Summary
Tamamlayıcı bileşen C1q, doku mikroortamında yüksek derecede ifade edilen, hücre dışı matriks ile etkileşimde bulunan, Pro-inflamatuar bir molekül. Burada, biz nasıl C1q hyaluronik asit etkileri hücre yapışma bağlı test etmek için bir yöntem tarif.
Abstract
Tümör mikroortamın neoplazi büyümesi ve metasrat içinde aktif rol oynadığını giderek ortaya koymuştur. Farklı yollar sayesinde, tümör hücreleri etkili bir şekilde stromal, bağışıklık ve endotel hücreleri uyarıcı faktörler, kemokinler ve sitokinlerin salgılar tarafından işe. Buna göre, bu hücreler, yüksek proliferasyonu ve metastatik yetkinliği sürdürmek için büyüme teşvik sinyalleri, metabolitleri ve ekstrasellüler matris bileşenlerini serbest bırakarak mikroortamın sinyalizasyon özelliklerini değiştirebilir. Bu bağlamda, biz tamamlayıcı bileşen C1q, yüksek ölçüde insan malign tümörlerin bir dizi tarafından yerel olarak ifade, ekstraküler matris hyaluronik asit ile etkileşim üzerine, güçlü insan tümöründen izole primer hücrelerin davranışını etkiler tespit Örnek. Burada, biz nasıl C1q hyaluronik asit (HA) etkileri tümör hücre yapışması bağlı test etmek için bir yöntem açıklamak, gerçekte temel bileşenlerin biyolojik özellikleri (Bu durumda HA) ekstrasellüler matrisin temel bileşenlerinin tümör doğru biyoaktif sinyaller şeklinde olabilir Ilerleme.
Introduction
Tümör mikroçevre (TME), hücre hayatta kalma, büyüme ve istilası için karşı bir niş sağlayabilmesi için kanser gelişimini ve ilerlemesini etkiler. TME 'deki yeni anahtar oyuncularının tanımlanması, hedef terapi için yeni moleküler araçların keşfi için yararlı olabilir. TME, endotel hücreler, fibroblastlar ve bağışıklık sisteminin hücreleri gibi Malign olmayan hücrelerin karmaşık ve dinamik ağını içerir ve bu da collagens, Laminins, fibronektinler dahil olmak üzere çevredeki ekstrelüler matris (ECM) bileşenlerine gömülür. Proteoglikanlar ve hyaluronans. Hem tümör hem de tümör içermeyen hücreler, TME 'nin fiziksel, kimyasal ve sinyalizasyon özelliklerini genel olarak değiştiren sitokinler, kemokinler, büyüme faktörleri ve inflamatuar ve matris remodeling enzimleriyle ECM bileşenlerini sentezleyen ve salgılar. Bu bileşenler arasında, hyaluronik asit (HA) tümör biyolojisinde önemli bir rol oynadığı ortaya çıkmıştır. Basit kimyasal bileşimine rağmen, HA, onun HA-bağlayıcı molekülleri ile birlikte (hyalyapışlar), anjiyogenezi modüle edebilir, bağışıklık sistemi yanıt ve ECM bir boyut ve konsantrasyon bağımlı şekilde yeniden modelleme1.
Tamamlayıcı (C) sistemi de yakın zamanda artan ilgi aldı yerel TME, bir parçasıdır. C sistemi, non-Self-hücrelere, istenmeyen konak elemanları ve patojenlere karşı savunma ilk satırında yer alan çözünür ve membran bağlı proteinleri bir dizi kapsar. İşlevsel olarak, C, doğal ve adaptif sistemlerin iki efektör kollarını doğrudan hücre öldürme ya da bir inflamatuar yanıt2montaj teşvik etmek bağlar. C aktivasyon kanser hücrelerini yok ederek veya onların büyüme inhibe ederek, tümör büyümesini bastırmak, ama giderek bu kronik inflamasyon sürdürülmesi tarafından bir tümör teşvik aktivitesi sahip olabilir açık hale gelmiştir, bir kurulması teşvik immünosupresif çevre, anjiyogenez inducing, ve kansere bağlı sinyalizasyon yolları aktive3. Bu bağlamda, C1q, c sisteminin klasik yolunun ilk tanıma molekülü, C aktivasyonu4' ten bağımsız olarak tümör mikroortamındaki önemli fonksiyonları ortaya çıkartmıştır. C1q, anjiyogenezi ve metasjen5' e ek olarak kanser hücresi yapışma, göç ve proliferasyon lehine olabilir insan malign tümörlerin bir dizi yerel olarak ifade edilmesi gösterilmiştir. İlginçtir C1q ECM gibi büyük bir kurucu ile etkileşime girer.
Primer kanser hücrelerini tümör kütlesine izole etmek için bir teknik geliştirdik. Ayrıca, biz, özellikle C1q ve yüksek moleküler ağırlık hyaluronik asit arasındaki etkileşimi tümör mikroçevre teşvik edebilir matris oluşturdu. C1q bağlı HA tümör hücrelerinin yapışmasını ikna edebildi.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Hastadan gelen doku örnekleri, Italya 'nın Trieste Üniversitesi Hastanesi kurumsal Kurulu tarafından etik hususları onayladıktan sonra bilgilendirilmiş onay sonrasında toplandı.
1. tümör hücre yalıtımı ve Kültür (gün 1)
- İnsan mezotelyoma hücrelerini MPM katı örneklerden yalıtın. Yaklaşık 2-3 mm2 boyutunda parçalar elde etmek ve 0,5 mm CA2 +/mg2 +, 0,5% tripsin ve 50 μg/ml ile desteklenen Hanks ' dengeli tuz çözeltisi (HBSS) ' den oluşan 5 ml sindirim çözeltisi içinde inkük olan dokuyu bir kesici ile ince bir şekilde kıyma DNase ı, gece 4 °C ' de.
- Tümör hücresi yalıtımı ve kültürü (2. gün)
- Gece inkübasyon sonrası, sindirilmiş dokusu 37 °C ' de 30 dakika boyunca hafifçe sallama ile yerleştirin.
- Santrifüjleme üzerine sindirim çözeltisi değiştirin (250 x g) ile 3 mg/ml kolajenaz tipi 1 çözünür 5 ml Orta 199 HBSS ile ve daha fazla inkük 30 dakika için 37 °c hafif sallayarak ile.
- Enzimatik reaksiyonu% 10 ısı inaktive fetal sığır serumu (FBS) ekleyerek engelleyin. Hücrelerin çoğunun dokudan serbest bırakıldığından emin olmak için 5 mL pipet ile hücreleri çok dikkatlice resuspend. Ardından, hücre süspansiyonunu 100 μm gözenek filtresine göre filtreleyin.
- Bir 12,5 cm2 Flask ve kültür onları 37 °c ' de insan endotel hücreleri ile serum-serbest Orta (hesf),% 10 FBS ve egf (10 ng/ml), temel fgf (20 ng/ml), ve 1% penisilin-streptomisin ile Takviyeler.
Not: her 2-3 gün taze orta ile değiştirin.
2. HA kaplama (gün 1)
- 1 mg/mL6konsantrasyonunda çift distile su içinde yüksek moleküler ağırlık HA (1,5 kDa) resuspend.
- 50, karbonat/bikarbonat tamponunda (0,1 M, pH 9,6), nazik pipetleme ile dilute HA stok çözümüdür.
- 96-kuyu plakasını, 4 °C ' de gece başına 100 μL dilüt HA stok çözeltisi ile kat.
Not: hyaluronik asit Profesör Ivan Donati, Yaşam Bilimleri Bölümü, Trieste Üniversitesi7bir tür hediye oldu.
3. C1q kaplama (gün 2)
- Gece kuluçkının ardından, vakum tedavi edilen kuyuları Aspire ve 96-kuyu plakasını aynı zamanda 100 μL, Dulbecco 'nun PBS 'si (dpbs) ile yıkayın.
- 100 μL dPBS + 0,5% BSA ve 0,7 mM CA2+/mg 2 + ' da 25 μg/ml 'lik bir konsantrasyonda bu proteinlere inkük ederek plastik immobilized-ha ' y a bağlamak için C1q (25 μg/ml veya doz tepkisi denemeleri için farklı konsantrasyonlar) veya BSA (negatif kontrol olarak) izin verin. . Sonra gece 4 °C ' de inkübe.
- Vakum, kuyuları Aspire ve 100 μL/iyi dpbs ile 96-kuyu plakasını yıkayın.
4. hızlı dıı ile hücre etiketleme
- 10 μg/mL floresan boya hızlı dıı içeren dPBS 500 μL 'de resuspend 1 x 105 tümör hücreleri. 5 dakika aralıklarından sonra el ile karıştırma, etiketleme için 5% v/v CO2 kuluçko Içinde 37 °c 15 dakika boyunca inkübe.
- Aşırı hızlı dıı kaldırmak için, 10 mL dPBS eklemek, yavaşça yukarı ve aşağı pipet ve 7 dakika için 250 x g Santrifüjü 1 ml insan endotel serum ücretsiz orta içeren hücre pelet 0,1% BSA (hesf + 0,1% BSA).
5. HA/C1q matrisler üzerinde hücre yapışma (gün 1)
- Vakum, farklı matrisler ile kaplı kuyuları Aspire (kuyular adım 3,2 kaplı).
- Etiketli hücre süspansiyonunun 100 μL 'ini kaplanmış kuyulara dağıtın ve% 5 v/v CO2 inkükoplinde 37 °c ' de 35 dakika için plakası kuluçd.
- Supernatant duman çekiş olmayan-yapışmaz hücreleri çıkarın. % 0,5 BSA, 0,7 mM CA2 + ve 0,7 mm MG2 +içeren dpbs ile bir kez yıkayın.
- 10 mm Tris-HCL, pH 7,4 +% 0,1% v/v SDS 200 μL/Well ekleyerek yapışan hücreleri Lyse ve hemen bir floresan okuyucu (544 Nm, emisyon 590 Nm) ile 96-Well plaka okuyun etiket artan sayıda lizis ile oluşturulan bir kalibrasyon eğrisi kullanarak Hücre.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
HA, tekrarlayan (β, 1-4)-D-glukuronik asit-(β, 1-3)-N-asetil-D-glukolin disakkarid üniteler (Şekil 1B)7' den oluşan, negatif olarak şarj edilmiş yüksek molekül ağırlığı polizakkaridin. 96-Well plaka üzerinde ha bağlayıcı oluşumu yanı sıra onun immobilizasyon verimliliği biyotinlenmiş ha yararlanarak test edildi (Bio-ha). 10 μg/mL 'den 1 mg/mL 'ye kadar farklı biyo-HA konsantrasyonları, 100 mM karbonat/bikarbonat-buffer pH 9,6 ' de yeniden askıya alındı ve gece 4 °C ' de inkübe edildi.
Geniş yıkıldıktan sonra, 96-Wells plakasına bağlı biyo-HA, alkalin fosfataz için konjuli streptavidin kullanılarak algılandığında, streptavidin varlığı, bir substrat olarak pNPP (1 mg/mL) kullanılarak ölçülebilir. Okuma bir ELıSA okuyucu kullanarak 405 nm dalga boyu yapıldı. Bio-HA bir doz yanıtı şekilde bir 96-Well plaka bağlamak başardı (veri gösterilmez); 50 μg/mL bir doygunluk Platosu olarak seçildi ve bu nedenle bizim bizim bizim olarak kullanılmıştır.
Önceki verilerimiz C1q ECM8' de lokalize olan geniş bir hedef Ligat yelpazesine bağlanabildiğinden emin olduğunu göstermiştir. Bu bağlama özellikle HA9ile güçlüdür. Mikrotitre plakasının kuyuları 50 μg/ml HMW-ha ile kaplanmıştır ve artan C1q konsantrasyonlarına sahip hale getirilmiş. bağlı C1q Anti-C1q polikklonal antikorlar ile inkübasyon üzerine görselleştirildi. C1q yüksek molekül ağırlığı HA 'ya bir doz bağımlı şekilde bağlanabilmektedir (Şekil 1a), 50 μg/ml konsantrasyonunda maksimum bağlayıcı seviyeye ulaşır. C1q 'nin HA 'ya bağlanacağını tespit ettiğimiz bu etkileşimin ECM 'nin sinyalizasyon özelliklerini ve tümör gelişiminde bunların etkilerini değiştirmede ele geçirilmesini araştırdık. Bu amaçla, etkilenen hastalarından elde edilen biyoptik örneklerden izole tümör hücrelerine bir protokol kurduk. Primer tümör hücreleri Şekil 2' de özetlendiği gibi doku biyopsisi ile izole edildi. C1q ile etkileşime girmek için tümör hücrelerinin yeteneği, Şekil 3' te gösterildiği gibi, farklı matris kombinasyonları kullanarak bir hücre yapışma tahlili gerçekleştirerek değerlendirildi. Tümör hücreleri floresan prob ile lekelenmiş hızlı dıı ve immobilize ha üzerine seribaşı, ha C1q veya BSA bağlı (negatif kontrol olarak kullanılır), 35 dk. HA ile karşılaştırıldığında, HA-Bound-C1q ile kaplama primer hücrelerin yapışmasını miktarını artırmak başardı ancak Şekil 3' te temsili grafikte gösterildiği gibi, biz test tümör hücre hatları yapışma uyarmak mümkün değildir.
Şekil 1 . Hyaluronik asit ile C1q etkileşimi. (A) bir doz bağımlı şekilde HMW ha üzerinde C1q bağlama. Veriler, triplicate ± S.E.M. (B) C1q molekülün şematik temsili ve rekombinant tek zincir küresel bölgenin üç bağımsız deneyinin ortalaması olarak ifade edilir. C1q üç polipeptid zincirleri (A, B, C) monte edilir: her bir N-terminal kollajen benzeri sıra ve C-Terminal küresel gC1q kafa içeren. (C) hyaluronik asit kimyasal formülü, glukuronik asit ve N-asetilglukozamin çok polimerize zinciri. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek Için lütfen tıklayınız.
Şekil 2 . Tümör hücrelerinin yalıtım ve morfolojisi Özet şeması. Tümör hücreleri plevral biyopsi örneklerden izole edildi. Hücreler bir 12,5 cm2 Flask içinde tohumlandı ve ınsan endotel hücre serum serbest orta kültür + 10% FBS. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek Için lütfen tıklayınız.
Şekil 3 . Tümör hücreleri yapışma üzerinde C1q etkisi. Tümör hücreleri (MES) veya primer mezotelyoma hücre hattı (MSTO-211H), hyaluronik asit (HA) ile önceden kaplı mikrotiter kuyularına, C1q veya sığır serum albumine (BSA) bağlanmıştır. Figürün üst kısmında, bir temsilcinin primer hücre hattının morfolojik yönü HA, HA C1q veya BSA 'ya bağlı olarak yapışmıştır. Görüntüler faz-kontrast mikroskop, orijinal büyütme yoluyla elde edildi: 200x. HıZLı DLI primer mezotelyoma hücreleri veya bir mezotelyoma hücre hattı (MSTO-211H) ile önceden kaplanmış olduğunu mikrotiter kuyuları için izin verildi etiketli HA, HA C1q veya BSA bağlı. Veriler, Çoğalt ± S.E.M. * p < 0,01 vs ha ile yapılan üç bağımsız deney ortalaması olarak ifade edilir. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek Için lütfen tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Biz nasıl tamamlayıcı bileşen C1q, hyaluronik asit ile etkileşim, insan tümörü dokularından izole primer hücrelerin davranışını modüle edebiliyoruz araştırmak için kolay bir yöntem açıklanmaktadır. Hem HA hem de C1q, hem fizyolojik hem de patolojik koşullarda, çeşitli hücre biyolojik süreçlerine katılan doku mikroortamında oldukça mevcuttur. Örneğin, C1q plasentanın mikroortamında mevcut olduğu görüldüğü için, plasentasyon8' de maternal decidua 'nın ekstrıillous trofoblast istilasını sunar. C1q Ayrıca, doku rejenerasyonu ve onarımı için gerekli anjiyojenik süreci iyileştiren yara iyileştirici cilde yatırılır10. Son olarak, C1q birkaç farklı tümör dokularında tespit edilmiştir4. Yüksek molekül ağırlığı ha anjiyogenez ve proliferasyon için doğal bir bariyer ve son kanıtlar C1q, tamamlayıcı aktivasyon klasik rolünün yanı sıra, bir ECM molekülü olarak hareket edebilecektir gösterdi, hücre göç lehine.
Bu çalışmanın yenilik C1q HA bağlama güçlü HA ile tümör hücrelerinin etkileşimi değiştirmek bulgu oluşur. Bu yöntemi ayarlamak için birkaç denetim noktası kabul edildi. Her şeyden önce, yeterli miktarda HA biyinylated HA kullanarak kültür ve ELıSA kuyuları plastik bağlı olduğunu sağladı. Kuyuların Alcian mavi boyama bu sonuçları doğruladı (veri gösterilmez). Kuluçgun bikarbonat tampon bir gecede yapılmıştır, pH 9,6, ve bu prosedür HA tarafından kuyuların tam doygunluk sağlamak (veriler gösterilmez).
İkinci adım C1q için HA bağlamak oldu. C1q ile HA 'nın bağlanması fizyolojik pH (7,4) ve CA2 + 'nın varlığını gerçekleştirmiştir. Bu nedenle, iki bivalent iyonlarla dPBS-BSA tamponu kullandık. Biz başlangıçta tespit etmek ve HA bağlı bulunabilir C1q optimum miktarını seçmek için bir doz tepkisi deneyi yapılmıştır. Doz-yanıt eğrisi biz tam olarak Plato ulaşmadı rağmen, biz 25 μg/mL konsantrasyon kullanılan ücretsiz C1q fizyolojik konsantrasyon daha yakın olmak için, C1q miktarı normalde serum mevcut 75-150 μg/mL olduğunu dikkate alınarak. C1r ve C1S 'den gelen serum C1q C1 kompleksi11' in% 10-% 20 ' sinin yaklaşık olduğu hesaplanır. C1q bağlayıcı polyanions yeteneği ile bilinmektedir, bir şarj desen tanıma molekül olarak tanımlanır ve HA (β, 1-4)-D-glukuronik asit-(β, 1-3)-N-asetil-D-Glukosamin12yinelenen birimleri negatif şarj lineer polimer olduğunu, 13. bu nedenle, bu güçlü olmayan kovalent etkileşimi araştırdık. Gözlemlerimiz, tümör hücrelerinin C1q ' e bağlı ha ve HA arasındaki farkı anlamının olduğunu belirtti. Hücreler sadece HA tek başına yapışan hücre karşılaştırıldığında daha Spread-Out olarak görünür. Biz bu etkisi çözünür C1q tarafından aracılık değildir gözlenen, hücre yapışma bu değişikliğin ha ile C1q etkileşimi bağlı olduğunu gösteren, muhtemelen bağlayıcı bir sonucu olarak tamamlayıcı molekül bir Konformasyonel değişikliği nedeniyle.
Biz olarak gösterildiği gibi, birkaç hücre hatları ile karşılaştırıldığında Primer hücreler arasındaki yapışma yeteneği güçlü bir fark fark beri, yapışma deneyler için tümör davranışlarının in vitro modelleri olarak primer hücrelerin kullanımı önemini vurgulamak istiyorum Şekil 3 ' ü. HA 'nın biyolojik özelliklerini değerlendirmek için alternatif ve çok ilginç bir model, HA hidrojel İskelesi 3D modellerinin kullanımı. Biyolojik moleküllerin birleştirilmesiyle birlikte bu iskele biyoaktif sinyallerin değerlendirilmesi ve rejeneratif tıbbın birkaç uygulaması için kullanılabilir14. Bu çalışmada öneriyoruz model bir uyarıcı kombinasyonu hücresel tepkiler değerlendirilmesi için daha kolay, daha hızlı ve daha ucuz bir yöntemdir, ve bu tür dahil moleküler mekanizmalar anlayışı için bir ilk adım olarak kabul edilebilir Etkileşim.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar, araştırmanın potansiyel bir ilgi çatışması olarak yorumlanabilecek herhangi bir ticari veya finansal ilişkinin yokluğunda gerçekleştirildiğini beyan ederler.
Acknowledgments
Ivan Donati 'ye, HA, Leonardo Amadio, Gabriella Zito (ıRCCS "Burlo Garofolo", Trieste, Italya) ve Andrea Romano (operatif klinik anatomisi ve patolojik Histoloji Anabilim Dalı, Cattinara Hastanesi, Trieste, Italya ) doku numune toplama için. Biz video hazırlama ve Alex Coppola, ses yardım için de Nicolò Morosini teşekkür ederiz. Bu çalışma anne ve Çocuk Sağlığı Enstitüsü, ıRCCS "Burlo Garofolo", Trieste, Italya (RC20/16) ve Fondazione Cassa di risparmio Trieste 'den R. bulla 'dan hibe tarafından destekleniyordu.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 100 µm pore filter | BD Falcon | 352360 | |
| Amphotericin B solution (fungizone) | Sigma-Aldrich | 1397-89-3 | |
| basic FGF | Immunological Sciences | GRF-15595 | |
| Calcium Chloride | Sigma-Aldrich | C-4901 | |
| Collagenase type I | Worthington Biochemical Corporation, DBA | MX1D12644 | |
| D-Glucose | Sigma-Aldrich | 50-99-7 | |
| DNase I | Roche | 10 104 159 001 | |
| EDTA | Sigma-Aldrich | 60-00-4 | |
| EGF | Immunological Sciences | GRF-10544 | |
| FAST DiI | Molecular probes, Invitrogen, Thermo Fisher Scientific | D7756 | |
| Fetal bovine serum | Gibco, Thermo Fisher Scientific | 10270-106 | |
| Fibronectin | Roche | 11051407001 | |
| Flask for cell culture | Corning | 430639 | Sterile, vented |
| Gentamicin solution | Sigma-Aldrich | G1397-10ML | |
| Hank’s Balanced Salt Solution (HBBS) | Sigma-Aldrich | H6648 | Supplemented with EDTA, Glucose, penicillin-streptamicin, gentamicin and fungizone |
| High molecular weight hyaluronic acid | Kind gift by Prof. Ivan Donati | ||
| Human endothelial serum free medium | Gibco, Thermo Fisher Scientific | 11111-044 | Supplemented with EGF (5 ng/mL), basic FGF (10 ng/mL), and 1% penicillin–streptomycin (Sigma-Aldrich) |
| Magnesium Chloride | Carlo Erba | 13446-18-9 | |
| Medium 199 with Hank’s salt | Sigma-Aldrich | M7653 | |
| Penicillin-Streptomycin | Sigma-Aldrich | P0781 | |
| Time-lapse microscopy | Nikon | Imaging System BioStation IM-Q | |
| Titertek Multiskan ELISA Reader | Flow Labs | ||
| Trypsin | Sigma-Aldrich | T4674 |
References
- Zamboni, F., Vieira, S., Reis, R. L., Oliveira, J. M., Collins, M. N. The potential of hyaluronic acid in immunoprotection and immunomodulation: Chemistry, processing and function. Progress in Materials Science. 97, 97-122 (2018).
- Lorusso, G., Ruegg, C. The tumor microenvironment and its contribution to tumor evolution toward metastasis. Histochemistry and Cell Biology. 130 (6), 1091-1103 (2008).
- Ricklin, D., Hajishengallis, G., Yang, K., Lambris, J. D. Complement: a key system for immune surveillance and homeostasis. Nature Immunology. 11 (9), 785-797 (2010).
- Bulla, R., et al. C1q acts in the tumour microenvironment as a cancer-promoting factor independently of complement activation. Nature Communications. 7, 10346 (2016).
- Winslow, S., Leandersson, K., Edsjo, A., Larsson, C. Prognostic stromal gene signatures in breast cancer. Breast Cancer Research. 17, 23 (2015).
- Collins, M. N., Birkinshaw, C. Hyaluronic acid solutions: A processing method for efficient chemical modification. Journal of Applied Polymer Science. 130 (1), 145-152 (2013).
- Itano, N. Simple primary structure, complex turnover regulation and multiple roles of hyaluronan. Journal of Biochemistry. 144 (2), 131-137 (2008).
- Agostinis, C., et al. An alternative role of C1q in cell migration and tissue remodeling: contribution to trophoblast invasion and placental development. Journal of Immunology. 185 (7), 4420-4429 (2010).
- Agostinis, C., et al. Complement Protein C1q Binds to Hyaluronic Acid in the Malignant Pleural Mesothelioma Microenvironment and Promotes Tumor Growth. Frontiers in Immunology. 8, 1559 (2017).
- Bossi, F., et al. C1q as a unique player in angiogenesis with therapeutic implication in wound healing. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (11), 4209-4214 (2014).
- Hosszu, K. K., et al. Cell surface expression and function of the macromolecular c1 complex on the surface of human monocytes. Frontiers in Immunology. 3, 38 (2012).
- Laurent, T. C., Fraser, J. R. Hyaluronan. Journal of the Federation of American Societies for Experimental Biology. 6 (7), 2397-2404 (1992).
- Gaboriaud, C., et al. The crystal structure of the globular head of complement protein C1q provides a basis for its versatile recognition properties. Journal of Biological Chemistry. 278 (47), 46974-46982 (2003).
- Lam, J., Truong, N. F., Segura, T. Design of cell-matrix interactions in hyaluronic acid hydrogel scaffolds. Acta Biomaterialia. 10 (4), 1571-1580 (2014).
