Summary
In vitro における B 細胞を形質細胞分化モデルに報告多段階培養システムを使用して。
Abstract
形質細胞 (Pc) 抗体の大量分泌し、活性化されている B 細胞から発生します。Pc は骨髄や粘膜に位置する希少な細胞、体液性免疫を確保します。それらの低周波と場所のため Pc の研究が困難な人間に。我々 は PC に B を報告選択した生体内で発生した連続細胞分化を再現することができるサイトカインや活性化の分子の組み合わせを用いた in vitro 分化モデル。この in vitro モデル、メモリー B 細胞 (MBCs) が前の plasmablasts (prePBs) plasmablasts に (PBs)、早く Pc を区別するために、最終的に、長命に Pc、表現型を閉じる健常者.の対応するまた、オープン アクセス バイオインフォマティクス PC 分化に関連する GEP データから最も顕著な情報を分析するためのツールを建てた。PC 分化し現在の研究ではヒトの B を勉強するこれらのリソースを使用することができます、PC 分化ヒト B 中に後成の要因の遺伝子発現制御を検討しました。
Introduction
B 細胞の形質細胞 (Pc) への分化は、体液性免疫に欠かせない感染症1に対してホストを保護します。PC 分化する B 抗体の分泌に合わせて転写能力と代謝に大きな変化に関連付けられます。B を PC の分化を制御する転写因子が広く研究されているし、明らかに排他的なネットワーク B および PC 特異的転写因子 (TFs)2。B 細胞の PAX5、BCL6 および BACH2 TFs が B 細胞アイデンティティ2,3の保護者です。IRF4、 PRDM1エンコード BLIMP1 およびXBP1 PC TF の誘導が B 細胞遺伝子を消すし、調整された抗体分泌細胞転写プログラム3,4,5を誘発します。これら協調的な転写変更は膜結合型フォームから免疫グロブリン重鎖2,3,の分泌された形態への切り替えと Ig 遺伝子転写活性化に関連付けられています。4. PC 分化する B が小胞体に関与する遺伝子の誘導とリンクされ、ゴルジ装置関数の合成を収容し PC で重要な役割を再生する知られている小胞体ストレス応答 (UPR) アクティベーションを併用免疫グロブリンは、6、7を分泌します。TF XBP1 は、この細胞の適応8,9,10の主要な役割を果たしています。
B 細胞と Pc は、体液性免疫の主要選手です。生物学を理解する生産と通常のプラズマ細胞の生存効率的な免疫応答を確保し、自己免疫疾患や免疫不全を防止する必要がある治療上の介在の重要ですコントロールを処理します。PC は、完全生物学的特性、特に人間を妨げる解剖位置で行われる初期の分化段階で希少な細胞です。多段階培養システムを使用して、PC の差別化モデルに体外 B を報告した.このモデルを再現した連続細胞分化と成熟 vivo11,12,13.別の臓器に発生します。最初のステップでメモリー B 細胞は最初に 4 日間の CD40 リガンド、オリゴデオキシヌクレオチドおよびサイトカインの組み合わせによってアクティブ化され、preplasmablasts (PrePBs) に分化します。2 番目のステップでは、preplasmablasts plasmablasts (PBs) に分化する CD40L とオリゴデオキシヌクレオチド刺激の取り外しとサイトカインの組み合わせを変更することによって引き起こされます。3 番目のステップでは、plasmablasts は、初期 Pc にサイトカイン組み合わせ11,12を変更することによって区別するために引き起こされます。4 番目のステップは、培養骨髄間質細胞のエアコンの中でこれらの初期の Pc によって完全に成熟した Pc を取得する導入されたか、成長因子13を選択しました。これらの成熟した Pc 数ヶ月体外を生き残るため、免疫グロブリン (図 1) を大量に分泌します。興味深いことに、私たちの in vitro モデルを繰り返す、協調的な転写変更と検出された生体内で11,12,13,14 をすることができます PC の段階に別の B の表現型 ,15。Pc は、希少な細胞と in vitro 分化モデル PC 分化ヒト B を勉強することができます。
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Protocol
ヘルシンキ宣言と生物資源のモンペリエ大学病院センターの契約に基づきガイドラインをプロトコルに従います。
1. 培養正常形質細胞分化のモデルで
注:Pc は、4 つのステップ文化11,12,13を通じて生成されます。
-
B 細胞の増幅と分化
- 記憶 B 細胞の浄化のための健常人末梢血細胞を使用します。
- RPMI 1640 媒体の 24.5 ml 血の 7.5 mL を希釈します。
- 部屋の温度密度勾配 (例えば、Ficoll) の 12.5 mL を滅菌 50 mL の円錐管に追加します。優しく 32 ml 希釈血液の密度勾配をオーバーレイします。2 段階の混合を最小限に抑えます。
- ブレーキ 500 x gで 20 分間遠心分離機のオフ。希薄プラズマ/密度勾配インターフェイスから、PBMCs を収集し滅菌 50 mL のチューブにセルを配置し、ハンクの平衡塩溶液と 45 mL に完了します。
- 500 × gで 5 分間細胞を遠心します。慎重に上澄みを除去し、ペレットを維持します。
- 500 x gで RPMI1640/10% 牛胎児血清 (FCS) の遠心 5 分 45 mL を加えます。慎重に上澄みを除去し、ペレットを維持します。PBS/2% FCS の 30 mL を追加します。
-
CD2 + 抗 CD2 磁気ビーズを使用してセルを削除します。1 つのターゲット細胞の 4 ビーズを追加します。4 ° C で 30 分間加温します。
- 磁石を用いた細胞分離用非連結の細胞から別のビード区切セルです。非連結の細胞を収集し、抗 CD19 APC、CD27 PE 抗体抗と細胞ペレット 4 ° C (106細胞の抗体の 2 μ L) で 15 分間インキュベートします。
- PBS/10% ヤギ血清で 2 回洗います。
- FSC と SSC のプロットに汚染のイベントを削除します。FSC A 対 SSC、FSC H 対 SSC H プロットの残骸を削除し、選択総末梢血白血球ポピュレーションのシングレットをプロットします。CD19/CD27 と CD19 メモリー B 細胞を選択+CD27+。
- 95% の高純度で、セルソーターを用いた MBCs を浄化します。
- 50 mg/mL ヒト トランスフェリンと 5 ミリグラム/ml ヒトインスリンを添加した IMDM と 10 %fcs を使用してすべての文化手順に従います。
-
プレート 6 ウェル培養皿に MBCs を精製した (1.5 x 105 5 mL/よく MBCs/mL)、IL-2 との 4 日間 (20 U/mL)、IL-10 (50 ng/mL) と IL 15 (10 ng/mL)。
- ホスホロチオエート CpG ODN 2006 年ヒスチジン付けられた遺伝子組換えひと可溶性 CD40L を追加 (sCD40L; 50 ng/mL) と反 polyhistidine mAb (5 mg/mL) MBCs 活性化 (図 1)。低い増幅12に同じサイトカイン カクテルだけで sCD40L または ODN による活性化をもたらします。最大数を鉛でここで説明されている活性化シグナルの組み合わせには、B 細胞と PrePBs11,12 (図 1) がアクティブ化されます。
- 遺伝子発現プロファイルの浄化 CD38/CD20-- PrePBs、日 4、セルソーター (図 2) を用いたします。
-
:Hiv 細胞の生成
- 4 日目でのセルをカウントします。
- 2 mL の 105/mL × 2.5 で 12 ウェル培養皿の細胞をプレート/まあ。
- CpG オリゴヌクレオチドと sCD40L の取り外しと新しいサイトカイン カクテル IL-2 を含むと新しい培養液の添加による分化を誘導する (20 U/mL)、IL-6 (50 ng/mL)、IL-10 (50 ng/mL) と IL 15 (10 ng/mL) (図 1)。37 ° C で (日 4 日 7) から 3 日間の培養細胞
- 遺伝子発現プロファイルの浄化 CD38+/CD20- PBs、日 7、セルソーター (図 2) を用いたします。
-
初期のプラズマ細胞の生成
- 7 日のセルをカウントします。
- 2 mL に 5 × 105/mL で 12 ウェル培養皿の細胞をプレート/まあ。
- 新鮮な培養液を用いた IL 6 初期の Pc で PB を区別する (50 ng/mL)、IL 15 (10 ng/mL) とインターフェロン α (500 U/mL) 37 ° C で 3 日間遺伝子発現プロファイルの CD20 を浄化する-/CD38+/CD138+初期 Pc で 10 日、セルソーター (図 2) を用いたします。
-
長命の形質細胞世代
- 培養条件を変更することによって、長い間住んでいた Pc に初期 Pc を区別します。
- 2 mL に 5 × 105/mL で 12 ウェル培養皿の細胞の培養/よくまたは 1 mL/37 ° C で 24 ウェル培養皿で il-6, 間質細胞を使用してエアコン中と 4 月 (200 ng/mL)。
- 培地に 5 日間の間質細胞を培養によって間質細胞調節された媒体を取得します。間質細胞培養上清 (0.2 μ m) をフィルターし、フリーズします。
- 毎週更新で PC 文化に間質細胞調節されたメディアの 50% を追加します。生成された長寿命の Pc は、ヶ月13維持可能性があります。Pc の長期生存を報告された13としてのみ IL 6 と 4 月の取得でした。
- フローサイトメトリーからメジャー Ig 分泌には、Pc が並べ替えられます。
- 106セル/ml 24 時間 Pc を培養、培養上清を収穫します。IgG および IgA 人間酵素免疫測定法 (ELISA) キット11,12,13を使用して測定します。中央の IgG 分泌 10 pg/セル/日 10 〜 17 日 pg/セル/日 60 日目13時からであった。
2 PC 分化する B の分子のアトラス
注:我々 はバイオインフォマティクスのツールを抽出し、PC 分化 (GenomicScape)15に関連するアフィメトリクス GEP データから最も顕著な情報を視覚化する便利でオープン アクセスを構築しました。GEP は精製の MBCs、PrePBs、PBs および Epc を含む ArrayExpress データベース (http://www.ebi.ac.uk/arrayexpress/) から公開: E MTAB 1771、E MEXP 2360 E MEXP 3034 と BMPC E MEXP 236014,15。Genomicscape は、自由に利用できる webtool です。
-
PC データセットに B の選択
- GenomicScape オープン アクセス bioinformatic ツール (http://www.genomicscape.com) でプラズマ細胞にヒト B 細胞と呼ばれるデータの参照メニューの PC データセット B を選択します。ユニークな遺伝子の遺伝子発現プロファイルまたは遺伝子のリストの可視化は、ホーム ページで利用可能な分析ツールで式共発現レポートツールを使用して利用可能です。
-
チャイルド分析と主成分分析 (PCA)
- 選択解析ツール | webSAM SAM ツールをロードします。
- ヒト B 細胞のプラズマ細胞へのデータセットを選択し、比較するサンプルのグループを選択します。
- 興味のフィルタ リング オプションを適用する使用可能な別のフィルターを使用します。
- SAM ツールでの遺伝子発現プロファイルを比較するには、フォールドの変更を順列、虚偽の発見率と比較の種類の数を含むフィルターのオプションを変更します。GenomicScape は、分析を計算して、選択したグループの間発現遺伝子を提供します。
- 分析ツールメニューで主成分分析を選択して主成分分析を実行します。
- ヒト B 細胞のプラズマ細胞へのデータセットを選択し、対象のグループを選択します。
- 興味の遺伝子または遺伝子の差異によるとの一覧を貼り付けます。遺伝子のリストを貼り付け、選択遺伝子/ncRNAs のリストを分析するここをクリックして... Genomicscape 可視化およびダウンロードできる PCA が計算されます。
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Representative Results
生体外で通常 PC 分化の全体的な手順は、図 1で表されます。ここで提示されたプロトコルを使用して、ex vivo ひと試料で得られなかった細胞の十分な量を生成可能性があります。PC の分化に関与する転写因子の複雑なネットワークの役割を行ったキー PC 分化の転写ネットワークを規定しているメカニズムのあまり知られていないままです。細胞の分化は、エピジェネティックな変動によって大抵運転されます。私たちの in vitro モデルと PC GEP アトラスに B を使用すると、正常の形質細胞分化におけるエピジェネティック因子の発現変動を調べた。
通常のプラズマ細胞分化におけるエピジェネティック因子の発現
我々 は次の家族に属するものを後成の要因として定義されている: DNA メチル基転移酵素 (DNMT)、メチル CpG 結合ドメイン (MBD) 蛋白質、ヒストン コリンアセチルトランスフェラーゼ (帽子)、ヒストン脱アセチル化酵素 (HDAC)、ヒストンメチル (HMT) とヒストン脱メチル化酵素 (HDM) 前述のがん細胞16 (補助テーブル 1)。後成を行った浄化私たちの in vitro モデルを使用して PC の分化発現要因成熟した骨髄 Pc (BMPCs) と「PC アトラスを B」利用 GenomicScape webtool (図 2)。マルチクラス サムを分析して、我々 71 遺伝子大幅差動と間にある MBCs、PrePBs、PBs、初期 Pc BMPCs 虚偽の発見率 < 5% (図 3A・3 b 、補助表 2)。MBC ステージは 4.35% メチル結合タンパク質のヒストン脱メチル化酵素 (HDMTs) の 21.74%、ヒストンメチル化酵素 (HMTs) 30.43% ヒストン コリンアセチルトランスフェラーゼ (帽子) の 39.13% を含む 23 のエピジェネティックなプレーヤー遺伝子の過剰発現によって特徴付けられると4.35 %hdacs をした (図 4)。7.14% 帽子 (図 3) の HDMTs の 7.14% 21.43 %hdacs をした種の 1,428万 %hmts の 50% を含む PrePBs の段階で具体的には過剰に発現して 14 エピジェネティックな選手だった。PBs のステージは、2 HDMTS、2 HMTs 1 DNMT とエピジェネティックな 5 人の選手の過剰発現によって区別されます。4 エピジェネティックな選手は、初期の Pc (1 HDAC、1 帽子、1 HMT 1 メチル結合タンパク質) で過剰に発現します。BMPCs、10 の後成の要因だった特に発現 HMT (補助テーブル 2) の 50% を含みます。
エピジェネティック因子の発現に最も重要な変更は、PrePBs の変遷、ダウンレギュレーションと 23 の MBCs 遺伝子と 14 PrePBs エピジェネティックな遺伝子 (図 4) のアップレギュレーションに使用中に発生します。MBCs では、帽子のヒストン翻訳後修飾に関与する大幅過剰発現。ヒストンのアセチル化は、クロマチン構造とクロマチンの凝縮によって沈黙が epigenetically 遺伝子の転写を増加のクロマチンの decondensation 結果を影響します。PrePBs 移行する MBCs が帽子、HMTs 式に大きな変化と濃縮 hdacs をした、種の遺伝子発現の重要なダウンレギュレーション関連付けられて。興味深いことに、PrePB ステージはMMSET HMT の過剰発現によっても特徴です。MMSET/WHSC1/NSD2 は、ヒストンのリジン メチルトランスフェラーゼ ディ ・ trimethylate のヒストン H3 リジン 36 にすることができますを含むドメインの設定です。MMSET は、予後に関連付けられている多発性骨髄腫のサブグループ内相互 t(4;14)(p16;q32) 転流に関与しています。MMSET が関与していることが報告された H4K20 メチル化ヒストン DNA 二重鎖切断のまわりでの誘導を調節する DNA 修理で、ターンでは、容易に 53BP1 募集17。PrePBs は、S 相11 PrePBs ステージが高い複製ストレスに関連付けられていることを示唆している細胞の 50% と MBCs に比較して高い増殖されています。MMSET の過剰発現は、PrePBs 複製ストレス誘発性 DNA 損傷の防止に参加できます。
PB と初期 Pc 同様エピジェネティック因子発現プロファイル (図 2) を発表しました。BMPCs は HMT とEHMT2 、 HDAC6を含む免疫グロブリン分泌ストレス適応に関連する HDAC の特定の過剰発現によって特徴付けられます。成熟した BMPCs エレメンタリーに特徴があるし、抗体の大量分泌します。この高合成免疫グロブリンの誤って折りたたまれたタンパク質誘起応力とこの生産への小胞体 (ER) 対応の開発に関連付けられて。B 中にリプログラミング イベントのエピジェネティックな媒介を通して PC 分化に重要な役割を果たす可能性があります後成の要因の主要な遺伝子発現変動を示した。
図 1: In vitro における細胞分化モデル。PC 分化モデル人間 PC 世代の様々 なステップを繰り返します。最初のステップで記憶 B 細胞 CD40 リガンド、オリゴデオキシヌクレオチドおよびサイトカインの組み合わせで 4 日間はじめて有効化し、preplasmablasts に分化します。2 番目のステップでは、preplasmablasts は、CD40L とオリゴデオキシヌクレオチド刺激の取り外し、サイトカインの組み合わせを変更する plasmablasts に区別するために引き起こされます。3 番目のステップ plasmablasts サイトカイン組み合わせ11,12を変更することで初期のプラズマ細胞に区別するために引き起こされます。4 番目のステップは、完全に成熟したプラズマ細胞培養 2 ヶ月13これら初期のプラズマ細胞、骨髄間質細胞またはエアコン SC 中、4 月に導入されました。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 2: 前の plasmablasts (prePBs)、plasmablasts (PBs) で CD20、CD38、CD138 式を強調人間 PC 分化モデルと浄化ができるプラズマ細胞 (Pc) セルソーターとアフィメトリクス遺伝子発現プロファイルを使用して。GenomicScape webtool は PC 分化データ セットに B への関心の 1 つまたは複数の遺伝子の発現プロファイルを視覚化および細胞集団間特異的発現遺伝子を分析することができます。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 3:多クラス サム解析します。PC 分化 (SAM 分析的発現を示す B の中に著しく 71 の後成の要因の信号FDR < 0.05) メモリー B 細胞 (MBCs の場合、n = 5)、preplasmablasts (PrePBs、n = 5)、plasmablasts (PB、n = 5)、初期のプラズマ細胞 (初期 Pc n = 5)、通常骨髄形質細胞 (BMPCs、n = 5) 高 (深紅) 式に低 (ディープ ブルー) から表示されます。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 4:大幅種、メチル CpG 結合ドメイン (MethylBP) 蛋白質、ヒストン コリンアセチルトランスフェラーゼ (帽子)、ヒストン脱アセチル化酵素 (HDAC)、ヒストンメチル (HMT)、ヒストン脱メチル化酵素のカテゴリに属するエピジェネティックな遺伝子の割合MBCs または PrePBBs で過剰に発現します。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
補足表 1:このファイルをダウンロードするここをクリックしてください。
補足テーブル 2:このファイルをダウンロードするここをクリックしてください。
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Discussion
人間で PC は稀な細胞分化段階を完全に生物学的特性を妨げる解剖学的場所で行われています。体外 B 活性化分子とサイトカインのさまざまな組み合わせは、その後で発生した連続細胞分化を再現するために適用される多段階培養システムを用いた PC 分化モデルを開発した、異なる臓器・組織 vivo11,12,13。
Pc の差別化モデルに他の効率的な体外 B は、報告された18,19だった。ル Gallou によって開発されたモデルらは、CD19 から始まって 2 段階培養方法論と PC 分化 T 細胞依存 B を探検+/CD27-ナイーブ B 細胞。コッコらは総 B 細胞19から始まって長い Pc を生成する in vitro モデル。当社の戦略を模倣活性化と分化 CD40 と Toll 様受容体の胚中心で発生している樹状細胞、マクロファージと T ヘルパーによって生成された活性化サイトカインとの組み合わせで使用される T 細胞の助けと抗原活性化を模倣.リンパ節、扁桃、人間11,20で骨髄で確認されている PrePBs の生成に sCD40L と CpG ODN 活性化をもたらします。この移行期、CD20、CD38、CD138 のマーカーと、B と PC TFs の共発現 PBs、B 細胞と比較して低レベルの不在によって特徴付けられるまたは PC11。この移行期、特に関心のプロテアソーム阻害剤抵抗性多発性骨髄腫患者20,21に関連付けられているだから。我々 の手で、提供される IL 15 追加が CD20 の世代で結果を最適化された IL 1518,19なし Pc で生成される可能性があります、場合でも-CD38 4 日目11,12+ +細胞。イリノイ 21 添加は IL 21 飛行船誘導以前に報告された19,22STAT3 活性化を介した PC 分化を促進するので特に関心のでしょう。複雑な Coccoらによって報告された文化は含んでいるイリノイ 21、IFN α、IL6 と間質細胞調節中サポート長命 Pc の世代を条件します。我々、Pc の長期生存が報告サポート、in vitro で IL 6、4 月と間質細胞調節された媒体またはのみ 2 つの成長因子を使用します。間質細胞を主要な PC 成長因子、特に IL 6 とガレクチン13,19,23,24,25を作り出し、造血間の相互作用を支えるセルと Pc26。さらに、4 月は造血細胞27,28によって生成される、Pc の生存に関与する主要な成長要因の一つであります。間質細胞のさまざまなソースに関連する不均一性を避けるためには、8 と 15 の通路13,29間レスト 6 間質細胞、かりんのタルトのラボが開発および提供で使用されました。レスト 6 セルは CD105、CD73 CD90 の間質細胞マーカーを表現し、正常および悪性 B 細胞29の成長を効率的にサポートします。
ただし、活性化 B 細胞、PrePBs、PBs および健康なドナー血メモリー B 細胞浄化11,12,13の使用によって Pc の割合で中等度の不均一性を観察できます。生成された長寿命の Pc が非循環 Pc、存続し、3 カ月以上の体内相手13として体外免疫グロブリンを生産します。長命 Pc エクスプレス高 CD138 と遺伝子発現プロファイル体内に関連する Pc13です。また、, にスプライシングXBP1 IRF4 、 PRDM1 Pc の転写因子の高発現との比率が高かった特徴で得られる得られた培養初期 Pc と比較して長寿命の主成分10 日目13。
エピジェネティックなだし、転写の変更は、開発中に細胞の遷移を制御します。ただし、B リンパ球分化形質細胞には独自のプロセスでのエピジェネティック修飾は主不明のままです。よると、我々 は最近通常の PC 分化の miRnome を分析し、通常 PC 分化14意義のネットワークを調節する新規キー Mirna を識別しました。我々 はいくつかの Mirna が PCD、IRF4、PRDM1、ELL2、ARID3A の14を含む重要な転写因子の発現の制御に加わることができるまた示した。よると、我々 はここで GenomicScape オープン アクセス プラットフォームを使用して PC 分化する B 中にエピジェネティクス関連遺伝子プロファイルの特性拡張。このアプローチでは、クロマチン PC 分化の各段階で具体的に発現する酵素遺伝子の変更を識別することができました。MBCs は大幅 nuleosomal 改造転写結合部位を公開するを引き起こすと知られて帽子を過剰発現。ヒストンのアセチル化を含む、ヒストンの転写後修飾はPAX5、CIITA、SPIB 、 BCL6の30,31を含む主要な B 細胞 TFs のプロモーター領域で報告されています。さらに、プロテオーム解析 CREBBP と EP300 (MBCs の過剰発現) ではやり取り BCL6 を実証し、BCL632の転写制御の役割を果たすことができます。PAX5、クロマチンとヒストン蛋白質33を変更することを勧誘することによってターゲット遺伝子の発現を調節することが示されました。Pax5 は、H3K4 メチル化とその活性化ターゲット遺伝子33のプロモーターで H3K9 アセチル化を誘導するために示されました。
主要なエピジェネティック因子 GEP 変更は HMTs 式と hdacs をした、種の遺伝子表現の豊かさの増加と共に帽子の主要な低下に PrePBs 移行する MBCs の中に識別されました。PrePB 過渡期は、高い増殖細胞人口11です。それにあわせて、DNMT134、EZH235,36,37,38 MMSET39,40 など細胞増殖の制御に関与すると知られているいくつかの後成的要因識別され、PrePB 段階で細胞の活性化と増殖の誘導に関与することができます。
PC 分化する B の終わりの段階、BMPCs EHMT2 HDAC6、小胞体ストレス応答に関与すると知られているを含むエピジェネティックな要因で過剰に発現。小胞体とゴルジ体、分泌される免疫グロブリンの合成に対応する PC の大きな役割を果たします。膀胱癌細胞における EHMT2 阻害は小胞体ストレスを刺激し、誘発アポトーシス41。HDAC6 は hdacs をしたのクラス 2 b の家族に属しています。蛋白質の恒常性の役割を果たすことが知られて、UPR42,43 HDAC6 阻害剤は多発性骨髄腫悪性 Pc を対象とする臨床試験でテストされます。データの下線が後成の要因が Pc を分泌長命 Ig の恒常性の役割を果たす可能性があります、私たち。
レンチウイルスベクターおよび/または特異的阻害剤を使用して、それはこれらの生物学的経路とクロマチン修正のクロマチン PC 発生・分化・機能グループが前述のように酵素の役割を調査するは興味深いかもしれない44。
この研究から得られる知識が通知し、予後と改善の治療戦略の決定的な治療法がなく癌多発性骨髄腫の場合などの PC 障害の診断と治療戦略の指示批判的に必要です。
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Disclosures
著者がある何も開示するには
Acknowledgments
この作品はフランスのインカ (Institut 国立デュがん) からの助成金によって支えられた研究所 (PLBIO15-256)、ANR (ネクタイ スキップ)、機械がん (ミリ ・ TT)。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| anti-CD2 magnetic beads | Invitrogen | 11159D | |
| Anti-CD138-APC | Beckman-Coulter | B49219 | |
| Anti-CD19-APC | BD | 555415 | |
| Anti-CD20-PB | Beckman-Coulter | B49208 | |
| Anti-CD27-PE | BD | 555441 | |
| Anti-CD38-PE | Beckman-Coulter | A07779 | |
| Anti-histidine | R&D Systems | MAB050 | |
| CpG ODN(PT) | Sigma | T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*G*T*C* G*T*T*T*T*G*T*C*G*T*T |
|
| human Transferin | Sigma-Aldrich | T3309 | |
| IFN-α | Merck | Intron A | |
| IMDM | Gibco | 31980-022 | |
| Recombinan Human CD40L-hi | R&D Systems | 2706-CL | |
| Recombinant Human APRIL | R&D Systems | 5860-AP-010 | |
| Recombinant Human IL-10 | R&D Systems | 217-IL- | |
| Recombinant Human IL-15 | Peprotech | 200-15-10ug | |
| Recombinant Human IL-2 Protein | R&D Systems | 202-IL- | |
| Recombinant Human IL-6 | Peprotech | 200-06 |
References
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