGMA 203793 reagent
Omnis Clearify Clearing Agent DAKO CACLEGAL reagent
Omnis EnVision Flex TRS DAKO GV80011-2 reagent
Orange G SIGMA O3756 reagent
Paraffin Sakura 7052 reagent
Peloris LEICA equipment
Percoll SIGMA P4937 reagent
RPMI 1640 without L-Glutamine Microgem L0501-500 reagent
STS020 Leica equipment
Tissue-Teck Paraform Sectionable Cassette SAKURA 7022 equipment
Tissue-Tek Automated paraffin embedder Sakura equipment
Xylene J.T.Baker 8080.1000 reagent

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References

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  11. Cribiù, F. M., Burrello, C., et al. Implementation of an automated inclusion system for the histological analysis of murine tissue samples: A feasibility study in DSS-induced chronic colitis. European Journal of Inflammation. 16, 1-12 (2018).

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免疫学与感染 第143期 组织病理学分析 小鼠模型 自动化 嵌入系统 标准化 小鼠肠道标本

Erratum

Formal Correction: Erratum: Using Robotic Systems to Process and Embed Colonic Murine Samples for Histological Analyses
Posted by JoVE Editors on 02/03/2019. Citeable Link.

An erratum was issued for: Using Robotic Systems to Process and Embed Colonic Murine Samples for Histological Analyses.  An author affiliation was updated.

The affiliation for Claudia Burrello and Federica Facciotti was updated from:

Department of Experimental Oncology, European Institute of Oncology

to:

Department of Experimental Oncology, IEO, European Institute of Oncology IRCCS

利用机器人系统对结肠小鼠样本进行处理和嵌入进行组织学分析
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Cribiù, F. M., Burrello, C.,… More

Cribiù, F. M., Burrello, C., Tacchi, R., Boggio, F., Ricca, D., Caprioli, F., Ferrero, S., Facciotti, F. Using Robotic Systems to Process and Embed Colonic Murine Samples for Histological Analyses. J. Vis. Exp. (143), e58654, doi:10.3791/58654 (2019).

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