Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Immunology and Infection

Effekterna av smak signalering Protein Abolishment på Gut Inflammation i en musmodell för inflammatorisk tarmsjukdom sjukdom

Published: November 9, 2018 doi: 10.3791/58668
* These authors contributed equally

Summary

Här presenterar vi ett protokoll för att undersöka effekten av upphävandet av gustation-relaterade gener på immunsvaret hos en dextran sulfat natrium (DSS)-inducerad musmodell för inflammatorisk tarmsjukdom sjukdom (IBD).

Abstract

Inflammatorisk tarmsjukdom (IBD) är en av de immunrelaterade gastrointestinala störningar, inklusive ulcerös kolit och Crohns sjukdom, som påverkar livskvaliteten för miljontals människor världen över. IBD symtom är buksmärtor, diarré och rektal blödning, vilket kan resultera från interaktioner mellan tarmfloran, matdelar, tarmepitelceller och immunceller. Det är särskilt viktigt att bedöma hur varje nyckel gen uttryckt i tarmens epitelceller och immun cellerna påverkar inflammation i tjocktarmen. G-proteinkopplade smak receptorer, inklusive G protein subenhet α-gustducin och andra signalering proteiner, har hittats i tarmen. Här, vi använder α-gustducin som representant och beskriva en dextran sulfat natrium (DSS)-inducerad IBD-modell för att utvärdera effekten av luktintrycket genmutationer på gut slemhinnor immunitet och inflammation. Denna metod kombinerar genteknik knockout med kemiskt inducerad IBD-modellen och därmed kan användas för att bedöma resultatet av luktintrycket gen upphävda samt andra gener som kan andas eller dämpa immunsvaret DSS-inducerad i tjocktarmen. Muterade möss administreras med DSS för en viss period under vilken deras kroppsvikt, pall och rektal blödning övervakas och registreras. Vid olika tidpunkter under administration, vissa möss är euthanized, sedan de storlekar och vikter för sin mjälte och kolon mäts och gut vävnader samlas in och bearbetas för histologiska och gen uttryck analyser. Data visar att α-gustducin knockout resultaten i överdriven viktminskning, diarré, intestinal blödning, vävnadsskada och inflammation vs. vildtyps-möss. Eftersom svårighetsgraden av inducerad inflammation påverkas av mus stammar, boendemiljö och kost, är optimering av DSS koncentration och administration varaktighet i en pilot experiment särskilt viktigt. Genom att justera dessa faktorer, kan denna metod användas för att bedöma både anti - och pro-inflammatoriska effekter.

Introduction

De två stora formerna av inflammatorisk tarmsjukdom (IBD), Crohns sjukdom (CD) och ulcerös kolit (UC) kännetecknas av kronisk remitterande eller progressiv inflammatoriska tillstånd i tarmen med multifaktoriell etiologi1,2 . Utvecklingen av IBD beror på genetiska samt vissa miljöfaktorer som kost, användning av antibiotika, och ännu viktigare, patogena infektioner. De etiologi och reglerande molekylära mekanismer bakom IBD är dock fortfarande oklart. Talrika kemiskt inducerad IBD djurmodeller har därför konstruerats och tillämpas för att avgränsa den patogenes och reglerande mekanismer och utvärdera effektiviteten av mänskliga therapeutics3.

Smak receptorer är G-proteinkopplade receptorer (varandra) och klassificeras som två typer: typ I (T1Rs) och typ II (T2Rs) som upptäcker sweet, umami och bitter föreningar. Smak signalering cascades initieras av tastant binder till T1Rs eller T2Rs, aktivera heterotrimeric G proteiner bestående av α-gustducin och en Gβγ dimer och leder till frisättning av Gβγ subunitsna. Den Gβγ delen stimulerar i sin tur nedströms effektor enzymet fosfolipas C-β2 (PLC-β2). Aktiverade PLC-β2 sedan hydrolyserar fosfatidylinositol-4,5-bisphosphate i två intracellulära sekundära budbärare [inositol-1,4,5-trisphosphate (IP-3) och diglyceridolja] och IP-3 binder till och öppna dess kanal-receptor IP3 R3, släppa kalciumjoner från endoplasmatiska retiklet. Detta leder så småningom till öppnandet av transient receptor potential jonkanal Trpm5 och frisättning av signalsubstansen ATP på luktintrycket nerver4,5,6,7. Men är signalvägar som salt och syrlig smak olika och oberoende från sweet, umami och bittra smaker8. I tillägg finns de komponenter av smak varandra och nedströms proteiner i olika extra orala vävnader. Nyligen genomförda studier indikerade att α-gustducin, befinns huvudkomponenten i smak signalering, uttryckas i tarmslemhinnan. Ytterligare studier behövs för att förstå funktionerna i dessa smak signalering komponenter i extra orala vävnader9,10.

Den metod som beskrivs här används för att karakterisera funktioner av luktintrycket signalering proteinerna uttrycks i extra orala vävnader. Vi kombinerar en transgen mus linje utvecklats för avgränsar signalering cascades i smaklökar med kemiskt inducerad kolit modellen. Till stor del på grund av dess processuella enkelhet och patologiska likheter med människans ulcerös kolit, dextran sulfat natrium (DSS)-inducerad IBD modell har använts mest bland olika kemiskt inducerad kolit modeller11. I denna studie använde vi α-gustducin-brist möss som en representativ mus linje för att avslöja nya funktioner av α-gustducin i tarmen slemhinnor immunitet och inflammation genom att 1) analysera morfologiska förändringar i vävnaden och 2) testmetoder skillnader i uttrycket av cytokiner som relaterade till inflammation i tjocktarmen. Denna metod kan användas för att kvantitativt och kvalitativt bestämma luktintrycket signalering proteiner (och andra proteiner som uttrycks i tarmen) bidrag till vävnadsskador och tarminflammation, när genetiskt modifierade mus linjer för gener intresse finns. Fördelarna med denna metod möjliggör användare att få integrerade data som härrör från åtgärder i både kemiska DSS och brist av genen av intresse. Denna metod kan förbättras ytterligare för att öka dess känslighet och avslöjar subtila intestinal förändringar på cellulär och molekylär nivå.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Alla försök med möss var granskas och godkänns av institutionella djur vård och användning kommittéer av Zhejiang University. Det rekommenderas att bära lämplig personlig skyddsutrustning innan du utför detta protokoll.

1. beredning av möss och DSS

  1. Hålla de knockoutmöss (α-gustducin- / -) och ålder-, genus- och vikt-matchade vildtyp kroppskontroll (α-gustducin+/ +) C57BL/6 möss individuellt i rena burar.
    Obs: Knockoutmöss har varit backcrossed med C57BL/6 möss för över 20 generationer och har en nästan 100% C57BL/6 genetiska bakgrund.
  2. Lös upp 30 g dextran sulfat natrium (DSS) pulver i 1 L Ånghärdad vatten. Blanda tills lösningen blir klar att säkerställa att den slutliga arbetande koncentrationen är 3% (w/v).
    Obs: DSS lösningen kan förvaras i rumstemperatur i upp till 1 vecka eller vid 4 ° C fram till användning.

2. induktion och utvärdering av DSS kolit hos möss

  1. Väga och registrera varje musens initiala kroppsvikt. Placera mössen individuellt i standard plast burar och etiketten burar.
  2. Ersätta reguljära dricksvatten med 3% DSS lösning för sammanlagt 7 dagar som båda grupper av möss har tillgång ad libitum.
  3. Mäta musens kroppsvikt, registrera DSS lösning förbrukningen, och samla in och undersöka avföringen varje mus dagligen under DSS administration. Observera svårighetsgraden av diarré och rektal blödning och konvertera detta till DSS-inducerad sjukdom index12.
  4. Under experimentet beräknas procentandelen av viktminskning jämfört med ursprungliga vikt och indexet sjukdom för att utvärdera symtom på kolit.
    Obs: Indexet sjukdom görs genom att kombinera observationer av diarré och rektal blödning och definieras enligt följande: 0 (normal avföring, inget blod), 1 (mjuk avföring, inget blod), 2 (mjuk avföring, lite blod), 3 (mycket mjuk avföring, blygsamma blödning), och 4 (vattnig avföring, signifikant blödning)12. Indexet sjukdom analyseras dagligen för varje mus.
  5. I slutet av 7-dagars DSS, offra möss av cervikal dislokation och fortsätt med de återstående experiment.

3. beredning av vävnadsprover

  1. Placera musen i ryggläge och rengör huden på buken med 70% etanol. Gör en 3 cm lång mittlinjen snitt i buken med en liten sax att exponera bukhålan.
  2. Använd ett par pincett att noga skilja mjälte från andra vävnader, sedan bort mjälten och mäta dess storlek.
  3. Identifiera och lyfta tjocktarmen med pincett och separera det från omgivande krös. Dra ut hela tjocktarmen tills blindtarmen och ändtarmen är synliga.
  4. Isolera tjocktarmen genom transecting det colonocecal marginal och djupt i bäckenet som gratis proximala och distala kolon, respektive. Sedan, mät och anteckna längden på isolerade kolon. Var noga med att inte skada colonic vävnaden under förfarandet dissekera.
  5. Spola tjocktarmen med 10 mL iskallt fosfatbuffrad saltlösning (PBS) med en 10 mL spruta försedd med en sondmatning nål ta bort avföring och blod tills eluatet är helt klart.
  6. För histologiska identifiering, dela vävnadsproverna lika i tre delar: proximala, mellersta, och distala. Sedan fixa vävnaden med 4% PARAFORMALDEHYD (PFA) över natten vid 4 ° C.
  7. För analys av cytokin uttryck, frysa hela tjocktarmen snabbt med flytande kväve och förvara den vid-80 ° C fram till användning.

4. histologisk bedömning av svårighetsgraden av DSS-inducerad kolit

  1. Hematoxylin och eosin (H & E) färgning
    1. Efter fixering, dränka vävnaden i en lösning av 30% sackaros i 1 x PBS över natten i en 15 mL tub till cryoprotect proverna.
    2. Bädda in vävnaden i optimal skärtemperatur (ULT) sammansatta och placera den vid-20 ° C tills ULT hårdnar.
    3. Överföra OCT blocket som innehöll vävnaden som en kryostaten, ange tjocklek ratten i kryostaten till 12 µm, och skiva och samla 12 µm tjock frusna snitt.
    4. Värm de insamlade vävnadssnitt från en kryostat vid 65 ° C i 20 min på en värmeplatta.
    5. Tvätta i avsnitt kortfattat i destillerat vatten. Färga dem med hematoxylin färgning lösning för 5 min och skölj därefter med rinnande vatten i 5 min.
    6. Differentiera avsnitten med 0,5% saltsyra-etanol i 30 s och skölj dem i rinnande kranvatten för 1 min. Sedan utföra tvätten i 1 x PBS för 1 min och därefter skölj med rinnande vatten i 5 min.
    7. Utföra tvättning av avsnitten vävnad i 70%, 75%, 80% och 95% alkohol, var och en för 10 s. motfärg i eosin färgning lösning i 2 min.
    8. Utföra uttorkning genom 95% alkohol och 2 förändringar i absolut alkohol för 5 min varje gång. Tydlig i 2 ändringar av xylen i 5 min.
    9. Poäng vävnadsskada i proximala, mellersta, och distala tjocktarmen av varje mus för både genen knockout och vildtyps-grupper baserat på resultaten av ovanstående H & E färgningen.
      Obs: Indexet sjukdom är en kombinerad värdering av epitelial skador och inflammation i slemhinna, submucosa, muscularis och serosa regionerna, som definieras enligt följande: 0 (ingen vävnadsskada och inflammation), 1 (focal vävnadsskada och inflammation), 2 (fläckvis vävnadsskada och inflammation), och 3 (diffus vävnadsskada och inflammation)12,13. Tre poäng per mus för proximala, mellersta, och distala delar av tjocktarmen summeras sedan för att få en totalpoäng för varje djur. De genomsnittliga poängen för varje grupp beräknas sedan.
  2. Immunohistokemi14
    1. Värm de insamlade vävnadssnitt från en kryostat vid 65 ° C i 20 min på en värmeplatta. Tvätta avsnitten i 1 x PBS 3 gånger, för 10 min varje. Inkubera i vävnaden avsnitt i 3% väteperoxid i ca 10 min att eliminera endogena peroxidas. Tvätta i avsnitt 3 gånger. Blockera vävnader med blockerande buffert (3% BSA, 0,3% icke-joniskt rengöringsmedel, 2% get serum, 0,1% natriumazid i 1 x PBS) i rumstemperatur i 1 h eller mer.
    2. Ersätta det blockerande buffert med en lösning innehållande följande immunceller typspecifika primära antikroppar: CD45 för leukocyter, CD3 för T-celler, B220 för B-celler, CD11b för makrofager, och Ly6G för neutrofiler. Inkubera vid 4 ° C över natten.
    3. Ta bort de primära antikropparna från vävnadssnitt genom aspiration. Tvätta avsnitten med 1 x PBS 3 gånger, för 10 min varje. Inkubera i avsnitt med biotinylerade sekundär antikropp följt av inkubation med streptividin-HRP komplexet vid rumstemperatur.
    4. Inkubera i avsnitt 3, 3'-diaminobenziding (DAB) lösning att utveckla en ljus - eller mörkbrun färg och visualisera immunreaktiva cellerna.
    5. Counterstain avsnitten med hematoxylin och 0,3% (v/v) utspädd ammoniak. Ta ljusa fält bilder vid 10 X förstoring i Mikroskop.
    6. Använda en bild bearbetningsprogram att identifiera och kvantifiera befolkningen av markerade immuncellerna i både epitel och lamina propria (under epitelet) genom inställning 2 masker: använda den första masken i färg-kub-baserade funktionen för att ange en färg för upptäckande tröskel och mäta de färgade DAB-reaktivt områdena; använda andra masken för att fastställa totala områden av epitel och laminär propria i avsnittet granskas. Express immunreaktiva cell befolkningen som en kvot av området färgning av infiltrerade celler, som den totala arealen av den undersökta vävnaden.

5. gen uttryck bedömning av DSS-inducerad kolit

  1. Hämta kolon vävnader från DSS-behandlade gen knockout och vildtyps-möss från en-80 ° C frys och Lägg till 0,6 mL lyseringsbuffert till 25 mg av vävnad och homogenisera i en Homogenisatorer.
  2. Följ RNA extraktion kit's protokoll för att extrahera total-RNA, och DNAS jag används för att eliminera eventuella kontaminerande genomiskt DNA.
  3. Kör en agarosgel för att kontrollera kvaliteten på den extraherade RNA. Om dess 28S RNA bandet är ljusare än 18S band, är det användbart. Ta 1 µL av RNA provet att avgöra den RNA-koncentrationen på en microspectrophotometer.
  4. Blanda 1 µg totalt RNA med 2,5 µL 20 mM oligo (dT)12,13,14,15,16,17,18 primers och 1 µL Moloney murina leukemi virus (MMLV) omvänt transkriptas. Inkubera vid 42 ° C i 60 min att förbereda cDNA.
  5. Ställa in realtids PCR-reaktioner genom att blanda 1µL av cDNA med 0,5 µL av framåt och bakåt qPCR primers för TNF, IFN-γ, IL-5, IL-13, IL-10, TGF-β1 och β-aktin som kontroll förutom 2 x fluorescerande grön dye.
  6. Kör qPCR med följande parametrar: 95 ° C i 10 min, följt av 45 cykler av 95 ° C för 10 s, 50 ° C för 25 s, och 72 ° C under 20 s.
  7. Beräkna relativ kvantifiering av genuttryck genom att använda de 2ΔΔCt metod15. Jämförelsevis analysera gen uttrycksnivåerna i knockout vs. vilda möss.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

En DSS-inducerad IBD förfarande inrättades genom administrera 3% DSS i dricksvatten till α-gustducin-knockout (KO) och vildtyp (WT) möss. Jämfört med WT möss, uppvisade knockoutmöss mer svår kolit med överdriven viktminskning, diarré och intestinal blödning (figur 1). Efter en 7-dagars DSS administration, skillnaderna i vävnad integritet analyserades med H & E färgning som metoden histologiska och mer grovt vävnadsskada hittades i den proximala, mellersta, och distala kolon av knockoutmöss än i WT möss ( Figur 2). Dessutom ledde den överdrivna immunsystemets aktiveringen till kolit med infiltration av olika inflammatoriska celler såsom makrofager och neutrofiler. Immunhistokemiska analyser med hjälp av ett antal markörer för immuncellerna genomfördes för att avgöra huruvida den α-gustducin bristen påverkas immunceller infiltration. Jämförande analys visade att infiltrationen av leukocyter, neutrofiler och makrofager höjdes betydligt i knockoutmöss jämfört med WT kontroll möss (figur 3). Slutligen fastställdes vissa cytokin uttryck nivåer i kolon av DSS-inducerad kolit möss med qPCR med gen-specifika primers. Resultaten visade att jämfört med WT möss, knockoutmöss hade högre nivåer av TNF och IFN-γ men lägre nivåer av IL-5, IL-13 och IL-10; dock sågs ingen skillnad i nivån uttryck av TGF-β1 mellan knockout och WT möss (figur 4).

Figure 1
Figur 1 : DSS administration återger mer svår kolit i α-gustducin knockouts (KO). (A) andelen viktminskning: KO möss visas betydligt mer viktminskning start från dag 3. (B) kolit sjukdom index baserat på svårighetsgraden av diarré och rektal blödning: KO möss visade signifikant större sjukdom index än WT kontroller. (C) kolon (övre panelen) och mjälten (lägre paneler) från representativa WT och KO möss 7 dagar post-DSS administration: KO möss hade betydligt kortare kolon och större mjälte. Felstaplar representera SEM (* p < 0,05, ** p < 0,005, *** p < 0,0005; ANOVA med post hoc- t-tester). Skalstapeln = 1 cm. Denna siffra har ändrats från en tidigare publikation13. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figure 2
Figur 2 : Α-gustducin KO möss Visa allvarligare vävnadsskada efter behandling med DSS. (A) H & E färgning av kolon vävnader från WT och α-gustducin KO möss inte behandlas med DSS (vatten) eller behandlats med DSS i 7 dagar (DSS). (B) vävnad skada score baserat på histologiska färgning av kolon vävnader från WT och KO möss 7 dagar efter DSS administration. DSS behandling inducerad vissa vävnadsskada i WT kolon, vilket var mycket värre i KO preparatet. Felstaplar representera SEM (* p < 0,05). Skalstapeln = 50 µm. Denna siffra har ändrats från en tidigare publikation13. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figure 3
Figur 3 : Α-gustducin KO möss visar ökad infiltration av immunceller i DSS-inducerad kolit. (A) massiva immunceller infiltration i kolon av DSS-behandlade KO möss. (B) kvantifiering av immunceller nummer: procentandelen immunostained områden dividerat med den totala arealen av uppmätta vävnad baserat på bild analyser. Felstaplar representera SEM. skala bar = 50 µm. Denna siffra har ändrats från en tidigare publikation13. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figure 4
Figur 4 : Α-gustducin KO möss uppvisar olika uttryck nivåer av immun cytokiner i DSS-inducerad kolit. DSS behandling ökat uttryck av TNF och IFN-γ och minskat uttryck av IL-5, IL-13 och IL-10 i KO möss kolon jämfört med WT möss. Realtid kvantitativ RT-PCR utfördes med hjälp av gen-specifika primers. Β-aktin användes som en intern kontroll-genen. Felstaplar representera SEM (* p < 0,05, ** p < 0,005). Denna siffra har ändrats från en tidigare publikation13. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Table 1
Tabell 1: Lista över primers används.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Denna metod kan användas för att kvantitativt bestämma effekten av mutationer i specifika luktintrycket gener på inflammation i en musmodell för DSS-inducerad IBD. För att dra full nytta, är optimal induktion av IBD ett viktigt steg. Utvecklingen av kolit påverkas av flera faktorer, inklusive mus stam, boendemiljö, tarmflorans, samt generna av intresse. Det rekommenderas att utföra en pilot experiment med ett litet antal möss att testa olika doser och behandlingstider DSS administration. Under pilot experiment, brutto symtom såsom viktminskning, diarré, intestinal blödning och några mikroskopiska förändringar såsom vävnadsskada, inflammation i samband med immunceller infiltration, och uttryck-nivå förändringar av cytokiner bör vara analyserat och jämfört med kontrollgrupper som har dricksvatten utan DSS16,17,18,19. Svårighetsgraden av de inducerade koliken kan övervakas genom att analysera dagliga förändringar i mus kroppsvikt och noter av insamlade avföring under perioden DSS-behandling. Efter DSS behandling, kan vävnadsskadan bedömas av H & E färgning på frysta delar av tjocktarmen, medan infiltration av immunceller och uttryck nivåer av cytokiner kan identifieras och kvantifieras med hjälp av immunohistokemi och qPCR. DSS dosering, administration varaktighet och kost kan justeras för att avslöja subtila effekter av luktintrycket genmutationer på colonic immunsvaret. Känsligheten hos denna metod kan dock fortfarande begränsa sin ansökan till studier av minimala effekten av några andra gener. I detta fall kan vissa ändringar antas; till exempel genom att minimera variabler från individ-specifika tarmflorans genom att administrera antibiotika.

DSS-inducerad kolit modellen har använts mest omfattande bland kemisk agent-inducerad IBD modeller, till stor del på grund av sin enkelhet, snabbhet, reproducerbarhet, manöverbarhet och framför allt dess likheter med människans ulcerös kolit, som är användbart för att värdera effekten av mänskliga therapeutics2. En nackdel som forskare måste vara medveten om är att T och B celler krävs inte för utvecklingen av kolit, som skiljer sig från utvecklingen av sjukdomen hos människor. Dock kan det vara användbar för att studera rollen av det medfödda immunsystemet i utvecklingen av akut kolit2.

Denna studie har etablerat en DSS-inducerad IBD modell med α-gustducin-brist möss, som kan användas för att undersöka nya funktioner i den G-protein α-subenheten i gut slemhinnor immunitet och inflammation. Resultaten visar att möss som saknar α-gustducin är mer mottagliga för DSS-inducerad kolit och åtföljs av mer allvarliga symtom, inklusive vävnadsskada, överdrivet inflammatoriskt svar och förändrat uttryck av potenta cytokiner13. I samförstånd med senaste rön som visar medverkan av smak-liknande chemosensory vägar i typ II immunsvar på gut parasiter20, α-gustducin och andra smak signalering proteiner kan ha roman och viktiga funktioner i tarm immun balans. De exakta molekylära mekanismerna bakom dessa skeva immunsvar kvarstår dock för att bli upptäckt.

Dessutom denna metod kan användas för att studera effekterna av andra luktintrycket gener som uttrycks i tjocktarmen (t.ex. den transient receptor potential jonkanal Trpm5, som är kritiska till söt, bitter och umami smak och uttryckt i mänskliga kolon celler7). Slutligen, samma strategi kan användas för att upptäcka nya funktioner av viktiga proteiner och faktorer i intestinal immunitet och hjälpa till att utvärdera effektiviteten av nya behandlingar av vissa mänskliga sjukdomar.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Författarna förklarar att de har inga konkurrerande finansiella intressen.

Acknowledgments

Detta arbete stöds genom bidrag från de nationella naturvetenskap Foundation of China (81671016, 31471008 och 31661143030) och National Institutes of Health (DC010012, DC015819) och av stiftelsen Siyuan.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Antibody
CD45 BD Biosciences 550539
CD3 BD Biosciences 555273
B220 BD Biosciences 550286
CD11b BD Biosciences 550282
Ly6G BD Biosciences 551459
Reagent
Dextran Sulfate Sodium Salt (DSS) MP Biomedicals 2160110
Streptavidin-HRP complex BD Pharmingen 551011
H&E Staining Kit BBI Life Sciences E607318
Phosphate Buffered Saline (PBS) Sangon Biotech B548117
FastStart Universal SYBR Green Master(ROX) Roche 4913850001
MMLV Reverse Transcriptase, GPR Clontech,TaKaRa 639574
TaKaRa MiniBEST Universal RNA Extraction Kit  TaKaRa 9767
BD 10 mL Syringe BD Biosciences 309604
Instruments and equipment
balance
scissors 
forceps
centrifuge
qPCR machine
staining jars
Software
Imag-Pro Plus  Media Cybernetics, Inc. 

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Kaser, A., Zeissig, S., Blumberg, R. S. Inflammatory Bowel Disease. Annual Review of Immunology. 28 (1), 573-621 (2010).
  2. Benoit, C., D, A. J., Madhu, M., Matam, V. K. Dextran Sulfate Sodium (DSS)-Induced Colitis in Mice. Current Protocols in Immunology. 104 (1), 11-14 (2014).
  3. Chassaing, B., Darfeuille-Michaud, A. The Commensal Microbiota and Enteropathogens in the Pathogenesis of Inflammatory Bowel Diseases. Gastroenterology. 140 (6), 1720-1728 (2011).
  4. Chandrashekar, J., Hoon, M. A., Ryba, N. J. P., Zuker, C. S. The receptors and cells for mammalian taste. Nature. 444 (7117), 288-294 (2006).
  5. Gilbertson, T. A., Khan, N. A. Cell signaling mechanisms of oro-gustatory detection of dietary fat: Advances and challenges. Progress in Lipid Research. 53, 82-92 (2014).
  6. Huang, L., et al. Gγ13 colocalizes with gustducin in taste receptor cells and mediates IP3 responses to bitter denatonium. Nature Neuroscience. 2 (12), 1055-1062 (1999).
  7. Perez, C. A., et al. A transient receptor potential channel expressed in taste receptor cells. Nature Neuroscience. 5 (11), 1169-1176 (2002).
  8. Shigemura, N., Ninomiya, Y. Recent Advances in Molecular Mechanisms of Taste Signaling and Modifying. International Review of Cell and Molecular Biology. 323, 71-106 (2016).
  9. Bezençon, C., et al. Murine intestinal cells expressing Trpm5 are mostly brush cells and express markers of neuronal and inflammatory cells. Journal of Comparative Neurology. 509 (5), 514-525 (2008).
  10. Lu, P., Zhang, C. -H., Lifshitz, L. M., ZhuGe, R. Extraoral bitter taste receptors in health and disease. The Journal of General Physiology. 149 (2), 181-197 (2017).
  11. Wirtz, S., Neufert, C., Weigmann, B., Neurath, M. F. Chemically induced mouse models of intestinal inflammation. Nature Protocols. 2, 541-546 (2007).
  12. Chassaing, B., Aitken, J. D., Malleshappa, M., Vijay-Kumar, M. Dextran sulfate sodium (DSS)-induced colitis in mice. Current Protocols in Immunology. 104 (25), Unit 15 (2014).
  13. Feng, P., et al. Aggravated gut inflammation in mice lacking the taste signaling protein α-gustducin. Brain, Behavior, and Immunity. 71, 23-27 (2018).
  14. Feng, P., et al. Immune cells of the human peripheral taste system: Dominant dendritic cells and CD4 T cells. Brain, Behavior, and Immunity. 23 (6), 760-766 (2009).
  15. Livak, K. J., Schmittgen, T. D. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method. Methods. 25 (4), 402-408 (2001).
  16. Kim, J. J., Shajib, M. S., Manocha, M. M., Khan, W. I. Investigating Intestinal Inflammation in DSS-induced Model of IBD. Journal of Visualized Experiments. (60), 3678 (2012).
  17. Axelsson, L. -G., Landström, E., Goldschmidt, T. J., Grönberg, A., Bylund-Fellenius, A. -C. Dextran sulfate sodium (DSS) induced experimental colitis in immunodeficient mice: Effects in CD4+-cell depleted, athymic and NK-cell depleted SCID mice. Inflammation Research. 45 (4), 181-191 (1996).
  18. Egger, B., et al. Characterisation of Acute Murine Dextran Sodium Sulphate Colitis: Cytokine Profile and Dose Dependency. Digestion. 62 (4), 240-248 (2000).
  19. Whittem, C. G., Williams, A. D., Williams, C. S. Murine Colitis Modeling using Dextran Sulfate Sodium (DSS). Journal of Visualized Experiments. (35), 1652 (2010).
  20. Howitt, M. R., et al. Tuft cells, taste-chemosensory cells, orchestrate parasite type 2 immunity in the gut. Science. 351 (6279), New York, N.Y. 1329-1333 (2016).

Tags

Immunologi och infektion fråga 141 inflammatorisk tarmsjukdom tarm sjukdom smak receptorer G-proteinkopplade receptorer α-gustducin signalering utbildningsavsnitt dextran sulfat natrium immun inflammation
Effekterna av smak signalering Protein Abolishment på Gut Inflammation i en musmodell för inflammatorisk tarmsjukdom sjukdom
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Du, Y. W., Liu, Q., Luo, X. C.,More

Du, Y. W., Liu, Q., Luo, X. C., Zhao, D. X., Xue, J. B., Feng, P., Margolskee, R. F., Wang, H., Huang, L. Effects of Taste Signaling Protein Abolishment on Gut Inflammation in an Inflammatory Bowel Disease Mouse Model. J. Vis. Exp. (141), e58668, doi:10.3791/58668 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter