Summary
في هذا البروتوكول، يصف لنا كامل عملية قصر النظر التجريبية الإغراء في الفئران باستخدام المصممة حديثا النظارات وتكنيك اللازمة لتحقيق نتائج مستقرة واستنساخه في القياسات المعلمة العين.
Abstract
نموذج مورين من قصر النظر يمكن أداة قوية لبحوث قصر النظر بسبب التلاعب الجيني سهلة نسبيا. طريقة واحدة للحث على قصر النظر في الحيوانات وضع واضح ناقص العدسات أمام عينية لمدة أسابيع (المستحثة بعدسة قصر النظر، ليم). ومع ذلك، البروتوكولات القائمة للاغراء والتقييم تختلف من مختبر إلى مختبر. وهنا وصفت لنا طريقة عملية للغاية واستنساخه للحث على نظارات ليم في الفئران باستخدام المصممة حديثا. أسلوب التصحيحات العدسة ستابلي أمام العين الماوس بينما يسمح للعدسة لتكون أقلعت للتنظيف أو موضعي المخدرات الإدارة. النمط الظاهري قوية وفعالة، والفرق الصغيرة. يمكن تطبيق الطريقة الموضحة هنا للفئران الحق بعد الفطام التي تمتد مدة ممكنة للتجارب. أعطينا أيضا المشورة التقنية لتحقيق النتائج استنساخه في قياسات طول محوري والانكسار. ونأمل البروتوكول خطوة بخطوة الموصوفة هنا والمقالة مفصلة يمكن أن تساعد الباحثين القيام بتجارب قصر النظر مع قصر النظر بشكل أكثر سلاسة وجعل البيانات القابلة للمقارنة عبر المختبرات.
Introduction
معدل انتشار قصر النظر زاد بشكل كبير مؤخرا، بينما إليه ظهور وتطور إلى حد كبير لا يزال غير معروف1. النمط الظاهري الأكثر تميزا من قصر النظر هو استطالة طول محوري (القاعدة)، مما يزيد من خطر الإصابة بمضاعفات الشبكية أو حتى عمي2. لتحسين فهم الآلية المرضية لقصر النظر وتطوير علاجات فعالة، نماذج حيوانية قصر نظر قوية ومستقرة النمط الظاهري التقييم ضرورية.
باختصار، توجد طريقتين لحفز الدول قصر النظر في الحيوانات: نموذج-الحرمان قصر النظر (FDM) وقصر النظر المستحثة بعدسة (ليم)3. السابق يضع الناشرون أمام العين أو سوتوريس الجفن إلى طمس الصورة، والتي تؤثر على التطور الطبيعي لمقلة العين، مما يؤدي النمط الظاهري قصر نظر إلى. الأماكن الأخيرة ناقص العدسات أمام العين لنقل الجهة خلف الشبكية. الشبكية بالكشف عن تحول التركيز ومقلة العين لإعادة الشبكية والوصل الغضروفي. ل FDM، بعد إغلاق الجفن أو تم إصلاح الناشر أمام العين، وتكاد لا توجد صيانة المزيد مطلوب. ليم، العدسة تحتاج إلى اتخاذ للتنظيف من أجل الحفاظ على شفافية. وهكذا، FDM من السهل نسبيا أن يتسبب من الناحية الفنية. بيد أن آليات FDM ويم مختلفة، والأسلوب الذي يحاكي قصر النظر في الإنسان أفضل ما زال قيد المناقشة3. واحدة من نقاط القوة في ليم هو النمط الظاهري أقوى بالمقارنة مع FDM، على الأقل في حالة الفئران4.
وتشمل الحيوانات التي استخدمت لحمل قصر نظر الفراخ5والقرود6، الزبابة شجرة7، خنازير غينيا8والفئران4. النظر في إمكانية التلاعب بالجينات وأجسام الوفيرة المتاحة، والتكلفة المنخفضة لتربية، الفئران قد يكون الخيار الأول كنموذج الحيوان من قصر النظر. بالمقارنة مع غيرها من الحيوانات الكبيرة، تحديد العدسات أو الناشرون أمام العين الماوس غير صعبة نسبيا خاصة بالنسبة للفئران الصغار مثل حق بعد الفطام. للتجارب التي تحتاج إلى إدارة المخدرات الموضعية أو متعددة القياسات العين مؤقتاً، من الضروري أيضا للإطار أن يكون قابل للإزالة. تحد آخر وهو تغيير الماوس مقلة العين، الذي يحتاج إلى تقنيات متطورة وأجهزة لتقييم الخصائص المورفولوجية الصغيرة. وحتى الآن، حمل مختلفة وقياس البروتوكولات المستخدمة في فرق بحثية مختلفة تجعل من الصعب مقارنة وتكرار النتائج عبر المختبرات. هناك حاجة إلى بروتوكول قياسي مع التفاصيل.
ووصف الأعمال السابقة أساليب متعددة لإصلاح العدسات أو الناشرون أمام العين الماوس، مثل الالتصاق9، خياطة10 وحملق محمولة على رأس الإطار11،12. نحن مجتمعة توجد تقنيات12،11،حملق محمولة على رأس13 مع إطار عملنا المصممة حديثا لوضع بروتوكول يحسن لتحريض قصر تجريبية قوية وفعالة في الفئران. يمكن تطبيق البروتوكول للفئران الصغار بعد الفطام عند الولادة يوم 21 (p21). نحن أيضا الأمثل في عمليات التقييم مستقرة ودقيقة لتعمل بما في ذلك الانكسار وال. نأمل أن يكون هذا البروتوكول الموحد يمكن أن تساعد على جعل الفئران قصر نموذج أكثر سهولة للبحوث قصر النظر.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
وافق جميع الإجراءات "لجنة الأخلاقيات" في "بحوث الحيوان" كلية الطب بجامعة كيو التقيد "البيان آرفو" "استخدام الحيوانات" في أوفثالميك والبحوث الرؤية والمبادئ التوجيهية المؤسسية في "التجارب الحيوانية" في كيو جامعة، والبحوث الحيوانية: المبادئ التوجيهية لتقديم التقارير في فيفو تجارب (سيصلون) لاستخدام الحيوانات في البحوث.
1-تجميع النظارات للفئران
- إعداد قطع الغيار اللازمة لتجميع النظارات الطبية (الشكل 1a). لكل الماوس، وإعداد جميع ما يلي: عصا النايلون مثبتة على رئيس واحد وواحدة أعلى والتيتانيوم أقل واحد الإطار، اثنين من العدسات مع القوى السليم وفقا للغرض من التجربة، الجوز واحد ل M1.4 حجم المسمار عادي واحد، M1.4 واحد حجم المسمار بطول 10 ملم غسالة ل M1.4 حجم المسمار مع سمك 0.3 مم، ونصائح الأظافر الاصطناعية اثنين (جدول المواد).
ملاحظة: يوجد نوعين من إطارات مع ارتفاعات مختلفة. للماوس واحد، تستخدم إطار أعلى واحد وإطار واحد أقل كمجموعة. وينبغي وضع إطارات أعلى أعلاه أقل منها بغية جعل الحقول الرؤية متناظرة. الإطارات والعدسات المصممة خصيصا والمصنعة من قبل مجموعة أبحاث المؤلفين. هذه متاحة عن طريق الاتصال بالمؤلفين المناظرة من هذه المادة. يمكن العثور على أجزاء أخرى في محلات البيع بالتجزئة أداة. - تجميع الإطار للعين اليمنى واليسرى بشكل منفصل.
- ترتيب نصيحة ظفر لمواجهة الاتجاه الخارجي لتحقيق أفضل تأثير وقائي. ضبط زاوية بين طرف ظفر والإطار يكون حوالي 130° لتجنب إخفاء حقل الرؤية الماوس (الشكل 1b). تلتزم نصائح الأظافر الاصطناعية للإطار باستخدام مادة لاصقة cyanoacrylate.
ملاحظة: يمكن أن تساعد الأظافر نصائح لحماية العدسة من التعرض الخدوش بالماوس. يجب أن يكون اتجاه نصائح ظفر المعاكس بسبب استخدام الإطار الأعلى والإطار السفلي للعين اليمنى والعين اليسرى، على التوالي. - انتظر على الأقل 12 ح السماح لاصق جاف تماما، ثم استخدام ماكينة أظافر ضبط شكل الظفر نصائح لتكون عن 1 سم × 1 سم عن طريق القص والتشذيب.
- تنضم للإطار باستخدام مادة لاصقة cyanoacrylate العدسة. وضع العدسة على الإطار من جهة وتعقد الإطار أفقياً. حقن لاصقة cyanoacrylate من حافة العدسة، والسماح انتشار لاصقة بالتوتر السطحي.
ملاحظة: اللاصقة سوف تآكل العدسة وتؤثر على شفافيته، لذا تأكد من اللاصق إلا يمس الجزء المحيطي للعدسة. استخدام عدسة بلانو الديوبتر 0 (د) كعنصر تحكم وناقص العدسة للحث على قصر النظر. تأثير القوى المختلفة من ناقص العدسات (–10 D إلى –50 D) وقد تم وصف4في أماكن أخرى. إلى أقصى حد الإغراء قصر النظر، ينصح بعدسة د –30 لتحريض قصر النظر. يمكن أيضا التي يسببها FDM مع نفس الجهاز ببساطة عن طريق تغيير العدسة إلى الحد الأقصى من 1.5 مل microtube الناشر.
- ترتيب نصيحة ظفر لمواجهة الاتجاه الخارجي لتحقيق أفضل تأثير وقائي. ضبط زاوية بين طرف ظفر والإطار يكون حوالي 130° لتجنب إخفاء حقل الرؤية الماوس (الشكل 1b). تلتزم نصائح الأظافر الاصطناعية للإطار باستخدام مادة لاصقة cyanoacrylate.
- تشديد المسمار إلى العصا النايلون جنبا إلى جنب مع الغسالة من الجانب المسطح من العصا. إعداد نظارات والعصي قبل التجربة على التوالي والأسهم لزيادة الاستخدام (الشكل 1 ج).
ملاحظة: يمكن أن يكون مؤقتاً البروتوكول هنا.
2-القياسات الانكسار وال خط الأساس.
- تطبيق قطره واحدة من عامل ميدرياتيك التي تحتوي على تروبيكاميدي 5 ملغ/مل و 5 ملغ/مل هيدروكلوريد فينيليفريني على كل جانب من مقلة العين تمدد التلميذ. انتظر لمدة 5 دقائق على الأقل قبل التخدير العام.
ملاحظة: تمدد التلميذ تحت العامة التخدير سوف يسبب الساد المعكوس الذي يؤثر على قياس بعد ذلك. دائماً تمدد التلميذ قبل التخدير العام والانتظار لمدة 5 دقائق على الأقل. قطره واحدة (حوالي 0.05 مل) عامل ميدرياتيك ما يكفي معلقاً التلميذ العين الماوس، بينما عامل أكثر سوف لا تضر بالخطوات التالية. - ضع الماوس تحت التخدير العام. فهم الجلد الخلفي للماوس بهدوء لإبقاء الفأرة من الاهتزاز في العين حتى أنه هو فظاعتها تماما. القاضي عمق التخدير العام يكون كافياً إذا لم يتحرك الماوس عند وضعه على الطاولة بحرية.
ملاحظة: يتم استخدام مزيج من الميدازولام (40 ميكروغرام/100 ميكروليتر)، ميديتوميديني (7.5 ميكروغرام/100 ميكروليتر) وطرطرات بوتورفانول (50 ميكروغرام/100 ميكروليتر) هنا للتخدير العام للفئران بحجم الحقن داخل 0.01 مل/غ. عموما، هناك حاجة أقل من 5 دقائق للفئران النوم. منذ وقت طويل من التخدير العام يسبب بطء ضربات القلب ودرجة حرارة الجسم منخفضة. يوصي بتجنب التأثير المحتمل للتخدير العام للقياس، الانتهاء من جميع القياسات في غضون 10 دقيقة بعد حقن المخدر. بوتورفانول المقدمة في كوكتيل مخدر توفير ما يقرب من 4 ساعات تسكين. وصفه مناسبة للتخدير العام قد مختلف المؤسسات. - قياس إنكسار العين الماوس باستخدام9،4،فوتوريفراكتور الأشعة تحت حمراء14. ضبط اتجاه إحدى العينين الماوس للحفاظ على صورة بوركنجي الأولى في مركز للتلميذ وقياس الانكسار على طول المحور البصري. بعد القياس، قياس العين المقابلة مع نفس الإجراءات (الشكل 2a).
ملاحظة: قيمة قياس الانكسار يتأثر تأثرا شديدا بموقف العين الماوس على طول المحور البصري. تأكد من محاذاة الصورة بوركنجي الأولى ضمن درجات ±3 من المركز للتلميذ. ويمكن استخدام منضدة لنظام التصوير المقطعي (SD--أكتوبر) التماسك الضوئية المجال الطيفي لضبط الاتجاه للتلميذ في مقاييس الانكسار4. - قياس العال العين الماوس باستخدام SD--أكتوبر نظام4،،من1516. تعريف شركة كالمسافة من الذروة القرنية إلى حدود ألمع قرب العصب البصري (الشكل 2).
ملاحظة: مماثلة مع قياس الانكسار، الجامعة تتأثر بقوة باتجاه العين الماوس. يمكن تأكيد الذروة القرنية بانعكاس مثل نقطة على السطح القرنية. وستكون حدود الجانب الشبكية ضبابي جداً عند نقطة العصب البصري. ضبط الاتجاه قليلاً للسماح للحدود أن يكون واضحا ما فيه الكفاية لقياس ولكن ليس بعيداً جداً من العصب البصري.
3-تثبيت الإطار على الجمجمة الماوس.
- تطبيق قطره واحدة من 0.1% المنقي الصوديوم hyaluronate قطره العين لمنع جفاف في كل عين.
ملاحظة: سوف تؤثر قطره العين على سطح العين قيم الانكسار وقياسات طول محوري. لا تستخدم قطره العين بعد التخدير حتى يتم الانتهاء من جميع القياسات. - وضع الذقن الماوس أنيسثيتيزيد على منحدر من الطين أو أي شيء يمكن استخدامها كوسادة لتجعل الطائرة مقدما للجمجمة تكون أفقية.
- تعقيم الشعر وفروة الرأس بين الأذنين والعيون باستخدام مسحه القطن مع الإيثانول 70%.
- قطع الجلد بين الأذنين والعينين لفضح الجمجمة لحول 0.8 سم2 باستخدام المقص الجراحي وملاقط. استخدم مسحه النقش الأسنان السائل والقطن لإزالة في السمحاق. تعقيم بالمقص الجراحي وملاقط مع الإيثانول 70% قبل الجراحة لكل الماوس.
ملاحظة: قص الشعر وارتداء قفازات معقمة قد تكون مطلوبة. تحقق من أحكام اللجنة الرعاية الحيوانية ذات الصلة قبل هذا الإجراء. في معظم الحالات، يمكن الاطلاع على سائل الحفر الأسنان كأحد المرفقات في نظام لاصقة الأسنان علاج ذاتي. إذا لم يتوفر سائل الحفر الأسنان، استخدام الإيثانول 70% بدلاً من ذلك. - قم بتجميع مجموعة من الأطر دون عدسة للمساعدة في إصلاح العصا على الموقف الصحيح. وضع الإطارات على رأس الماوس. ضبط موضع الإطارات التأكد من كلتا العينين في منتصف الإطار الفارغ بعناية.
- استخدام نظام لاصقة أسنان علاج ذاتي لإرفاق العصا على الرأس الماوس. احرص على عدم ترك السائل لتدفق نظام التقيد إلى العين الماوس.
ملاحظة: يختلف الأسلوب لاستخدام نظام لاصقة الأسنان علاج ذاتي بين المنتجات. الرجوع إلى التعليمات بعناية.
تنبيه: بعض الكواشف في نظام لاصقة الأسنان قد تكون سامة. - انتظر حوالي 5 دقائق وتقلع من الإطار والجوز بعناية دون تغيير موقف العصا (الشكل 3a).
- حقن 0.75 مغ/كغ أتيباميزولي هيدروكلوريد إينترابيريتونيلي لمساعدة الماوس للتعافي من التخدير بسرعة أكبر. ضع الماوس أقفاص فردية حتى تعافي تماما. لا تترك الماوس غير المراقب حتى قد وعيه كافية للحفاظ على ريكومبينسي القصية. يمكن أن يكون مؤقتاً البروتوكول هنا.
4-بدء التعريفي قصر النظر والصيانة بعد ذلك
- انتظر 24 ساعة على الأقل بعد عملية جراحية للسماح للماوس التعافي من التخدير تماما. أمسك العصا ووضع الإطارات مع العدسات. الإغراء يبدأ عند هذه النقطة الزمنية (الشكل 3b).
ملاحظة: لتقليل عدم الراحة أثناء التعافي من التخدير، وإعطاء الوقت الكافي لنظام لاصقة الأسنان يتجمد، ينصح بوضع الإطار بعد الفئران تعافي تماما من التخدير. وسيغطي أسمنت الراتنج نظام لاصقة تماما القطع من فروة الرأس. ولذلك، مطلوب لا معاملة خاصة بعد الجراحة للوقاية من العدوى وتخفيف الألم بعد الجراحة. الحق بعد المرة الأولى من وضع الإطار، سوف تكون أكثر إدراكا منها لوجود العدسة الفئران والصفر كثيرا. السلوك الإجمالي سوف يعود إلى طبيعته بعد بضع ساعات. يمكن الاحتفاظ بالفئران مع عدسات بنفس الكثافة للفئران العادية. - إزالة الإطار وتنظيف العدسات ونصائح ظفر مع مسحات القطن على الأقل مرتين في أسبوع للحفاظ على شفافية العدسة.
ملاحظة: ليس من الضروري وضع الماوس تحت التخدير لإزالة ووضع في الإطار. توفير دعم للفئران الجلوس على، بدلاً من وجود لهم إنهاء أثناء العمل معهم يمكن أن تقلل من الشدة.- إذا كان مقياس مؤقتة اللازمة، وضع الماوس تحت التخدير وقياس الماوس كما تم وصفه سابقا. ويمكن أن تستمر الإغراء بعد الماوس يتعافى من التخدير.
- قم بتنظيف القفص على الأقل مرتين في أسبوع.
ملاحظة: هذه التعليمات الحفاظ على وضوح العدسة. كما قد يكون من المفيد وضع شبكة بين الماوس وأسفل القفص filtrate قصاصات الغذاء. - مراقبة وزن الجسم والسلوك الإجمالي. قارن لهم نفس السن الفئران لم يمسها أثناء عملية تجريبية كاملة.
ملاحظة: باستثناء بعض السلوكيات الخدش، هو إيجاد أي تغيير ملموس بما في ذلك وزن الجسم بين فئران التجارب مع الفئران غير المعالجة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
أولاً، تحقق في حالة استعداد جميع قطع الغيار اللازمة (الشكل 1a). ويرد مثال على قطعة من النظارات الطبية المجمعة في الشكل 1b. باستثناء الجزء الرئيسي من الإطارات والجوز، جميع أجزاء أخرى المتاح لكل الماوس. مجموعة من النظارات المكتملة يرد في الشكل 1 ج. تغيير الزاوية بين إطارين لتناسب الماوس مع مختلف الإعمار.
ويرد مثال لقياس الانكسار في الشكل 2a. وهذا عين ماوس المستحث بعدسة د-30 لمدة 3 أسابيع ابتداء من p21. لاحظ أنه يجب التحكم غض البصر قريبة من 0 درجة في محور x و y مما يعني أن الماوس هو رؤية الحق أمام الكاميرا9. الشكل 2 (ب) يبين مثالاً لصورة العين كله أخذ بنظام SD--أكتوبر ضبطها للفئران، وتعريف كل جزء من العين. وبصفة عامة، نظم التنمية المستدامة، تشرين الأول/أكتوبر الفعلية المقاسة القيمة الحالية مباشرة.
صورة عصا التقيد بالماوس رأسه هو مبين في الشكل 3 ألف. ينبغي أن تكون حدود القطع مالا يقل عن 3 ملم بعيداً عن العين لتجنب التأثير على وظيفة الجفن. يبقى على رأس الماوس حتى نهاية الإغراء العصا ويوفر الأساس لإصلاح النظارات. قوة لاصقة للنظام لاصقة الأسنان المفترض أن تكون كافية لتثبيت النظارات الطبية خلال التجربة بأكملها حوالي 3 إلى 4 أسابيع. تجميع النظارات الطبية كما هو موضح في الشكل 3 (ب). قطعتين من النظارات الطبية ينبغي أن تكون متماثلة إلى حد ما.
وتظهر نتائج الممثل في الشكل 4. في هذه التجربة، تم إصلاح عدسات بلانو د 0 أمام أعين الأيسر الضوابط الداخلية والعدسات-30 د تم إصلاحها أمام العين اليمنى للحث على قصر النظر (C57B6/ياء الفئران، الإغراء بدأت من p21، n = 4). تم قياس الانكسار والمرض مرة واحدة في أسبوع بعد بداية الحافز لمدة ثلاثة أسابيع. مقارنة مع عدسات بلانو د 0،-30 D الناجم عن تحول قصر نظر قوي في الانكسار وال. تغيير الانكسار التوصل إلى الذروة في الأسبوع الأول وبقي مسطحة للاسبوعين التاليين. الفرق بين تغيير عيون قصر نظر وعيون التحكم في شركة كبيرة من الأسبوع الأول وأصبح أكبر وأكبر في الأسبوعين التاليين.
رقم 1: تصميم النظارات محمولة على جمجمة. () جميع الأجزاء اللازمة لتجميع النظارات الماوس. (ب) مثال على وضع الإطار والمسمار تلميح للجانب الأيمن من العين. (ج) مثال على مجموعة واحدة من نظارات المجمعة. قم بضبط الجزء المشترك تغيير زاوية الإطارات صالح للفئران في مختلف الإعمار. لقد تم تعديل هذا الرقم من جيانغ، X. وآخرون4، متاح تحت "رخصة الإبداعي العموم الإسناد 4.0 الدولية". http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
رقم 2: عينة من الصور لقياس الانكسار وآخرون () صورة لقياس الانكسار لعين قصر نظر باستخدام فوتوريفراكتور الأشعة تحت حمراء. (ب) صورة لنموذج قياس نادي العين الماوس باستخدام نظام للتنمية المستدامة، تشرين الأول/أكتوبر، وتعريف كل جزء من كرة العين. لقد تم تعديل هذا الرقم من جيانغ، X. وآخرون4، متاح تحت "رخصة الإبداعي العموم الإسناد 4.0 الدولية". http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
رقم 3: صورة لماوس واحدة بعد الجراحة- () مثال واحد الماوس بعد الجراحة للتقيد العصا. (ب) أحد الماوس مع النظارات الطبية في كلا الجانبين. لقد تم تعديل هذا الرقم من جيانغ، X. وآخرون4، متاح تحت "رخصة الإبداعي العموم الإسناد 4.0 الدولية". http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 4: الممثل نتائج متابعة مدتها ثلاثة أسابيع للاغراء قصر النظر في أربعة الفئران باستخدام عدسات د-30 والعدسات د 0 الضوابط الداخلية- () التغييرات من الانكسار لمدة ثلاثة أسابيع. ويمكن ملاحظة تغيير مفاجئ بعد الإغراء أسبوع واحد. (ب) على النقيض من ذلك، التغييرات في شركة كانت خفيفة نسبيا. وأظهرت علامات النجمة دلالات إحصائية بين العينين يرتدي العدسات د 0 ود-30 في كل أسبوع، على التوالي. ف < 0.05، * *ف < 0.01. طالب t-اختبار. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الرقم 5: أوصى المخطط الانسيابي لتحريض قصر النظر في الفئران. المخطط الانسيابي أظهر هنا تمثل نمط واحد ممكن لحمل قصر النظر في الفئران. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
للتأكد من النظارات الطبية لتكون ثابتة ستابلي على رأسه الماوس، عدة خطوات في هذا البروتوكول بحاجة إلى إيلاء اهتمام كبير. يجب إزالة في السمحاق تماما قبل استخدام نظام لاصقة طب الأسنان. الدم في الجمجمة أيضا تحتاج إلى تنظيف بعناية. بينما ضبط القليل مقبول الحق بعد تطبيق اللاصقة، لا تقم بتحريك العصا وكثيراً ما قبل النظام لاصقة تجف. اتبع التعليمات للنظام لاصقة بعناية، لا سيما أن نسبة كل مكون من مكونات المخلوط النهائي. عندما أمسك الماوس أثناء الصيانة النظارات الطبية أو القياسات المتابعة بعد الجراحة، لا يمسك العصا مع جسم الماوس معا. الحركة النسبية بين الجمجمة والعصا هو السبب الأكثر تواترا لإسقاط إلى أسفل العصا. مع الجراحة المناسبة واستيعاب المهارة، سيكون عدد الأفراد قائمة منسدلة العصا أقل من واحد في تجربة 3 أسابيع بما في ذلك 20 فردا.
الشعر وقصاصات الغذاء قد تنزلق إلى الفاصل الزمني بين العين والعدسة. وهذا سوف تؤثر على شفافية العدسة، بل يحتمل أيضا أن تلحق الضرر سطح القرنية جسديا. للحفاظ على شفافية العدسة، مرتين على الأقل لتنظيف ضرورية من كل أسبوع. وهذا سيعطي أيضا الفئران فرصة للعريس وجها للحد من حدوث مضاعفات للقرنية. ترك مساحة حوالي 1 ملم بين الإطار والجلد للسماح للماوس وميض. الإطار قد يجعل من الصعب بالنسبة للفئران للوصول إلى الطعام خارج القفص عن طريق الشبكة أعلاه. لذلك، من المستحسن وضع الغذاء على أرضية القفص مباشرة. تغيير القفص إلى واحدة نظيفة لحول مرتين في أسبوع سيساعد أيضا على إبقاء العدسات نظيفة. أصبحت العدسات القذرة الناشرون تحريض قصر النظر من خلال إليه النموذج-الحرمان. وقد تشوه البيانات وجعل النتيجة إلى أن يكون من الصعب تفسير حيث أظهرت الأدلة أن FDM ويم نظم نموذجية مختلفة في مسببات3.
نظراً لصغر حجم العين الماوس، معايير قياس العين تميل إلى أن تكون غير مستقرة. ونحن نوصي فوتوريفراكتور الأشعة تحت الحمراء التي وضعها الدكتور شيفل ل قياس الانكسار9 ونظام سدوكت لل4 (انظر الجدول للمواد). كلا النظامين تقديم معلومات كافية للحكم على موثوقية القيمة المقاسة التأكد من التكرار للقياس. للانكسار، كما ورد في التقارير السابقة، بالغة الأهمية للحفاظ على،على محور4قياس14. إبقاء سيطرة النظرة داخل ±3 درجات يمكن أن تلقي نتائج مستقرة. أنبوب النظام سدوكت لتحقيق هذا القياس الدقيق، قد يكون مفيداً عند اللف باتجاه العين الماوس. لقياس ال، وهي الضوء المنعكس على الحدود ألمع قرب العصب البصري والذروة القرنية علامتي التشريحية موثوق بها تضمن التكرار لهذا القياس.
البروتوكول هو موضح هنا الناجم عن قصر نظر من الدول الهامة في الفئران في غضون أسبوع واحد. على الرغم من أن هذه الآلية لا يزال غير معروف، التغيير في الانكسار، وشركة ليست بالضرورة موازية. حيث يواصل نموه نادي قصر نظر بعد أسبوع واحد، نحن نوصي بالقياس إلى القيام به ثلاث مرات في المجموع: قبل أسبوع واحد وثلاثة أسابيع بعد الإغراء. وأظهرت إحدى الانسيابية مثال لتحريض قصر النظر في الشكل 5. استناداً إلى السابقة تقرير4، بدءاً من p21، واستخدام--أوصت العدسات 30 د "يم تجارب" آخر لما يزيد على 4 أسابيع قد يكون ارتفاع معدل المضاعفات القرنية الشديدة التي تؤثر على القيمة المقاسة وتسريع استهلاك العدسات . المضاعفات الأكثر شيوعاً تندب القرنية. لا يمكن تنظيف الفئران وجوههم والجفون ارتداء الإطار، التي قد تكون السبب في التعقيد.
يمكن تطبيق الجهاز المبينة في هذا البروتوكول على الفئران بعد الفطام (p21). وهذا قد يسهم جزئيا النمط الظاهري قوية لاحظ4. الإطار قابل للإزالة دون التخدير العام. وهذا ما يسمح الباحث ليس فقط تنظيف العدسات بسهولة، ولكن أيضا جعل إمكانية إيصال المخدرات الموضعية4. قوة أخرى أن العدسات يمكن أن تتغير بسهولة في الناشرون أو العدسات مع ديوبتر مختلفة (على سبيل المثال.، بالإضافة إلى العدسات)، الذي يمتد في إمكانيات هذا الأسلوب. واحد الحد من هذا الأسلوب أن الجراحة تحتاج بعض الممارسة قبل أن يمكن التقيد الإطارات ستابلي للتجربة كلها. القياسات أيضا بحاجة إلى الصبر لجمع بيانات موثوقة.
الفئران نموذج الحيوان الذي لا غنى عنه مع أن إمكانية التلاعب بالجينات ومنخفضة التكلفة لتربية. نأمل أن يكون البروتوكول الموصوفة هنا يمكن أن تجعل قصر النظر التجريبية في الفئران نموذج عملي أكثر لقصر النظر للبحث.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
تم تطبيق تصميم النظارات الماوس لبراءات اختراع (الطلب رقم 201741349).
Acknowledgments
ونشكر Pardue فرص لتقديم المشورة بشأن سدوكت، واو شيفل لإسداء المشورة بشأن قياس الانكسار وانحناء القرنية، السيد سانشوو لإعادة إنشاء البيانات الإطار ثلاثي الأبعاد، م. Miyauchi؛ ك. العداء؛ يوسف تاناكا؛ س. كوندو؛ جيم شودا؛ م. أبوكي؛ يوسف ميوا؛ يوسف هاجيوارا؛ ألف إيشيدا؛ يوسف توميتا؛ يوسف قتادة؛ هاء يوتسوكورا؛ ك. تاكاهاشي؛ ووانغ Y. لمناقشات حاسمة. هذا العمل كان يدعمها اينيد المنح "البحث العلمي" (كاكينهي، 10881 ك 15 رقم) من وزارة التربية والتعليم، والثقافة والرياضة، والعلوم والتكنولوجيا (يأمرون) للمعارف التقليدية. هذا العمل تدعمه أيضا المنح للبحوث قصر النظر من العداء المختبرات، وشركة (طوكيو، اليابان).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| screw | NBK | SNZS-M1.4-10 | |
| washer | MonotaRO | 42166397 | |
| nut | MonotaRO | 42214243 | |
| stick | DMM Make | none | designed by authers and output by the 3D printer rented from DMM Make. |
| frame | DMM Make | none | designed by authers and output by the 3D printer rented from DMM Make. |
| lenses | RAINBOW CONTACT LENS | none | customized for mice use by the company |
| cyanoacrylate glue | OK MODEL | MP 20g | |
| dental adhesive resin cement | SUN MEDICAL | super bond | contains the etching liquid used for removing the periosteum of the mouse skull |
| infrared photorefractor | Steinbeis Transfer Center | none | designed and offered by Dr. Frank Schaeffel from university of Tübingen |
| Spectral domain OCT | Leica | R4310 | |
| Tropicamide, Penylephrine Hydrochloride solution | Santen | Mydrin-P | |
| midazolam | Sandoz K.K. | SANDOZ | components for the anesthetic |
| medetomidine | Orion Corporation | Domitor | components for the anesthetic |
| butorphanol tartrate | Meiji Seika Pharma | Vetorphale | components for the anesthetic |
| 0.1 % purified sodium hyaluronate | Santen | Hyalein | |
| atipamezole hydrochloride | Zenoaq | antisedan |
References
- Dolgin, E. The myopia boom. Nature. 519 (7543), 276-278 (2015).
- Ohno-Matsui, K. Pathologic Myopia. Asia-Pacific Journal of Ophthalmology (Philadelphia, Pa). 5 (6), 415-423 (2016).
- Morgan, I. G., Ashby, R. S., Nickla, D. L. Form deprivation and lens-induced myopia: are they different. Ophthalmic & Physiological Optics. 33 (3), 355-361 (2013).
- Jiang, X., et al. A highly efficient murine model of experimental myopia. Scientific Reports. 8 (1), 2026 (2018).
- Torii, H., et al. Violet Light Exposure Can Be a Preventive Strategy Against Myopia Progression. EBioMedicine. 15, 210-219 (2017).
- Smith, E. L. 3rd, et al. Effects of Long-Wavelength Lighting on Refractive Development in Infant Rhesus Monkeys. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 56 (11), 6490-6500 (2015).
- Gawne, T. J., Siegwart, J. T., Ward, A. H., Norton, T. T. The wavelength composition and temporal modulation of ambient lighting strongly affect refractive development in young tree shrews. Experimental Eye Research. 155, 75-84 (2017).
- Wu, Y., et al. Early quantitative profiling of differential retinal protein expression in lens-induced myopia in guinea pig using fluorescence difference two-dimensional gel electrophoresis. Molecular Medicine Reports. , (2018).
- Schaeffel, F., Burkhardt, E., Howland, H. C., Williams, R. W. Measurement of refractive state and deprivation myopia in two strains of mice. Optometry and Vision Science. 81 (2), 99-110 (2004).
- Tkatchenko, T. V., Shen, Y., Tkatchenko, A. V. Mouse experimental myopia has features of primate myopia. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 51 (3), 1297-1303 (2010).
- Faulkner, A. E., Kim, M. K., Iuvone, P. M., Pardue, M. T. Head-mounted goggles for murine form deprivation myopia. Journal of Neuroscience Methods. 161 (1), 96-100 (2007).
- Gu, Y., et al. A Head-Mounted Spectacle Frame for the Study of Mouse Lens-Induced Myopia. Journal of Ophthalmology. 2016, 8497278 (2016).
- Siegwart, J. T. Jr, Norton, T. T. Goggles for controlling the visual environment of small animals. Laboratory Animal Science. 44 (3), 292-294 (1994).
- Tkatchenko, T. V., Tkatchenko, A. V. Ketamine-xylazine anesthesia causes hyperopic refractive shift in mice. Journal of Neuroscience Methods. 193 (1), 67-71 (2010).
- Chou, T. H., et al. Postnatal elongation of eye size in DBA/2J mice compared with C57BL/6J mice: in vivo analysis with whole-eye OCT. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 52 (6), 3604-3612 (2011).
- Park, H., et al. Assessment of axial length measurements in mouse eyes. Optometry and Vision Science. 89 (3), 296-303 (2012).
