Behavior

סוללה בדיקה התנהגותית להערכה חוזרת ונשנית של מיומנויות מוטוריות, מצב רוח, קוגניציה בעכברים

Published: March 2, 2019 doi: 10.3791/58973

Ran You^1,2,3, Yan Liu³, Raymond Chuen-Chung Chang³

¹Nanjing Key Laboratory of Pediatrics, Children's Hospital of Nanjing Medical University, ²Nanjing Key Laboratory of Pediatrics, Nanjing Medical University, ³Laboratory of Neurodegenerative Disease, Li Ka Shing Faculty of Medicine, University of Hong Kong, Pokfulam, Hong Kong Special Administrative Region (HK SAR)

Summary

סוללה מבחן התנהגותי מקיף של מיומנויות מוטוריות, רוח — לרבות אינטראקציה חברתית, דיכאון וחרדה – קוגניציה מיועד המבדק חוזרות ונשנות של שינויים התנהגותיים הקשורים ניוון מוחיים הקשורים בעכברים.

Abstract

לימודי תרופתי, רעילות הקשורים ניוון מוחיים דורשים ניתוח התנהגותי מקיף בעכברים כי תפקוד מוטורי, בתפקוד ב רוח וחשיבה נפוצים, לעיתים קרובות משותף תסמיני מחלות ניווניות. המוצגת כאן היא סוללה בדיקה התנהגותית מנוע, רוח של קוגניציה, אשר יכול להיבדק שוב ושוב במחקר האורך. סוללה זו מעריך את פנוטיפ באופן כללי התנהגות בעכברים על-ידי בדיקת כל תחום של התנהגות לפחות שתי בדיקות היטב קיבל עצמאית (קרי, מבחן בשדה פתוח, rotarod הבדיקה המוטורית, מבחן אינטראקציה חברתית, גבוהות וכן מבחן מבוך, ו כפייה השחיה לבדיקת תפקוד רגשי, ו מוריס מים מבוך מבחן, מבחן זיהוי האובייקט הרומן לתפקוד קוגניטיבי). לכן, סוללה מבחן רגיש ומקיף זו היא כלי רב עוצמה עבור המחקר של ההתחלפות התנהגותיים הקשורים ניוון מוחיים.

Introduction

מחלות ניווניות בהשתתפות הרסנית התנהגותית סימפטומים, כולל פגיעה קוגניטיבית, רוח בתפקוד כגון חרדה, דיכאון, או תפקוד מנוע¹. בפתוגנזה של סוגים שונים של מחלות ניווניות היא לא ברורה². מחקרים המצטברת מציינים כי גורמים גנטיים וסביבתיים עשוי גם לתרום בפתוגנזה של מחלות ניווניות. זיהוי גורם הסיכון של הקשורים ניוון מוחיים דורש ניתוח התנהגותי. למרות כל סוג של מחלות ניווניות יש סממנה התנהגותית החתימה (למשל, מחלת אלצהיימר [AD] בהשתתפות עם ליקוי קוגנטיבי ומחלת פרקינסון [PD] עם תפקוד מוטורי). עם התקדמות המחלה, המטופלים להתבטא תחלואה נלווית של הפרעות התנהגותיות שונות³. לדוגמה, חולי אלצהיימר מראים סימפטומים של חוסר תפקוד רוח בשלב מתקדם⁴^,⁵. החולים במחלה עלולה להתקדם לתוך דמנטיה הקשורות PD ולפתח פגיעה קוגניטיבית⁶. על סמך תכונות אלה, ניתוח התנהגות במודלים הקשורים ניוון מוחיים הוא בדרך כלל חוזרים ונשנים ומקיף.

כדי להשיג מטרה זו, סוללה אשר מכיל מבחנים התנהגותיים קלאסית והשימוש בהם נפוץ עם תוקף מעולה תוכנן עבור ניתוח התנהגות מנוע, רוח, קוגניציה. בתפקוד המוטורי יכול להיבדק על ידי⁷^,את מבחן בשדה פתוח⁸ והבדיקה rotarod מאיץ. תפקוד רוח, כולל בתפקוד חברתי, דיכאון וחרדה, נראים לרוב מחלות ניווניות⁵. לפיכך, סוללה זו כוללת מבחן אינטראקציה חברתית חברותיות⁹, את גבוהות בתוספת מבוך מבחן חרדה¹⁰המבחן כפייה השחיה עבור דיכאון¹¹. פגיעה קוגניטיבית הוא אחד התסמינים האופייניים ביותר מחלות ניווניות כגון AD ו- דמנציה אוני frontotemporal¹². תחומים קוגניטיביים, כולל זיכרון לטווח קצר וזיכרון אפיזודי, רגישים הקשורים ניוון מוחיים¹³^,¹⁴^,¹⁵. לכן, המבחן מבוך המים מוריס עבור ולמידה מרחבית, זיכרון¹⁶ והמבחן זיהוי האובייקט חדשניים עבור זיכרון לטווח קצר¹⁷ כולל הסוללה. בדיקות אלה תואמים אחד לשני. סדר הבדיקות תוכנן כדי למקסם habituation וכדי למזער הפרעות, להמשיך להגדיל את התאימות בתוך הסוללה. מאז כל פונקציה נבדק על ידי לפחות שתי בדיקות עצמאיות שונות בין עיקרון השיטה, התוצאות של כל בדיקה יכול להיות עוד יותר לאמת. יתר על כן, הפרוטוקולים של בדיקות מודגשים לבדיקות חוזרות ונשנות, בקידום המחקר האורך של התפתחות מחלות ניווניות. לכן, סוללה בדיקה זו התנהגות מחקרים שונים תחומי משנה של שינויים התנהגותיים ראיתי בשלבים שונים של הקשורים ניוון מוחיים בעת עולה מספר מינימלי של בעלי חיים. סוללה זו שימש במחקר האורך אשר העריכו את השינויים בהתנהגות בעכברים צעירים למבוגרים (3 בן חודש) זכר C57BL/6N לאחר חשיפה נשימתית חלקיקי סיליקה, במקצוע זה הוא גורם סיכון פוטנציאלי של הקשורים ניוון¹⁸. עם זאת, מודלים, כגון בגילאי עכברים או מניפולציה גנטית עכברים, או זנים אחרים עשויים לנהוג אחרת מאשר עכברים C57BL/6N צעירים. לכן, זהירות עשוי להידרש בעת שימוש סוללה זו בעכברים אלו.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

כל השיטות המתוארות כאן אושרו על ידי הוועדה על שימוש של חיים חיות מחקר (CULATR), אוניברסיטת הונג קונג והוראה.

1. פרוטוקול כללי

הערה: סעיף זה מבוסס על דיקון¹⁹.

חדר ההתנהגות כיוונון
1. להיפטר שאינם קשורים גירוי/הסחת דעת, כולל אור בוהק ישירה על המנגנון ניסיוני, ריח, רעש, וחיות אחרות לא רלוונטי, בחדר התנהגותית (אשר צריך להיות 10 מ' על² עם מתכווננת תאורה ויש, רצוי, באים בהזמנה).
  הערה: מאז העכבר הוא חיים ליליים, תאורה מתחת לגיל 15 לאקס במבחן בשדה פתוח, בדיקה זיהוי אובייקט הרומן של אינטראקציה חברתית מבחן יכול למזער את הלחץ/ההפרעה מן האור ולעזור העכבר למקד הבדיקה.
2. להגדיר את המצלמה עבור הקלטת לפחות 1.5 מ' מעל הרצפה, המבטיח כי זה הרחק מעיני העכבר בדיקות וידאו.
דיור ו habituation
1. קבוצה-בית העכברים ביחידה בעלי חיים תחת השגחה (למשל, קבוצה-דיור לא יותר מ-4 מבוגרים עכברים).
  הערה: כאן, שימשו עכברים C57BL/6N זכר בן 3 חודשים ובו שכנו בתוך כלוב 1144B. לשלול עכברים חולים, פצועים או קשות מתוח. חוויות של רעב, צמא, או שמציקים עשוי להשפיע על הביצועים של העכבר.
2. לארגן המאלף אותו לנהל את כל הבדיקות התנהגותית, לצמצם את השתנות. לבצע את התחבורה הציבורית, טיפול, ולהתנסות במהלך מחזור אור מ-7 בבוקר עד 7 בערב במידת האפשר, לארגן את כל הטיפול אחרים, כגון המינהל של סמים/רעלן (למשל, תוך-אפי החדרה של חלקיקי סיליקה) או ניקוי הכלוב, לאחר הבדיקה.
3. Relabel את הכלובים עם מספרים אקראיים לעוור הנסיין לפני ניסוי. Habituate העכברים לסביבה ניסיוני בחדר התנהגותית למשך 15 עד 30 דקות בכלובים שלהם הביתה. שמור את הכלובים הביתה בחדר התנהגותיים במהלך הניסוי כולו.
4. לפני תחילת הניסוי, לשים עכבר C57BL/6N nonexperimental במנגנון כך התנאי ניסיוני העכבר הראשון הוא זהה לשאר. לאחר מכן, לנקות את המנגנון כדלקמן: להסיר בשתן ובצואה במגבת נייר נקיה, לנקות את המכשיר ניסיוני עם מים מהברז, ואז, מכסים את הריח נשאר על ידי העכבר שתמחקי את המנגנון עם מגבת נייר בקלילות ריסס עם 70% אתנול.
5. כדי למזער את הסחת הדעת הנגרם על ידי הנסיין, בקש הנסיין לעזוב את החדר התנהגותיים במהלך הקלטת וידאו, או להישאר מאחורי הקלעים במהלך הבחינה מבוך המים מוריס.
סידור בדיקה התנהגותית
1. לארגן את המבחן התנהגותיות לפי הסדר כפי שמוצג באיור 1A. תוכנית לביצוע הבדיקות מרחפים על ידי 24 h, חוץ גבוהות פלוס מבחן מבוך.
  הערה: מאז כל ההליך דורש עד 2 שבועות, לפשט את הסוללה על-ידי בחירה בין בדיקות דומות לפני יישום במחקר חריפה או לטווח קצר.
  התראה: הבדיקה בשדה פתוח 2 יום מבטיחה habituation נאותה למבחן זיהוי האובייקט הרומן. בדיקות המבחן כפייה השחיה אחרונה שכן היא עלולה לגרום מתח בעכברים C57BL/6N.

2. BehavioralTest פרוטוקול

מבחן בשדה פתוח⁸^,¹⁸^,¹⁹^,²⁰
1. לבצע את הבדיקה בשדה פתוח ב- 60 ס מ (אורך [L]) x 60 ס מ (רוחב [W]) x ארנה פלסטיק לבן לצבעי 40 ס"מ (גובה [H]).
  הערה: שימוש בזירות מרובים יכולים להגדיל את התפוקה של הבדיקה.
2. להתחיל את ההקלטה המצלמה ולשים בעדינות את העכבר ליד באמצע קיר של הזירה, מול הקיר זהה. לתעד את אופן הפעולה של מצביע העכבר 10 דקות לפני שחזר זה הכלוב הביתה. לנקות את המנגנון כפי שמתואר בשלב 1.2.4.
  הערה: נקודת ההתחלה במבחן בשדה פתוח יכול להיות גם במרכז הזירה. להיות עקבי בין העכברים.
3. חזור עד העכברים לסיים את הפרוטוקול. מאוזנים את סדר הבדיקה בין קבוצות.
4. לבצע ניתוח הנתונים כמפורט להלן.
  1. לחלק את הזירה ארבעה ריבועים על ידי ארבעה ריבועים (רשת דמיונית) על מסך המחשב. כדי להעריך את הפונקציה גינקולוגיות, לספור את מספר קווים חוצים את העכבר ארנה¹⁹.
    הערה: ההגדרה של "לחצות את הגבול" הוא כאשר שני הגפיים האחוריות לחצות אותו. הגדרה זו חל גם גבוהות וגם מבחן מבוך.
  2. למדוד את הזמן באזור מרכזי כמחוון של חרדה. אזור מרכזי זה ארבעה ריבועים במרכז הזירה.
    הערה: פרמטרים נוספים, כגון גידול (שני השלג מעל האדמה, עם השלג נגד הקיר או עמידה), השהיית אחורי הראשון, ואת טיפוח, הקפאת מציינים את רגשנות של העכבר.
  3. לחלופין, השתמש תוכנת מעקב, כפי שתיאר בפרוטרוט Seibenhener ו-⁸, כדי למדוד את המרחק ווטן, את המהירות, ואת הזמן המושקע באזור המרכז.
האצת rotarod מבחן¹⁸
1. לבצע היום 3 הכשרה של rotarod מאיץ הבדיקה לפני כל טיפול בתרופות או רעלן/דוגמנות/התפרצות של מחלות ולבדוק בתפקוד המוטורי ליום 1, כמתוכנן ב איור 1A.
  הערה: העכבר מקבל שלושה ניסויים ליום במהלך האימונים ובדיקות. בכל ניסוי מתחיל הסיבוב של המוט ומסתיים עם הירידה של העכבר.
2. מקם את המנגנון rotarod על הספסל בחדר התנהגותית. הימנע מתאורה ישירה לציוד. תוכנית הציוד החל מ- 4 סל ד, תוך האצה למהירות של 40 סל ד בתוך 5 דקות.
3. בכל ניסוי, הנח את העכבר על מוט סטטי, מופנות לקיר של המכונה. מתחילים את המכשיר כאשר העכבר סוכם. להפסיק את המכשיר מרגע העכבר טיפות ולהקליט את הזמן העכבר על המוט. חזור מיד לניסויים שני עוד לפני שחזר את העכבר בחזרה לכלוב הביתה.
4. חזור על הפעולות על העכברים האחרים.
5. למדוד את הזמן הממוצע בילה על המוט של שלושה ניסויים במהלך הבדיקה כדי להעריך המוטורית.
  הערה: הזמן הממוצע על המוט במהלך היום השלישי של אימון היא הבסיס של המוטורית.
אינטראקציה חברתית מבחן¹⁸
1. עבור הבדיקה אינטראקציה חברתית, להשתמש זירה בשדה פתוח עם שני תאים שקופים זהים (8 ס"מ [L] x 6 ס מ [W] x 12 ס מ [H]) עם חורים על פני השטח – עכבר הרומן (עוזר) אשר conspecific מאותו מין לנוער כי יש לו קשר הקודם נושא בעכבר. איור 1B מציגה את הערכה של ההליך. לנקות את הזירה ואת התאים כפי שמתואר בשלב 1.2.4.
  הערה: העכבר הרומן אינו יכול להיות חבר littermate או כלוב של העכבר נושא. זה שוכן קבוצה ובריא. Habituate בעכבר הרומן לחדר התנהגותית למשך 15 עד 30 דקות כפי שמתואר בשלב 1.2.3.
2. בנפרד למקם הצ'יימברס שני באמצע שני קירות מנוגדים של הזירה. להציג את העכבר נושא לתוך הזירה כפי שמתואר בשלב 2.1.2 באיור איור 1B, לחקר 3 דקות. להחזיר את העכבר נושא לכלוב הביתה ולהסיר כל שתן או צואה בזירה.
3. לשים המסייע באחד התאים. להציג את העכבר הנושא מחדש הזירה ולהקליט במשך 3 דקות לאחר מכן, חזרה שני העכברים לכל אחד הכלובים בבית משלהם. חזור על ההליכים עם אחרים עכברים הנושא כפי שתואר לעיל.
  הערה: מאוזנים לצד המסייע או באופן אקראי להקצות אותו בתוך הקבוצה.
4. הוידאו, מעריכים את פרמטר המתאר את הפעילות אינטראקציה חברתית של העכברים כמו t_helperזה_ריק, כלומר היחס בין הזמן אינטראקציה עם תא המסייע (t_helper) וריק אחד (t_ריק), או להשתמש ההכרה אינדקס t_helper/ (t_helper + t_ריק).
  הערה: אינטראקציה בין העכבר נושא התא מוגדר כאשר האף של העכבר נמצא במרחק 2 ס מ של החדר, מופנות לכיוון זה.
גבוהות בתוספת מבוך מבחן ¹⁰
1. לנהל את גבוהות בתוספת מבוך מבחן באותו יום אחרי עכברים כל נבחנים במבחן בשדה פתוח. לנקות את המנגנון כפי שמתואר בשלב 1.2.4.
  הערה: התצורה של גבוהות ועוד מבוך זה "+"-צורה. יש לו שתי זרועות פתוחות (30 ס מ x 5 ס"מ x 0.5 ס מ) מול אחד את השני, מאונך שתי זרועות סגור (30 x 5 x 16 ס מ) עם פלטפורמה מרכז (5 ס"מ x 5 ס"מ x 0.5 ס מ). המבוך הוא מוגבה 40 ס"מ מן הקרקע.
2. הנח את העכבר ליד הצומת בין הזרועות פתוחים וסגורים, מול היד פתוחה כי היא הפוכה הנסיין (איור 1C). להקליט את ההתנהגות במשך 5 דקות לפני שחזר את העכבר על הכלוב הביתה. חזור עד עכברים כל נבדקים.
  הערה: הזנת במבוך עם הפרצוף שלה את הזרוע פתוח יכול להגדיל חקר של העכבר היד פתוחה.
3. למדוד את הזמן העכבר בזרועות פתוחות (t_פתח), בזרועות סגור (t_סגור) מבוסס על הוידאו: t_פתחזה_לסגור מציין את רמת החרדה.
כפייה השחיה מבחן¹¹
1. המנגנון של הבדיקה כפייה השחיה הוא מיכל גלילי 30 ס מ, 20 ס מ קוטר. למלא את המיכל עד 15 ס מ גבוהה עם ברז מים בטמפרטורת החדר (23-25 ° C).
  הערה: השתמש מים טריים עבור כל עכבר.
2. התחל הקלטת וידאו ולשים בעדינות את העכבר בתוך המים, במרכז של המנגנון. תיעוד הווידאו עבור 6 דקות לפני לשים את העכבר לכלוב הביתה תחת אור אינפרא-אדום.
  הערה: נא לא להפריע את העכבר על-ידי מטביע אותה. או פיתול הזנב שלו.
3. מדד הזמן פקקת 5 דקות האחרונות של הווידאו המוקלט. ניידות פירושו כל תנועות פרט לאלה הנדרשים כדי לאזן את הגוף, כדי לשמור את הראש מעל המים.
הרומן וראייה לבחון¹⁷^,¹⁸
1. להגדיר את המבחן זיהוי האובייקט הרומן לכלול 2 ימי habituation, 1 יום להכרות, 1 יום של בדיקות (איור 1D); כל מפגש הוא 10 דקות לכל עכבר, המרווח ובהשתדלות 24 שעות ביממה.
  הערה: Habituation באמצעות המבחן בשדה פתוח מתבצע כמתואר בסעיף 2.1. העכבר אינטראקציה עם שני עצמים זהים (חפצים ישנים) ב להכרות. הבדיקה, העכבר אינטראקציה עם אחד האובייקטים הישן, אובייקט חדש, שניהם ממוקמים באותו מקום כמו האובייקטים להכרות. המנגנון של מבחן זיהוי האובייקט הרומן כולל זירה בשדה פתוח, שתי קבוצות של אובייקטים. כל ערכה מכילה שני עצמים זהים (א' ו- A ואובייקטים B ו- B). אובייקטים A ו- B הם דומים בגודלם אך שונים מרקם (זכוכית/פלסטיק/נייר), צורה (עגול/מעוקב) וצבע (בהיר/כהה). האובייקטים צריך להיות נטול ריח, מספיק גדול בשביל העכבר כדי לחקור בתוך 10 דקות. הגודל המתאים עבור עכברים C57BL/6N למבוגרים הוא בגובה 8 ס"מ ו 5 ס מ רחב/ב קוטר.
2. סמן את העמדות של שני העצמים להכרות ובדיקה, אשר הם 5 ס מ מן הצד ובגובה 7 ס מ מן החלק העליון של הזירה.
  הערה: סמן את המיקום על ערב קודם להכרות כדי למנוע את הריח של דה מרקר.
3. ב להכרות, העכבר מקיים אינטראקציה עם סט אחד של עצמים זהים. לנקות את ארנה ואת האובייקטים כפי שמתואר בשלב 1.2.4 לפני הנחת העכבר בזירה מול אמצע הקיר, כפי שמוצג באיור 1D. שיא 10 דקות לפני שחזר את העכבר על הכלוב הביתה. חזור עד העכברים סיום ולהחזיר את כל הכלובים ליחידה בעלי חיים.
  הערה: מאוזנים את האובייקטים המשמשים להכרות בתוך הקבוצה לצמצם הטיה (למשל, עכברים מס ' 1 ו- 2 לחקור אובייקטים A ו A, ו עכברים מס ' 3 ו- 4 לחקור אובייקטים B ו- B; בדרך זו, האובייקט הרומן הוא אובייקט B עבור עכברים מס ' 1, 2 ואובייקט A עבור עכברים לא. 3 ו- 4).
4. לבצע את הבדיקה 24 שעות לאחר להכרות. השתמש בפרוצדורה זהה בנוגע להכרות, אלא להחליף את אחד מהאובייקטים אחד מכל קבוצה אחרת (איור 1D). חזור עד כל העכברים יש לבצע את הבדיקה, ואחר כך, לחזור כל הכלובים יחידת בעלי חיים.
  הערה: מאוזנים הצד של האובייקט החדש בתוך הקבוצה לצמצם הטיה (למשל, להציג עכברים מס ' 1 ו- 3 אובייקטים A ו- B, ו עכברים מס ' 2 ו-4 לאובייקטים B ו- A). באופן זה, האובייקט הרומן מראה בצד ימין עבור עכברים מס ' 1 ו- 4-בצד שמאל עכברים מס ' 2 ו- 3. כאן, בצד שמאל הוא הצד השמאלי של הנסיין מול הזירה.
5. למדוד את הזמן כי העכבר כל אינטראקציה עם האובייקט החדש (t_החדש) והאובייקט הישן (t_הישן) בנפרד, מתוך הוידאו בשלב ניסויי. אינטראקציה בין החיה לבין האובייקט המתואר בפתק בעקבות צעד 2.3.4. לחשב את הזיכרון של העכבר כהעדפת לעצם הרומן = t_החדשזה_הישן; או t_החדש/ (t_החדש + t_הישן).
  הערה: t_החדשזה_זקן שווה ל- 1 או t_החדש/ (t_החדש + t_הישן) שווה ל 0.5 משמעה העכבר אין העדפה עבור האובייקט הרומן (קרי, ליקוי זיכרון). הפעם אינטראקציה עם אובייקטים להכרות יכול לשמש פקד של הניסוי. הזמן הכולל מציין את פעילות חקר של העכבר, ומציעה t_שמאלהזה_נכון bias המרחביים.
מבוך המים מוריס מבחן¹⁶
1. להגדיר את המנגנון כדלקמן.
  1. לשים מבוך מים, בריכה עגולה (של 120 ס מ קוטר ו עמוק 60 ס"מ), במרכז חדר התנהגותית, לסמן את המיקום של המבוך כדי להבטיח שהמיקום נשאר זהה במהלך הניסוי כולו.
  2. לחלק מן המבוך ארבעת הרבעים דמיוני שווה. לתלות על רמזים חזותיים (למשלעיגול, ריבוע, משולש, הפנטגון) במרכז כל רביע, 130 ס מ מעל הרצפה ו- 53 ס"מ מן הקיר של המבוך.
    הערה: במבוך ואת הסימן חייב להישאר באותה תנוחה במהלך הבדיקה כולה, כך העכבר יכול ליצור זיכרון מרחבי מדויק.
  3. מקום פלטפורמה 25 ס מ מן הקיר, במרכז של רביע הרביעי, לסמן את המיקום. הפלטפורמה העכבר הוא 10 ס מ קוטר.
    הערה: המיקום ואת קוטר של פלטפורמת לקבוע את הקושי של הפעילות. קרוב יותר זה הקיר של המבוך, או גדול יותר הפלטפורמה, כך קל יותר הפעילות.
  4. למלא את המבוך מים עם מים (עם טמפרטורת 23-25 ° C, צבעוני לתוך לבן, שנעשו אטום על ידי הלבנת אבקת אבקת חלב/מזון) עד מפלס המים גבוה יותר מאשר פלטפורמת 1 ס מ. להביא את העכברים לחדר התנהגותית למשך 15 עד 30 דקות של habituation כפי שמוצג צעד 1.2.3, להדליק את האור האינפרא-אדום מעל הכלובים, אשר ישמש כדי לייבש את העכברים.
    הערה: לכסות העליון של פלטפורמת עם בד לבן ובד כך העכבר יכול בקלות לטפס על זה. ודא שאין תאורה ישירה מעל המים.
2. לנהל את שלב ההכשרה כמפורט להלן.
  1. שלב ההכשרה אורכת 5 ימים, 4 משפטים ליום. לארגן באופן אקראי למחצה נקודות המוצא בכל יום כפי שמתואר בספרות¹⁶. המאמץ הזה מונע את העכבר ביסוס זיכרון אסוציאטיבי, וזו הדרך הנפוצה ביותר "לרמות" המבחן.
  2. בתחילת כל משפט, התחל הקלטת וידאו ולשים בעדינות את העכבר לתוך המבוך.
    הערה: אל תפיל את העכבר לתוך הטנק או לסובב את הזנב שלו, דבר העלול לגרום ללחץ נוסף ואבדן.
  3. שואל הנסיין להישאר מחוץ לטווח ראייה של העכבר ובמקרה לחזור לקחת את העכבר בחזרה לכלוב שלו הביתה כאשר כל אחת מהפעולות הבאות: (i) העכבר אינו יכול לאתר את הפלטפורמה בתוך 60 s; (ii) העכבר מוצא פלטפורמת בתוך 60 s ונשאר על זה עבור 10 s. בנסיבות (i), שואל הנסיין למקם את העכבר על הרציף, תן לו להישאר שם במשך 10 s.
    הערה: הנקודה (ii) פירושו שהעכבר ממוקם בהצלחה את הפלטפורמה.
  4. לעצור את הוידאו ולשים את העכבר חזרה לכלוב הביתה תחת אור אינפרא-אדום.
    הערה: שמירה על טמפרטורת הגוף של העכברים הוא קריטי עבור הביצועים שלהם כי היפותרמיה מדגיש עכברים עלולים להשפיע על הבדיקות הבאות.
  5. חזור על הפעולות עם עכבר אחר.
  6. בהתבסס על הוידאו, שיא ההשהיה לברוח, שהוא משך הזמן של תקופת שהעכבר מבלה במבוך, מלהיכנס המבוך עד לרגע זה בהצלחה מאתרת את הפלטפורמה. אם העכבר אינו מוצא בפלטפורמת או נשארת שם פחות מ-10 s ב- 60 s, ההשהיה לברוח נחשב מגרש ס' 60 עקומת למידה כנגד ימי הדרכה עם ההשהיה לברוח בממוצע ליום.
    הערה: ההשהיה בריחה אינה כוללת 10 s לבלות על הרציף.
3. בצע את שלב בדיקה כדלקמן.
  1. ביום השישי של מבחן מבוך המים מוריס, להרכיב את המערכת כפי שמתואר בשלב 2.7.1., לצלם תמונה של המבוך כדי להקליט את המיקום של פלטפורמת ולאחר מכן הסר את הפלטפורמה מתוך הטנק.
  2. התחל הקלטת וידאו והניח בעדינות את העכבר לתוך המבוך ברביע באלכסון מול המשולש היעד.
  3. שואל הנסיין להישאר מחוץ לטווח ראייה של העכבר במהלך הקלטת וידאו 1 דקות. לאחר מכן, יש הנסיין לקחת את העכבר החוצה מן המבוך ושם אותו חזרה לכלוב הביתה.
  4. להשתמש בתמונה שצולמו שלב 2.7.3.1. כאסמכתא כדי למדוד את משך הזמן של כל חוצה פלטפורמה. זמן משך שהעכבר נשאר ברביע היעד (t_היעד), על-פי הווידאו. הזמן הכולל הוא t_הכולל. למדוד את העדפת המשולש היעד כמו t_יעד זה_סה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

סוללה זו בדיקה התנהגותית תוכנן עבור ניתוח התנהגותי מקיף וחוקית של המנוע, מצב רוח, קוגניציה, אשר בדרך כלל מושפעות הקשורים ניוון מוחיים⁵. לנו יש להחיל סוללה זו ללמוד את השינויים בהתנהגות בעכברים C57BL/6N למבוגרים צעירים לאחר חשיפה נשימתית חלקיקי סיליקה 1 חודש, 2 חודשים¹⁸. התוצאות חשף כי עכברים C57BL/6N נחשפים חלקיקי סיליקה הראו שינויים התנהגותיים שונים לאחר חשיפה שונות פי¹⁸. בקצרה, תוצאות הבדיקה בשדה פתוח (איור 2 א), הבדיקה rotarod מאיץ (איור 2B) הדגימו כי חשיפה חלקיקים של סיליקה לא השפיע על הפונקציה גינקולוגיות או מוטורי בעכברים, המעידים על יכולת מלאה של לביצוע בדיקות אחרות. אינטראקציה חברתית פעילות הושפע לאחר חשיפה 1 חודש חלקיקי סיליקה (איור 2C). בהתחשב חרדה או דיכאון גם הקטנת חברותיות, ניתחנו את הנתונים של הבדיקה בשדה פתוח, מוגבה, בנוסף, בדיקה מבוך (איור דו-ממדיE) של המבחן כפייה השחיה (איור 2F), אשר אינן מצביעות על כל תחלואה נלווית של חרדה או דיכאון בנקודת הזמן 1 חודש. חשיפה שני חודשי חלקיקי סיליקה הביא חרדה לפי התוצאות מוגבר בתוספת מבחן מבוך (2E איור). מגמה דומה הוצג משך האזור המרכזי במבחן בשדה פתוח (איור דו-ממדי). פגיעה קוגניטיבית זוהה גם מוריס המים מבוך מבחן, מבחן ההכרה אובייקט הרומן לאחר חשיפה חודשיים (איור 3). יצוין, כי הפרוטוקול היה שונה במקצת במשפטים שני של הבדיקה מבוך המים מוריס. מנורת נוספים נוספה במשפט השני, אז כל העכברים תמיד נשארה תחת המנורה כדי להתחמם. לפיכך, אין nonperformer הוצגה במשפט השני, בעוד שתיים מתוך שמונה עכברים הפך nonperformers במבחן בדיקה במשפט הראשון.

אנו להתאים את הפרוטוקול כך רוב הבדיקות בסוללה יכול להיבדק שוב ושוב. המפתח הוא לשמור על המוטיבציה של הבדיקות. בדיקות כמו אינטראקציה חברתית מבחן, מבחן ההכרה אובייקט הרומן גבוהות בתוספת מבחן מבוך המונעים על ידי חידוש (קרי, עוזר לנוער הרומן אובייקטים הרומן, סביבה הרומן, בהתאמה). על ידי שמירה על החידוש בפרוטוקול, העכברים C57BL/6N למבוגרים צעירים הראו ביצועים עקביים כאשר נבדק שוב אחרי חודש. עפ י הנתונים, כאשר הציג שני שונים העוזרים בניסויים שני, עכברים בעקביות הראה העדפה גדולה יותר מאשר מבחן כוחנו לעוזרת יותר לתא ריק באינטראקציה חברתית (איור 4A). במבחן זיהוי האובייקט הרומן, העכברים נורמלי בעקביות העדיפו את האובייקט הרומן והאובייקט הישן (איור 4B). עם זאת, לנוכח גבוהות פלוס מבחן מבוך, כאשר נבדק שוב באותה סביבה לאחר 1 החודש, חקר קפץ לביקור (איור 4C) חצי¹⁰. באופן תיאורטי, עכברים C57BL/6 מבוגרים צעירים יכולים להיבדק שוב ושוב המבחנים האלה כל עוד התנאי ניסיוני, לרבות החידוש, את המצב של העכברים, נשאר זהה. לנו יש לחזור על בדיקות אלו, כל חודש עד שלוש פעמים במעבדה שלנו. ראוי לציין, הבדיקה מבוך המים מוריס אין אפשרות לבדוק שוב ושוב באותה קבוצה של עכברים C57BL/6N למבוגרים צעירים כמו החוויה מפריע באופן משמעותי הביצועים כאשר נבדק שוב ושוב. עפ י הנתונים, העכברים עדיין זכר פלטפורמת גם לאחר חודש, מציג הנכון וזיכרון המרחבי לטווח ארוך. בעת שינוי המיקום של הפלטפורמה, העכברים המנוסים למדו מהר יותר מאשר עכברים תמים, כפי שהם למדו את כללי ואסטרטגיה -חיפוש מן הכשרה מוקדמת (איור 4D).

איור 1: שרטוטים. סידור (א') ההתנהגות מבחן הסוללה ואת החלקות סכימטי (B) הבדיקה אינטראקציה חברתית, (ג) גבוהות בתוספת מבוך, בדיקה של (D) במבחן זיהוי האובייקט הרומן. קיצורים: R = מבחן מאיץ rotarod; של = מבחן בשדה פתוח; EPM = גבוה ובנוסף מבוך מבחן; ולא = מבחן זיהוי האובייקט הרומן; SI = מבחן אינטראקציה חברתית; MWM = מוריס המים מבחן מבוך; FST = מבחן השחייה בכפייה. נקודת המוצא של העכבר במבחן מוצג על ידי העכבר בערכת. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 2: שינויים מנוע, רוח בעכברים נחשפים חלקיקי סיליקה 1 חודש או חודשיים, שזיהה את הסוללה בדיקה התנהגותית- היו עכברים נבדק ב (A ו- D) בשטח פתוח המבחן, מבחן (ב') rotarod, (C) הבדיקה אינטראקציה חברתית, (E) גבוהות פלוס, מבוך בדיקה של (F) כפייה השחיה מבחן כללה את הסוללות. N = 8, 12, או 20, כלומר כל קבוצה הייתה 8, 12, או 20 עכברים, בהתאמה, כפי שמתואר באיור בכל. N = 17-20 אומר בכל קבוצה היו עכברים 20, למעט קבוצת ביקורת-1 החודש, שכללה 17 עכברים. לוחות A, Dו- E, הנתונים היו מנורמל קודם כדי לשלוט בכל נקודה בזמן ו, אז, נותחו עם דו-זנבית של סטודנט t-מבחן. הנתונים בלוח ב' נותחו על ידי אמצעים חוזרות ANOVA דו-כיווני. הנתונים לוחות C ו- F נותחו עם דו-זנבית של סטודנט t-מבחן. כל הנתונים מוצג כבלתי מתכוון ±S.E.M. *, * * * מתכוון p < 0.05 0.0001, בהתאמה. נתונים אלה פורסמו בעבר על ידי לך et al.¹⁸. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 3: שינויים הכרה לאחר נחשפים חלקיקי סיליקה 1 חודש או חודשיים. שינויים הכרה של העכברים לאחר נחשפים חלקיקי סיליקה (A) עבור חודש או מבחן (E) 2 חודשים, שזיהה את הרומן וראייה. שינויים בקוגניציה של העכברים לאחר נחשפים חלקיקי סיליקה עבור (B - D) 1 חודש או (F - H) 2 חודשים, שזיהה את המבחן מבוך המים מוריס. עכברים נבדקו שוב ושוב במבחן זיהוי האובייקט הרומן. אצווה שונים של עכברים נבחנה במבחן מבוך המים מוריס בנקודות זמן שונות. N = 6, 8, 12 או 20, כלומר כל קבוצה הייתה 6, 8, 12 או עכברים 20, בהתאמה, כפי שמתואר באיור בכל. פאנלים A, C, D, E, Gו- H, נותחו נתונים עם דו-זנבית של סטודנט t-מבחן. הנתונים לוחות B ו F נותחו על ידי אמצעים חוזרות ANOVA דו-כיווני. כל הנתונים מוצגים אומר ±S.E.M. * אומר p < 0.05. נתונים אלה פורסמו בעבר על ידי לך et al.¹⁸. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 4: נציג נתונים בבדיקות. נציג נתונים בבדיקות, כולל מבחן (א') האינטראקציה החברתית, מבחן (B) ההכרה אובייקט הרומן (C) גבוהות וגם מבחן מבוך, נבדק בעכברים תמימה (משפט 1) ובדק שוב ושוב ב מאותה אצווה של עכברים (משפט 2) . בדיקת נתונים (D) נציג של מבוך המים מוריס כאשר נבדק שוב ושוב. איור זה השתנה מ לך et al.¹⁸. כל הנתונים המוצגים אומר ±S.E.M. וניתח עם הסטודנט אינטראקצית t-מבחן. P < 0.001, בהשוואה ל 1 במשפט. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

ניתוח התנהגותי של עכברים חיוני למחקר הקשורים ניוון מוחיים. בעוד תפקוד קוגניטיבי הוא לעיתים קרובות רגישים ביותר בתחום התנהגות מושפעת מחלות ניווניות, תפקוד לקוי של מצב רוח, כגון דיכאון, חרדה, לעתים קרובות comorbid. יתר על כן, המוטורית לעתים קרובות משפיעה על הפרשנות של תוצאות בדיקות, כגון במבחן זיהוי האובייקט הרומן, גבוהות בתוספת מבחן מבוך הבדיקה אינטראקציה חברתית. בהתבסס על המחשבות האלה, סוללה מבחן התנהגותי מקיף נדרש הערכה הכוללת ומדויק של ההתנהגויות.

השלב הראשון הוא בחירת הבדיקות הנכונות. כללנו בדיקות היטב המקובלת, קלאסית, כלומר הבדיקה בשדה פתוח, המבחן rotarod עבור המוטורית, גבוהות של פלוס מבוך בדיקה נגד חרדה, המבחן כפייה השחיה עבור דיכאון, המבחן אינטראקציה חברתית עבור גדושה של מבוך המים מוריס מבחן וההכרה אובייקטים הרומן לבדוק קוגניציה. ישנן שלוש בדיקות קלאסית עבור חרדה, כלומר הבדיקה בשדה פתוח, גבוהות בתוספת בדיקה של הבדיקה תיבת כהה/אור. בדיקות אלה כל לנצל את הסכסוך בין הסקרנות הטבוע על הסביבה הרומן את סלידתם לשדה פתוח, מוגבה או מואר במאור פנים. לפיכך, עכברים הם לא נעשים על ידי גירויים רעילים, כגון הלם חשמלי, ריח טורף, וכן הלאה. עם זאת, שופע מחקרים גילו כי בדיקות אלה יש אמינות intertest המסכן, אפילו בתוך מעבדה יחידה²¹. אנו נעשה שימוש במבחן בשדה פתוח, גבוהות וגם מבחן מבוך כדי לנתח את החרדה בעכברים בזמן הקצר ביותר האפשרי. הבדיקה בשדה פתוח בוחן את התנהגות חרדה בנוסף פונקציה גינקולוגיות, ויש גם habituation כדי להפוך את האובייקט הרומן מבחן ההכרה מבחן אינטראקציה חברתית. בחרנו פלוס מוגברות מבוך הבדיקה כי זה פרדיגמה ומבוססת. יש לו תוקף פנים מעולה (דמיון הפנומנולוגי בין ההתנהגות בעכברים הסימפטומים אצל חולים), לבנות תוקפו (למידת שאליו המבחן משקף את הנחות היסוד התיאורטי), ואת תוקף ניבוי (הדיוק תוצאות של בדיקת פרוייקטי אותם לבני אדם)¹⁰. אם החרדה היתה העדיפות, חוקרים שתשקול כולל תיבת כהה/אור לבדוק באופן מקיף ניתוח ההתנהגות המבחנים האלה עם פרמטרים נוספים, כגון גידול תדר, מתיחה-להשתתף התנהגות, עשיית צרכים²¹. שנית, תוצאות של בדיקות אלה יכול להיות בקלות לפרש כי המניעים של הבדיקות ברורות, אשר הם או את סקרנותך נוביטם או מים, כדי לבצע משימה פשוטה במצב לשליטה. בניגוד הרעבה, pretraining, דבר העלול לגרום רמות שונות של מוטיבציה בעכברים, אלו סוגים של מוטיבציה הם חזקים מספיק עבור רוב C57 העכבר כדי לבצע את המשימה. שלישית, בדיקות אלה יש תאימות טובה עם זה, כי המוטיבציה היא לא מלחיצה מדי כדי לגרום ללחץ לטווח ארוך או אפילו לצמיתות, כגון הלם חשמלי או מניעת מזון/מים עלול לגרום. בדיקות ייאוש, כולל הבדיקה כפייה השחיה הבדיקה ההשעיה הזנב, לנצל לעקרון העכבר מוותר נאבק כשהוא לכוד בתוך סביבה נואש. על ידי מדידת הזמן"יאוש", הבדיקות תגיד כמה מדוכא העכבר. C57BL/6N עכברים מראים בדרך כלל 180 s של פקקת מכלל 300 s אלה בדיקות¹¹^,²². בחרנו השחייה כפויה לבדוק על הזנב ההשעיה הבדיקה כי זה יחסית פחות מלחיץ כאשר העכבר בעל ניסיון במים מבוך הכשרה. בדרך זו, הם מותאמים למים ואת יודעת כיצד למנוע היפותרמיה לאחר להירטב. לעומת זאת, הבחנו בסביבות 2 גר' במשקל הגוף בלילה שאחרי הבדיקה ההשעיה הזנב, המציין מתח רב. עם זאת, בדיקות חוזרות ונשנות של כפייה השחיה הבדיקה צריכה להיעשות בזהירות, העכברים צריך לשחזר למשך זמן ארוך יותר מאשר 24 שעות לפני כל הניסויים/קורבנות נוספים. לחלופין, מדענים עשויים לשקול כולל מבחן העדפה סוכרוז, פרדיגמה בשימוש נרחב מפגינות כמו דיכאון anhedonia, בסוללה. עם זאת, הפרוטוקול של בדיקה זו דורשת ימי habituation למגורים נפרדים²³, אשר עשוי להיות גירוי משפיע על התוצאה של בדיקות אחרות. לבסוף, הבדיקות יש כאן תפוקה סבירה. כל הבדיקות יכול לסיים בתוך 10 דקות/עכבר. כאשר להגדיל את כמות ציוד, כגון הזירה בשדה פתוח, הערוצים במבחן rotarod, הטנקים במבחן כפייה השחיה, ואת המסלולים במבחן ההשעיה הזנב, גם ניתן להגדיל את התפוקה. למרות הבדיקה מבוך המים מוריס מקשה על מבחן עכברים מרובים בו זמנית, בכל ניסוי לוקח רק s ~ 60-75.

החשש הקריטי ביותר תוך יישום של סוללה בדיקה התנהגותית הוא ההפרעה בקרב על הבדיקות ועל הלחץ של הטיפול בתדירות גבוהה. ניתן למזער את ההשפעות השליליות של אחד מנושאים אלה על-ידי נוספים מיטוב הסדר וגם את מרווח הזמן של בדיקות. אמנם זה הגיון סדר הבדיקות התנהגותי שאמור להיות מן המעט הכי מלחיצים העכבר, בדיקות בסוללה זו יכול לשמש להתאקלמות לבדיקות הבאות, לשפר את היציבות של הביצועים. לדוגמה, ביצוע גבוהות וגם מבחן מבוך בעקבות הבדיקה בשדה פתוח מגבירה את חקר היד פתוח¹⁰. חוץ מזה, כאשר העכברים נבדקים לפי סדר, בדיקה בשדה פתוח, מבחן ההכרה אובייקט הרומן של אינטראקציה חברתית מבחן, הם בהדרגה habituate את הסביבה ואת הפעילות, כולל החדר התנהגותית, במגרש הפתוח של האובייקטים. ומכאן העכברים סביר להניח להתבטא neophobia⁷^,²⁴^,²⁵, אשר אומר מציג אינטראקציה נמוכה מהרגיל עם האובייקט/הפרט הרומן, מתמקדים הכל כראוי המשימה. סידור זה מקטין את התנודות בנתונים של בדיקות המונעים על ידי סקרנותך. הבדיקה מבוך המים מוריס הבדיקה כפייה השחיה יש מוטיבציה חזקה. לפיכך, העכברים צפויים להיות מושפעות החוויה של הבדיקות. תחבורה תכופים וטיפול במהלך ההליך כולו הוא מקור מתח אחר, ובכך הדורשים טיפול בבעלי חיים נאותה habituation מספיק. מומלץ כי המרווח בדיקות בסוללה צריך להיות לפחות 24 שעות, אז העכברים יכול לשחזר מן הלחץ של אלה לחצים²⁶^,²⁷^,²⁸. עם זאת, ישנם מחקרים אחרים נבדק עכברים בבדיקות מרובות לכל יום²⁹.

חשש נוסף על בדיקה חוזרת ונשנית של ההתנהגויות הוא השפעת הניסיון הקודם. הבדיקה בשדה פתוח, הבדיקה rotarod מאיץ ניתן להשתמש שוב ושוב בניתוח המוטורית. בדיקות מונעים החדשנות, כולל את גבוהות בתוספת מבחן מבוך, במבחן זיהוי האובייקט הרומן הבדיקה אינטראקציה חברתית, יכול להיות מנוצל שוב ושוב כאשר המוטיבציה הוא רומן בבכל ניסוי, מה שאומר סביבה ניסיונית חדשה, זוגות של חפצים , או עוזר, בהתאמה. כפי שמוצג הנתונים נציג, עכברים C57BL/6N לא יכול להתאמן שוב ושוב בפרוטוקול הקלאסית של מבחן מבוך המים מוריס כפי הם נזכרו את אסטרטגיית חיפוש מניסיון.

סוללה זו מעריך תחומים מרובים של התנהגות. בדרך זו, ניתן בתוצאות בדיקות כנקודת התייחסות פרשנות הנתונים של אחרים. בנתונים נציג באיור1, כאשר העכברים נחשפים סיליקה nanoparticle במשך חודש הראו ירידה בפעילות אינטראקציה חברתית, זה יכול להיות של פנוטיפ של דיכאון או חרדה או התוצאה של גרעון המוטורית. עם זאת, התוצאות של הבדיקות חרדה ותפקוד מוטורי ציינו כי הירידה אינטראקציה חברתית היה העיקרי, לא עוקבות. בנוסף, סוללה זו מכילה בדיקות שונות לאותה קבוצת מחשבים של התנהגויות, עם רגישות שונים ושימוש. מגמה/תוצאות עקביות המבחנים האלה להגביר את המהימנות של הסוללה. עם זאת, הסדר זה לוקח זמן נוסף במהלך כל התהליך. הניסוי לטווח קצר זה לוקח פחות מ 1 חודש להשתמש גרסה מפושטת של סוללה זו.

סוללה בדיקה התנהגותית זו נועדה מסך של פנוטיפ התנהגותית המוצגות בשלבים שונים לאחר החשיפה לגורם הסיכון גנטית או סביבתית של הקשורים ניוון מוחיים. לכן, פרוטוקול זה מפורטים רק הקריאות חיוני של כל מבחן. ראוי לציין כי כל בדיקה התנהגותית יכול לספק המון מידע; לפיכך, המשתמש ניתן להרחיב את הפרוטוקול לחקירה נוספת. לדוגמה, פעילות ספונטנית כגון לטפח, גידול, עשיית הצרכים, thigmotaxis בשדה הפתוח חושף רגשנות⁸. אלה תכונות התנהגות מוגבר פלוס מבוך הבדיקה ניתן גם אינדיקטורים של חרדה¹⁰^,²¹. Rotarod מבחן מחקרים למידה מוטורית העכברים מאומנים לאחר תחילת דוגמנות או מחלה/חשיפה גורמי סיכון סביבתיים³⁰. הבדיקה אינטראקציה חברתית תוכלו גם ללמוד זיכרון חברתית על ידי החדרת עוזר הרומן השני לאחר הבדיקה חברותיות⁹. לכן, הרחבה של הסוללה יכול להיות מותאם אישית כדי להתאים עדיפויות שונים של מחקר. עם זאת, סוללה זו נבדק רק בעכברים צעירים למבוגרים C57BL/6N בשל מגבלות זמן. רמת הביצועים הבסיסית של זנים או עכברים C57BL/6 בגילאי אחרות עשויות להיות שונות. יתר על כן, מודלים העכברים הטרנסגניים ניווניות ייתכן שיישומים חסרונות התנהגותיים כגון היפו - או היפראקטיביות. לפיכך, הם לא בהכרח מתאים בדיקות עם מוטיבציה נמוכה, כגון במבחן זיהוי האובייקט הרומן. לכן, נוסף אופטימיזציה צריך להידרש להערכת התנהגות של עכברים אלה.

לסיכום, סוללה זו מאפשרת ניתוח התנהגותי משכנע ומקיף של הקשורים ניוון מוחיים המתח העכבר C57. הוא מתאים ביותר ללימודי הקשורים ניוון מוחיים הקשורים האורך של הרעילות של גורמי סיכון פוטנציאליים/עצבי או פיתוח תרופות, אשר לעיתים קרובות כולל ניהול לטווח ארוך ובדיקות חוזרות ונשנות.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

המחברים אין לחשוף.

Acknowledgments

המחברים תודה ד ר קורה SW לאי מתוך הספר למדעי ביו, אוניברסיטת הונג קונג, שהשאלת את גבוהות בתוספת מבוך בדיקה של החוג להרדמה מ אוניברסיטת הונג קונג שהשאלת את המנגנון בדיקת rotarod.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
chambers in social interaction test	home made		(8 cm (L) x 6 cm (W) x 12 cm (H)), transparant with holes, plastic
cylindrical tanks used in forced swimming test	home made		30 cm height, 20 cm diameters, glass
elevated plus maze	home made		open arms (30 cm x 5 cm x 0.5 cm) ,closed arms (30 cm x 5 cm x 16 cm), center platform (5 cm x 5 cm x 0.5 cm), 40 cm tall. Plastic, nontransparant
IITC Roto-Rod Apparatus	IITC life science Inc.	755, series 8
open field arena	home made		60 cm (L) x 60 cm (W) x 40 cm (H), plastic, nontransparant
water maze	home made		120 cm in diameter, 60 cm deep, steel

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

Baquero, M., Martin, N. Depressive symptoms in neurodegenerative diseases. World Journal of Clinical Cases. 3 (8), 682-693 (2015).
Brown, R. C., Lockwood, A. H., Sonawane, B. R. Neurodegenerative Diseases: An Overview of Environmental Risk Factors. Environmental Health Perspectives. 113 (9), 1250-1256 (2005).
Bossy-Wetzel, E., Schwarzenbacher, R., Lipton, S. A. Molecular pathways to neurodegeneration. Nature Medicine. 10, S2-S9 (2004).
Cummings, J. L., Diaz, C., Levy, M., Binetti, G., Litvan, I. I. Neuropsychiatric Syndromes in Neurodegenerative Disease: Frequency and Signficance. Seminars in Clinical Neuropsychiatry. 1 (4), 241-247 (1996).
Levenson, R. W., Sturm, V. E., Haase, C. M. Emotional and behavioral symptoms in neurodegenerative disease: a model for studying the neural bases of psychopathology. Annual Review of Clinical Psychology. 10, 581-606 (2014).
Kehagia, A. A., Barker, R. A., Robbins, T. W. Neuropsychological and clinical heterogeneity of cognitive impairment and dementia in patients with Parkinson's disease. Lancet Neurology. 9 (12), 1200-1213 (2010).
Gould, T. D., Dao, D. T., Kovacsics, C. E. The Open Field Test. Mood and Anxiety Related Phenotypes in Mice. Gould, T. D. , Humana Press. Totowa, NJ. 1-20 (2009).
Seibenhener, M. L., Wooten, M. C. Use of the Open Field Maze to measure locomotor and anxiety-like behavior in mice. Journal of Visualized Experiments. (96), e52434 (2015).
Kaidanovich-Beilin, O., Lipina, T., Vukobradovic, I., Roder, J., Woodgett, J. R. Assessment of social interaction behaviors. Journal of Visualized Experiments. (48), e2473 (2011).
Walf, A. A., Frye, C. A. The use of the elevated plus maze as an assay of anxiety-related behavior in rodents. Nature Protocols. 2 (2), 322-328 (2007).
Can, A., et al. The mouse forced swim test. Journal of Visualized Experiments. (59), e3638 (2012).
Veerappan, C. S., Sleiman, S., Coppola, G. Epigenetics of Alzheimer's disease and frontotemporal dementia. Neurotherapeutics. 10 (4), 709-721 (2013).
Kirova, A. M., Bays, R. B., Lagalwar, S. Working memory and executive function decline across normal aging, mild cognitive impairment, and Alzheimer's disease. Biomed Research International. 2015, 748212 (2015).
Draganski, B., Lutti, A., Kherif, F. Impact of brain aging and neurodegeneration on cognition: evidence from MRI. Current Opinion in Neurology. 26 (6), 640-645 (2013).
Schliebs, R., Arendt, T. The cholinergic system in aging and neuronal degeneration. Behavioural Brain Research. 221 (2), 555-563 (2011).
Vorhees, C. V., Williams, M. T. Morris water maze: procedures for assessing spatial and related forms of learning and memory. Nature Protocols. 1 (2), 848-858 (2006).
Leger, M., et al. Object recognition test in mice. Nature Protocols. 8 (12), 2531-2537 (2013).
You, R., et al. Silica nanoparticles induce neurodegeneration-like changes in behavior, neuropathology, and affect synapse through MAPK activation. Particle and Fibre Toxicology. 15 (1), 28 (2018).
Housing Deacon, R. M. husbandry and handling of rodents for behavioral experiments. Nature Protocols. 1 (2), 936-946 (2006).
Poon, D. C., et al. PKR deficiency alters E. coli-induced sickness behaviors but does not exacerbate neuroimmune responses or bacterial load. Journal of Neuroinflammation. 12, 212 (2015).
O'Leary, T. P., Gunn, R. K., Brown, R. E. What are we measuring when we test strain differences in anxiety in mice? Behavior Genetics. 43 (1), 34-50 (2013).
Can, A., et al. The tail suspension test. Journal of Visualized Experiments. (59), e3769 (2012).
Angoa-Perez, M., et al. Mice genetically depleted of brain serotonin do not display a depression-like behavioral phenotype. ACS Chemical Neuroscience. 5 (10), 908-919 (2014).
Blazquez, G., Canete, T., Tobena, A., Gimenez-Llort, L., Fernandez-Teruel, A. Cognitive and emotional profiles of aged Alzheimer's disease (3xTgAD) mice: effects of environmental enrichment and sexual dimorphism. Behavioural Brain Research. 268, 185-201 (2014).
Gimenez-Llort, L., et al. Modeling behavioral and neuronal symptoms of Alzheimer's disease in mice: a role for intraneuronal amyloid. Neuroscience & Biobehavioral Reviews. 31 (1), 125-147 (2007).
Lad, H. V., et al. Behavioural battery testing: evaluation and behavioural outcomes in 8 inbred mouse strains. Physiology & Behavior. 99 (3), 301-316 (2010).
Powell, T. R., Fernandes, C., Schalkwyk, L. C. Depression-Related Behavioral Tests. Current Protocols in Mouse Biology. 2 (2), 119-127 (2012).
Paylor, R., Spencer, C. M., Yuva-Paylor, L. A., Pieke-Dahl, S. The use of behavioral test batteries, II: effect of test interval. Physiology & Behavior. 87 (1), 95-102 (2006).
Lee, K. M., Coehlo, M., McGregor, H. A., Waltermire, R. S., Szumlinski, K. K. Binge alcohol drinking elicits persistent negative affect in mice. Behavioural Brain Research. 291, 385-398 (2015).
Shiotsuki, H., et al. A rotarod test for evaluation of motor skill learning. Journal of Neuroscience Methods. 189 (2), 180-185 (2010).

Behavior

סוללה בדיקה התנהגותית להערכה חוזרת ונשנית של מיומנויות מוטוריות, מצב רוח, קוגניציה בעכברים

Summary

Abstract

Introduction

Protocol

Representative Results

Discussion

Disclosures

Acknowledgments

Materials

References

Tags

Cite this Article

Summary

Abstract

Introduction

Protocol

Representative Results

Discussion

Disclosures

Acknowledgments

Materials

References

Tags

Cite this Article

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.