Summary
Utilizando sistemas de cultivo de múltiples pasos, Divulgamos un in vitro células B al modelo de diferenciación de la célula de plasma.
Abstract
Células plasmáticas (PC) secretan grandes cantidades de anticuerpos y desarrollo de las células B que han sido activadas. PC es células en la médula ósea o la mucosa y garantizar la inmunidad humoral. Debido a su baja frecuencia y localización, es difícil el estudio de PC en humanos. Hemos informado a B para PC modelo de diferenciación in vitro usando las combinaciones de citoquinas y activación de moléculas que permiten reproducir la diferenciación secuencial que ocurre in vivo. En este modelo in vitro, memoria (MBCs) de células B diferencian en los plasmablasts (prePBs), plasmablasts PC (PBs), temprano y por último, en larga vida PC, con un fenotipo cerca de sus contrapartes en individuos sanos. También hemos construido un acceso abierto bioinformática herramientas para analizar la información más prominente de datos GEP de diferenciación de la PC. Estos recursos pueden utilizarse para estudiar humano B diferenciación de PC y en el presente estudio, hemos investigado la regulación de la expresión génica de factores epigenéticos durante humano B para diferenciación de PC.
Introduction
La diferenciación de células B a células plasmáticas (PC) es esencial para la inmunidad humoral y proteger al huésped contra infecciones1. B para diferenciación de PC se asocia con cambios importantes en el metabolismo y capacidad de transcripción para la secreción de anticuerpos. Se han estudiado ampliamente los factores de transcripción que controlan B para diferenciación de PC y redes exclusiva reveladas incluyendo transcripción B-PC-específicas y factores (TFs)2. En las células de B, PAX5, BCL6 y BACH2 TFs son los guardianes de la identidad de la célula de B2,3. Inducción de IRF4, PRDM1 codificación BLIMP1 y XBP1 PC TF se apaga genes de la célula B e inducir un coordinado secretoras de anticuerpo células programa transcripcional3,4,5. Estos cambios transcripcionales coordinados están asociados con la activación de transcripción de genes de Ig junto con un interruptor de la forma unida a la membrana a la forma secretada de la inmunoglobulina cadena pesada2,3, 4. B para diferenciación de PC está vinculada con la inducción de genes implicados en el retículo endoplásmico y aparato de Golgi funciones concomitantes con la activación de la respuesta (UPR) de proteína desdoblada conocida por desempeñar un papel clave en la PC con capacidad para la síntesis de secretan las inmunoglobulinas6,7. El TF XBP1 desempeña un papel importante en esta adaptación celular8,9,10.
Las células de B y PC es actores clave de la inmunidad humoral. Comprensión de lo biológico los procesos que controlan la producción y la supervivencia de las células de plasma normales es fundamental en las intervenciones terapéuticas que necesitan para garantizar la eficiente respuesta inmune y prevenir la autoinmunidad o inmunodeficiencia. PC son las células raras a etapas tempranas de la diferenciación tiene lugar en localizaciones anatómicas que dificultan la caracterización biológica completo, particularmente en humanos. Utilizando sistemas de cultivo de varios pasos, hemos divulgado una B in vitro al modelo de diferenciación de PC. Este modelo reproduce la diferenciación secuencial y la maduración que ocurre en los diferentes órganos en vivo11,12,13. En un primer paso, las células de memoria B se activan en primer lugar durante cuatro días por combinación de CD40 ligando, oligodeoxynucleotides y citocinas y se diferencian en preplasmablasts (PrePBs). En un segundo paso, preplasmablasts son inducidas a diferenciarse en plasmablasts (PBs) quitando CD40L y oligodeoxynucleotides estimulación y cambia la combinación de citocinas. En un tercer paso, plasmablasts son inducidas a diferenciar en las primeras PC cambiando la combinación de citocinas11,12. Un cuarto paso se introdujo para obtener piezas totalmente maduros por cultivar estos primeros PC con medio de la médula ósea células stromal acondicionadas o seleccionado factores de crecimiento de13. Estos equipos maduros podrían sobrevivir varios meses en vitro y secretan altas cantidades de inmunoglobulinas (figura 1). Curiosamente, nuestro modelo in vitro recapitula los cambios transcripcionales coordinados y el fenotipo de la B diferente a etapas de PC que puede ser detectado en vivo11,12,13,14 ,15. PC es las células raras y nuestro modelo de diferenciación in vitro permite para estudiar humano B para diferenciación de PC.
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Protocol
El protocolo sigue las directrices de acuerdo con la declaración de Helsinki y acuerdo de centro de Hospital de la Universidad de Montpellier de recursos biológicos.
1. en el modelo de diferenciación de la célula de Plasma Vitro Normal
Nota: PC se genera a través de una cultura de cuatro pasos11,12,13.
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Diferenciación y la amplificación de la célula de b
- Uso de células de sangre periféricas de voluntarios sanos para la purificación de células B de memoria.
- Diluir 7,5 mL de sangre con 24,5 mL de Medio RPMI 1640.
- Añadir 12,5 mL de temperatura gradiente de densidad (por ejemplo, Ficoll) a un tubo cónico estéril 50 mL. Suavemente el recubrimiento el gradiente de densidad con los 32 mL de sangre diluida. Minimizar la mezcla de las dos fases.
- Centrifugar 20 min a 500 x g con el freno de. Recoger las PBMCs de la interfaz de gradiente de densidad de plasma diluido y colocar las células en un tubo estéril de 50 mL y completar hasta 45 mL con una solución salina equilibrada de Hank.
- Centrifugar las células durante 5 minutos a 500 x g. Cuidadosamente Quite el sobrenadante y mantener el pellet.
- Agregar 45 mL de suero de ternera fetal de RPMI1640/10% (FCS) y centrifugar 5 min a 500 x g. Cuidadosamente Quite el sobrenadante y mantener el pellet. Añadir 30 mL de PBS/2% FCS.
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Eliminar células CD2 + con bolas magnéticas anti-CD2. Añadir 4 granos para la celda objetivo. Incubar 30 min a 4 ° C.
- Celdas separadas del grano-limite de células independientes utilizando un imán para aplicación de separación celular. Recoger las células independientes e incubar el sedimento celular con anti CD19 APC y anti anticuerpos CD27 PE durante 15 minutos a 4 ° C (2 μl del anticuerpo para 106 células).
- Lavar dos veces en PBS/10% de suero de cabra.
- Eliminar los eventos contaminantes en parcelas FSC y SSC. Trama de Maillots en FSC-A vs H de FSC y SSC-A vs QUE SSC-H parcelas para eliminar los desechos y para seleccionar la población total de leucocitos. Seleccionar las células de memoria B CD19/CD27 y CD19+CD27+.
- Purificar MBCs utilizando un clasificador de células con una pureza de 95%.
- Realice todos los pasos de cultivo con IMDM y 10% FCS, complementado con la insulina humana de 50 mg/mL humana transferrina y 5 mg/mL.
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Placa purificada MBCs en placas bien seis (1.5 x 105 MBCs/mL en 5 mL/pocillo), durante 4 días, con IL-2 (20 U/mL), IL-10 (50 ng/mL) y IL-15 (10 ng/mL).
- Añadir fosfotioato CpG ODN 2006, CD40L soluble humana recombinante con etiqueta histidina (sCD40L; 50 ng/mL) y mAb anti-polyhistidine (5 mg/mL) para la activación de MBCs (figura 1). Activación de sCD40L o ODN solamente con la misma citocina cóctel cede a la menor amplificación12. La combinación de señales de activación descritas aquí con plomo para el número máximo de activa las células B y PrePBs11,12 (figura 1).
- Para el perfil de expresión génica, purificar CD38 /CD20–– PrePBs, en el día 4, mediante un clasificador de células (figura 2).
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Generación celular plasmablastic
- En el día 4, contar las células.
- Células en placas 12-pozo de la placa a 2,5 x 105/ml en 2 mL/pozo.
- Inducir la diferenciación por eliminación de oligonucleótidos CpG y sCD40L y adición de un nuevo medio de cultivo con una citoquina nuevo cóctel incluyendo IL-2 (20 U/mL), IL-6 (50 ng/mL), IL-10 (50 ng/mL) y IL-15 (10 ng/mL) (figura 1). Células en cultivo durante 3 días (desde el día 4 a día 7) a 37 ° C.
- Para el perfil de expresión génica, purificar CD38+/CD20– PBs, en el día 7, usando un clasificador de células (figura 2).
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Primera generación de células plasmáticas
- En el día 7, contar las células.
- Placa de células en placas 12-bien en 5 x 105/ml en 2 mL/pozo.
- Distinguir en los primeros PCs con medio de cultivo fresco de IL-6 PB (50 ng/mL), IL-15 (10 ng/mL) y el IFN-α (500 U/mL) durante 3 días a 37 ° C. Para el perfil de expresión génica, purificar CD20–/CD38+/CD138+ PC temprana, en el día 10, utilizando un clasificador de células (figura 2).
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Generación de larga duración de células plasmáticas
- Se diferencian temprano PC en PC largo cambiando las condiciones de cultivo.
- Las células en placas 12-bien en 5 x 105/ml en 2 mL de la cultura/bien o en placas de 24 pocillos cultura en 1 mL/bien a 37 ° C, uso de IL-6 y células estromales acondicionado medio y abril (200 ng/mL).
- Obtener medio acondicionado de célula estromal por cultivo de células del estroma durante 5 días con medio de cultivo. Filtro de la cultura de células estromales sobrenadante (0.2 μm) y congelar.
- Añadir 50% de la media condicionada de célula stromal a culturas de PC con renovación cada semana. PC duradero generado podría mantenerse por meses13. Supervivencia a largo plazo de piezas se podía obtener con IL-6 y abril sólo como reportados13.
- Medida la secreción de Ig de citometría de flujo había clasificado PCs.
- PC cultura 106 células/ml para 24 h y cosecha cultivo sobrenadante. Medir IgG e IgA con humano enzima-ligado del inmunosorbente (ELISA) de ensayo kits11,12,13. La secreción de IgG mediana entre 10 pg/célula/día a 10 a 17 pg/célula/día a 60 días13.
2. molecular Atlas de B para diferenciación de PC
Nota: Hemos construido un acceso conveniente y herramientas bioinformáticas para extraer y visualizar la información más importante de datos de Affymetrix GEP PC diferenciación (GenomicScape)15. GEP están públicamente disponibles de ArrayExpress base de datos (http://www.ebi.ac.uk/arrayexpress/) incluyendo purificada MBCs, PrePBs, PBs y EPCs: E-MTAB-1771, E-MEXP-2360 y E-MEXP-3034 y E BMPC-MEXP-236014,15. Genomicscape es un libremente disponible webtool.
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Selección de la B al conjunto de datos de PC
- Seleccione B para conjunto de datos de PC en el menú de Buscar datos en GenomicScape herramienta de Bioinformática de acceso abierto (http://www.genomicscape.com) llamada células B humanas a células plasmáticas. Visualización del perfil de expresión génica del gen único o una lista de genes está disponible mediante la herramienta de Informe de Coexpression de expresión en las Herramientas de análisis disponibles en la página de inicio.
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Análisis de actividades y análisis de componentes principales (PCA)
- Seleccione herramientas de análisis de | webSAM para cargar la herramienta SAM.
- Elija el conjunto de datos de las células humanas B a células plasmáticas y seleccionar los grupos de muestras a comparar.
- Utiliza los diferentes filtros disponibles para aplicar las opciones de filtrado de interés.
- Para comparar perfiles de expresión génica con la herramienta SAM, modificar las opciones de filtrado incluido doble cambio, número de permutaciones, tarifa falsa del descubrimiento y el tipo de comparación. GenomicScape calcular el análisis y proporcionar genes expresados diferencialmente entre los grupos seleccionados.
- Ejecutar análisis de componentes principales mediante la selección de Análisis de componentes principales en el menú de Herramientas de análisis .
- Seleccione el conjunto de datos de las células humanas B a células plasmáticas y seleccione los grupos de interés.
- Pegar una lista de genes de interés o seleccionarlos genes según la varianza. Para pegar una lista de genes, seleccione Genomicscape para analizar una lista de genes/ncRNAs, haga click aquí... se computar PCA que pueda ser visualizado y descargado.
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Representative Results
El procedimiento general de diferenciación in vitro de PC normal se representa en la figura 1. Utilizando el protocolo presentado aquí, podríamos generar suficiente cantidad de células que no se podía obtener con ex vivo de muestras humanas. Aunque se ha investigado el papel de la compleja red de factores de transcripción implicados en la diferenciación de la PC, los mecanismos de regulación de redes de transcripción de diferenciación de PC claves siguen siendo mal conocidos. Diferenciación celular es conducida sobre todo por cambios epigenéticos y transcripcionales. Usando nuestro modelo in vitro y el B a atlas PC GEP, investigamos los cambios de expresión de los factores epigenéticos en la diferenciación de la célula de plasma normal.
Expresión de factores epigenéticos en la diferenciación de la célula de plasma normal
Los que pertenecen a las siguientes familias definimos como factores epigenéticos: ADN metiltransferasas (DNMT), proteínas de dominio de metil-CpG-que ata (MBD), histona acetiltransferasas (HAT), histona deacetilasas (HDAC), histona metiltransferasas (HMT) y histona demetilasas (HDM) como se describió anteriormente para cáncer de las células16 (complementariotabla 1). Investigamos los epigenéticos factores expresados diferencialmente durante la diferenciación de la PC usando nuestro modelo in vitro, purificada maduran médula ósea PC (BMPCs) y "B atlas PC" usando el webtool GenomicScape (figura 2). Usando análisis de SAM multiclase, encontramos 71 genes significativamente diferencialmente entre MBCs, PrePBs, PBs, principios ordenadores y BMPCs con una tarifa falsa del descubrimiento < 5% (figura 3Ay3B y complementariotabla 2). Etapa MBC se caracteriza por la sobreexpresión de 23 genes epigenéticos jugador incluyendo el 39.13% de histona acetiltransferasas (HATs), 30.43% de histona metiltransferasas (HMTs), 21.74% de histona demetilasas (HDMTs), 4.35% de proteínas de unión de metilo y 4,35% de HDACs (figura 4). 14 jugadores epigenéticos se sobreexpresa específicamente en la etapa de PrePBs incluyendo el 50% de HMTs, 14.28% de DNMTs, 21,43% de las HDACs, 7.14% de HDMTs y 7.14% de sombreros (figura 3). Etapa de PBs se distingue por la sobreexpresión de 5 jugadores epigenéticos con 2 HDMTS y 2 HMTs 1 DNMT. 4 jugadores epigenéticos son overexpressed en PC temprana (1 HDAC, 1 sombrero, 1 HMT y 1 proteína de unión a metil). En BMPCs, 10 factores epigenéticos fueron específicamente overexpressed incluyendo el 50% de HMT (complementariotabla 2).
Los cambios más importantes en la expresión de factores epigenéticos se producen durante las MBCs a la transición de PrePBs con una regulación a la baja de 23 genes de MBCs y upregulation de los genes epigenéticos de 14 PrePBs (figura 4). MBCs overexpressed perceptiblemente sombreros en modificaciones post-traduccionales de las histonas. Acetilación de histona afecta estructura de la cromatina dando por resultado la decondensation de la cromatina y el aumento de transcripción de genes que son epigenéticamente silenciados por compactación de la cromatina. También está asociado con una regulación a la baja significativa de sombreros, un cambio importante en la expresión HMTs y enriquecimiento en la expresión génica de las HDACs y DNMTs MBCs PrePBs transición. Curiosamente, PrePB etapa también se caracteriza por la sobreexpresión de MMSET HMT. WHSC1/MMSET/NSD2 es un dominio SET que contiene histonas lisina metiltransferasa que puede di - y trimethylate histona H3 en lisina 36. MMSET está implicado en la translocación de recíproco t(4;14)(p16;q32) en un subgrupo de mieloma múltiple asociado a pronóstico pobre. Se informó que el MMSET está implicado en la reparación del ADN regulan la inducción de la H4K20 la metilación de histonas alrededor de roturas de doble cadena de DNA, que, a su vez, facilita 53BP1 contratación17. PrePBs altamente proliferan en comparación con MBCs con 50% de las células en la fase S11 sugiere que la etapa de PrePBs podría estar asociada con un alto estrés replicativo. Sobreexpresión del MMSET podría participar en la prevención de daño de la DNA inducida por el estrés de replicación en PrePBs.
PB y PC temprana presenta factores epigenéticos similares perfiles de expresión (figura 2). BMPCs se caracterizan por una sobreexpresión específica de HMT y HDAC que están relacionados con la adaptación de estrés de la secreción de Ig como EHMT2 y HDAC6. BMPCs maduros tienen la característica de sintetizar y secretan grandes cantidades de anticuerpos. Esta síntesis alta de inmunoglobulinas está asociada con un estrés inducido por proteínas mal plegado y el desarrollo de la respuesta del retículo endoplásmico (ER) para dar cabida a esta producción. Nuestros resultados demuestran cambios de expresión de gen mayor de factores epigenéticos que pueden jugar un papel importante durante la B a la diferenciación de la PC a través de eventos de reprogramación epigenética mediada.
Figura 1 : Modelo de diferenciación In vitro de células plasmáticas. El modelo de diferenciación de PC recapitula los distintos pasos de la generación humana de PC. En un primer paso, las células de memoria B se activan en primer lugar durante cuatro días por combinación de CD40 ligando, oligodeoxynucleotides y citocinas y diferencian en preplasmablasts. En un segundo paso, preplasmablasts son inducidas a diferenciarse en plasmablasts quitando CD40L y oligodeoxynucleotides estimulación y cambia la combinación de citocinas. En un tercer paso, plasmablasts son inducidas a diferenciarse en células de plasma tempranas cambiando la combinación de citocinas11,12. Un cuarto paso se introdujo para obtener células plasmáticas maduras totalmente por su cultivo de estas células del plasma tempranas con células estromales de médula ósea o medio SC acondicionado y abril para dos meses13. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 2 : Modelo de diferenciación de PC humano resaltando la expresión de CD20, CD38 y CD138 en los plasmablasts (prePBs), plasmablasts (PBs) y células plasmáticas (PC) que permiten la purificación celular clasificador y Perfil de expresión génica de Affymetrix. GenomicScape webtool permite visualizar el perfil de expresión de uno o varios genes de interés en B al conjunto de datos de PC diferenciación y analizar genes diferencialmente expresados entre subpoblaciones celulares. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 3 : Clase múltiple SAM análisis. Las señales de los factores epigenéticos 71 significativamente expresados diferencialmente durante B para diferenciación de PC (análisis de SAM; FDR < 0.05) en células de memoria B (MBCs, n = 5), preplasmablasts (PrePBs, n = 5), plasmablasts (PB, n = 5), temprana de las células plasmáticas (temprano PC, n = 5) y las células plasmáticas de médula ósea normal (BMPCs, n = 5) se muestran de baja (azul profundo) de alta expresión (rojo intenso). Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 4 : Porcentaje de genes epigenéticos pertenecientes a categorías de demetilasas histonas, proteínas de dominio de metil-CpG-que ata (MethylBP), histona acetiltransferasas (HAT), histona deacetilasas (HDAC), histona metiltransferasas (HMT) y DNMTs significativamente sobreexpresa en MBCs o PrePBBs. Por favor haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Complementario tabla 1: Haga clic aquí para descargar este archivo.
Tabla adicional 2: Haga clic aquí para descargar este archivo.
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Discussion
En humanos, PC son células con etapas de diferenciación tiene lugar en lugares anatómicos que obstaculizan la caracterización biológico completo. Hemos desarrollado una in vitro B modelo de diferenciación de PC utilizando sistemas de cultivo de varios pasos donde varias combinaciones de moléculas de activación y citoquinas se aplican posteriormente para poder reproducir la diferenciación secuencial en el diferentes órganos/tejidos en vivo11,12,13.
Otros eficiente B in vitro a los modelos de diferenciación de PC fueron reportados18,19. El modelo desarrollado por Le Gallou et al. explorado B dependiente de células T a la diferenciación de la PC con una metodología de cultivo de dos etapas a partir de CD19+/CD27– ingenuo B células. Cocco reportaron un modelo in vitro para generar piezas duraderas a partir del total de las células B19. Nuestra estrategia imita la activación y diferenciación que ocurren en un centro germinal con CD40 y Toll-like receptor mímico la célula de T ayuda y antígeno de activación utilizada en combinación con citoquinas de activación producida por las células dendríticas, macrófagos y ayudante de T . Activación con sCD40L y CpG ODN cede a la generación de PrePBs que han sido identificados en los ganglios linfáticos, amígdalas y médula ósea en humanos11,20. Esta etapa de transición se caracteriza por la ausencia de marcadores CD20, CD38 y CD138 y el coexpression de B y PC TFs, pero en un nivel reducido en comparación con las células de B, PBs, o PC11. Esta etapa de transición es de particular interés ya que se asocia a la resistencia de inhibidor de la proteasoma en pacientes de mieloma múltiple20,21. Aunque PC podría ser generados sin IL-1518,19, además de IL-15 siempre en nuestras manos, optimización resultados en la generación de CD20–CD38++ células en día 411,12. Además de IL-21 sería de particular interés ya que la IL-21 promueve la diferenciación de la PC a través de la inducción de dirigible mediada por la activación de STAT3 como previamente divulgados19,22. Según lo informado por Cocco et al complejo cultura condiciones que contiene IL-21, IFN-α, IL6 y stromal cell-condicionada medio apoyo la generación de piezas de larga duración. Nos informan que la supervivencia a largo plazo de PC podría ser soportado, in vitro, uso de IL-6, abril y stromal cell-condicionada medio o los dos factores de crecimiento solamente. Las células del estroma producen importantes factores de crecimiento del PC, especialmente IL-6 y galectin13,19,23,24,25 y mantienen las interacciones entre hematopoyético células y PC26. Además, abril es uno de los principales factores de crecimiento implicados en la supervivencia de la PC, producida por las células hematopoyéticas27,28. Para evitar la heterogeneidad relacionada diferentes fuentes de células estromales, células estromales Resto 6, desarrollado y proporcionado por el laboratorio de Karin Tarte, fueron utilizadas entre pasajes 8 y 1513,29. Resto-6 células expresan marcadores de células estromales CD73, CD90 y CD105 y apoyan eficientemente el crecimiento de las células de B normales y malignas29.
Sin embargo, se pudo observar una heterogeneidad moderada en el porcentaje de células B activadas, PrePBs, PBs y PC dependiendo de la sangre de donantes sanos para la memoria de la célula B purificación11,12,13. El PC duradero generados es no-ciclismo PC, sobrevivir y producir inmunoglobulinas in vitro, como sus contrapartes en vivo13más de tres meses. Larga vida PC altamente expresa CD138 y gene expresión perfiles relacionados con en vivo PC13. Además, una proporción más alta de empalmada a unspliced XBP1 con mayor expresión de factores de transcripción IRF4 y PC PRDM1 caracteriza la PC duradero obtenidos en vitro en comparación con PC temprana obtenida en Día 1013.
Se cree epigenéticos y cambios transcripcionales controlan transiciones celulares durante el desarrollo. Sin embargo, la diferenciación terminal de los linfocitos B en células plasmáticas es un proceso único cuyas modificaciones epigenéticas sigue siendo en gran parte desconocidas. Según eso, recientemente se analizó la miRnome de la diferenciación normal de PC y se identificaron novela clave miRNAs regulan las redes de significación para la diferenciación normal de PC14. Demostró que varios miRNAs también podría participar en la regulación de la expresión de factores de transcripción claves durante la PCD, incluyendo IRF4, PRDM1 y ELL2 ARID3A14. Según eso, ampliamos aquí la caracterización de perfiles epigenéticos relacionados con gene durante B para diferenciación de PC utilizando la plataforma de acceso abierto GenomicScape. Este enfoque nos permitió identificar cromatina modificación de genes de la enzima específicamente expresados en las diferentes etapas de diferenciación de la PC. MBCs overexpressed perceptiblemente sombreros causan nuleosomal remodelación que expone los sitios de unión de la transcripción. Modificaciones post-transcripcionales de las histonas, incluyendo acetilación de las histonas se han divulgado en la región del promotor de grandes células B TFs incluyendo PAX5, CIITA, SPIB y BCL630,31. Además, análisis proteómico demostraron que CREBBP y EP300 (overexpressed en MBCs) interactuarán con BCL6 y podrían desempeñar un papel en la regulación transcripcional de BCL632. PAX5, también fue demostrado para regular la expresión del gen objetivo mediante la contratación de la remodelación de la cromatina y la histona modificación de proteínas33. Pax5 fue demostrado para inducir H3K4 metilación y acetilación de H3K9 en promotores de sus genes blanco activado del33.
De los principales factores epigenéticos GEP cambios fueron identificados durante las MBCs a la transición de la PrePBs con una mayor regulación a la baja de sombreros junto con un aumento en la expresión HMTs y enriquecimiento de la expresión génica de las HDACs y DNMTs. Etapa de transición PrePB es una célula altamente proliferante población11. Según eso, varios factores epigenéticos, conocidos por estar involucrado en el control de la proliferación de célula incluyendo DNMT134, EZH235,36,37,38 y MMSET39,40 han sido identificados y podrían estar involucrados en la inducción de la activación y proliferación celular durante la etapa de PrePB.
En la etapa final de B para diferenciación de PC, BMPCs overexpressed factores epigenéticos, incluyendo EHMT2 y HDAC6, conocido por estar involucrado en la respuesta de estrés de ER. ER y aparato de Golgi juegan un papel importante en la PC para la síntesis de Ig secretada. En células de cáncer de vejiga, EHMT2 inhibición estimula estrés ER e induce apoptosis41. HDAC6 pertenece a la familia de 2b de la clase de las HDACs. Se sabe que desempeñan un papel en la homeostasis de la proteína y la UPR42,43 y HDAC6 inhibidores son probados en ensayos clínicos a PC malas en mieloma múltiple. El subrayado de los datos que factores epigenéticos pueden desempeñar un papel en la homeostasis de larga duración Ig secretoras de PC.
Uso de vectores lentivirales o inhibidores específicos, podría ser interesante investigar el papel de estas vías biológicas y cromatina modificación de enzimas en la remodelación de la cromatina, la diferenciación de PC y funciones como se describió anteriormente por nuestro grupo 44.
El conocimiento derivado de esta investigación podría informar e instruir en estrategias diagnósticas y terapéuticas para los trastornos de la PC, como en el caso de mieloma múltiple, un cáncer sin cura definitiva para el que mejor pronóstico y estrategias terapéuticas mejoradas se necesitan críticamente.
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Disclosures
Los autores no tienen nada que revelar
Acknowledgments
Este trabajo fue financiado por becas del INCA francés (Institut National du Cancer) cáncer de ITMO (MM & TT), ANR (Tie-Skip) e Instituto (PLBIO15-256).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| anti-CD2 magnetic beads | Invitrogen | 11159D | |
| Anti-CD138-APC | Beckman-Coulter | B49219 | |
| Anti-CD19-APC | BD | 555415 | |
| Anti-CD20-PB | Beckman-Coulter | B49208 | |
| Anti-CD27-PE | BD | 555441 | |
| Anti-CD38-PE | Beckman-Coulter | A07779 | |
| Anti-histidine | R&D Systems | MAB050 | |
| CpG ODN(PT) | Sigma | T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*G*T*C* G*T*T*T*T*G*T*C*G*T*T |
|
| human Transferin | Sigma-Aldrich | T3309 | |
| IFN-α | Merck | Intron A | |
| IMDM | Gibco | 31980-022 | |
| Recombinan Human CD40L-hi | R&D Systems | 2706-CL | |
| Recombinant Human APRIL | R&D Systems | 5860-AP-010 | |
| Recombinant Human IL-10 | R&D Systems | 217-IL- | |
| Recombinant Human IL-15 | Peprotech | 200-15-10ug | |
| Recombinant Human IL-2 Protein | R&D Systems | 202-IL- | |
| Recombinant Human IL-6 | Peprotech | 200-06 |
References
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