Summary
نقدم هنا بروتوكولا لاستحثاث كريوينجوري البطين الأيسر متبوعاً بغرس تصحيحًا عضلة القلب، المستمدة من خلايا iPS البشرية كارديوميوسيتيس في نموذج خنزير غينيا.
Abstract
نظراً لقدرة التجدد محدودة للقلب في الثدييات الكبار، يؤدي احتشاء عضلة القلب فقدان كارديوميوسيتيس لا رجعة فيه. هذا الخسارة المبالغ ذات الصلة لعضلة القلب كتلة يمكن أن تؤدي إلى فشل القلب. وإلى جانب زراعة القلب، يوجد أي خيار العلاجية لفشل القلب نهاية مرحلة. في أوقات نقص الهيئة المانحة، هناك حاجة إلى طرائق المعالجة المستقلة الجهاز. أجهزة مساعدة البطين الأيسر خيار علاج تبشر بالخير، ومع ذلك، خاصة كعلاج الوجهة، محدودة بإثارة الجانبية مثل السكتة الدماغية، والالتهابات والنزف. وفي السنوات الأخيرة، حققت عدة استراتيجيات إصلاح القلب بما في ذلك حقن الخلايا الجذعية، وفروعه القلب أو هندسة الأنسجة احتشاء عضلة القلب. التحسينات الأخيرة في بيولوجيا الخلية يسمح بالتفريق بين كميات كبيرة من كارديوميوسيتيس المشتقة من الخلايا الجذعية البشرية المستحثة pluripotent (اللجنة التوجيهية). واحدة من استراتيجيات إصلاح القلب حاليا قيد التقييم زرع أنسجة القلب الاصطناعي. أنسجة القلب هندسيا (اهت) شبكة ثلاثية الأبعاد كارديوميوسيتي الذي تم إنشاؤه في المختبر، مع الخصائص الوظيفية لانسجة القلب الأصلي. لقد أنشأنا ات-بقع من كارديوميوسيتيس هيبسك المشتقة. نقدم هنا بروتوكولا لاشتقاق تقلد كريوينجوري عضلة القلب البطين الأيسر في صورة خنزير غينيا، متبوعاً بغرس هيبسك ات على جدار البطين الأيسر.
Introduction
هو زيادة عدد المرضى الذين يعانون من قصور في القلب في أن شيخوخة السكان. لنهاية مرحلة فشل القلب، هو زرع قلب أورثوتوبيك الخيار العلاجية فقط. ومع ذلك، لا سيما في البلدان الأوروبية، هناك نقص مانحة جهاز متزايد. ولذلك، خيارات العلاج البديلة اللازمة. الإنجازات التي تحققت مؤخرا في دعم الدورة الدموية الميكانيكية تبشر بالخير، ولكن لا سيما في الأجل الطويل تشغيل، محدودة بإثارة الجانبية مثل النزيف وضخ تجلط الدم والمضاعفات المعدية1.
قدرة التجدد الذاتية قلب الإنسان الكبار محدودة للغاية. ولذلك، قد تصبح العلاجات التجدد القلب خيار علاج بديل لنهاية مرحلة فشل القلب المرضى2،3. ووصف تقنيات مختلفة بما في ذلك حقن يستند إلى الخلية الجذعية خلية أو الأنسجة كان النهج الهندسية3،،من45.
الخلايا الجذعية البشرية المستحثة pluripotent (هيبسك)، فضلا عن الخلايا الجذعية الجنينية البشرية (هيس) يمكن أن تكون فعالة متباينة للضرب عفويا cardiomyocytes البشرية6، الذي كان إنجازا كبيرا في المجال القلب التجدد العلاجات.
لتحل محل عضلة القلب بعد احتشاء عضلة القلب وتحسين وظيفة القلب الفاشل، بقاء عدد مناسب كارديوميوسيتيس والميكانيكية والكهربائية اقتران مع قلب الأم أمر أساسي. ويلزم للتحقيق في إمكانات القلب العلاجات التجدد مع المؤسسة البشرية الخلية المشتقة cardiomyocytes، نموذج مناسب لبحث. النموذج المثالي ينبغي أن تكون فعالة من حيث التكلفة ولها الإنسان مثل علم وظائف الأعضاء والكهربية. نماذج الحيوانات الكبيرة مثل الخنازير سيكون أمرا مثاليا من وجهة النظر تلك، بيد أن تلك التجارب مكلفة للغاية وكميات كبيرة من كارديوميوسيتيس سيكون من الضروري استبدال عدد ذات صلة من كارديوميوسيتيس من أجل معرفة الآثار على اليسار بطيني الدالة في نموذج احتشاء خنزير.
للإجابة على الأسئلة البيولوجية الابتدائية نحو تجديد القلب البشري يستند إلى الخلية، مثلاً، بقاء الخلية، والأوعية الدموية، واقتران الكهربائية، النماذج الحيوانية الصغيرة أكثر ملاءمة. من النماذج الحيوانية الصغيرة المتاحة، هو خنزير غينيا الأنواع الأكثر فائدة، بالمقارنة مع الفئران والجرذان، كما على الكهربية أكثر يشبه الوضع في البشر7. في هذا النموذج خنزير غينيا، نحن التي يسببها كريوينجوري ترانسمورال من البطين الأيسر. أسبوع واحد بعد التعريفي لغرس احتشاء عضلة القلب ثلاثي الأبعاد، عفويا الضرب كارديوميوسيتي الوركين-الخلية المشتقة التصحيح أنجزت. وجرى تقييم بقاء الخلية كارديوميوسيتي 28 يوما بعد زرع عن طريق الفحص النسيجي.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
الحيوانات تلقي الرعاية الإنسانية امتثالا لدليل "المبادئ الحيوانات المختبرية"، أعد المعهد "مختبر الموارد الحيوانية"، ونشرت من قبل "المعاهد الوطنية للصحة". كافة البروتوكولات الحيوان كانت وافقت عليها السلطة المحلية المسؤولة ('' Amt für Gesundheit und فيربراوتشيرشوتز، هامبورغ هانزستات ''/الحيوانية البروتوكول رقم 109/16).
1-الحصول على الحيوانات
- الحصول على خنازير غينيا الإناث تزن 500-600 غ تجارياً.
- منزل لهم في ظل الظروف التقليدية في أقفاص الحيوانات. تغذية تشاو الجرذان القياسية وليبيدوم الإعلانية يعقم ماء.
2-عبر الصدر تخطيط صدى القلب
- خنزير غينيا في دائرة تحريض وتخدير الحيوان مع إيسوفلوراني (2 – 3%). تحقق من عمق التخدير بعدم الاستجابة لتو-قرصه.
- ضع خنزير غينيا أنيسثيتيزيد على منصة الاحترار (40-42 درجة مئوية) في وضع ضعيف. يستمر التخدير عن طريق الآنف مخروط (isoflurane 1.5-2%)
- حلاقة وتضطرين الصدر pig´s غينيا ماكينة حلاقة شعر الحيواني كهربائية باستخدام.
- تطبيق هلام محول طاقة الموجات فوق الصوتية بريوارميد (~ 25 درجة مئوية). استخدام نظام تخطيط صدى القلب مجهزة بمحول طاقة تردد أعلى من 15 ميغاهيرتز.
- الحصول على آراء طويلة محور parasternal ثنائي الأبعاد بوضع محول على الصدر خنزير guinea´s يواجه من الرقبة الصحيح نحو الساق اليسرى وسجل المحور الطويل ب-وضع الصور في طائرة الصمام الابهري مع مرئيات متزامنة من ذروة LV. التحقيق في وظيفة البطين الأيسر قبل العملية.
- تشغيل محول بمقدار 90° درجة للحصول على طريقة عرض محور قصيرة ب-الوضع على المستوى منتصف حليمي.
ملاحظة: الحيوان ثم نقل فورا إلى طاولة المفاوضات أو. يتم باستمرار تخديره الحيوان مع إيسوفلوراني 3%. يتم حقن الأتروبين 0.05 مغ/كغ (الدردشة) لتجنب زيادة إفراز الشعب الهوائية أثناء التهوية الميكانيكية.
3-الجراحة
-
تحريض احتشاء عضلة القلب
- حقن والايبوبروفين 4 – 5 ملغ/كغ والبوبرينورفين 0.05 مغ/كغ للتسكين تحت الجلد بإبرة ز 21 وحقنه 10 مل. يتم حقن 0.5 ملغ/كغ اتروبين تحت الجلد بإبرة ز 21 وحقنه 10 مل.
- خنزير غينيا على ظهرها وإبقاء التخدير مع فاسيماسك تغطي الفم والأنف. تحقق من عمق التخدير معسر أقدام هند (انعدام منعكس دواسة).
- نشر أرجل الخنازير غينيا وتحديد موقف باستخدام الشريط.
- يحلق في الصدر ومنطقة القصبة الهوائية للحيوان أنيسثيتيزيد مع ماكينة حلاقة كهربائية. تطهير المنطقة على نطاق واسع باستخدام فرك المستندة إلى اليود، تليها الإيثانول 80%. كرر هذه الخطوات تعقيم مرتين.
- إجراء شق عمودي 1.5 سم في منطقة القصبة الهوائية وصراحة تشريح العضلات الذي يغطي القصبة الهوائية حتى تشاهد القصبة الهوائية. ثقب القصبة الهوائية مع قنية رابعا 18 جرام وإدراج الجزء المرن من القنية كأنبوب الرغامى.
- قم بتوصيل أنبوب الرغامى تنفس حيوان يحققوا خنزير غينيا باستمرار أثناء الإجراء.
ملاحظة: الآن هو الحفاظ على التخدير مع إيسوفلوراني 3% عبر الأنبوب الرغامى (الإلهام بمساعدة التهوية مع ضغط الإلهام كحد أقصى، ومعدل التنفس: 100-120/دقيقة، ذروة الإلهام الضغط: 18-22 سم زئبق استخدام التهوية زقزقة أثناء فتح الصدر ). - تحديد المساحة ربيةال 5 قبل عد المسافات الضلع ابتداء من أول مساحة ربية. إجراء شق أفقي 2 سم على مساحة ربية 5 على الجانب الأيسر من خنزير غينيا باستخدام مقص وملقط. إدراج ضام حيوانات صغيرة. تشريح العضلات مع اليكتروكاوتيري حتى يتم التوصل إلى العضلات ربية، التي يمكن أن ينظر إليها بعد إزالة الأنسجة تحت الجلد، يتم التوصل إليها.
- تشريح العضلات ربية بلطف مع الملقط حتى يتم التوصل إلى الحيز الجنبي ويمكن للمرء أن يرى في الرئة اليسرى في الجبهة. إدراج ضام بين الأضلاع وفتحه بعناية حتى يتم الحصول على عرض جيد للقلب.
- فتح سم تامور ما يقرب من 1 في المنطقة جدار البطين الأيسر الأمامي مع المقص. وضع ضغط على الرئة اليسرى حمايتها من التلف عندما حمل كريوينجوري البطين الأيسر.
- ضع غيض من ختم تآكل المعادن (ألومنيوم) يبلغ قطرها 0.5 سم مستعرضة في النتروجين السائل لمدة 3 دقائق.
- الصحافة النيتروجين تبرد المسبار على الجدار الأمامي الأيسر للقلب لمدة 30 ثانية. ثم فصل ذلك عن قلب كهربائي لحام حديد (250 درجة مئوية) التي وضعت داخل الختم تدفئتها باستخدام. كرر هذا الإجراء 3 مرات للحصول على من إصابة عضلة القلب ترانسمورال. مراقبة تبييض عضلة القلب.
- انتفاخ الرئتين مع أقصى قدر من الضغط (لقط الأنبوب إلى الخارج من التنفس 2 s)، لتجنب انخماص الرئة. إزالة ضام من الفضاء ربية.
- إغلاق الأضلاع مع اثنين من خيوط 3-0. إغلاق خياطة العضلات على الأضلاع بتشغيل 4-0. لإغلاق الجلد استخدام 5-0 خياطة غرزة واحدة.
- الحد إيسوفلوراني إلى 1%. عند الحيوان هو التنفس تلقائياً، وإزالة الأنبوب الرغامى، ويستمر التخدير مع فاسيماسك (إيسوفلوراني 2 – 3%).
- ضمان عدم وجود ردود الفعل قبل معسر أطرافهم هند لرصد عمق كاف للتخدير. ثم استخدم واحدة 8-0 خياطة إغلاق موقع ثقب في القصبة الهوائية. إغلاق الجرح بثلاثة خيوط شتيخ واحدة 4-0.
- استخدام البوبرينورفين (0.05 مغ/كغ كل 12 ح) ووالايبوبروفين (5 مغ/كغ كل 24 ساعة) لعلاج الألم في الأيام التالية 5.
-
غرس ات (7 أيام بعد كريوينجوري)
- خنزير غينيا في دائرة التعريفي وتخدير الحيوان مع إيسوفلوراني الاختيار عمق التخدير بسبب عدم استجابة لتو-قرصه.
- حقن والايبوبروفين 4 – 5 مغ/كغ و 0.05 مغ/كغ البوبرينورفين تحت الجلد مع ز 21 إبرة وحقنه 10 مل بعد تحريض التخدير. خنزير غينيا على ظهرها وإبقاء التخدير مع فاسيماسك تغطي الفم والأنف.
ملاحظة: يجب التحقق من كفاية تخدير معسر القدمين الخلفيتين. - ينتشر الساقين خنزير غينيا في وتحديد موقف باستخدام الشريط.
- أداء الأعمال التحضيرية قبل العمليات الجراحية كما هو موضح في الخطوة 3.1.4–3.1.6. تنفيذ شق جلد أفقي 2 سم في منطقة الندبة من الجانب الأيسر الجانبي باستخدام مقص وملاقط.
- تشريح التصاقات اكسترابليورال باستخدام اليكتروكاوتيري برفق. فتح مساحة الجنبي بعناية مع المقص. إدراج الناشرة ضلع لفضح القلب.
- بصريا تحديد منطقة احتشاء بلونه شاحبا بالمقارنة عضلة القلب السليمة المحيطة. وضع التصحيح أنسجة القلب هندسيا أكثر منطقة احتشاء.
- ضمان الحصول عليها مع اثنين من 8-0 خياطة الجروح في كلا الجانبين. تأكد من الحصول على التصحيح في المنطقة غير إينفاركتيد القلب (الشكل 1). تضخم الرئتين مع الضغط، لتجنب انخماص الرئة. إزالة ضام من الفضاء ربية.
- إغلاق الأضلاع مع اثنين من خيوط 3-0. إغلاق خياطة العضلات على الأضلاع بتشغيل 4-0. لإغلاق الجلد استخدام 5-0 خياطة غرزة واحدة.
- الحد إيسوفلوراني إلى 1%. عند الحيوان هو التنفس تلقائياً، وإزالة الأنبوب الرغامى، ويستمر التخدير مع فاسيماسك (إيسوفلوراني 2 – 3%).
- ضمان عدم وجود ردود الفعل قبل معسر أطرافهم هند لرصد عمق كاف للتخدير. ثم استخدم واحدة 8-0 خياطة إغلاق موقع ثقب في القصبة الهوائية. إغلاق الجرح بمفرده ثلاث غرزة خياطة الجروح 4-0.
- استخدام البوبرينورفين (0.05 مغ/كغ كل 12 ح) ووالايبوبروفين (5 مغ/كغ كل 24 ساعة) لعلاج الألم في الأيام التالية 5.
- أربعة أسابيع بعد غرس ات القيام تخطيط صدى القلب عبر الصدر (كما هو موضح في الخطوة 2) لرصد وظيفة LV مع مرور الوقت.
ملاحظة: ويتم رصد وظيفة LV قبل غرس ات و 4 أسابيع بعد زرع لمراقبة لتحسين وظيفة القلب بغرس ات - Euthanize الحيوان التي IACUC الموافقة على البروتوكول وجراحيا explant القلب لمزيد من التحليل.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
هذا خنزير غينيا النموذج نموذج مناسب للتحقيق تجديد القلب بعد غرس هيبسك المشتقة بقع ات. تكاثر يؤدي إلى إصابات كبيرة transmural احتشاء عضلة القلب. يتم تقييم حجم الندبة بعلم الأنسجة أربعة أسابيع بعد كريوينجوري. ميسون trichrome تلطيخ يكشف الندوب transmural الكبيرة (الشكل 2). وكان حجم الندبة مماثلة على مدى عدد كبير من الجرحى الحيوانات التي تعكس درجة عالية من إمكانية تكرار نتائج8. في المتوسط 25 في المائة لعضلة القلب البطين الأيسر حلت محلها ندبا. تلوين ديستروفين أظهرت الطعوم احتشاء عضلة القلب الكبير أن جزئيا ريموسكولاريزيد الندبة (الشكل 3a). تلوين للبشرية Ku80 ثبت أصل البشرية لهذه المشكلة حديثا من عضلة القلب (الشكل 3b). أعلى التكبير كشفت عن أن هذه الطعوم تتألف من كثافة ميوسيتيس. وتم رصد وظيفة البطين الأيسر باستخدام تخطيط صدى القلب عبر الصدر. غرس ات ناجحة يتسم بحدوث تحسن في لفيف، وكسور منطقة تقصير، وانخفاضا في قطر نهاية االنبساطي البطين الأيسر (الشكل 4).
رقم 1: بقع هيهت بعد زرع. (أ) التصحيح فورا بعد زرع. (ب) تصحيح بعد زرع أربعة أسابيع. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
رقم 2: تحديد احتشاء في ماسون 's trichrome الملون المقطع البارافين 28 يوما بعد كريوينجوري- احتشاء يتحدد باللون الأزرق في تلطيخ trichrome ماسون، يمثلون أنسجة تليفية. شريط مقياس = 2 مم- الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 3: تلطيخ مع ديستروفين والبشرية Ku80. () ديستروفين تلطيخ يظهر جزر العضلات الكبيرة (براون) في منطقة الندبة (ب) تلطيخ كو من البارافين مقطوع القلب. كو-80 من جسم الإنسان على حدة. ولذلك، الخلايا إيجابية الملون (اللون البنى) من أصل الإنسان. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 4: M-وضع قياس البطين الأيسر باستخدام تخطيط صدى القلب عبر الصدر. (أ) في الأساس و (ب) أسبوع واحد بعد كريوينجوري. (مركز الحبس الاحتياطي: حاجز داخل البطيني، LV: البطين الأيسر، الأسبق: الجدار الخلفي). يتم إجراء قياسات 3 مرات. في الأساس، وأسبوع واحد بعد كريوينفاركشن و 4 أسابيع بعد غرس ات الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
تتوفر مجموعة متنوعة من نماذج حيوانية صغيرة لدراسة التأثير الذي يمارس زرع الخلايا في قلوب الجرحى9،،من1011. لقد اخترنا نموذجا خنزير غينيا بسبب الحيوانات الصغيرة جميع نماذج لها (الكهربائية) فسيولوجيا يشبه أوثق من البشر. مزايا النماذج الحيوانية الصغيرة هي الإسكان بسيطة، وتكاليف يمكن التحكم فيها، والقوى العاملة القليلة. بالمقارنة مع الفئران والجرذان، غينيا pigs´ فسيولوجيا القلب (الكهربائية) أكثر مماثلة للبشر. خاصة هو تردد القلب السفلي (~250/min)، ويظهر عمل البطين المحتملة مرحلة الهضبة والبوتاسيوم الحالي أناالخمير الحمر مهم بالنسبة ريبولاريزيشن7. وعلاوة على ذلك، ييسر الحجم الأكبر من الحيوانات العمليات الجراحية، وهو أهمية خاصة كما إعادة-thoracotomy المطلوبة بعد أسبوع من تنظيم دورات تعريفية للإصابة. ومع ذلك، خنازير غينيا حساسة للتخدير التي تتطلب بعض الخبرة.
ووصف شيبا et al.، استخدام 50 مغ/كغ xylazine الكيتامين و 2 مغ/كغ (القائمة) تخدير خنازير غينيا للقلب كريوينجوري4. وقد قيمنا أيضا هذا الفوج التخدير. واحدة من العيوب هو حقيقة أن من المستحيل وقف تأثير المخدرات إكسيلازيني والكيتامين بسبب مضادات قوية في عداد المفقودين. إذ ترى أن خنازير غينيا معرضة لمخاطر عالية من نقص السكر في الدم أثناء العمليات الجراحية، قررنا أن استخدام غاز المخدرات أثرها من السهل السيطرة وذلك مما أدى إلى مرحلة إنعاش مخدر قصيرة جداً. يتم استخدام القصبة لضمان تهوية آمنة طوال فترة الإجراءات. تنبيب الرغامى أورو من الناحية التقنية جداً يطالب في خنازير غينيا، حيث كثيرا ما يصعب تصور فتح القصبة الهوائية ولا يمكن ضمان تنبيب آمنة.
على الرغم من إصابة البرد يدفع بإصابة احتشاء عضلة القلب حاد لا التحديد مرآة مرض شريان التاجي/احتشاء عضلة القلب في البشر. وفي هذا الصدد، يجمل ربط اللاعب أو حتى نموذج إصابة ضخه الاسكيمية أكثر عن كثب الفيزيولوجيا المرضية البشرية. ومع ذلك، تشريح الشريان التاجي في خنازير غينيا يتسم بالضمانات الاحتياطية واسعة النطاق. ولذلك، ربط الشريان التاجي الأيسر الأمامي تنازلي لا يؤدي تكاثر في إصابات احتشاء عضلة القلب الكبير في خنازير غينيا12،13. ربط الفتى في الفئران والجرذان يؤدي إلى إعادة عرض واسعة النطاق وفي نهاية المطاف رقيق الجدار الأمامي، سمات التي لا ينظر إليها في البشر إلى هذا الحد. نموذج cryo-إصابة خنزير غينيا الحث على عمليات إعادة عرض وترقق جدار البطين، ولكن إلى حد ما، يشبه أوثق من احتشاء عضلة القلب إصابة في البشر. ولذلك، اختير نموذج كريوينجوري مما أدى لإصابة احتشاء عضلة القلب أكثر موثوقية إلى13. وفيات بيريبروسيدورال مشكلة رئيسية مع هذا النموذج. في البداية، توفي حوالي 30% الحيوانات خلال العملية الأولى أو في غضون 7 أيام بعد إصابة القلب. توفي آخر 30% خلال ات زرع المحاسبة المتعلقة وفيات الإجمالية بنسبة 60%. تعديلات عدة تؤدي إلى انخفاض كبير في معدل الوفيات. يستحث Isoflurane الثقيلة اللعاب وإفراز الشعب الهوائية. الأتروبين يقلل من إفراز الشعب الهوائية وكان عاملاً رئيسيا لخفض معدل الوفيات. العامل الثاني الذي انخفض بشكل كبير معدل الوفيات هو الاستخدام لحام الحديد للإفراج عن الطابع المعدني البارد من القلب. كان يستخدم الماء الدافئ في البداية فصل الطوابع من عضلة القلب. ومع ذلك، كان من الصعب لإزالة الماء من تجويف الصدر. المياه أثرت سلبا على التنفس وتؤدي إلى تطوير الالتصاق التي ساءت التشخيص animal´s المتبقية. وكان آخر تعديل التي أثرت إيجابيا على الإجراء حماية الرئة اليسرى من الطابع المعدني البارد مع ضغط. بعد هذه التعديلات كانت تنفذ الوفيات انخفض إلى ~ 20% لعملية القلب الضرر (بما في ذلك الأسبوع الأول بعد الجراحة) و 25 في المائة لزرع اهت. التعريفي لإصابة البرد يمثل عملية أسهل من الناحية الفنية، ويمكن تحقيق نتائج ثابتة بعد 5-10 الحيوانات قد عملت تحت إشراف. ات في زرع أكثر تطلبا وحوالي 20 من العمليات الجراحية تحت إشراف ينصح حتى يمكن الحصول على نتائج استنساخه.
في البداية، كنا الملحية الدافئة شطف القلب، وذلك، فصل التحقيق المجمدة من جدار البطين الأيسر. هذا الإجراء أسهل للتعامل مع ولكن تبقى قليلة ملليلتر من المحلول الملحي في الصدر يزيد من مخاطر فشل في الجهاز التنفسي.
وفي الختام، نموذج يصور خنزير غينيا استنساخه، وغير مكلفة، ويؤدي إلى نتائج متسقة. تخطيط صدى القلب عبر الصدر يقدم أداة مجدية وغير الغازية لتقييم وجود إصابة قلبية قبل إعادة تشغيل ويتم زرع الفساد.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
أي من مقدمي البلاغ قد تضارب المصالح المالية أو غيرها تضارب في إعلان.
Acknowledgments
تم تلقي لا تمويل لهذه الدراسة
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Ventilator (VetFlo Dual Mode) | Kent Scientific | ||
| Forene | abbvie | 1000009819 | |
| Carprofen | Zoetis | 256692 | |
| Atropin | Braun | PZN 00648037 | |
| Buprenorphin | Sigma | ||
| Metal stamp | |||
| Electric soldering iron | Claytools | ||
| 3-0 prolene suture | Ethicon | ||
| 4-0 prolene suture | Ethicon | 662SLH | |
| 5-0 prolene suture | Ethicon | 8710H | |
| 8-0 prolene suture | Ethicon | 8841H | |
| Tungsten Carbide Scissor | FST | No. 14568-12 | |
| Stainless sterilization Container | FST | No. 20890-51 | |
| Graefe Forceps | FST | No.11652-10 | |
| Extra fine Graefe Forceps | FST | No.11150-10 | |
| Forceps | FST | No. 11022-15 | |
| Halsted- Mosquito | FST | No. 13009-12 | |
| Forceps | FST | No.13003-10 | |
| Baby Mixter | FST | No. 13013-14 | |
| Needle holder (Castroviejo with Tungsten Casbide Jaws) | FST | No. 12565-14 | |
| Needle Holder (Halsey) | FST | No. 12501-13 | |
| Alm Retractor with Blumt Teeth | FST | No. 17008-07 | |
| Spring Scissor | FST | No. 15000-00 | |
| Compress 5x5 | Fink + Walter | PZN 08821417 | |
| Venflon Pro Safety | Becton Dickinson | PZN11123964 | |
| Cautery High Temp 2" | Bovie Medical Corporation | 0100607151011055 |
References
- Kirklin, J. K., et al. Seventh INTERMACS annual report: 15,000 patients and counting. The Journal of heart and lung transplantation: the official publication of the International Society for Heart Transplantation. 34, 1495-1504 (2015).
- Soonpaa, M. H., Field, L. J. Survey of studies examining mammalian cardiomyocyte DNA synthesis. Circulation research. 83, 15-26 (1998).
- Shiba, Y., Hauch, K. D., Laflamme, M. A. Cardiac applications for human pluripotent stem cells. Current pharmaceutical design. 15, 2791-2806 (2009).
- Shiba, Y., et al. Human ES-cell-derived cardiomyocytes electrically couple and suppress arrhythmias in injured hearts. Nature. 489, 322-325 (2012).
- Chong, J. J., et al. Human embryonic-stem-cell-derived cardiomyocytes regenerate non-human primate hearts. Nature. 510, 273-277 (2014).
- Kattman, S. J., et al. Stage-specific optimization of activin/nodal and BMP signaling promotes cardiac differentiation of mouse and human pluripotent stem cell lines. Cell stem cell. 8, 228-240 (2011).
- Watanabe, T., Rautaharju, P. M., McDonald, T. F. Ventricular action potentials, ventricular extracellular potentials, and the ECG of guinea pig. Circulation research. 57, 362-373 (1985).
- Weinberger, F., et al. Cardiac repair in guinea pigs with human engineered heart tissue from induced pluripotent stem cells. Science translational medicine. 8, 363ra148 (2016).
- Shiba, Y., et al. Electrical Integration of Human Embryonic Stem Cell-Derived Cardiomyocytes in a Guinea Pig Chronic Infarct Model. Journal of Cardiovascular Pharmacology and Therapy. 19, 368-381 (2014).
- van Laake, L. W., et al. Human embryonic stem cell-derived cardiomyocytes survive and mature in the mouse heart and transiently improve function after myocardial infarction. Stem cell research. 1, 9-24 (2007).
- Zimmermann, W. H., et al. Engineered heart tissue grafts improve systolic and diastolic function in infarcted rat hearts. Nature medicine. 12, 452-458 (2006).
- Johns, T. N., Olson, B. J. Experimental myocardial infarction. I. A method of coronary occlusion in small animals. Annals of surgery. 140, 675-682 (1954).
- van den Bos, E. J., Mees, B. M., de Waard, M. C., de Crom, R., Duncker, D. J. A novel model of cryoinjury-induced myocardial infarction in the mouse: a comparison with coronary artery ligation. Heart and circulatory physiology. , H1291-H1300 (2005).
