Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Chemistry
Click here for the English version

Chemistry

راديويمونوثيرابي بريتارجيتيد بناء على تفاعل ديلز-الدر الطلب إلكترون معكوس

Published: January 29, 2019 doi: 10.3791/59041
Automatic Translation
1,2, 1,2,3, 1,2,3,4
1Department of Chemistry, Hunter College of the City University of New York, 2Ph.D. Program in Chemistry, Graduate Center of the City University of New York, 3Department of Radiology, Memorial Sloan Kettering Cancer Center, 4Department of Radiology, Weill Cornell Medical College

Summary

ويصف هذا البروتوكول التوليف وتوصيف ترانس-سيكلوكتيني (TCO)-تعديل الأجسام المضادة وراديوليجاند لو المسمى تيترازيني (Tz) 177راديويمونوثيرابي بريتارجيتيد (مدير). وبالإضافة إلى ذلك، أنها تفاصيل استخدام هذه الثوابت اثنين للدراسات الطولية العلاج في نموذج موريني سرطان القولون والمستقيم و في فيفو بيوديستريبوتيون.

Abstract

في حين راديويمونوثيرابي (RIT) نهجاً واعداً لعلاج السرطان، يمكن أن يؤدي نصف فترة طويلة الحرائك الدوائية للأجسام المضادة راديولابيليد جرعات إشعاع عالية للأنسجة السليمة. ربما ليس من المستغرب أن العديد من الاستراتيجيات المختلفة قد وضعت للالتفاف حول هذا القيد المثيرة للقلق. واحد الأكثر تبشيرا بالنجاح لهذه النهج راديويمونوثيرابي بريتارجيتيد (مدير). مدير يقوم على فصل النويدات المشعة من الغلوبولين المناعي والحقن منهم على حدة، وثم السماح لهم الجمع في فيفو في النسيج المستهدف. وهذا النهج يسخر خصائص الأجسام المضادة لاستهداف الورم استثنائية بينما يتجنب سلبياتها الحرائك الدوائية، مما خفض جرعات الإشعاع على الأنسجة غير المستهدفة وتيسير استخدام النويدات المشعة مع إنصاف التي تعتبر قصيرة جداً للاستخدام في راديويمونوكونجوجاتيس التقليدية. على مدى السنوات الخمس الماضية، تطورت مختبرنا وآخرون نهج في فيفو بريتارجيتينج استناداً إلى تفاعل ديلز-الدر (إيدا) الطلب إلكترون معكوس بين ترانس-سيكلوكتيني (TCO) وتيترازيني (Tz). تم بنجاح تطبيق هذه الاستراتيجية إلى بريتارجيتيد التصوير المقطعي بانبعاث البوزيترون (PET) وانبعاث فوتون واحد المقطعي (SPECT) التصوير مع مجموعة متنوعة من نظم جسم مضاد-مستضد. في زوج من المنشورات التي صدرت مؤخرا، لقد أظهرنا كفاءة مدير المستندة إلى إيدا في نماذج مورين غدية الأقنية البنكرياس وسرطان القولون والمستقيم. في هذا البروتوكول، يصف لنا البروتوكولات لمدير استخدام راديوليجاند تيترازيني Lu-DOTA-المسمى 177(لو-DOTA-شماعة [177لو]7-Tz) ومتغير تعديل تكلفة الامتلاك الكلية لسرطان القولون والمستقيم استهداف جسم huA33 (huA33-TCO). وبشكل أكثر تحديداً، ونحن سوف تصف بناء huA33-تكلفة الامتلاك الكلية، والتوليف و لو-DOTA-شماعة راديولابيلينج من [177لو]7-Tz، والأداء في فيفو بيوديستريبوشن والدراسات الطولية العلاج في نماذج مورين سرطان القولون والمستقيم.

Introduction

راديويمونوثيرابي (RIT) – استخدام الأجسام المضادة لتسليم النويدات المشعة العلاجية للأورام – منذ فترة طويلة نهجاً تحريضية لعلاج السرطان1،2. والواقع أن هذا الوعد قد أكد موافقة اثنين من راديويمونوكونجوجاتيس لعلاج الأورام اللمفاوية عدم هودجكين الولايات المتحدة إدارة الأغذية والعقاقير في: 90إيبريتوموماب Y تيوكسيتان و 131-توسيتوموماب3 , 4-بعد حتى من بداياته، تعرقلت آفاق السريرية للفرقة مضاعفات حرجة: معدلات الجرعة العالية الإشعاع على الأنسجة السليمة5،6. وبصفة عامة، يتم المسمى راديويمونوكونجوجاتيس للفرقة مع النويدات المشعة المعمرة (مثلاً، 131أنا [t½ = 8.0 يوما] و 90ص [t½ = أيام 2.7]) مع حياة نصف المادية التي تتوافق تماما مع الحرائك الدوائية طويلة إنصاف المناعية. هذا أمر أساسي، كما يضمن هذا النشاط الإشعاعي كافية لا يزال حالما وصلت الجسم بيوديستريبوشن الأمثل لها بعد عدة أيام من التداول. ومع ذلك، ينتج هذا المزيج من أوقات الإقامة الطويلة في الدم ونصف حياة طويلة المادية حتما تشعيع الأنسجة السليمة، وبالتالي الحد من نسب العلاجية ويحد من فعالية العلاج7. وقد تم استكشاف استراتيجيات عدة للتحايل على هذه المشكلة، بما في ذلك استخدام أجزاء جسم مبتورة مثل القوات المسلحة البوروندية، القوات المسلحة البوروندية '، F(ab')2، مينيبوديس، ونانوبوديس8،،من910. واحد من الواعدة ورائعة، ولكن نهج بديلة معقدة لا يمكن إنكاره في فيفو بريتارجيتينج11.

وهو نهج للتصوير النووي والعلاج الذي يسعى إلى الاستفادة من تقارب رائعة والانتقائية للأجسام المضادة بينما يتجنب بهم عيوب الحرائك الدوائية11،12،13 في فيفو بريتارجيتينج. وتحقيقا لهذه الغاية، هي فككت جسم راديولابيليد المستخدمة في راديويمونوثيرابي التقليدية إلى عنصرين هما: راديوليجاند جزيء صغير وإيمونوكونجوجاتي التي يمكن أن تربط كل مستضد ورم وراديوليجاند المشار إليها أعلاه. إيمونوكونجوجاتي هو حقن أولاً ونظرا 'السبق'، غالباً ما عدة أيام, خلالها يتراكم في الأنسجة المستهدفة ومسح من الدم. وفي وقت لاحق، راديوليجاند جزيء صغير يدار وأما يجمع بين إيمونوكونجوجاتي في الورم أو مسح سريعة من الجسم. في جوهرها، في فيفو بريتارجيتينج يعتمد على أداء الكيمياء الإشعاعية داخل الجسم نفسه. بالحد من تداول النشاط الإشعاعي، هذا النهج في نفس الوقت يقلل من جرعات الإشعاع على الأنسجة السليمة ويسهل استخدام النويدات المشعة (مثلاً، 68Ga، t½ = 68 دقيقة211؛ ك، t½ = ح 7.2) مع إنصاف التي تعتبر عادة غير متوافقة مع ناقلات القائم على الأجسام المضادة.

ابتداء من أواخر الثمانينات، حفنة من نهج مختلفة في فيفو بريتارجيتينج وقد وضعت، بما في ذلك استراتيجيات تقوم على أجسام بيسبيسيفيك، التفاعل بين ستريبتافيدين والبيوتين، والتهجين للتكميلية النوكليوتيد14،،من1516،،من1718. بعد كل قد عقدت مرة أخرى بدرجات متفاوتة من تعقيدات، وأشهرها الاستمناع قوية من أجسام معدلة ستريبتافيدين19،20. على مدى السنوات الخمس الماضية، تطورت مجموعتنا وآخرون نهج في فيفو بريتارجيتينج استناداً بيورثوجونال والسريع إلكترون معكوس الطلب ديلز-الدر ربط بين ترانس-سيكلوكتيني (TCO) وتيترازيني (Tz) 2122،،،من2324. وأنجح هذه الاستراتيجيات قد استخدمت جسم تعديل تكلفة الامتلاك الكلية و Tz الحاملة راديوليجاند، كتكلفة الامتلاك الكلية عادة أكثر استقرارا في فيفو من به25،Tz شريك (الشكل 1)26. كما هو الحال في غيرها من المنهجيات بريتارجيتينج، إيمونوكونجوجاتي ماب-تكو تدار أولاً وإعطاء الوقت مسح من التداول، وتتراكم في أنسجة الورم. وفي وقت لاحق، راديوليجاند Tz جزيء صغير يتم حقن، بعدها من النقرات مع إيمونوكونجوجاتي داخل الأنسجة المستهدفة أو مسح سريعة من الجسم. هذا و في فيفو بريتارجيتينج استراتيجية ثبت فعالة للغاية للحيوانات الأليفة و SPECT التصوير مع العديد من أنظمة مختلفة جسم/مستضد واستمرار إنتاج الصور ذات التباين العالي وتمكين استخدام النويدات المشعة قصيرة العمر مثل 18 و (t½ = 109 دقيقة) و 64Cu (t1/2 = ح 12.7)21،،من2224. في الآونة الأخيرة، ثبتت فعالية القائم فوق راديويمونوثيرابي بريتارجيتيد (مدير) في نماذج مورين البنكرياس الأقنية غدية (بدك) وسرطان القولون والمستقيم27،28. تحقيقا لهذه الغاية، النويدات المشعة العلاجية 177Lu (بيتاماكس = 498 كيلو إلكترون فولط، t1/2 = 6.7 يوما) كان يعمل بالاقتران مع اثنين من الأجسام المضادة المختلفة: 5B1، الذي يستهدف الكربوهيدرات مستضد 19.9 (CA19.9) وأعربت عن أوبيكويتوسلي في بدك ، وبروتين سكري ترانسميمبراني huA33، الذي يستهدف A33، المعرب عنها في > 95% سرطان القولون والمستقيم. في كلتا الحالتين، هذا النهج إلى 177Lu-مدير أسفرت عن تركيزات عالية النشاط في أنسجة الورم وخلق تأثير تعتمد على الجرعة علاجية، وفي نفس الوقت تقليص النشاط التركيزات في الأنسجة السليمة المقارنة التقليدية راديويمونوكونجوجاتيس المسمى مباشرة.

في هذه المقالة، نحن وصف بروتوكولات لمدير استخدام راديوليجاند تيترازيني Lu-DOTA-المسمى 177(لو-DOTA-شماعة [177لو]7-Tz) والبديل تعديل تكلفة الامتلاك الكلية من جسم huA33 (huA33-TCO). وبشكل أكثر تحديداً، يمكننا وصف بناء huA33-TCO (الشكل 2)، والتوليف و لو-DOTA-شماعة راديولابيلينج من [177لو]7-Tz (رقم 3 و رقم 4)، والأداء في فيفو بيوديستريبوشن والدراسات الطولية العلاج في نماذج مورين لسرطان القولون والمستقيم. وعلاوة على ذلك، في نتائج تمثيلية والمناقشة، تقديم مجموعة بيانات عينة، عنوان الاستراتيجيات الممكنة للاستفادة المثلى من هذا النهج، والنظر في هذه الاستراتيجية في سياق أوسع نطاقا في فيفو بريتارجيتينج ومدير. وأخيراً، من المهم أن نلاحظ أن في حين أننا اخترنا التركيز على بريتارجيتينج باستخدام huA33-تكو و [177لو] لو-DOTA-شماعة7-Tz في هذا البروتوكول، وهذه الاستراتيجية هي وحدات عالية ويمكن تكييفها لتناسب مجموعة واسعة من الأجسام المضادة و النويدات المشعة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

كافة في فيفو التجارب على الحيوانات ووصف في هذا العمل المنجز وفقا للبروتوكولات المعتمدة والمنفذة في إطار المبادئ التوجيهية الأخلاقية مركز ميموريال سلون كيترينج للسرطان ومركز ويل كورنيل الطبي، وكلية هنتر مؤسسات الرعاية الحيوانية واستخدام اللجان (إياكوك).

1. إعداد huA33-تكو

ملاحظة: تم توليف huA33-تكو سبق الإبلاغ عنها29. ومع ذلك، تسهيلا للقارئ، يتم إجراء نسخ متماثل هنا مع تعديلات للظروف المثلى.

  1. في أنبوب ميكروسينتريفوجي 1.7 مل، تعد حلاً ميكروليتر 125 (ه)--سيكلوكت--4-أنيل 2.5-ديوكسو-1-بيروليدينيل كربونات (TCO--دائرة الصحة الوطنية) في الجافة ثنائي ميثيل ميثلامين (DMF) بتركيز 40 مغ/مل (0.15 متر). يمكن أن يكون هذا الحل الكوتيد والمجمدة في-80 درجة مئوية لاستخدامها في التجارب المستقبلية.
  2. في أنبوب ميكروسينتريفوجي مل 1.7 منفصلة، إعداد حل huA33 في 1 مل من المحلول الملحي الفوسفات مخزنة (برنامج تلفزيوني؛ 2.7 مم كلوريد البوتاسيوم وكلوريد الصوديوم 137 مم، وفوسفات البوتاسيوم 11.9 ملم ودرجة الحموضة 7.4) 5 ملغ/مل.
  3. استخدام مختبرين الصغيرة (< 5 ميكروليتر) 0.1 م Na2CO3، ضبط الأس الهيدروجيني الحل جسم من "الخطوة 1، 2" إلى 8، 8-9.0. استخدام ورقة الأس الهيدروجيني أو مقياس الأس الهيدروجيني مع ميكروليكترودي لرصد درجة الحموضة وممارسة الرعاية لا تتجاوز درجة الحموضة 9.0.
  4. إلى جسم الحل هو موضح في "الخطوة 1، 3"، ببطء إضافة وحدة تخزين المطابقة لحكمة المولى 40 من تكلفة الامتلاك الكلية--دائرة الصحة الوطنية بالنسبة إلى كمية الأجسام المضادة. على سبيل المثال، إذا كان 5 ملغ (نمول 30) من huA33 في الحل، إضافة ميكروليتر 9.0 (1.20 μmol) لحل 40 مغ/مل (0.15 م) TCO--دائرة الصحة الوطنية.
    ملاحظة: تكلفة الامتلاك الكلية--دائرة الصحة الوطنية مسعور. عند إضافته إلى حل جسم، إضافة ببطء ومع الإثارة لمنع هطول الأمطار. لا تتعدى 10% DMF من حيث الحجم في الحل النهائي رد فعل.
  5. السماح بأن رد الفعل على احتضان عند 25 درجة مئوية في ثيرموميكسير على ح 1 مع الانفعالات خفيف (500 لفة في الدقيقة).
  6. بعد ح 1، نق إيمونوكونجوجاتي huA33-تكو استخدام عمود desalting استبعاد معبأة مسبقاً حجم المتاح.
    1. حجته استبعاد حجم العمود كما هو موضح من قبل المورد لإزالة أي من المواد الحافظة الموجودة في العمود أثناء التخزين. إجراء نموذجي يشمل غسل العمود 5 x بحجم برنامج تلفزيوني يتوافق مع حجم العمود: 5 × 2.5 مل من برنامج تلفزيوني.
    2. إضافة خليط رد فعل إلى العمود الاستبعاد الحجم مشيراً إلى حجم الخليط رد فعل.
    3. بعد أن دخلت الخليط رد فعل العمود، إضافة مبلغ مناسب لبرنامج تلفزيوني لتحقيق الحجم الإجمالي للحل إضافة إلى العمود يصل إلى 2.5 مل. على سبيل المثال، إذا أدى رد فعل تصريف إجمالي 1.3 مل، إضافة 1.2 مل من برنامج تلفزيوني إضافية للعمود.
    4. جمع المنتج باستخدام 2 مل من برنامج تلفزيوني الوينت.
      ملاحظة: هذه الخطوة سوف تسفر عن huA33-تكو بناء النهائي في 2 مل من برنامج تلفزيوني، درجة الحموضة 7.4.
  7. قياس تركيز huA33-تكلفة الامتلاك الكلية باستخدام جهاز المطياف الضوئي الأشعة فوق البنفسجية بالنسبة رصد الطول الموجي نانومتر 280. معامل الانقراض المولى لمعظم إيجس (280من اليورو) هو م 210,000-1سم-1.
  8. إذا كان المطلوب هو التوصل إلى حل مع وجود تركيز أعلى من إيمونوكونجوجاتي، huA33-تكو الحل باستخدام وحدة الطرد مركزي تصفية مع وقف وزن الجزيئي 50,000 يركز اتباع إرشادات الشركة المصنعة.
    ملاحظة: العديد من الأجسام المضادة قد عرفت إلى تجميع أو تعمد أثناء الاعتقال. عند محاولة هذا الإجراء مع جسم جديد، ينبغي أرجاء الباحثين للأدب أو تجربتها في التعامل مع الأضداد في السؤال.
  9. تخزين إيمونوكونجوجاتي huA33-تكو المكتملة في 4 درجات مئوية في الظلام إذا لزم الأمر فورا. إذا كان استخدام أكثر من 4 أيام في المستقبل، بتخزينها في-80 درجة مئوية في الظلام.
    ملاحظة: هذا نقطة توقف مقبولة في الإجراءات. ينبغي أن يكون إيمونوكونجوجاتي huA33-تكو المكتملة مستقرة للتخزين على الأقل 6 أشهر في-80 درجة مئوية في الظلام.

2-توليف Tz-شماعة7-نهبوك

  1. في أنبوب ميكروسينتريفوجي 1.7 مل، حل 5 ملغ إستر-هيدروكسيسوكسينيميديل تيترازيني ن(Tz--دائرة الصحة الوطنية؛ 12.6 μmol) في 0.15 مل من اللامائى ثنائي ميثيل سلفوكسيد ([دمس]).
  2. في أنبوب ميكروسينتريفوجي مل 1.7 منفصلة، حل 8 ملغ من بنك الصين محمية الأمينية شماعة البوليمر، O-(2-Aminoethyl)-O′-[2-(Boc-amino)ethyl]hexaethylene غليكول (نهبوك-PEG7-NH2؛ 17.1 μmol) في 0.15 مل من اللامائى [دمس].
  3. حل Tz--دائرة الصحة الوطنية، إضافة 3 ميكروليتر (21.3 μmol، مكافئات المولى 1.7) من إثيل (الشاي) وتخلط جيدا.
  4. إضافة حل تيترازيني الوردي على شماعة نهبوك7-NH2 الحل من 2.2 خطوة واحتضان رد فعل الخليط مدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة (RT) مع الانفعالات معتدل.
  5. وبعد 30 دقيقة، يضعف رد فعل 1:1 في ح2س وتنقية رد فعل استخدام المرحلة عكس ج18 عالية الأداء اللوني السائل ([هبلك]) لفصل أي Tz الممتص--دائرة الصحة الوطنية من شماعة Tz7-نهبوك. استخدام المذيبات دون حمض لمنع إزالة حماية مجموعة البنك سابق لأوانه. رصد كلا Tz-شماعة7-نهبوك و Tz--دائرة الصحة الوطنية في موجه 525 نانومتر.
    ملاحظة: مرات الاحتفاظ ومن الواضح أن يعتمد بشدة على المعدات [هبلك] لكل مختبر (المضخات، والأعمدة، والأنابيب، إلخ)، ويجب أن يتم تشغيل عناصر التحكم المناسبة قبل تنقية. ومع ذلك، لتقديم مثال على ذلك، إذا كان تدرج 5:95 ميكن/ح2س (على حد سواء دون أي مضافة) تستخدم لنمط ميكن/ح2س أكثر من 30 دقيقة، بمعدل تدفق من 1 مل/دقيقة، وعمود18تحليلية 4.6 ملم × 250 ملم ج ، أوقات استبقاء Tz--دائرة الصحة الوطنية وشماعة Tz7-نهبوك حوالي 16 دقيقة و 18 دقيقة، على التوالي.
  6. تجميد الوينت [هبلك] التي تم جمعها باستخدام النتروجين السائل والتفاف أنبوب جمع مجمدة الآن في رقائق الألومنيوم. مكان أنبوب جمع المجمدة في ليوفيليزير بين عشية وضحاها إلى إزالة المرحلة المحمول [هبلك]. وسوف يكون المنتج صلبة وردي مشرق مميزة.
    ملاحظة: إذا لم يتوفر النيتروجين السائل، تجميد الوينت [هبلك] التي تم جمعها في الثلج الجاف، أو بين ليلة وضحاها في ثلاجة-80 درجة مئوية.

3-توليف Tz-شماعة7-NH2

  1. الناتج من الخطوة 2.6، شماعة Tz7-نهبوك، إضافة 1.5 مل الميثان (DCM) ونقل هذا الحل إلى قارورة القاع المستديرة صغيرة.
  2. إضافة 0.25 مل حامض trifluoroacetic (تفا) دروبويسي إلى الحل الوردي من 3.1 الخطوة.
  3. السماح برد فعل لاحتضان مدة 30 دقيقة في الرايت مع الانفعالات معتدل.
  4. وبعد 30 دقيقة، تتبخر المذيبات عبر تبخر دوارة. لا تتجاوز درجة حرارة مياه حمام 37 درجة مئوية.
  5. إعادة تشكيل المنتج اللزج الوردي في 0.5 مل من الماء.
  6. تنقية المنتج باستخدام عكس المرحلة ج18 [هبلك] لفصل Tz-شماعة7-NH2 من السلائف محمية ببنك الصين. رصد كلا Tz-شماعة7-نهبوك وشماعة Tz7-NH2 في موجه 525 نانومتر.
    ملاحظة: مرات الاحتفاظ ومن الواضح أن يعتمد بشدة على المعدات [هبلك] لكل مختبر (المضخات، والأعمدة، والأنابيب، إلخ)، ويجب أن يتم تشغيل عناصر التحكم المناسبة قبل تنقية. ومع ذلك، لتقديم مثال على ذلك، إذا كان تدرج 5:95 ميكن/ح2س (كلاهما مع 0.1% تفا) تستخدم لنمط ميكن/ح2س أكثر من 30 دقيقة، بمعدل تدفق من 1 مل/دقيقة، وعمود18تحليلية 4.6 ملم × 250 ملم ج ، أوقات استبقاء Tz-شماعة7-نهبوك وشماعة Tz7-NH2 هي حوالي 18 دقيقة و 13 دقيقة، على التوالي.
  7. تجميد الوينت [هبلك] التي تم جمعها باستخدام النتروجين السائل والتفاف أنبوب جمع مجمدة الآن في رقائق الألومنيوم. مكان أنبوب جمع المجمدة في ليوفيليزير بين عشية وضحاها إلى إزالة المرحلة المحمول [هبلك]. وسوف يكون المنتج صلبة وردي مشرق.
  8. إعادة تشكيل المنتج من 3.7 خطوة، شماعة Tz7-NH2، مع ميكروليتر 150 [دمس]، ونقل إلى أنبوب ميكروسينتريفوجي 1.7 مل.
  9. قياس تركيز Tz-شماعة7-NH2 باستخدام جهاز المطياف الضوئي الأشعة فوق البنفسجية بالنسبة رصد الطول الموجي نانومتر 525. معامل الانقراض المولى لشماعة Tz7-NH2 (اليورو525) هو 535 م-1سم-1.

4-توليف Tz-شماعة7-DOTA

  1. تذوب Tz-شماعة7-NH2 (4.5 ملغ، 6.9 μmol) في 0.15 مل من [دمس] (أو ببساطة المضي في الحل الذي تم إنشاؤه في الخطوة 3، 8).
  2. إضافة 22 مكافئات المولى للشاي (21 ميكروليتر، ملمول 0.15) إلى الحل الذي يحتوي على تيترازيني من "الخطوة 4، 1".
  3. إضافة 10 ملغ (14.2 μmol) من فالعقده-Bn-DOTA كدوامة الحل لحوالي 2 دقيقة أو حتى يذوب تماما بالمواد الصلبة.
  4. السماح برد فعل لاحتضان مدة 30 دقيقة في الرايت مع الانفعالات معتدل.
  5. بعد 30 دقيقة، يضعف رد فعل 1:1 في ح2س وتنقية المنتج باستخدام عكس المرحلة ج18 [هبلك] لإزالة الممتص فDOTA--العقدة--الجبهة الوطنية. P-العقدة-Bn-DOTA يمكن رصدها في موجه 254 نانومتر، بينما Tz-شماعة7-DOTA يرصد أفضل في موجه 525 نانومتر.
    ملاحظة: مرات الاحتفاظ ومن الواضح أن يعتمد بشدة على المعدات [هبلك] لكل مختبر (المضخات، والأعمدة، والأنابيب، إلخ)، ويجب أن يتم تشغيل عناصر التحكم المناسبة قبل تنقية. ومع ذلك، تقديم مثال على ذلك، إذا كان تدرج 5:95 ميكن/ح2س (سواء مع 0.1% تفا) وتستخدم لنمط ميكن/ح2س ما يزيد على 30 دقيقة وعمود18تحليلية 4.6 × 250 ملم ج، Tz-شماعة7-DOTA و p-العقدة-Bn-DOTA يستطيعون الاحتفاظ بأوقات حوالي 15.6 دقيقة ودقيقة 16.1، على التوالي.
  6. تجميد الوينت [هبلك] التي تم جمعها باستخدام النتروجين السائل والتفاف أنبوب جمع مجمدة الآن في رقائق الألومنيوم. مكان أنبوب جمع المجمدة في ليوفيليزير بين عشية وضحاها إلى إزالة المرحلة المحمول [هبلك]. وسوف يكون المنتج على مسحوق وردي مشرق.
  7. إعادة تشكيل المنتج في 0.15 مل من [دمس]، وقياس تركيز استخدام جهاز المطياف الضوئي الأشعة فوق البنفسجية بالنسبة رصد الطول الموجي نانومتر 525. معامل الانقراض المولى لشماعة Tz7-DOTA (525من اليورو) هو 535 م-1سم-1.
  8. تحليل المركب النهائي بالرنين المغناطيسي النووي (الرنين المغناطيسي النووي) والاستبانة الطيف الكتلي (نظام إدارة الموارد البشرية) للتحقق من هذا التوليف كانت ناجحة. انظر الجدول 1 لتحولات كيميائية مصممة تجريبيا والأوزان الجزيئية لجميع المركبات تمت مناقشتها في هذا العمل.
  9. تخزين المنقي Tz-شماعة7-يعطي الحل في الظلام في-80 درجة مئوية.
    ملاحظة: هذا نقطة توقف مقبولة في الإجراءات. السلائف دي أو تي أية-7Tz-شماعة المكتملة مستقرة لمدة سنة واحدة على الأقل في ظل هذه الظروف.

5- 177لو راديولابيلينج من الوتد Tz7-DOTA

تنبيه: هذه الخطوة من البروتوكول يشمل مناولة والتلاعب بالنشاط الإشعاعي. قبل تنفيذ هذه الخطوات – أو أداء أي عمل آخر مع النشاط الإشعاعي – الباحثين ينبغي التشاور مع إدارة سلامة الإشعاع على المؤسسة الرئيسية. اتخاذ جميع الخطوات الممكنة للتقليل من التعرض للإشعاعات المؤينة.

ملاحظة: عند العمل مع كميات صغيرة من راديوميتالس من المستحسن أن تكون كافة المخازن المؤقتة خالية من المعادن النزرة للحيلولة دون التدخل في تنسيق الموقع ملزم.

  1. في أنبوب الطرد مركزي 1.7 مل، إضافة 200 ميكروليتر من المخزن المؤقت خلات الأمونيوم 0.25 م تعديل مع مختبرين من 1 M HCl للأس الهيدروجيني 5.5.
    ملاحظة: إذا كان استخدام مبق أقل من 370 من النشاط للعلامات، ينبغي خفض حجم المخزن المؤقت المستخدم إلى 100 ميليلتر.
  2. إضافة المبلغ المطلوب من [177لو] لوكل3 في حل المخزن المؤقت. المبلغ الذي أضيف سوف تعتمد على عدد المواضيع في التجربة والجرعات الإشعاعية الذي تتم إدارته. من المستحسن أن تضاف 1-2 جرعات إضافية قيمتها من النشاط الإشعاعي كإجراء وقائي لتعويض الخسارة المحتملة للنشاط الإشعاعي خلال خطوات تنقية.
  3. إضافة Tz-شماعة7-يعطي في [دمس] إلى خليط المواد المشعة في "الخطوة 5-2". Tz-شماعة7-DOTA تبلغ اعتماداً على عدد الموضوعات التي يجري اختبارها. يمكن الاطلاع على مزيد من التفاصيل حول هذا الموضوع في خطوة 6.2.2.2.
  4. السماح بأن الحل لاحتضانها في 37 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة.
  5. تحقق من راديولابيلينج اكتمال استخدام الإذاعة الفورية طبقة رقيقة اللوني (راديو-شروع) مع 50 مم يدتا، الأس الهيدروجيني 5.5 كمرحلة المتنقلة. المسمى لو-DOTA-شماعة [177لو]7-Tz ستظل في الأساس – Rو = 0 – الحرة [177لو] في حين لو3 + سيتولى تنسيق يدتا وسوف يسافر مع جبهة المذيب، Rو = 1.0 (الشكل 3B).
  6. وإذا لم يتحقق وصف كمي، إضافة يجند إضافية لتنسيق راديوميتال الحرة. وبدلاً من ذلك، نق المسمى لو-DOTA-شماعة [177لو]7-Tz استخدام خرطوشة18 ج. اتبع إرشادات الشركة المصنعة للاستخدام. ويرد نموذج إجراء أدناه.
    1. رئيس الوزراء الخرطوشة بتمرير ببطء من خلال 5 مل إيثانول من خلال الخرطوشة بحقنه كبيرة. ثم، يمر عبر 5 مل من الاسيتو الانيتريل ومن ثم 5 مل من منزوع (دي) ح2o.
    2. وضع الحل راديوليجاند من 5.3 خطوة في حقنه أصغر وحقن ببطء على خرطوشة18 ج. ثم أغسل الخرطوشة مع 10 مل ح دي2س إزالة أي غير منضم [177لو] لوكل3.
    3. الوت مع 500 ميليلتر من الإيثانول. قم بإزالة أي الإيثانول من المنتج النهائي التي تمر فوق السفينة مع معدل تدفق منخفض الجافة النيتروجين أو الأرجون لمدة 10-15 دقيقة. وفي وقت لاحق، ريسوسبيند راديوليجاند في المياه المالحة في وحدة تخزين المحددة في الخطوة 6.2.2.2.

6-دراسات في فيفو

تنبيه: تتضمن هذه الخطوة من البروتوكول كما هو الحال في الفرع 5، مناولة والتلاعب بالنشاط الإشعاعي. قبل القيام بهذه الخطوات، استشارة الباحثين إدارة سلامة الإشعاع على المؤسسة الرئيسية. اتخاذ جميع الخطوات الممكنة للتقليل من التعرض للإشعاعات المؤينة.

  1. إعداد الحيوانات
    1. في الفئران athymic امرأة عارية، تحت الجلد زرع خلايا سرطان القولون والمستقيم6 SW1222 5 × 10 تعليق في ميكروليتر 150 من خليط 1:1 من خلية الإعلام ومصفوفة (مثلاً., ماتريجيل) وتسمح هذه أن تنمو لتصبح إكسينوجرافت3 100-150 مم (14-18 يوما بعد التلقيح).
    2. فرز الحيوانات لتجربة بيوديستريبوتيون
      1. مرة واحدة الأورام ذات حجم كاف حسبما تقرره قياس قدمه ذات الورنيّة، فرز الحيوانات لضمان كل فوج تقريبا نفس حجم الورم متوسط. يمكن تمييز الحيوانات في كل قفص بعلامات على الذيل بالمداد (فرقة واحدة، وشريطين، إلخ).
    3. الفرز من الحيوانات لدراسة طولية العلاج
      1. مرة واحدة الأورام ذات حجم كاف حسبما تقرره قياس قدمه ذات الورنيّة، إرفاق العلامات الإذن لكل من الحيوانات لضمان تعقب الصحيح طوال التجربة.
        ملاحظة: العلامات الإذن العددية قد تسقط طوال فترة التجربة. كنتيجة لذلك، من المستحسن أن تصاحب هذه العلامات المادية مع الشقوق الإذن بطريقة منهجية (أي. أو اليمين أو اليسار اليسار، الثنائية، وحق x 2، x 2).
      2. فرز الحيوانات حيث يكون حجم الورم متوسط في كل فوج متساوية تقريبا. يمكن تنفيذ الأسلوب التالي لفرز الحيوانات باستخدام برنامج جدول بيانات.
        1. قائمة أرقام تعريف الحيوان، ونمط الشق الإذن، وحجم الورم في ثلاثة أعمدة منفصلة.
        2. فرز البيانات من أصغر إلى أكبر حجم للورم.
        3. في عمود الرابع، تعيين كل الحيوانات عدد الأقفاص ودورة من خلال الأقفاص في نمط سناكيليكي. على سبيل المثال، إذا كان هناك 5 أقفاص، سيكون هذا العمود شغل "5، 4، 3، 2، 1، 1، 2، 3، 4، 5..." حتى يتم تعيين جميع الحيوانات قفص.
        4. حالما يتم تعيينها في الأقفاص، فرز البيانات حسب عدد الأقفاص. إذا كانت تستخدم الإذن من الشقوق، ضمان أن كل الحيوانات في قفص معين قد نقش الشق إذن فريدة من نوعها. إذا كان هناك تكرارات (اثنين أو أكثر من نفس النمط) في قفص معين، بمبادلة الماوس واحد مع واحد من قفص آخر مع نمط مفقود حتى كل قفص الحيوانات مع الإذن الفريدة نوتش أنماط.
  2. تركيبات وحقن
    ملاحظة: تسلسل حقن لدراسة كل من بيوديستريبوشن والعلاج العائدات على النحو التالي: يتم حقن huA33-تكو أولاً، تليها Lu-DOTA-شماعة [177لو]7-Tz بعد فاصل زمني محدد سلفا.
    1. إيمونوكونجوجاتي
      1. يضعف قاسمة لحل huA33-تكو من 1.9 خطوة بتركيز 0.8 ملغ/مل في سالين معقم 0.9 في المائة.
      2. رسم جرعة من 150 ميليلتر (100 ميكروغرام) من حل huA33-تكو في المحاقن pretreated مع ألبومين المصل البقري 1% (BSA) في برنامج تلفزيوني وتخزين هذه الحقن على الجليد.
        ملاحظة: جيش صرب البوسنة العلاج يقلل الربط غير محددة من جسم على الجدران من المحاقن.
      3. الحارة الحيوانات تحت مصباح حرارة لمدة 3 دقائق تمدد الوريد الذيل.
      4. حقن الوريد ذيل الماوس xenograft الحاملة الحل huA33-تكو. تسمح ح 24 (أو فاصل زمني محدد مسبقاً مختلفة) huA33-تكو تتراكم في ورم الماوس.
    2. راديوليجاند
      1. راديولابيل شماعة Tz7-يعطي كما هو مبين في المادة 5.
      2. رسم جرعات في ميكروليتر 150 من 0.9% العقيمة التي تديرها-DOTA بالنسبة إلى مبلغ huA33-تكو المالحة التي تحتوي على معادلات المولى 1.1 Tz-شماعة7. على سبيل مثال، إذا كان 100 ميكروغرام (نمول 0.67) من huA33-تكو تم حقن الحيوان وقدم [177لو [لو-DOTA-شماعة7-Tz رد فعل المخلوط مع نشاط معين من 12.4 جبق/μmol، ثم جرعات ستوضع المحتوية على 9.14 مبق لنشاط كل. وهذا يناظر نمول 0.74 من Tz (مكافئ. المولى 1.1 نسبة إلى huA33-TCO).
      3. الحارة الحيوانات تحت مصباح حرارة لمدة 3 دقيقة تمدد الوريد الذيل.
      4. حقن جرعة راديوليجاند في هذا السياق ذيل الماوس xenograft الحاملة. يتحدد مقدار النشاط بالحقن بالباحث. وقد أظهرت البيانات المنشورة الآثار تعتمد على الجرعة العلاجية على حجم الورم داخل مجموعة من 7.4-55.5 مبق.
  3. بيوديستريبوشن
    1. عند نقطة الوقت المطلوب بعد إقامة راديوليجاند، euthanize كل فوج من الفئران باستخدام 2 س2 /6% CO2 الغاز المخلوط.
      ملاحظة: اتبع أي المتطلبات المؤسسية فيما يتعلق بأساليب القتل الرحيم المادية الثانوية (مثلاً، التفكك عنق الرحم).
    2. لكل الحيوان، وإزالة جميع الأجهزة التابعة للمصلحة وغسلها في حمام مائي لإزالة أي الدم الزائد وتجفيفها على منشفة ورقية في الهواء الطلق لقائمة الجهاز عينة 5 كحد أدنى في الترتيب المقترح: الدم، الورم، القلب، الرئتين، الكبد، والطحال، والمعدة، والأمعاء الدقيقة ، الأمعاء الغليظة، الكليتين، العضلات، العظام، والجلد، والذيل.
    3. مرة واحدة بما فيه الكفاية المجففة، وضع الأجهزة في أنابيب ثقافة المتاح قبل موزون. وزن أنابيب مليئة الآن مرة أخرى للحصول على الكتلة لكل جهاز أو الأنسجة.
    4. قياس النشاط في كل من هذه الأنابيب باستخدام عداد غاما. قم بمعايرة نشاط المقاسة في عداد غاما إلى كاشف المستخدمة لقياس الجرعة مرسومة. تعتمد المعايير المشعة من 177لو على كل صك وتحديد عامل معايرة ل interconversion بين النشاط والتهم في الدقيقة (cpm).
    5. رسم البيانات بيوديستريبوشن كرسم بياني شريطي (انظر الشكل 5) مع الوسط تطبيع امتصاص لكل جهاز عرض بالإضافة إلى حانة تدل على انحراف معياري واحد. يمكن تقييم الفروق الإحصائية في الإقبال بين مجموعات العينة التي مزاوج اختبار t، ويتحقق فيه أهمية عندما ف < 0.05.
  4. رصد العلاج
    1. باستخدام الفرجار، قياس الجانب الأطول من ورم مستطيل (طول) فضلا عن العرض، وعمودي على الطول. حساب حجم استخدام صيغة لوحدة التخزين المجسم الاهليلجي: πL· (4/3) W· ح، الذي يبسط إلى ½L· ث2، على افتراض أن الارتفاع مساو تقريبا للعرض.
      ملاحظة: من الممكن أيضا استخدام ورم يده جهاز قياس إذا كان أحد المتاحة (انظر الجدول للمواد).
    2. تزن كل الماوس على توازن لتتبع زيادة الوزن أو فقدان الوزن مع مرور الوقت.
    3. الأهم من ذلك، ترصد كل الحيوانات المظهر المادي لإشارات الاستغاثة، مثل متحدب مرة أخرى أو تمزق الأوعية الدموية الجلدية (التي قد تشير إلى هايماتوتوكسيسيتي).
      ملاحظة: قياسات الورم ينبغي جمع كل أيام 1-2 وأثناء دراسة طولية من العلاج.
    4. بيانات الأرض من العلاج الطولية دراسة متوسط حجم الورم مع مرور الوقت وتطبيع لبدء حجم الورم إذا رغبت في ذلك. يمكن تقييم الفروق الإحصائية في الإقبال في نفس اليوم بين مجموعات العينة التي مزاوج اختبار t، ويتحقق فيه أهمية عندما ف < 0.05. تحليلات إحصائية أكثر شمولاً يمكن وينبغي الاضطلاع كما أوصت به بيوستاتيستيسيان مدربين.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

ويستند على تصريف تكلفة الامتلاك الكلية إلى huA33 اقتران بين رد الفعل أمين TCO--دائرة الصحة الوطنية وبقايا يسين على سطح جسم مضاد. هذا الأسلوب هو قوية للغاية واستنساخه وغلة موثوق بها درجة من-العلامات من تكلفة الامتلاك الكلية/ماب 2-4. وفي هذه الحالة، كان يعمل ToF استخدام الطيف الكتلي للتأكد من درجة من وسم من تكلفة الامتلاك الكلية حوالي 4.0/ماب؛ قيمة مماثلة تم الحصول عليها باستخدام تيترازيني تعديل fluorophore ك مراسل24. يتم توليف ليجند تيترازيني في ثلاث خطوات: (1) اقتران Tz--دائرة الصحة الوطنية إلى رابط شماعة مونو-بنك الصين-محمية deprotection (2) من هذا المتوسط للعائد Tz-شماعة7-NH2، والتشكيل (3) ال الربط بين p-العقدة-Bn-DOTA وشماعة Tz7-NH2. هذا الإجراء هو سهلة نسبيا ويتيح Tz-شماعة7-DOTA الغلة الإجمالية ~ 75%. كل من المواد الوسيطة اتسمت بنظام إدارة الموارد البشرية و 1ح-الرنين المغناطيسي النووي؛ يتم تقديم هذه البيانات في الجدول 1.

الانتقال إلى راديولابيلينج، 177لو3 + هو عادة التي يتم الحصول عليها من الموردين التجاريين الملح كلوريد لوكل [177لو]3 في 0.5 M HCl. راديولابيلينج شماعة Tz7-DOTA مع 177لو تؤتي Lu-DOTA-شماعة راديوليجاند [177لو]7-Tz بسيط جداً: في 20 دقيقة فقط، رد فعل كاملة، إنتاج المنتج المطلوب في > 99% الكيمياء الإشعاعية نقاء حسبما يقرره شروع الإذاعة. عادة، لا تنقية إضافية لا بد قبل صياغة. مسح الأدبيات حول Tz/المستندة إلى تكلفة الامتلاك الكلية بريتارجيتينج يوحي بأن نسبة مولى Tz:mAb ~ 1:1 ينتج أفضل في فيفو البيانات10. كنتيجة لذلك، من الضروري لا للحصول على راديوليجاند في نشاط المولى ممكن أعلى. على سبيل المثال، ناقش التجارب بيوديستريبوشن هنا لو-DOTA-شماعة توظيف [177لو]7-Tz بنشاط مولى من جبق ~ 12/µmol. الدراسات الطولية العلاج، على النقيض من ذلك، لو-DOTA-شماعة [177لو]7-Tz مع ارتفاع النشاط المولى كانت تستخدم من أجل تسهيل إدارة جرعات أكبر من النشاط الإشعاعي دون تغيير عدد حقن جزيئات من تيترازيني.

كما سيتم تناول كذلك في المناقشة، تجارب بيوديستريبوشن أهمية قصوى لفهم وتحسين أي نهج لمدير. وفي هذه الحالة، أجريت التجارب بيوديستريبوشن لتحديد وقت الفاصل الزمني الأمثل بين إدارة إيمونوكونجوجاتي وحقن راديوليجاند. وتحقيقا لهذه الغاية، استخدمنا athymic الفئران عارية واضعة تحت الجلد A33 معربا عن مستضد SW1222 تكثيفها في الكتف الأيسر. هذه الحيوانات وتلقى 100 ميكروغرام (نمول 0.67) من huA33-تكو 24 أو 48 أو 72 أو 120 ح قبل حقن لو-DOTA-شماعة [177لو]7-Tz (9.14 مبق، نمول 0.74). يبين الشكل 5 أن جميع الحقن فترات إنتاج تركيزات عالية من النشاط في أنسجة الورم وكذلك تركيزات منخفضة من النشاط في أجهزة صحية. الفاصل الزمني حقن ح 24 يتيح الاستيعاب بالاورام أعلى في 120 ساعة بعد الحقن: 21.2 ± 2.9%ID/g. وتنتج كل مجموعة من الشروط أيضا نسب تركيز الإعجاب الورم إلى الجهاز النشاط. بريتارجيتينج مع فاصل زمني 24 ساعة، على سبيل المثال، ينتج الورم بالدم وورم في الكبد وورم بعضلة نسب 20 ± 5, 37 ± 7، و 184 ± 30، على التوالي، 120 ساعة بعد إقامة راديوليجاند. بناء على هذه النتائج، تم اختيار فاصل زمني 24 ساعة لدراسة العلاج طولية اللاحقة (انظر أدناه).

في فيفو العلاج طولية الدراسة، الأفواج (n = 10) athymic الفئران عارية واضعة SW1222 تحت الجلد تم تكثيفها في الجناح الأيسر على تدار huA33-تكو (100 ميكروغرام، نمول 0.67) 24 ساعة قبل حقن [177لو] لو-DOTA-شماعة 7-Tz. تم توظيف ثلاثة أفواج تجريبية مختلفة، تلقي 18.7 أو 37 مبق 55.5 Lu-DOTA-شماعة [177لو]7-Tz (المقابلة لأنشطة المولى من 24 و 45 و 70 جبق/µmol). وبالإضافة إلى ذلك، تلقي واحد اثنين مراقبة الأفواج النصف مدير نظام المعالجة: أما huA33-TCO (100 ميكروغرام، نمول 0.67) دون [177لو] لو-DOTA-شماعة7-Tz أو [177لو [لو-DOTA-شماعة7-Tz (55.5 مبق، نمول 0.74) دون huA33-تكو. وهذه عناصر أساسية لضمان أن الاستجابة العلاجية لم تحظ بأي من إيمونوكونجوجاتي أو راديوليجاند وحدها. وقيست أحجام الأورام كل 3 أيام للأسابيع الثلاثة الأولى من الدراسة وثم مرة واحدة في الأسبوع حتى نهاية التجربة (70 يوما، 10 إنصاف 177Lu). كما يظهر في الشكل 6، هناك اختلاف صارخ في استجابة الأفواج التجريبية مقارنة بالفئات التحكم. بينما الأورام في الفئران تلقي عنصرا واحداً فقط من عناصر استراتيجية مدير تستمر في النمو دون رادع، أورام الفئران تلقي نظام مدير كامل تتوقف عن النمو ويتقلص في نهاية المطاف إلى كميات أقل من تلك التي تقاس في بداية الدراسة. الأهم من ذلك، لم يلاحظ أي آثار جانبية سامة، والإبقاء على جميع الحيوانات على وزن حدود 20 في المائة كتلتها الأولية (الشكل 7 أ). مؤامرة كابلان-ماير من البيانات ويوفر تصور ملفتة للنظر أكثر من الدراسة: في حين أن جميع الفئران في الأفواج التحكم يكون euthanized في غضون أسابيع قليلة، الفئران الأفواج التجريبية قد سجل مثالي للبقاء على قيد الحياة في النهاية (التحقيق 7B الشكل).

Figure 1
رقم 1: التخطيطي الكرتون من راديويمونوثيرابي بريتارجيتيد استناداً إلى رد فعل الطلب ديلز-الدر إلكترون معكوس. لقد تم تعديل هذا الرقم من مرجع #28. طبع (تكييف) بإذن من ميمبرينو، ر.، كوك، باء هاء، فونغ، ك.، لويس، س. ج.، وزيجليس،. م. "كليكميدياتيد بريتارجيتيد راديويمونوثيرابي سرطان القولون والمستقيم". الصيدﻻنيات الجزيئية. 15 (4)، 1729-1734 (2018). حقوق الطبع والنشر عام 2018 الجمعية الأمريكية الكيميائية. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 2
رقم 2: التخطيطي لبناء huA33-تكو. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 3
الشكل 3: التخطيطي لتوليف Tz-شماعة7-DOTA- الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 4
الشكل 4: (أ) تخطيطي من راديولابيلينج Lu-DOTA-شماعة [ 177لو]7-Tz؛ (ب (تمثيلية إذاعية-شروع chromatogram مما يدل > نقاء الكيمياء 98% Lu-DOTA-شماعة [177لو]7-Tz. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 5
الشكل 5: بيوديستريبوشن في من فيفو بريتارجيتينج مع huA33-تكو و [177لو] شماعة-DOTA-7-Tz في الفئران athymic عارية واضعة تحت الجلد أورام سرطان القولون والمستقيم البشرية SW1222 استخدام بريتارجيتينج فترات 48 (الأرجواني)، 24 (أخضر) ، 72 (برتقالي)، أو 120 ساعة (أزرق). البيانات مع الأخطاء المعيارية من أفواج n = 4؛ أجرى التحليل الإحصائي باختبار t الطالب مزاوج، * *ف < 0.01. لقد تم تعديل هذا الرقم من مرجع #28. طبع (تكييف) بإذن من ميمبرينو، ر.، كوك، باء هاء، فونغ، ك.، لويس، س. ج.، وزيجليس،. م. "كليكميدياتيد بريتارجيتيد راديويمونوثيرابي سرطان القولون والمستقيم". الصيدﻻنيات الجزيئية. 15 (4)، 1729-1734 (2018). حقوق الطبع والنشر عام 2018 الجمعية الأمريكية الكيميائية. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 6
الشكل 6: دراسة طولية العلاج من 5 مجموعات من الفئران (n = 10 كل) تأثير الأورام SW1222 تحت الجلد صورت في حجم الورم متوسط كدالة للزمن (A)؛ وحجم الورم تطبيع للتخزين الأولية كدالة للوقت (ب)- تلقي مجموعات التحكم إيمونوكونجوجاتي دون راديوليجاند (الأزرق) أو راديوليجاند دون إيمونوكونجوجاتي (أحمر). علاج ثلاثة مجموعات تلقي huA33-TCO (100 ميكروغرام، نمول 0.6) تليها ح 24 لاحقاً أما 18.5 (الأخضر) أو 37.0 (الأرجواني) أو مبق (برتقالي) 55.5 (نمول ~0.8 في كل حالة) من [177لو] شماعة-DOTA-7-Tz. بسجل-رتبة (رف-كوكس) اختبار، والبقاء على قيد الحياة وكان كبيرا (ف < 0.0001) لكل معاملة المجموعات. لقد تم تعديل هذا الرقم من مرجع #28. طبع (تكييف) بإذن من ميمبرينو، ر.، كوك، باء هاء، فونغ، ك.، لويس، س. ج.، وزيجليس،. م. "كليكميدياتيد بريتارجيتيد راديويمونوثيرابي سرطان القولون والمستقيم". الصيدﻻنيات الجزيئية. 15 (4)، 1729-1734 (2018). حقوق الطبع والنشر عام 2018 الجمعية الأمريكية الكيميائية. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 7
الشكل 7: وزن المنحنيات للحيوانات من خلال دراسة طولية العلاج 5 مجموعات من الفئران (n = 10 كل) منحنى بقاء كابلان-ماير المقابلة إذ تضع تحت الجلد SW1222 الأورام (A)؛ (ب)- تلقي مجموعات التحكم إيمونوكونجوجاتي دون راديوليجاند (الأزرق) أو راديوليجاند دون إيمونوكونجوجاتي (أحمر). علاج ثلاثة مجموعات تلقي huA33-TCO (100 ميكروغرام، نمول 0.6) تليها ح 24 لاحقاً أما 18.5 (الأخضر) أو 37.0 (الأرجواني) أو مبق (برتقالي) 55.5 (نمول ~0.8 في كل حالة) من [177لو] شماعة-DOTA-7-Tz. لقد تم تعديل هذا الرقم من مرجع #28. طبع (تكييف) بإذن من ميمبرينو، ر.، كوك، باء هاء، فونغ، ك.، لويس، س. ج.، وزيجليس،. م. "كليكميدياتيد بريتارجيتيد راديويمونوثيرابي سرطان القولون والمستقيم". الصيدﻻنيات الجزيئية. 15 (4)، 1729-1734 (2018). حقوق الطبع والنشر عام 2018 الجمعية الأمريكية الكيميائية. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

مجمع 1 ح-الرنين المغناطيسي التحولات نظام إدارة الموارد البشرية (ESI)
500 ميغاهرتز، [دمس]
Tz-شماعة7-نهبوك 10.52 (ق، ح 1)، 8.50 (م، ح 3)، 7.82 (تي، ح 1)، 7.46 (د، ح 2)، 6.69 (تي، ح 1)، 4.33 (د، ح 2)، 3.42 (م، ح 22)، 3.33 (تي، ح 2)، 3.31 (تي، ح 2)، 3.12 (س، ح 2)، 2.99 (س، ح 2)، 2.12 (تي، ح 2)، 2.03 (تي، ح 2)، 2.12 (تي، ح 2)، 1.70 (س، ح 2)، 1.29 (s ، ح 9) كالكد m/z . ج35ح57ن7س11نا: 774.4005؛ العثور على: 774.4014.
Tz-شماعة7-NH2 10.58 (ق، ح 1) 8.46 (م، ح 2) 7.87 (تي، ح 1)، 7.75 (د، ح 2)، 7.52 (د، ح 1)، 4.40 (د، ح 2)، 3.60-3.50 (م، ح 26)، 3.40 (تي، ح 2)، 3.32 (بكالوريوس، ح 2)، 3.20 (س، ح 2)، 2.99 (بكالوريوس، ح 2)، 2.19 (تي، ح 2)، 2.12 (تي، ح 2)،، 1.79 (س، ح 2). كالكد m/z . ج50ن30ح7س9: 652.3670؛ العثور على: 652.3676.
Tz-شماعة7-DOTA 10.57 (ق، ح 1)، 9.63 (بكالوريوس، ح 1)، 8.45 (م، ح 3)، 7.86 (م، ح 1)، 7.73 (بكالوريوس، ح 1)، 7.54 (د، ح 2)، 7.41 (م، ح 2)، 7.19 (م، ح 2)، 6.54 (بكالوريوس، ح 1)، 4.40 (د، ح 2)، 4.00-3.20 (م، ح 55) 2.10 (تي، ح 3)، 2.18 (تي، ح 3)، 1.76 (q، 3.20 (س، ح 4)، 2.54 (ق، ح 1) ، ح 2). كالكد m/z . ج50ح76ن11س15ق: 1202.56؛ العثور على: 1203.5741.

الجدول 1- توصيف البيانات للمركبات العضوية المبينة في هذا البروتوكول.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

واحدة من نقاط القوة في هذا النهج في فيفو بريتارجيتينج – خاصة فيما يتعلق باستراتيجيات مبنية على أجسام بيسبيسيفيك وراديولابيليد هابتينس – هو نمطية: يمكن إلحاق ترانس-سيكلوكتيني مويتيس بأي جسم، ويمكن راديولابيليد راديوليجاندس تيترازيني مع مجموعة غير عادية من النويدات المشعة دون إضعاف قدرتها على الرد مع شركائها في انقر فوق. بعد تكييف هذا النهج إلى نظام جسم/مستضد الأخرى ليست بهذه البساطة تكرار البروتوكول هو موضح هنا. وبطبيعة الحال، ينبغي أن يقترن أي محاولة لخلق إيمونوكونجوجاتي ماب-تكو جديدة أو راديوليجاند تيترازيني-حمل رواية بفحوصات توصيف المواد الكيميائية والبيولوجية المناسبة، بما في ذلك اختبارات للاستقرار ومفاعليه. ولكن أبعد من ذلك، هناك اثنين من المتغيرات التي تكتسي أهمية خاصة لاستكشاف وتحسين: (1) الشامل للإنسان والمحيط الحيوي-تكو إيمونوكونجوجاتي التي تديرها و (2) وقت الفاصل الزمني بين حقن ماب-تكلفة الامتلاك الكلية، وإدارة راديوليجاند. كل عوامل يمكن أن تؤثر تأثيراً جوهريا في فيفو سلوك النظام بريتارجيتينج. على سبيل المثال، يمكن أن يؤدي استخدام جرعات عالية أكثر من اللازم من إيمونوكونجوجاتي أو الفاصل الزمني لفترات قصيرة جداً في التركيزات العالية غير مرغوب بها النشاط في الدم بسبب ردود الفعل فوق بين راديوليجاند وإيمونوكونجوجاتي المتبقية في الدورة الدموية. على العكس من ذلك، توظيف الجماهير من إيمونوكونجوجاتي التي تكون منخفضة جداً أو الفترات الفاصلة طويلة أكثر من اللازم يمكن أن تقلل بلا داع تركيز النشاط في الورم بسبب عدم تشبع antigen أو isomerization العنيد (ولو بطيئا) من ترانس -سيكلوكتيني إلى غير نشط في رابطة الدول المستقلة-سيكلوكتيني. وعلى نفس المنوال، يمكن إجراء تجارب بيوديستريبوشن باستخدام مجموعة من الجماهير إيمونوكونجوجاتي وفترات بريتارجيتينج مفيدة غير عادي. وبطبيعة الحال، من المستحسن أيضا أن تشغيل عناصر التحكم المناسبة في جنبا إلى جنب مع أي تجارب في فيفو . وتشمل هذه — ولكن لا تقتصر على – تجارب تتميز خطوط خلايا مستضد السلبية، ومنع الأفواج التي تلقي فائض شاسعة جسم unconjugated، إدارة راديوليجاند وحدها، وحقن راديوليجاند بعد تكلفة الامتلاك الكلية- تفتقر إلى إيمونوكونجوجاتي، و في فيفو بريتارجيتينج استخدام غير محدد، إيمونوكونجوجاتي ايستب التحكم تحمل تكلفة الامتلاك الكلية.

وبدلاً من ذلك، يمكن استخدام تجارب التصوير للتحسين إذا النويدات المشعة العلاجية تنبعث positrons أو الفوتونات 'الصور' أو إذا كان إيسوتوبولوجوي 'الصور' من النويدات المشعة العلاجية المتاحة. في نهاية المطاف، يجب تحديد مجموعات المتغيرات التي تقدم أفضل توازن تركيزات عالية النشاط الأورام ونسب تركيز عالية الورم على خلفية النشاط للدراسات اللاحقة العلاج الطولية. في الحالة المعروضة هنا، تم حقن 100 ميكروغرام من huA33-تكو مع فاصل زمني حسابات الجرعات حاء – 24 – لا سيما تلك التي تسمح لحساب جرعات الورم ونسب العلاجية – يمكن أيضا أن تكون مفيدة أثناء عملية التحسين.

من المهم أن نلاحظ أنه حتى واعدة [177لو] لو-DOTA-شماعة7-Tz/huA33-تكو النظام الذي تم تطويره يمكن أن تستفيد من التحسين إضافية. تكشف مقارنة بين البيانات قياس الجرعات الإشعاعية من هذا النهج إلى مدير والفرقة التقليدية مع متغير المسمى لو 177من huA33 أن جرعة الورم مدير تقع أدنى من RIT. التقليدية وعلاوة على ذلك، الجرعة الفعالة لمدير النظام (0.054 ملي سيفرت/مبق) فقط أقل قليلاً من الفرقة التقليدية (0.068 ملي سيفرت/مبق).

يتم حاليا استكشاف سبل الانتصاف اثنين لهذه القضايا. أولاً، قد وضعت سقالة الجذعية قادرة على زيادة عدد تكوس إلحاق كل جسم30. في سياق تصوير الحيوانات الأليفة بريتارجيتيد، هذا النهج بشكل كبير يعزز تركيزات نشاط الأورام، وتجارب مماثلة مع Lu-DOTA-شماعة [177لو]7-Tz جارية. وثانيا، قد يكون من المفيد في سياق مدير استخدام وكلاء التخليص تيترازيني الحاملة. استغلت إدارة وكلاء قبل حقن راديوليجاند التخليص في مجموعة متنوعة من بريتارجيتينج منهجيات كوسيلة لتقليل تركيز إيمونوكونجوجاتي المتبقية في الدم وبالتالي تقليل تركيزات النشاط في أجهزة صحية23،31. استخدام وكلاء التخليص لا يخلو من بعض المآخذ، على الرغم؛ أبرزها التي يتزايد تعقيد طريقة علاجية معقدة فعلا المسلم. ومع ذلك، الباحثون في مركز ميموريال سلون كيترينج للسرطان نشرت مؤخرا تقريرا مقنعة بشأن إنشاء ديكستران Tz المسمى مسح عامل للحيوانات الأليفة التصوير بريتارجيتيد، وبيانات عن استخدام هذا البناء بالاقتران مع [177لو] Lu-DOTA-شماعة7-Tz و huA33-تكو هي المقبلة32. نهج آخر لتعظيم فوائد الجرعات مدير هو استخدام النويدات المشعة مع إنصاف المادية أقصر. وقد ثبت فعالية عالية للتصوير؛ ومع ذلك، النويدات المشعة العلاجية مع إنصاف المادية قصيرة قليلة ومتباعدة.

وأخيراً، سنكون مقصرين إذا فشلنا في معالجة بعض أوجه القصور المتأصلة في بريتارجيتينج بناء على رد فعل الطلب ديلز-الدر إلكترون معكوس بشكل صحيح. وأول هذه المشاكل الملازمة جميع النهج في فيفو بريتارجيتينج: لا يمكن استيعاب الأضداد المستخدمة عند الربط إلى النسيج المستهدف. وهذا، بطبيعة الحال، ضروري، كما الجسم يجب أن يظل موجوداً راديوليجاند بدلاً من المحتبسة في حجرة داخل الخلايا. ومن المسلم به هذا القيد الصعب التحايل، على الرغم من أنه ثبت مؤخرا أن الأجسام المضادة مع معدلات بطيئة إلى المعتدل الاستيعاب الداخلي يمكن أن تستخدم في فيفو بريتارجيتينج33،34. ثانيا، isomerization بطيئة في فيفو من رد الفعل ترانس-سيكلوكتيني إلى غير نشط رابطة الدول المستقلة-سيكلوكتيني لديه القدرة على الحد من طول الفاصل الزمني بين إدارة إيمونوكونجوجاتي تحمل تكلفة الامتلاك الكلية، الحقن راديوليجاند. حاسمة، وفترات تصل إلى 120 ساعة قدمت لا تزال نتائج ممتازة في السياق كل الحيوانات الأليفة بريتارجيتيد التصوير و مدير. ومع ذلك، استخدام هذه فترات أطول هو دائماً تقريبا مصحوبا بتخفيض طفيف في تركيزات نشاط الأورام، نتيجة التي قد تنبع من هذا isomerization. ولمعالجة هذه المسألة، حاولت عدة مختبرات لإنشاء أكثر استقرارا ترانس-سيكلوكتينيس دون المساس بمفاعليه، في حين أن آخرين قد حاولت وضع جديد تماما دينوفيليس قابلة للتفاعل مع تيترازيني35 . في السنوات القادمة، هو الأمل في أن هذه التطورات الكيميائية سوف تكون الاستدانة لمدير.

وفي النهاية، مدير استناداً إلى ربط الطلب ديلز-الدر إلكترون معكوس بلا شك تكنولوجيا الناشئة وغير ناضجة إلى حد ما. ومع ذلك، ومع ذلك يشجعنا النتائج الإكلينيكية التي قمنا بالحصول عليها ومتحمس للوعد السريرية لهذه الاستراتيجية. ونأمل أن يشجع هذا البروتوكول الآخرين لاستكشاف وتحسين هذا النهج والوقود ومن ثم رحلتها من المختبر إلى العيادة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

Acknowledgments

يشكر المؤلفون الدكتور جاكوب هاوتون للمحادثات مفيدة. الكتاب أيضا يود أن يشكر المعاهد الوطنية للصحة لتمويلها السخي (R00CA178205 و U01CA221046).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
(E)-Cyclooct-4-enyl 2,5-dioxo-1-pyrrolidinyl carbonate (TCO-NHS) Sigma-Aldrich 764523 Store at -80 °C
2,5-Dioxo-1-pyrrolidinyl 5-[4-(1,2,4,5-tetrazin-3-yl)benzylamino]-5-oxopentanoate (Tz-NHS) Sigma-Aldrich 764701 Store at -80 °C
Acetonitrile (MeCN) Fisher Scientific A998-4
Ammonium Acetate (NH4OAc) Fisher Scientific A639-500
Boc-PEG7-amine (O-(2-Aminoethyl)-O′-[2-(Boc-amino)ethyl]hexaethylene glycol) Sigma-Aldrich 70023 Store at -20 °C
Dichloromethane (DCM) Fisher Scientific D143-1
Dimethyl sulfoxide (DMSO), anhydrous Fisher Scientific D12345
EMD Millipore Amicon Ultra-2 Centrifugal Filter Unit Fisher Scientific UFC205024
GE Healthcare Disposable PD-10 Desalting Columns Fisher Scientific 45-000-148
N,N-Dimethylformamide (DMF), anhydrous Fisher Scientific AC610941000
Phosphate Buffered Saline (PBS) Fisher Scientific 70-011-044 10x Concentrated
p-SCN-Bn-DOTA Macrocyclics B-205 Store at -20 °C
Triethylamine (TEA) Fisher Scientific AC157911000
Trifluoroacetic Acid (TFA) Fisher Scientific A116-50
Tumor measuring device Peira TM900 Peira TM900

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Goldenberg, D. M. Targeted Therapy of Cancer with Radiolabeled Antibodies. Journal of Nuclear Medicine. 43 (5), 693-713 (2002).
  2. Goldenberg, D. M., et al. Radioimmunotherapy of B-cell Lymphomas with Iodine-131-labeled LL2 Monoclonal Antibody. Journal of Clinical Oncology. 9 (4), 548-564 (1991).
  3. Kaminski, M. S., et al. Radioimmunotherapy with 131I-Tositumomab for Relapsed or Refractory B-cell non-Hodgkin Lymphoma: Updated Results and Long-Term Follow-Up of the University of Michigan Experience. Blood. 96 (4), 1259-1266 (2000).
  4. Davies, A. J. Radioimmunotherapy for B-cell Lymphoma: Y90 Ibritumomab Tiuxetan and I131 Tositumomab. Oncogene. 26, 3614 (2007).
  5. Rajendran, J., et al. Comparison of Radiation Dose Estimation for Myeloablative Radioimmunotherapy for Relapsed or Recurrent Mantle Cell Lymphoma Using 131I Tositumomab to That of Other Types of Non-Hodgkin's Lymphoma. Cancer Biotherapy and Radiopharmaceuticals. 19 (6), 738-745 (2004).
  6. Rajendran, J. G., et al. High-Dose 131I-Tositumomab (Anti-CD20) Radioimmunotherapy for Non-Hodgkin's Lymphoma: Adjusting Radiation Absorbed Dose to Actual Organ Volumes. Journal of Nuclear Medicine. 45 (6), 1059-1064 (2004).
  7. Larson, S. M., Carrasquillo, J. A., Cheung, N. -K. V., Press, O. Radioimmunotherapy of Human tumours. Nature Reviews Cancer. 15 (6), 347-360 (2015).
  8. Kelly, M. P., et al. Tumor Targeting by a Multivalent Single-Chain Fv (scFv) Anti-Lewis Y Antibody Construct. Cancer Biotherapy & Radiopharmaceuticals. 23 (4), 411-423 (2008).
  9. Yazaki, P. J., et al. Tumor Targeting of Radiometal Labeled Anti-CEA Recombinant T84.66 Diabody and T84.66 Minibody: Comparison to Radioiodinated Fragments. Bioconjugate Chemistry. 12 (2), 220-228 (2001).
  10. van Duijnhoven, S. M. J., et al. Diabody Pretargeting with Click Chemistry In Vivo. Journal of Nuclear Medicine. 56 (9), 1422-1428 (2015).
  11. Altai, M., Membreno, R., Cook, B., Tolmachev, V., Zeglis, B. M. Pretargeted Imaging and Therapy. Journal of Nuclear Medicine. 58 (10), 1553-1559 (2017).
  12. Goldenberg, D. M., Chatal, J. -F., Barbet, J., Boerman, O., Sharkey, R. M. Cancer Imaging and Therapy with Bispecific Antibody Pretargeting. Update on cancer therapeutics. 2 (1), 19-31 (2007).
  13. Rossin, R., et al. In-Vivo Chemistry for Pretargeted Tumor Imaging in Live Mice. Angewandte Chemie International Edition. 49 (19), 3375-3378 (2010).
  14. Gestin, J. F., et al. Two-Step Targeting of Xenografted Colon Carcinoma Using a Bispecific Antibody and 188Re-Labeled Bivalent Hapten: Biodistribution and Dosimetry Studies. Journal of Nuclear Medicine. 42 (1), 146-153 (2001).
  15. Green, D. J., et al. Comparative Analysis of Bispecific Antibody and Streptavidin-Targeted Radioimmunotherapy for B-cell Cancers. Cancer Research. 76 (22), 6669 (2016).
  16. Sharkey, R. M., et al. Development of a Streptavidin−Anti-Carcinoembryonic Antigen Antibody, Radiolabeled Biotin Pretargeting Method for Radioimmunotherapy of Colorectal Cancer. Studies in a Human Colon Cancer Xenograft Model. Bioconjugate Chemistry. 8 (4), 595-604 (1997).
  17. Knox, S. J., et al. Phase II Trial of Yttrium-90-DOTA-Biotin Pretargeted by NR-LU-10 Antibody/Streptavidin in Patients with Metastatic Colon Cancer. Clinical Cancer Research. 6 (2), 406 (2000).
  18. Schubert, M., et al. Novel Tumor Pretargeting System Based on Complementary L-Configured Oligonucleotides. Bioconjugate Chemistry. 28 (4), 1176-1188 (2017).
  19. Forero, A., et al. Phase 1 Trial of a Novel Anti-CD20 Fusion Protein in Pretargeted Radioimmunotherapy for B-cell Non-Hodgkin Lymphoma. Blood. 104 (1), 227 (2004).
  20. Kalofonos, H. P., et al. Imaging of Tumor in Patients with Indium-111-Labeled Biotin and Streptavidin-Conjugated Antibodies: Preliminary Communication. Journal of Nuclear Medicine. 31 (11), 1791-1796 (1990).
  21. Zeglis, B. M., et al. A Pretargeted PET Imaging Strategy Based on Bioorthogonal Diels-Alder Click Chemistry. Journal of Nuclear Medicine. 54 (8), 1389-1396 (2013).
  22. Meyer, J. -P., et al. 18F-Based Pretargeted PET Imaging Based on Bioorthogonal Diels-Alder Click Chemistry. Bioconjugate Chemistry. 27 (2), 298-301 (2016).
  23. Rossin, R., Läppchen, T., vanden Bosch, S. M., Laforest, R., Robillard, M. S. Diels-Alder Reaction for Tumor Pretargeting: In Vivo Chemistry Can Boost Tumor Radiation Dose Compared with Directly Labeled Antibody. Journal of Nuclear Medicine. 54 (11), 1989-1995 (2013).
  24. Zeglis, B. M., et al. Optimization of a Pretargeted Strategy for the PET Imaging of Colorectal Carcinoma via the Modulation of Radioligand Pharmacokinetics. Molecular Pharmaceutics. 12 (10), 3575-3587 (2015).
  25. Agard, N. J., Prescher, J. A., Bertozzi, C. R. A Strain-Promoted [3 + 2] Azide−Alkyne Cycloaddition for Covalent Modification of Biomolecules in Living Systems. Journal of the American Chemical Society. 126 (46), 15046-15047 (2004).
  26. Blackman, M. L., Royzen, M., Fox, J. M. Tetrazine Ligation: Fast Bioconjugation Based on Inverse-Electron-Demand Diels−Alder Reactivity. Journal of the American Chemical Society. 130 (41), 13518-13519 (2008).
  27. Houghton, J. L., et al. Establishment of the In Vivo Efficacy of Pretargeted Radioimmunotherapy Utilizing Inverse Electron Demand Diels-Alder Click Chemistry. Molecular Cancer Therapeutics. 16 (1), 124-133 (2017).
  28. Membreno, R., Cook, B. E., Fung, K., Lewis, J. S., Zeglis, B. M. Click-Mediated Pretargeted Radioimmunotherapy of Colorectal Carcinoma. Molecular Pharmaceutics. 15 (4), 1729-1734 (2018).
  29. Reiner, T., Lewis, J. S., Zeglis, B. M. Harnessing the Bioorthogonal Inverse Electron Demand Diels-Alder Cycloaddition for Pretargeted PET Imaging. Journal of Visualized Experiments. (96), e52335 (2015).
  30. Cook, B. E., Membreno, R., Zeglis, B. M. Dendrimer Scaffold for the Amplification of In Vivo Pretargeting Ligations. Bioconjugate Chemistry. 29 (8), 2734-2740 (2018).
  31. Cheal, S. M., et al. Theranostic Pretargeted Radioimmunotherapy of Colorectal Cancer Xenografts in Mice Using Picomolar Affinity Y-86- or Lu-177-DOTA-Bn Binding scFv C825/GPA33 IgG Bispecific Immunoconjugates. European journal of nuclear medicine and molecular imaging. 43 (5), 925-937 (2016).
  32. Meyer, J. -P., et al. Bioorthogonal Masking of Circulating Antibody-TCO Groups Using Tetrazine-Functionalized Dextran Polymers. Bioconjugate Chemistry. 29 (2), 538-545 (2018).
  33. Houghton, J. L., et al. Pretargeted Immuno-PET of Pancreatic Cancer: Overcoming Circulating Antigen and Internalized Antibody to Reduce Radiation Doses. Journal of Nuclear Medicine. 57 (3), 453-459 (2016).
  34. Keinänen, O., et al. Pretargeting of Internalizing Trastuzumab and Cetuximab with a (18)F-Tetrazine Tracer in Xenograft Models. European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging Research. 7, 95 (2017).
  35. Billaud, E. M. F., et al. Micro-flow Photosynthesis of New Dienophiles for Inverse-Electron-Demand Diels-Alder Reactions. Potential Applications for Pretargeted In Vivo PET Imaging. Chemical Science. 8 (2), 1251-1258 (2017).

Tags

الكيمياء، 143 قضية، راديويمونوثيرابي، راديويمونوثيرابي بريتارجيتيد، بريتارجيتينج، ورد الطلب ديلز-الدر إلكترون معكوس، تيترازيني، ترانس-سيكلوكتيني، huA33، مستضد A33، لوتيتيوم-177
راديويمونوثيرابي بريتارجيتيد بناء على تفاعل ديلز-الدر الطلب إلكترون معكوس
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Membreno, R., Cook, B. E., Zeglis,… More

Membreno, R., Cook, B. E., Zeglis, B. M. Pretargeted Radioimmunotherapy Based on the Inverse Electron Demand Diels-Alder Reaction. J. Vis. Exp. (143), e59041, doi:10.3791/59041 (2019).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter