Celle-baserede assay er en meget udbredt metode til at påvise serum anti-aquaporin-4 immunoglobulin G. Denne metode kan anvendes til klinisk diagnose og videnskabelige undersøgelser af neuromyelitis optisk spektrum forstyrrelser.
Anti-aquaporin-4 (AQP4) immunoglobulin G (IgG) er den kerne diagnostiske biomarkør for neuromyelitis optica spektrum forstyrrelser (NMOSD). Celle-baserede analysen (CBA) er en meget anvendt metode til at opdage anti-AQP4 IgG i humant serum med høj følsomhed og specificitet. Kort, serum anti-AQP4 IgG er fanget af AQP4-transfekteret celle, der er fastsat på biochip derefter fundet af en fluorescein-mærket sekundær antistof. Fluorescens mikroskopi er udnyttet til at visualisere fluorescens, og intensiteten af Fluorescens er evalueret af mindst to erfarne klinikere. En endelig diagnose af NMOSD kan gøres baseret på en kombination af anti-AQP4 IgG påvisning resultater, kliniske manifestationer og neuroradiological resultater. Ifølge tidligere undersøgelser, CBA er mere følsom og specifik end andre anti-AQP4 IgG påvisningsmetoder, og det kan anvendes til både klinisk diagnose og undersøgelser af NMOSD. Metoden har begrænsninger; for eksempel, mangler en international skala til at evaluere serum anti-AQP4 IgG titers stadig. Her, er en detaljeret protokol for humant serum anti-AQP4 IgG påvisning ved hjælp af CBA beskrevet.
Serum AQP4 IgG er en core diagnostiske biomarkør for neuromyelitis optica spektrum forstyrrelser (NMOSD)1. Celle-baserede analysen (CBA) er en udbredt anti-AQP4 IgG påvisningsmetode med høj følsomhed og specificitet. Her, er en detaljeret protokol for CBA indført.
AQP4, en vand kanal protein, har seks membran-spænder enheder og to spiralformet domæner omkring en vandig pore2. Anti-AQP4 IgG er involveret i patogenesen af NMOSD gennem binding til sit mål AQP4, som er hovedsageligt placeret på endfeet af astrocytter3. Det har vist sig at anti-AQP4 IgG er positiv i cirka to tredjedele af NMOSD patienter4. I de seneste internationale diagnostiske kriterier for NMOSD, er anti-AQP4 IgG betragtes som et grundlæggende diagnostisk biomarkør5. I denne forbindelse, det er afgørende at etablere en pålidelig protokol for at opdage humant serum anti-AQP4 IgG og lette kliniske diagnose af NMOSD.
I øjeblikket er forskellige anti-AQP4 IgG påvisningsmetoderne tilgængelige, såsom CBA, væv-baserede assay, enzym-forbundet immunosorbent assay og flow flowcytometri6,7. CBA beskæftiger EU90 celler, som er transfekteret med menneskelige AQP4, til at fange anti-AQP4 IgG. Erobrede anti-AQP4 IgG er opdaget af fluorescerende sekundære antistoffer og efterfølgende visualiseret ved mikroskopi. Akkumulere beviser har vist, at CBA er mere følsom og specifik end andre anti-AQP4 IgG påvisning metoder6,7. Ifølge en meta-analyse, følsomhed og specificitet af CBA viste sig at være 76% og 99%, hvilket var højere end væv-baserede og enzym-forbundet immunosorbent undersøgelser vedrørende6. Derudover blev en multicenter sammenligning af diagnostiske assays af anti-AQP4 IgG gennemført7. Ialt 193 undersøgelse emner fra 15 europæiske diagnostiske Centre var tilmeldt7. Fire forskellige metoder blev udnyttet til at opdage serum anti-AQP4 IgG7. Det blev påvist, at CBA var mere følsom og specifik end andre metoder7. Som AQP4 er udtrykt som to store isoformer (AQP4-M1 og AQP4-M23), transfekteret anti-AQP4 IgG fange celle med enten AQP4-M1 eller AQP4-M23. Hvilken type af fange celle er imidlertid bedre resterne kontroversielle. En undersøgelse har støttet AQP4-M1 baseret CBA8, mens andre har anført, at AQP4-M23 baseret CBA er bedre7,9,10. Dog kan AQP4-M23-baserede CBA give falsk positive resultater på grund af uspecifik IgG bindende8. Jarius al.. 11 rapporterede, at der var ingen signifikant forskel i anti-AQP4 IgG opdagelse takster mellem AQP4-M1 og AQP4-M23-baseret CBAs.
I sammendrag, serum anti-AQP4 IgG er en core biomarkør for NMOSD. CBA har højere specificitet og sensitivitet end andre anti-AQP4 IgG detektionsmetoder. Det er fortsat kontroversielt, om AQP4-M1 – eller AQP4-M23-baserede CBA er bedre. I denne artikel, er en detaljeret protokol for AQP4-M1-baserede CBA beskrevet, som kan anvendes til klinisk diagnose og undersøgelser af NMOSD.
Vi har beskrevet et bredt tilgængelige metode til påvisning af anti-AQP4 IgG i humant serum. Anti-AQP4 IgG er nært beslægtet med NMOSD, og om oprettelse af en pålidelig anti-AQP4 IgG påvisningsmetode er afgørende for den kliniske diagnose af NMOSD. Første er anti-AQP4 IgG specifikke for NMOSD. Multipel sklerose er også en immun-medieret sygdom i centralnervesystemet og deler mange ligheder med NMOSD12. Anti-AQP4 IgG er imidlertid kun positive i NMOSD13. Andet, anti…
The authors have nothing to disclose.
Forfatterne er taknemmelig for støtten fra tilskud fra National Science Foundation of China (nr. 31600820), The sundhed og familieplanlægning Kommissionen i Jilin provinsen (Nej 2016Q036), og videnskab og teknologi planlægning projekt af Jilin provinsen (nr. 20180520110JH).
Anti-aquaporin-4 IIFT | Euroimmun | FA 1128-2005-50 | Contains biochip slides coated with AQP4-M1 transfected and untransfected EU 90 cells, fluorescein-labelled anti-human IgG, anti-AQP4 antibody as positive control, antibody negative sample, salt for PBS pH 7.2, Tween 20 and embedding medium. |
CellSens Dimension | OLYMPUS | N/A | photograph software |
Gel & clot activator tube | Improve medical | 623040202 | From a local Chinese company |