Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Neuroscience

Побуждение и оценки мышиных модели экспериментальной близорукости

Published: January 22, 2019 doi: 10.3791/58822

Summary

В настоящем протоколе мы описываем процесс полной экспериментальной близорукость склонения в мышах с помощью недавно разработан ОПРАВЫ и техника, необходимые для достижения стабильной и воспроизводимость результатов в глазной параметр измерения.

Abstract

Мышиных модель близорукость может быть мощным инструментом для близорукости исследований из-за сравнительно легко генетические манипуляции. Один из способов заставить близорукости в животных это поставить четкие минус линз перед глазами недель (объектив индуцированная миопия, Лим). Однако сохранившиеся протоколы для побуждения и оценки варьируются от лаборатории в лаборатории. Здесь мы описали весьма практичным и воспроизводимый метод побудить Лим мышей с использованием недавно разработан ОПРАВЫ. Метод исправления объектив стабильно перед мышь глаз во время позволяет объектив снимается для очистки или актуальные наркотиков администрации. Фенотипа является надежной и эффективной, и разница невелика. Метод, описанный здесь может применяться для мышей сразу после отнятия от груди, который расширяет возможности продолжительность для экспериментов. Мы также дали технического Советы для достижения воспроизводимость результатов в рефракции и измерения осевой длины. Мы надеемся, шаг за шагом протокол, описанные здесь и подробную статью может помочь исследователям выполнять эксперименты Близорукость миопия более плавно и сделать сопоставимые данные по всей лаборатории.

Introduction

Распространенность близорукость недавно резко возросло, в то время как механизм ее возникновения и прогрессирования по-прежнему находятся неизвестный1. Наиболее характерным фенотип близорукости является удлинение осевой длины (AL), который увеличивает риск для сетчатки осложнений или даже слепоты2. Лучше понимать патогенез близорукости и разработать эффективные методы лечения, необходимы надежные близорукий Животные модели и стабильной фенотип оценки.

Кратко, для вызывая близорукий государств в животных существуют два метода: формы лишение миопия (FDM) и объектив индуцированная миопия (LIM)3. Бывшие места диффузоры перед глазом или зашивает веко, чтобы скрыть изображение, которое влияет на нормальное развитие глазного яблока, что приводит к близорукости фенотип. Последние места минус линз перед глазом для перемещения координационным центром за сетчаткой. Сетчатки определяет смещение фокуса и удлиняется глазного яблока перестроить сетчатки и координатора. Для FDM после закрытия веко или диффузор был установлен перед глазом, требуется почти без дополнительного обслуживания. Для Лим объектив необходимо снять для очистки для того, чтобы держать его прозрачным. Таким образом FDM сравнительно легко быть наведено технически. Однако механизмы FDM и Лим отличаются и какой метод имитирует близорукости в человека лучше находится в стадии обсуждения3. Одна из сильных сторон Лим является сильнее фенотип, по сравнению с ФДМ, по крайней мере в случае мышей4.

Животные, которые были использованы для стимулирования близорукость включают цыплят5, обезьян6,7тупайи, морских свинок8и мышей4. Учитывая возможности генетической манипуляции, обильные имеющиеся антител и низкая стоимость для разведения мышей можно было первым выбором как животной модели близорукости. Однако по сравнению с другими более крупных животных, фиксации линз или диффузоры перед глазом мыши относительно сложным, особенно для молодых мышей, например право после отнятия от груди. Для экспериментов, которые нужно актуальные лекарствами или несколько измерений временных глаз это также необходимо для кадра, чтобы быть съемным. Еще одной проблемой является небольшой морфологические изменения мыши глазного яблока, которая требует сложной техники и приборов для оценки. На сегодняшний день, различные вызывающие и измерительные протоколы, используемые в различных исследовательских групп сделать его трудно сравнивать и повторить результаты через лаборатории. Необходим стандартный протокол с деталями.

Предыдущих работах описано несколько способов исправить линзы или диффузоры перед мыши глаз, таких как приклеивание9, шить10 и руководитель конной очки кадр11,12. Мы объединили существуют руководитель конной изумленный взгляд техника11,12,13 с нашей недавно разработан кадра, чтобы развивать улучшенное протокол для внедрения надежных и эффективных экспериментальных близорукость у мышей. Протокол может применяться для молодых мышей вскоре после отъема в послеродовой день 21 (p21). Мы также оптимизированы процессы для стабильной и точной оценки фенотипов, включая рефракции и др. Мы надеемся, это стандартный протокол может помочь сделать близорукий мышей модель более легко доступны для близорукости исследований.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Все процедуры были утверждены Этический Комитет по исследованию животных из школы медицины университета Кэйо придерживаться Арво заявление для использования животных в глазной и видение исследований, институциональные руководящие принципы, касающиеся экспериментов животных на Keio Университет и животное исследования: отчетность о в Vivo экспериментов (прибытие) руководящие принципы для использования животных в научных исследованиях.

1. сборка очки для мышей

  1. Подготовка детали, необходимые для сборки очков (рис. 1a). Для каждой мыши, подготовить все следующие: один руководитель конной нейлон палку, один выше и один нижний титана рама, две линзы с надлежащей полномочия согласно цели эксперимента, один винт размер M1.4 с длиной 10 мм, одна гайка для M1.4 Размер винта, один обычный машина для M1.4 Размер винта с толщиной 0,3 мм и две искусственный ноготь советы (Таблица материалов).
    Примечание: Существует два вида кадров с разной высоты. Для одной мыши один выше и один нижний кадром используются как набор. Выше рамки следует ставить выше нижних для того, чтобы сделать видение поля симметричные. Оправ и линз специально разработаны и изготовлены исследовательской группой авторов. Они доступны, обратившись в соответствующие авторы этой статьи. Другие части можно найти в магазинах инструмент.
  2. Соберите рамки для правого и левого глаза отдельно.
    1. Организовать кончик ногтя противостоять внешним направление для достижения лучших защитный эффект. Отрегулируйте угол между кончиком ногтя и рамку, чтобы быть около 130°, чтобы избежать, маскируя поля зрения мыши (рис. 1b). Придерживайтесь советов искусственного ногтя к раме с помощью Цианакрилатный клей.
      Примечание: Ноготь советы могут помочь для защиты объектива от поцарапать мышью. Направление ногтем советов должна быть противоположной потому что выше и ниже кадром используются для правый и левый глаз, соответственно.
    2. Подождите по крайней мере 12 h дайте полностью высохнуть, затем использовать клипер ногтя, чтобы скорректировать форму ногтя клей советы, чтобы быть около 1 × 1 см, резки и обрезки.
    3. Придерживайтесь объектива к раме с помощью Цианакрилатный клей. Положил объектив на раме вручную и удерживайте кадра по горизонтали. Придать Цианакрилатный клей от края линзы и пусть клей распространения, поверхностного натяжения.
      Примечание: Клей подорвать объектива и влияние его прозрачность, поэтому убедитесь, что клей только трогает периферийной части объектива. Используйте 0 диоптрию (D) Плано объектив как управления и минус объектив побудить близорукость. Эффект различных полномочий минус линз (–10 D –50 D) был описанных в других4. Чтобы максимизировать близорукость склонения, – 30 D объектив рекомендуется для вызывая близорукость. FDM может также быть наведено с того же устройства просто путем изменения объектив в Кап 1,5 мл микропробирок как диффузор.
  3. Затяните винт в нейлон склеивают шайбу из плоской стороной палки. Подготовить очки и палками до эксперимента соответственно и сток для дальнейшего использования (рис. 1С).
    Примечание: Протокол может быть приостановлена здесь.

2. измерения рефракции и Аль базовых.

  1. Нанесите одну каплю Мидриатическая агента, содержащих Тропикамид 5 мг/мл и фенилэфрин гидрохлорид 5 мг/мл на каждой стороне глазного яблока, расширяют зрачок. Подождите, по крайней мере 5 минут перед наркозом.
    Примечание: Расширяют зрачок под командованием генерала анестезии приведет к обратимым катаракты, которая влияет на измерение потом. Всегда расширяют зрачок перед общей анестезией и подождите по крайней мере 5 минут. Одна капля (примерно 0,05 мл) Мидриатическая агента является достаточно для расширяя зрачок глаза мыши, в то время как более агент будет делать никакого вреда на следующие шаги.
  2. Поместите мышь под общим наркозом. Понять назад кожа мыши мягко, чтобы держать мышь от bumping ее глаз до тех пор, пока он полностью невосприимчивы. Судья глубина общей анестезии будет достаточно, если мышь не двинуть вокруг, когда он положил на стол свободно.
    Примечание: Сочетание мидазоламом (40 мкг/100 мкл), medetomidine (7.5 мкг/100 мкл) и Буторфанол тартрата (50 мкг/100 мкл) используется здесь для общей анестезии для мышей с объемом 0,01 мл/г внутрибрюшинной инъекции. Как правило менее чем за 5 мин необходимы для мышей, чтобы заснуть. Долгое время общей анестезии вызывает понижение температуры тела и медленное биение. Чтобы избежать потенциального влияния общей анестезии для измерения, отделка все измерения в течение 10 мин после инъекции анестетика рекомендуется. Буторфанол в анестезии коктейль обеспечивают примерно 4 часа анальгезии. Надлежащего рецепта для общей анестезии может различными учреждениями.
  3. Измерьте рефракцию глаза мыши, с помощью инфракрасного photorefractor4,9,14. Отрегулируйте направление одного из глаза мыши, чтобы сохранить первое изображение Пуркинье в центре зрачка и измерить рефракцию вдоль оптической оси. После измерения измерения противоположный глаз с теми же процедурами (рис. 2a).
    Примечание: Значение измеряется для преломления сильным влиянием позиции мыши глаза вдоль оптической оси. Убедитесь, что первая Пуркинье Изображение выравнивается в пределах ±3 ° от центра зрачка. Верстак спектральной области оптическая когерентная томография (SD-Окт) система может использоваться для тонкой настройки направления ученика в рефракции измерения4.
  4. Измерьте Аль мыши глаза с помощью SD-Окт системы4,,1516. Определите Аль как расстояние от роговицы вершина до ярких границы вблизи зрительного нерва (рис. 2b).
    Примечание: Аналогичные с измерения рефракции, Аль сильно зависит от направления мыши глаза. Роговицы вершина может быть подтверждена точка как отражение на поверхности роговицы. Граница в сторону сетчатки будет очень туманно точке зрительного нерва. Отрегулируйте направление немного, чтобы граница быть достаточно ясным для измерения, но не слишком далеко от оптического нерва.

3. Фиксация кадра на черепе мыши.

  1. Нанесите одну каплю 0,1% очищенного натрия гиалуронат глаз капли для предотвращения сухости на каждый глаз.
    Примечание: Глаз падение на поверхность глаза будут влиять значения преломления и измерения осевой длины. Не используйте капли глаз после анестезии, до тех пор, пока все измерения выполняются.
  2. Положите подбородок наркотизированных мыши на склоне, сделанные из глины, или что-нибудь может использоваться как подушку сделать плоскости авансом черепа быть горизонтальным.
  3. Стерилизовать волосы и кожу головы, между уши и глаза, используя ватный тампон с 70% этиловом спирте.
  4. Вырежьте кожу между ушами и глазами подвергать черепа для примерно 0,8 см2 используя хирургические ножницы и щипчики. Использование стоматологической травления жидкости и хлопка тампон удалить надкостницы. Стерилизуйте хирургические ножницы и щипчики с 70% этанол до операции каждой мыши.
    Примечание: Стрижки волос и стерильных перчаток может потребоваться.  Проверка положения соответствующих животных ухода Комитета перед этой процедурой. В большинстве случаев Стоматологическая травления жидкости можно найти как один из вложений в самостоятельного лечения стоматологических адгезивной системы. Если не доступен Стоматологическая травления жидкости, используйте 70% этиловом спирте.
  5. Соберите набор фреймов без объектива, чтобы помочь исправить палку на правом положении. Положите на голову мыши кадры. Тщательно Отрегулируйте положение кадры, чтобы убедиться, что оба глаза находятся в середине пустая рамка.
  6. Используйте самостоятельного лечения стоматологических адгезивной системы прикрепить ручку на голову мыши. Будьте осторожны, чтобы не позволить жидкости придерживаться системы потока в мышь глаз.
    Примечание: Метод использования самостоятельного лечения стоматологических адгезивной системы отличается между продуктами. Обратитесь к инструкции внимательно.
    Предупреждение: Некоторые из реагентов в системе стоматологического клея могут быть токсичными.
  7. Подождите около 5 минут и снять кадр и гайку тщательно не меняя позиции ручки (рис. 3a).
  8. Придать Атипамезола гидрохлорид 0,75 мг/кг внутрибрюшинно быстрее помочь мышь для восстановления от анестезии. Поместите мышь в отдельные клетки до тех пор, пока полностью выздоровел. Не оставляйте мыши без присмотра, до тех пор, пока он сознание достаточно для поддержания грудной recumbency. Протокол может быть приостановлена здесь.

4. начало близорукости индукция и поддержание потом

  1. Подождите по крайней мере 24 часа после операции, чтобы позволить мышь полностью оправиться от анестезии. Возьмите ручку и положить на кадрах с линзами. Склонения начинается в этот момент времени (рис. 3b).
    Примечание: Чтобы свести к минимуму дискомфорт во время восстановления после анестезии и дать достаточно времени для стоматологического клея системы коагуляции, настоятельно рекомендуется поставить на раме после мышей полностью оправился от анестезии. Смола цемента адгезивной системы полностью будет охватывать разрез кожи головы. Таким образом без конкретных после хирургического лечения необходима для предотвращения инфекции и смягчения послеоперационные боли. Сразу после первой сдачи на раме мышь будет более сознательного существования объектива и поцарапать его много. Валового поведение будет вернуться к нормальной после нескольких часов. Мышей с линзы могут храниться с такой же плотности для обычных мышей.
  2. Удалить рамку и очистить линзы и ногтем советы с ватные тампоны по крайней мере два раза в неделю для поддержания прозрачности хрусталика.
    Примечание: Это не нужно положить мышь под анестезией для удаления и положить на раме. Предоставляют поддержку для мышей, чтобы сидеть на, вместо них висят во время работы с ними могут уменьшить бедствия.
    1. При необходимости временного измерения, поместите мышь под наркозом и измерить мыши как описано ранее. Побуждение может быть продолжена после мыши, восстановление от анестезии.
  3. Чистите клетку по крайней мере два раза в неделю.
    Примечание: Это поможет сохранить четкость объектива. Ввод сети между мышью и нижней клетке для фильтрата пищевые отходы также может быть полезно.
  4. Контролировать вес тела и грубые поведения. Сравните их с теми же возраст нетронутой мышей в процессе всей экспериментальной.
    Примечание: За исключением некоторых царапин поведение, никаких существенных изменений, включая вес тела находится между эксперимента мышей с необработанной мышей.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

На во-первых, проверьте, если все необходимые части готовы (рис. 1a). Пример кусок собранные очки показан на рисунке 1b. За исключением основной рамы и гайку все остальные части одноразовые для каждой мыши. Набор заполненных ОПРАВЫ показан на рисунке 1 c. Измените угол между двумя кадрами для мыши с разных возрастов.

Пример измерения рефракции показан на рисунке 2a. Это мышь глаз, вызванных-30 D объектив для 3 недель, начиная от p21. Обратите внимание, что взгляд должны контролироваться недалеко от 0 градусов в x и y оси, что означает, что мышь видя прямо перед камерой9. Рисунок 2b показывает пример весь глаз изображения, принятые SD-Окт система настроена для мышей и определение каждой части глаза. Как правило SD-Окт систем представляют фактические измеряемых непосредственно.

Образ палкой придерживаться мыши, голова это показано на рисунке 3a. Граница стрижки должна быть по крайней мере 3 мм от глаза, чтобы избежать влияния на функции веко. Stick остается на голове мыши до конца склонения и обеспечивает основу для устранения очков. Клеящая способность системы стоматологического клея должна быть достаточно для фиксации очки в течение всего эксперимента на около 3 до 4 недель. Соберите очки, как показано на рисунке 3b. Две части оправы должен быть достаточно симметрично.

Представитель результаты показаны на рисунке 4. В этом эксперименте, 0 D Плано линзы были исправлены напротив левого глаза как внутреннего контроля и -30 D линзы были исправлены перед правый глаз, чтобы побудить миопия (C57B6/J мышей, побуждение, начал с p21, n = 4). Преломлений и ALs были измерены один раз в неделю после начала стимулом для трех недель. По сравнению с 0 D Плано линзы,-30 D индуцированных сильной близорукости сдвиг в рефракции и Аль. Изменение рефракции достиг пика в первую неделю и остался плоские для следующих двух недель. Разница между изменением близорукого глаза и управления глаза в Аль был значительным в первую неделю и стал больше и больше в течение следующих двух недель.

Figure 1
Рисунок 1: дизайн череп монтируется очки. () все детали необходимые для монтажа мыши очки. (b) пример положения и фрейм и ногтем подсказка для правой стороны глаза. (c) пример одного набора собранные очки. Отрегулируйте в совместных часть, чтобы изменить угол рамы подходит для мышей в разных возрастов. Эта цифра была изменена от Цзян, X. et al4, доступны по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 международного. http://creativecommons.org/Licenses/by/4.0/. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Figure 2
Рисунок 2: образец изображения измерения рефракции и AL. () изображение преломление измерения для близорукого глаза с помощью инфракрасного photorefractor. (b) образца изображения Аль измерения мыши глаза с помощью SD-Окт системы и определение каждой частью мяч глаз. Эта цифра была изменена от Цзян, X. et al4, доступны по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 международного. http://creativecommons.org/Licenses/by/4.0/. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Figure 3
Рисунок 3: изображение одной мыши после операции. () пример одной мыши после операции для присоединения палку. (b), один мышь с eyeglasses в обе стороны. Эта цифра была изменена от Цзян, X. et al4, доступны по лицензии Creative Commons Attribution 4.0 международного. http://creativecommons.org/Licenses/by/4.0/. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Figure 4
Рисунок 4: представитель результаты три недели развитие близорукости склонения в четырех мышей, используя в качестве внутреннего контроля-30 D линзы и линзы 0 D. () изменения преломлений за три недели. Внезапные изменения можно наблюдать через одну неделю после склонения. (b) в отличие от изменений в Аль были сравнительно мягкая. Звездочка марок показал статистической значимости между глазами, ношение линз 0 D и D-30 в каждую неделю, соответственно. p < 0,05, **p < 0.01. Студент t-теста. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Figure 5
Рисунок 5: рекомендуется схема для стимулирования близорукость у мышей. Здесь показан блок-схема представляют собой один из возможных шаблон для стимулирования близорукость у мышей. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Чтобы убедиться, что очки стабильно крепится на голове мыши, несколько шагов в этом протоколе необходимо уделять большое внимание. Надкостницы должны быть полностью удалены перед использованием стоматологического адгезивной системы. Кровь на черепе также должны быть очищены с осторожностью. Хотя немного тонкой настройки является приемлемым сразу после нанесения клея, не перемещайте палку часто перед адгезивной системы высыхают. Следуйте инструкциям адгезивной системы тщательно, особенно соотношение каждого компонента заключительного смеси. Когда захватить мышь во время поддержания очки или последующих измерений после операции, не понять палку с телом мышь вместе. Относительное движение между черепа и stick является наиболее частой причиной падения вниз палки. С надлежащей хирургии и схватив мастерство количество лиц, которые падают вниз палку будет меньше, чем один в 3-х недельный эксперимент, включая 20 особей.

Волосы и пищевые отходы могут проскользнуть в интервале между глаз и объектив. Это будет не только влияние прозрачность объектива, но также потенциально повредить поверхность роговицы физически. Чтобы сохранить прозрачности хрусталика, по крайней мере два раза чистки необходимо каждую неделю. Это также даст мышей шанс жених лицом к сокращению числа случаев осложнений для роговицы. Оставьте место для около 1 мм между рамой и кожу, чтобы позволить мыши мигать. Рамка может сделать это трудно для мышей, чтобы добраться до пищи вне клетки через сетку. Поэтому рекомендуется положить еду на пол клетки непосредственно. Изменения в клетке в чистой один для примерно два раза в неделю также поможет сохранить линзы чистые. Грязные линзы стать диффузоры, вызывая близорукость через механизм формы лишения. Это может исказить данные и сделать результат, чтобы быть трудно интерпретировать, так как свидетельства показали, что FDM и Лим различные модели систем в этиологии3.

Из-за небольшого размера мыши глаз глаз измеренных параметров клонат быть нестабильным. Мы рекомендуем инфракрасного photorefractor, разработанный д-ром Schaeffel для измерения рефракции9 и SDOCT системы для Аль-4 (см. Таблицу материалы). Обе системы представляют достаточно информации для оценки надежности измеренное значение для обеспечения повторяемости измерений. Для преломления как отмечалось в предыдущих докладах, это чрезвычайно важно для поддержания измерения на оси4,14. Контроль взгляд в пределах ±3 градуса может получить стабильные результаты. Для достижения этого точное измерение, труб системы SDOCT может быть полезно при настройки направление мыши глаза. Для измерения Аль отраженный свет на роговицы вершина и ярких границы вблизи зрительного нерва являются два надежных анатомические знаки, обеспечивающие воспроизводимость этого измерения.

Протокол, описанные здесь индуцированной значительные близорукий государства мышей в течение одной недели. Хотя механизм до сих пор неизвестна, изменения в рефракции и Аль параллельны не обязательно. Так как Аль росла близорукий после одной недели, мы рекомендуем измерения предстоит сделать в общей сложности три раза: до одной недели и через три недели после склонения. Один пример схемы для близорукости индукции показан на рисунке 5. На основе предыдущего доклада4, начиная от p21 и использование - 30 D линзы рекомендуются для экспериментов Лим Последний для более чем 4 недели могут иметь распространенности тяжелой роговицы осложнений, которые влияют измеренное значение и ускорить потребление линзы . Наиболее частым осложнением является роговицы рубцов. Мышь не может очистить их лица и век, носить рамы, которые могут быть причиной осложнений.

Устройство, описанное в настоящем Протоколе может применяться для мышей сразу после отнятия от груди (p21). Частично это может способствовать сильным фенотип, наблюдается4. Рамка снимается без общей анестезии. Это позволяет не только исследователь легко очистить линзы, но и сделать доставку возможных4актуальные наркотиков. Другая сила, что линзы могут быть легко изменены в диффузоры или линзы с различными диоптрии (например., плюс линзы), который расширяет возможности этого метода. Одно ограничение этого метода является хирургии некоторой практики перед кадры могут соблюдаться стабильно для всего эксперимента. Измерения также нужны терпение для сбора надежных данных.

Мышей являются незаменимым животную модель с возможностью генетических манипуляций и низкая стоимость для разведения. Мы надеемся, что протокол, описанные здесь может сделать экспериментальный близорукость у мышей более практичная модель для близорукости исследований.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Конструкция очков мышь была применена на патент (приложение № 201741349).

Acknowledgments

Мы благодарим м.т. Пардью за советы по SDOCT, F. Schaeffel для консультации по измерения рефракции и кривизны роговицы, г-н Sanshouo для воссоздания трехмерной фрейма данных, м. Мияучи; K. Tsubota; Ю. Танака; S. кондо; C. Шода; М. Ибуки; Ю. Мива; Ю. Хагивара; А. Исида; Ю. Томита; Ю. Katada; E. Yotsukura; K. Такахаси; и ю. Ван для критического обсуждения. Эта работа была поддержана inAid грантов для научных исследований (KAKENHI, номер 15K 10881) от министерства образования, культуры, спорта, науки и техники (МПКСНТ) к ТЗ. Эта работа также поддерживается грантом близорукость исследований лаборатории Tsubota, Inc. (Токио).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
screw NBK SNZS-M1.4-10
washer MonotaRO 42166397
nut MonotaRO 42214243
stick DMM Make none designed by authers and output by the 3D printer rented from DMM Make.
frame DMM Make none designed by authers and output by the 3D printer rented from DMM Make.
lenses RAINBOW CONTACT LENS none customized for mice use by the company
cyanoacrylate glue OK MODEL MP 20g
dental adhesive resin cement SUN MEDICAL super bond contains the etching liquid used for removing the periosteum of the mouse skull
infrared photorefractor Steinbeis Transfer Center none designed and offered by Dr. Frank Schaeffel from university of Tübingen
Spectral domain OCT Leica R4310
Tropicamide, Penylephrine Hydrochloride solution Santen Mydrin-P
midazolam Sandoz K.K. SANDOZ components for the anesthetic
medetomidine  Orion Corporation Domitor components for the anesthetic
butorphanol tartrate  Meiji Seika Pharma Vetorphale components for the anesthetic
0.1 % purified sodium hyaluronate Santen Hyalein
atipamezole hydrochloride Zenoaq antisedan

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Dolgin, E. The myopia boom. Nature. 519 (7543), 276-278 (2015).
  2. Ohno-Matsui, K. Pathologic Myopia. Asia-Pacific Journal of Ophthalmology (Philadelphia, Pa). 5 (6), 415-423 (2016).
  3. Morgan, I. G., Ashby, R. S., Nickla, D. L. Form deprivation and lens-induced myopia: are they different. Ophthalmic & Physiological Optics. 33 (3), 355-361 (2013).
  4. Jiang, X., et al. A highly efficient murine model of experimental myopia. Scientific Reports. 8 (1), 2026 (2018).
  5. Torii, H., et al. Violet Light Exposure Can Be a Preventive Strategy Against Myopia Progression. EBioMedicine. 15, 210-219 (2017).
  6. Smith, E. L. 3rd, et al. Effects of Long-Wavelength Lighting on Refractive Development in Infant Rhesus Monkeys. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 56 (11), 6490-6500 (2015).
  7. Gawne, T. J., Siegwart, J. T., Ward, A. H., Norton, T. T. The wavelength composition and temporal modulation of ambient lighting strongly affect refractive development in young tree shrews. Experimental Eye Research. 155, 75-84 (2017).
  8. Wu, Y., et al. Early quantitative profiling of differential retinal protein expression in lens-induced myopia in guinea pig using fluorescence difference two-dimensional gel electrophoresis. Molecular Medicine Reports. , (2018).
  9. Schaeffel, F., Burkhardt, E., Howland, H. C., Williams, R. W. Measurement of refractive state and deprivation myopia in two strains of mice. Optometry and Vision Science. 81 (2), 99-110 (2004).
  10. Tkatchenko, T. V., Shen, Y., Tkatchenko, A. V. Mouse experimental myopia has features of primate myopia. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 51 (3), 1297-1303 (2010).
  11. Faulkner, A. E., Kim, M. K., Iuvone, P. M., Pardue, M. T. Head-mounted goggles for murine form deprivation myopia. Journal of Neuroscience Methods. 161 (1), 96-100 (2007).
  12. Gu, Y., et al. A Head-Mounted Spectacle Frame for the Study of Mouse Lens-Induced Myopia. Journal of Ophthalmology. 2016, 8497278 (2016).
  13. Siegwart, J. T. Jr, Norton, T. T. Goggles for controlling the visual environment of small animals. Laboratory Animal Science. 44 (3), 292-294 (1994).
  14. Tkatchenko, T. V., Tkatchenko, A. V. Ketamine-xylazine anesthesia causes hyperopic refractive shift in mice. Journal of Neuroscience Methods. 193 (1), 67-71 (2010).
  15. Chou, T. H., et al. Postnatal elongation of eye size in DBA/2J mice compared with C57BL/6J mice: in vivo analysis with whole-eye OCT. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 52 (6), 3604-3612 (2011).
  16. Park, H., et al. Assessment of axial length measurements in mouse eyes. Optometry and Vision Science. 89 (3), 296-303 (2012).

Tags

Нейробиологии выпуск 143 близорукость мышь методологии модели на животных неврологии лекарствами
Побуждение и оценки мышиных модели экспериментальной близорукости
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Jiang, X., Kurihara, T., Ikeda, S.More

Jiang, X., Kurihara, T., Ikeda, S. i., Kunimi, H., Mori, K., Torii, H., Tsubota, K. Inducement and Evaluation of a Murine Model of Experimental Myopia. J. Vis. Exp. (143), e58822, doi:10.3791/58822 (2019).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter