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Neuroscience

マウスにおける経頭蓋 Photobiomodulation 療法のプロトコル

doi: 10.3791/59076 Published: November 18, 2018

Summary

Photobiomodulation 療法は幅広い神経疾患、精神疾患の治療のための革新的な非侵襲的様相を健康な脳機能を向上させることも。このプロトコルには、マウスが他のげっ歯類での使用に合わせることができる配光経頭蓋脳 photobiomodulation を実行するステップ バイ ステップ ガイドが含まれています。

Abstract

Photobiomodulation 経頭蓋は脳生体エネルギー、神経疾患、精神疾患の広い範囲での脳機能や認知機能の低下の年齢関連のメモリ拡張を改善するため潜在的な革新的な非侵襲的治療アプローチ神経変性疾患。マウスにおける経頭蓋 photobiomodulation 療法 (PBMT) の実験プロトコルについて述べる。高齢者の BALB/c マウス (18 ヶ月) は、660 nm レーザー transcranially、一度 2 週間毎日と扱われます。レーザー透過率データは、背側の海馬を貫通、皮質表面から深さ 1 mm を頭皮にインシデントの赤色光の約 1% に達するを示しています。2 つの方法によって治療成績が評価されて: Barnes 迷路海馬依存空間学習・記憶タスク評価は、テストと測定海馬 ATP のレベル、生体エネルギー インデックスとして使用されています。バーンズ タスクから結果は高齢マウスのレーザー光を用いて年齢をマッチさせたコントロールと比較した場合の空間の記憶の強化を表示します。レーザー治療の後の生化学的分析は、海馬の ATP レベルを増加しました。我々 はメモリ性能の向上は赤色レーザー治療による海馬のエネルギー代謝の改善可能性があることを仮定します。マウスの観察は、このプロトコルをウサギ、猫、犬、猿などの並進運動神経科学で頻繁に使用される他の種に合わせることができる可能性があるので他の動物モデルに拡張できます。経頭蓋 photobiomodulation は、加齢に伴う認知機能障害で有望な治療アプローチがあります安全でコスト効果の高い療法です。

Introduction

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PBMT、または低レベルのレーザー光治療 (LLLT) は、レーザーまたは発光ダイオード (Led) の光エネルギーによって生体組織への刺激に基づく治療法を意味する一般的な用語です。〜 1100 nm、1 から 500 までの出力電力 600 から近赤外線 (NIR) ライト波長への赤と PBMT のほぼすべての治療が適用されます、mW と < 1 > から及ぶフルエンス 20 J/cm2 (鄭ら1参照)。

経頭蓋 PBMT は、外部光源 (Led またはレーザー)2を用いたヘッドの照射によって行われている非侵襲的光配信方法です。動物用には、このメソッドには、連絡先または動物の頭の上の LED またはレーザー プローブの接触の配置が含まれます。興味の治療の地域によって光プローブは (脳のすべての領域をカバー) の全体の頭の上や頭、前頭前野、前頭葉、または頭頂領域などの特定部分の上に配置できます。頭皮、頭蓋骨、硬膜赤色/近赤外光の部分の透過は皮質表面レベルに到達し、光子エネルギー治療効果を生成するための十分な量を提供できます。その後、皮質レベルで配信光フルエンスもグレーと白の脳実質へ伝播される脳3のより深い構造に達するまで。

遠領域 (600-680 nm) と初期の近赤外領域 (800-870 nm) に赤のスペクトル バンドの光は、シトクロム c 酸化酵素は、ミトコンドリアの呼吸鎖4のターミナルの酵素の吸収スペクトルに対応します。それは、PBMT 赤/近赤外スペクトルでミトコンドリアの電子伝達の増加の結果からチトクロム酸化酵素、一酸化窒素 (NO) の光解離を引き起こすし、最終的には、5世代の ATP を増加に仮定されます。神経のアプリケーションに対する潜在的な neurostimulatory の利点脳メソッドは、さまざまな外傷性の脳損傷 (TBI)6、齧歯動物モデルを含む、臨床研究で報告されている頭蓋照射を用いた PBMT急性期脳卒中7アルツハイマー病 (AD)8パーキンソン病 (PD)9うつ病の10、および高齢化11

脳の老化は、学習と記憶12などのいくつかの認知機能に影響を与える否定的神経心理学的条件と見なされます。ミトコンドリアは、ATP の生産および神経細胞の生体エネルギーを担当主な器官です。海馬13などの空間的ナビゲーション メモリにリンクされている脳領域の加齢に伴う赤字に関連するミトコンドリア機能障害が知られています。頭蓋治療赤色/近赤外光行為主にミトコンドリアのエネルギー代謝の変調、ので、海馬に十分な用量で配信された光は空間記憶の結果14の改善につながります。

現在のプロトコルの目的は、赤い光の低レベルを用いたマウス頭蓋 PBMT 手順をデモンストレーションすることです。老齢マウスの頭の組織を通じて必要なレーザー光透過率測定値の説明します。また、バーンズ迷路、海馬依存性の空間学習とメモリ タスク、および生体エネルギー インデックスとしての海馬の ATP レベルとして使用されます動物の治療への影響を評価するため。

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Protocol

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すべてのプロシージャはケアと健康の国民の協会 (NIH; の実験動物の使用のためにガイドに従い実施されました。85-23 号の文書改訂 1985) タブリーズ医科大学学地域倫理委員会の承認と。

注意: このプロトコル クラス 3B レーザー機器のアプリケーションを含む、適切な訓練と安全のガイドラインの遵守が必要になります。クラス 3B レーザーは真剣に目を損傷することができます、皮膚を熱することができます。クラス 3B レーザーは火傷の危険とは見なされません。目の保護ゴーグルを着用する必要がありますすべての回でレーザー デバイスの作動。

1. レーザー光伝送実験

注: ここで使用される 3 18 ヶ月歳の男性 balb/c マウスから得られたタブリーズ医科大学学動物施設。60 mW レーザー (660 nm) 光源として円形ビーム直径 2.5 mm の図形が使用されます。レーザー ソースはガウス分布と円偏光を生成し、連続波モードで動作します。10 nW 解像度、正方形の 1 cm2フォト ダイオードのアクティブ エリア、400 から 1100 nm までのスペクトル応答範囲とコマーシャル フォト ダイオード電源メーターを使用して、サンプルを送信光パワーを測定します。

  1. サンプル準備
    1. 新鮮なサンプルを得るために深くケタミン (100 mg/kg) とキシラジン (10 mg/kg) の混合物とマウスを麻酔します。
    2. 肩の真上に位置するポイントから始まって通常のハサミでマウスの頭を解剖します。
    3. 顎の腹側向くように、頭を回転させます。下顎の接合部の抵抗を気づいたまで口腔内を円滑に斜め解剖はさみをスライドさせます。頭蓋骨、下顎骨骨をリンクすべての大きな筋肉を切り取って捨てます。
    4. 斜め解剖はさみを使って、口蓋骨を削除します。
    5. カーブタイプ鉗子を使用して、頭蓋骨を取り巻くすべての肉を破棄します。
    6. 頭蓋骨の下の部分を解剖し、慎重に曲がりヘラで残りの頭蓋骨から脳を取る。
    7. 組織、スライスに適しているので 2% アガロースゲルのままの脳組織を修正します。
      注: そのまま頭蓋骨を取得プラス頭皮のサンプルのために脳組織に除去されるべき損傷せず動物の頭の腹側から頭の背の部分。
  2. 脳スライスの手順
    1. Vibratome マウント ブロックの表面に瞬間接着剤 (~0.05 mL) のドロップを広がってください。
    2. 慎重に vibratome ブロックを取り付け、脳の腹側表面は、下向きにアガロース ブロックを添付し、位置を調整します。
    3. 少しアガロース ブロックの上面に vibratome のブレードに一致し、プライマリ レベルとしてカッター値を記録します。
    4. 氷冷生理食塩水で vibratome タンクを記入します。
    5. 満足なスライスを取得する vibratome パラメーター (例えば、スライス厚 1 mm、速度 [デバイス単体で 5 の 5] と振動 [装置で 5 の 5]) を調整します。
    6. 1,000 μ m の厚みで脳をスライスに横カットします。
      メモ: スライスは皮質表面で区切られた脳の部分と平面配置 1,000 μ m (背側海馬) は皮質表面に劣る。
    7. 光学ガラスの表面に一滴の水 (~0.05 mL) を追加し、その上に脳スライスを入れてください。水が脳にスライスの滴を追加し、その上に 2 番目の光学ガラスを慎重に配置します。
      注: 一滴の水は、組織の乾燥や粗面からの散乱光を防止するためにサンプル ガラス境界を追加する必要があります。
  3. 頭の組織を介して光透過率の測定
    1. 反射ミラー、パワー メーター ユニット、レーザー デバイスを含む、光学機器を設定します。
      注意: レーザーの電源を入れる前に保護の目眼鏡をかけます。
    2. 電源メーターのサンプルがない場合は、レーザー デバイスをオンにし、フォト ダイオードのアクティブな領域に垂直の梁を導くための適切な距離に位置していますミラーにレーザー光線を集中します。
      注: 光透過率測定は、本社組織を抽出した後の 30 分以内常温 (23-25 ° C)、暗室で実行する必要があります。
    3. スライスした脳組織での測定を実行します。
      1. 電源メーターの表面に 2 つの空白の光学ガラスを配置します。
      2. 送信光パワーを読む (私0) 電源メーターの表示画面と値を記録します。
      3. ゆっくり脳のサンプルは、2 つの光学ガラスにつつまれて、電源メーターの表面に、組織の各領域の光線を焦点、送信電力を読むし、記録値。
    4. 頭蓋骨と頭皮での測定を実行します。
      1. 電源メーターの表面に空白の光学ガラスを配置します。
      2. 送信光パワーを読む (私0) 電源メーターの表示画面と値を記録します。
      3. 軽く新鮮な頭蓋骨と光学ガラスを配置プラス電源メーターの表面の組織を頭皮、前ゾーンに光ビームを一致、送信電力を読み取って値を記録します。
      4. 信号対雑音比を最大化するために光の透過率測定、少なくとも 3 を繰り返してすべてのサンプルのための x。
        注: 前のゾーンに配置は、耳の前方基地を通して引かれた線を約 3 mm。頭蓋骨と頭皮組織の厚さは、標準的なキャリパーによって測定されます。

2. Photobiomodulation 療法 (PBMT)

注: 45 男性 balb/c マウス 15 匹のマウスの 3 つのグループに割り当てられているが使用されました。グループは、偽 PBMT を受け取った高齢者コントロール マウス (18 ヶ月) および PBMT を受け取った高齢者 PBMT マウス (18 ヶ月)、偽 PBMT を受け取った若いコントロール マウス (2 ヶ月) で構成されていました。偽 PBMT 治療は、グループが非アクティブのレーザー治療、PBMT と同じから成っていた。マウスはタブリーズ医科大学学動物施設から得られた、24-25 ° C と 55% の相対湿度で 12 h の光と 12 時間日長で暗い処理単位の神経科学研究センター (中央) を保持している動物に収容されました。食料と水は、自由を提供されました。すべてのマウスは、治療前に、少なくとも 1 週間の順応されました。

  1. レーザー治療の手順
    注: 連続波モードでは 660 nm の波長を持つ半導体 GaAlAs レーザー経頭蓋 PBMT 治療に使われました。レーザー デバイスは、200 ± 2 mW の出力電力と 0.03 cm2のスポット サイズと 6.66 W/cm2の照度で稼動していた。15 頭皮表面に配信された 99.9 J/cm2各セッションごとの平均フルエンス照射の s。照射された投与 1 x 2 週連続の毎日。
    1. セラピー ルームでは、治療を開始する前に約 20 分にホームの檻の中でマウスをもたらします。
    2. 電気のプロテクターを壁のコンセントに接続します。
    3. 電気のプロテクターにレーザー デバイスのプラグを挿入します。
    4. 任意の表面に傷を防ぐために透明ナイロン膜を用いたレーザー プローブの先端をカバーします。
    5. 慎重にレーザー デバイスのチャンネルにプローブを接続します。
    6. レーザー デバイスをオンにし、ウォーム アップするため数秒を待ちます。、
    7. 照射時間と操作のモードを含むレーザー/治療パラメーターを調整します。
    8. 任意のサンプルがない場合は、レーザー装置の電源メーターのアクティブな領域にプローブの先端に連絡してレーザーの平均電力を決定します。値を記録します。
    9. 校正を繰り返して (ステップ 2.1.8) 少なくとも 5 x を読んで電源メーターからインシデントの権限画面を表示して値を記録します。
    10. 慎重に手のひらの上で動物の首の背側皮膚にマウスを押したまま、その頭を固定します。
      注: 現在のプロトコル レーザー プローブは 〜 3 mm を耳の内部のベースを結ぶ線は、前のゾーンに配置します。
    11. 軽く約 3 mm、耳の前方基地線を正中線で頭皮に直接プローブの先端を配置します。
      注: 保持でプローブを腹部の平面に対して約 45 ° の角度。
    12. 動物の目に直接照射を避けるために頭にプローブの先端がファーストコンタクトし、レーザー装置に入れます。
    13. レーザーをオンに、照射の終了するまでプローブを安定保持します。
    14. 療法の終了後、頭からレーザー プローブを撤回、ゆっくりマウスをケージに戻ります。
    15. レーザー デバイスの電源を切り、デバイスからプローブを外します。
    16. 適切な光学式洗浄機にレーザー プローブをクリーンアップします。
    17. 動物実験施設にマウスを転送します。

3. 行動のタスク

  1. オープン フィールド テスト
    1. 評価、運動としてオープン フィールド テスト中に旅の総距離によってそれぞれのマウスの活動は上記15
  2. バーンズ迷路課題
    1. 装置
      注: 空間の学習と記憶のタスクは、バーンズ迷路16で実行されます。この神経行動学的タスクのために使用される装置から成っている黒い木 (直径 95 cm) 20 等距離、作られた円形プラットフォーム、プラットフォームの境界部から 3 cm 上にある 5 cm 径孔。装置は降りてから動物を防ぐために床から高い 50 cm です。可動式の黒いプラスチックのエスケープ ボックス (20 cm × 15 cm × 5 cm) エスケープ穴下に置かれます。黒の迷路、白いマウスをテストするため使用され、追跡システム ソフトウェアが使用される場合に、黒いマットが迷路下に配置します。
      1. 迷路装置を明るい間接照明と静かな部屋の中央に配置します。
      2. 作業部屋のドアの外側に「入らない」記号を配置します。
      3. 視覚空間的手がかりを周囲の壁に取り付けます。
      4. 迷路のプラットフォーム上のデジタル ビデオ カメラの位置します。
      5. 削除不要な嗅覚の手がかりを 70% エタノールで迷路のプラットフォームの表面をきれいにします。
      6. 嗅覚キューとして使用するエスケープ ボックスの内側に動物のホーム ケージから寝具の少量を追加します。
    2. 適応セッション
      1. マウスに慣れるために、実験を開始する前にタスク ルーム約 30 分に各マウスをもたらします。
      2. 檻から、マウスを削除し、優しく 1 分のエスケープ ボックスで動物を配置します。
    3. トレーニング セッション
      注: トレーニング セッションは、4 日間連続で各マウスに対して繰り返されます。
      1. そっとエスケープ ボックスから、マウスを削除します。
      2. アリーナの中央にマウスを置きマウスの上にスタート室を置きます。
      3. 10 後スタート室を削除 s、3 分アリーナを探索するマウスを許可するとします。
      4. 静かにコンピューター領域にノイズ キャンセルのヘッドフォンに移動します。
      5. プラットフォーム レベルで約 80 dB の騒音白で構成される否定的な聴覚刺激をトリガーし、マウスを録画を開始します。
      6. ホワイト ノイズの電源を切り、マウス エスケープ ボックスに入ったときの録画を停止します。1 分のボックスで妨げられていないままに動物を許可します。
      7. エスケープ ボックスからマウスを取り外して、そのケージに戻します。
      8. 3.4.2 3.4.7 を介しての手順を繰り返します 3 分間隔繰り返し試験を一日あたり 4 倍。
        注: すべての試験の間アリーナ面から尿や便を削除し、70% エタノールで迷路をきれい。
    4. プローブ トライアル セッション
      1. 最後の訓練試験終了後、24 時間後、迷路のプラットフォームからエスケープ ボックスを削除、手順 3.4.5 を通じて 3.4.2.
      2. 3 分後にホワイト ノイズを切りビデオテープに録画を停止します。迷路・ アリーナからマウスを取り外して、そのケージに戻します。
      3. すべての動物がテストされた後は、迷路のプラットフォームおよびスタート室をクリーニングします。室内灯の電源を切り、ドアから「入らない」サインを取り外します。
      4. さらに分析のための外付けハード ドライブにテスト セッションからのビデオ録画を格納します。
      5. ビデオ追跡のソフトウェア プログラムと研修 4 日間ターゲットの穴を見つけるために遅延時間と時間を含む記録されたビデオからの興味のパラメーターはプローブ トライアル セッション中にターゲット作業領域で過ごした抽出を設定します。

4 生化学的評価

  1. 海馬の ATP レベル
    1. 深く (体重の 1 グラムあたり 100 mg) ケタミン ・ キシラジン (体重の 1 グラムあたり 10 mg) の混合物の腹腔内注入各マウスを麻酔します。
    2. 動物の首をはねるし、急速に頭蓋骨から脳組織を取り除きます。
    3. 海馬を解剖し、組織ホモジナイザーを用いた冷たいサンプル バッファー (キットで提供されます) で組織をホモジナイズしてください。
    4. すぐに 4 ° C で 3 分間 2,000 x gでホモジネートを遠心します。
    5. クリーン チューブに上清を転送します。
    6. 吸光光度を使って海馬の ATP レベルを評価する方法11を前述のよう。

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Representative Results

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統計解析

二元; バーンズ トレーニング セッションから取得したデータの統計的分析を行った他の行動テストやグループ間での海馬の ATP レベルの解析がテューキー事後テストが続く一方向の分散分析によってを行った。すべてのデータは ± 標準偏差 (SD) の手段として示されているレーザ伝送データを除く (SEM)、平均値の標準誤差 ± の手段として表されます。有意水準はp < 0.05 に設定されました。

レーザー光透過特性

レーザー光 (660 nm) 頭蓋骨と頭皮組織透過 (0.85 ± サンプル厚さ 0.09 mm) 高齢マウスの頃 15.67% ± 0.87% レーザービーム前 (図 1) に集中していた。この光の透過率に基づいて以来、頭皮表面に初期のフルエンスは 99.9 J/cm2 (15 [s] x 6.66 [W/cm2])、それ推定 16 J/cm2の近似フルエンスは皮質表面に達したこと。

レーザー透過率、高齢者の脳の 1 mm スライスでは 10.10% ± 0.95% (図 1)。これらの値から光のフルエンスがおよそ 1.6 J/cm2 1 mm の深さで皮質表面から大脳皮質組織レベルで 16 J/cm2から減少を推定することができます。

オープン フィールド試験

すべての実験グループ (図 2) の間でオープン フィールド テストで自発運動に統計的有意差はありませんでした。

バーンズ迷路課題

潜脱をバーンズ迷路課題中 4 日トレーニングと実験群間分析し、双方向の分散分析は日 (p < 0.001) のグループ (p < 0.001)、重大な影響を明らかにされる x デー (pないグループが= 0.47)。データの集団解析を示した高齢者対照動物の待ち時間が大幅に超える (p < 0.01) 3 番目に若いコントロール群と 4 番目 (p < 0.001) 曜日トレーニング セッション。しかし、PBMT 治療高齢マウスの待ち時間だった 4 日目 (p < 0.05) 高齢者コントロール マウス (p < 0.01) と比較して有意に短かった (図 3)。プローブ トライアル セッションでは、高齢者コントロール マウスはターゲット作業領域の若いコントロール マウス (p < 0.01) と比較して大幅に短い時間を過ごした。ただし、マウスを過ごした高齢者コントロール マウス (p < 0.05) と比較してターゲット作業領域で大幅に長く回高齢者 PBMT 扱われます (図 4)。

海馬の ATP レベル

高齢者のマウスは海馬の ATP レベル若いコントロール マウス (p < 0.05) と比較して大幅に減少を持っていた。ただし、高齢者 PBMT マウスの海馬における平均の ATP の内容が (p < 0.05) 高齢者コントロール マウスのそれらより大きく (図 5)。

Figure 1
図 1: 頭蓋骨と頭皮と脳組織を介して光透過率データをレーザーします。データは、平均 ± SD. SD として表現される標準偏差を =。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください

Figure 2
図 2: オープン フィールド テストから運動データデータは、平均 ± SEM. PBMT として表されます = photobiomodulation 療法;SEM = 平均値の標準誤差。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください

Figure 3
図 3: 講習会の 4 日の間にマウスのグループ遅延をエスケープします。値を表す平均 ± SEM. * *p < 0.01 と * * *p < 0.001 若いコントロール マウスと比較して。#p < 0.05、高齢者コントロール マウスと比較して。PBMT = photobiomodulation 療法;SEM = 平均値の標準誤差。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください

Figure 4
図 4: プローブのセッションの異なるグループでターゲット作業領域で費やされた時間。値を表す平均 ± SEM. * *p < 0.01、若いコントロール マウスと比較して。#p < 0.05、高齢者コントロール マウスと比較して。PBMT = photobiomodulation 療法;SEM = 平均値の標準誤差。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください

Figure 5
図 5: 海馬組織における ATP の内容。値を表す平均 ± SEM. *p < 0.05、若いコントロール マウスと比較して。#p < 0.05、高齢者コントロール マウスと比較して。PBMT = photobiomodulation 療法;SEM = 平均値の標準誤差。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください

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Discussion

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マウスにおける経頭蓋 PBMT プロシージャを行なうためのプロトコルについて述べる。このプロトコルは、特に齧歯動物に焦点を当てた photobiomodulation 研究所にターゲットします。しかし、このプロトコルは、ウサギ、猫、犬、猿など、神経科学の分野で頻繁に使用される他の実験動物に適応できます。

現在、経頭蓋 PBMT 赤/近赤外レーザーと Led の調査に関心が高まっています。齧歯動物の全体の治療手順を実行正常に、するために考慮するいくつかの基本的な手順があります。

最初に、生きている動物のすべての治療前に、光の透過度を精密に測定動物の頭部組織を通じて最適な光子用量 (J/cm2) を提供するために重要です。

第二に、いくつかのパラメーターはどの脳領域の病理によって影響を受けるし、治療対象に基づき、最適化する、光の透過性を最大化し、肯定的な結果の可能性を高める必要があります。照射時間、治療間隔、応用放射照度、フルエンスが含まれます。たとえば、高齢の動物モデルでは、これらの地域は、加齢に伴う病態2にリンクされているために、脳の海馬と前頭葉に十分な線量を提供することが重要です。標的組織に最適なフルエンス率は PBMT のもう一つの重要な要因です。ほとんどの研究者は、フルエンス (J/cm2) のみならずフルエンス配信レートに脳対象組織における二相性反応が存在することを考慮する怠ることは光の透過率に影響を与える要因について説明します。つまり、1 J/cm2を 1 分以上を配信のフルエンスは 1 J/cm2以上 1 s17,18を配信と同等ではありません。

また経頭蓋 PBMT 研究を実行する前に考慮すべきいくつかの付加的な要因があります。齧歯動物の頭蓋 PBMT は、レーザーを使用して適用される一般的または Led プローブ プローブ先端のサイズが動物の脳の大きさに縮小します。齧歯動物、中出力レーザーで申請 (≤ 500 の電源出力 mW) 短時間で光エネルギーの大きい量を提供でき、動物の治療時間と治療のストレスを軽減。クラス 3B レーザーは PBMT の用量範囲 (引時間: 20 J/cm2) で重要な光熱効果を持たない場合、頭蓋の適用時に氷やゲルなどの透明な光物質で頭皮表面を冷却がお勧めします。

いくつかの実験的頭蓋 PBMT 研究で光ファイバー、レーザーや LED のプローブ、頭の特定の小さな領域の照射のための利点のためではなく使用されます。例では、焦点の虚血性脳卒中、脳外傷と PD モデルでは、被害面積の正確な照射の保証されています。しかし、光ファイバーは一般的にこれは 1 つのセッションで提供されるエネルギーの総量に影響を与え、低下領域を補うために 1 つ以上の場所に手順を繰り返す研究者が必要になりますので小さなビーム領域をあります。最も実験的頭蓋 PBMT 学頭の照射は警告、無麻酔の動物で行われています。動物の安定性を確保するために手動の頭の保持と抑制装置の使用が推奨されます。手動で保持の方法、その動物が急に動く可能性がありますおそらく照射ゾーンからその頭を移動、光照射部分をムダかもしれないという事実のため。また、両方の方法は動物に余分なストレスを引き起こすことができる、潜在的な交絡要因かもしれない。いくつかのケースでは、麻酔下の動物で照射手順を実行します。あまりにも多くの麻酔には神経科学研究の実験成果が悪影響するに注意してください。したがって、実験のこれらのタイプの照射間隔を短くを慎重に考慮する必要があります。

本研究ではまず、頭蓋骨を介して光の透過率を測定したプラス男性 balb/c の頭皮老化マウス大脳皮質の表面に達し、660 nm レーザーのエネルギーの量を決定します。剃っていない頭皮の表面で光の初期の 16% は脳を通じて転送されることが示唆されました。男性の BALB/c マウスで他の研究所から伝送データは、670 nm のレーザー光の 1.2% だけだったそのまま頭蓋骨19を浸透することが示されています。また、670 nm の LED の光の約 90%、マウス頭蓋20内部減衰されることが報告されています。

皮質組織レベルで赤レーザーの効果的な neurostimulatory 投与量は、当社研究所11で行われた前回調査で確認されました。ご紹介する 8 J/cm2レーザの毎日皮質フルエンス 660 nm モデル11を老化マウスで procognitive 効果があります。現在の研究の療法で約を提供する 16 J/cm2大脳皮質の表面にままする必要レーザー上 15 秒、マウスが容認されました。現在の仕事も海馬表面で受信した光パワーを測定しました。実験の結果に基づき、10% のおおよその値は、1 mm スライス約 1.6 の光フルエンスに対応する、高齢者の脳の透過をレーザーで測定した J/cm2は皮質表面から深さ 1 mm に達する。BALB/c マウス脳を使用して他の研究からのデータは、脳組織21の 1 ミリに 670 nm の LED の光強度の 65% 削減を明らかにしました。また、670 nm の LED の光の約 2.5% が頭蓋骨表面から黒質緻密 (SNc) エリア22までの距離 5 mm の脳組織の深さに達することが示されています。

海馬は、空間記憶23の統合に枢機卿の役割を果たしています。実際には、海馬生体エネルギー容量は、空間的ナビゲーション記憶と学習に関連付けられます。ここで提示した知見は、光量約 1.6 J/cm2海馬レベル高齢マウスにおける空間記憶転帰の改善を生成するのに十分なことをお勧めします。それは 660 の特定の波長の赤色レーザーによって誘発されるようである海馬のエネルギー代謝の改善により認知タスク (バーンズ迷路) でメモリ性能の向上ができると推定されることができる nm。

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Disclosures

P. c. の給与は脳と行動研究財団 (NARSAD 若手研究者賞)、ハーバード大学の精神科 (デュポン ウォーレン親睦とリビングストン賞)、によって支えられた、Photothera 社によって無制限の許可。薬の寄付は、テバから来た。旅費の精算は、ファルマシア ・ アップジョンから来た。P. c. は、ヤンセン研究開発から相談料を受けた。P. c. は、精神医学における近赤外光の使用に関連するいくつかの特許を提出しています。PhotoMedex 株式会社は、臨床研究の 4 つのデバイスを供給しました。P. c. は、Litecure 株式会社大鬱病性障害の治療のための経頭蓋 photobiomodulation に関する研究を実施して健常者の研究を行うことから無制限の資金を受けています。P. c. は、近赤外光を基に治療の新しいモダリティの開発に焦点を当てて会社 (Niraxx 光治療) を共同設立彼はまた同じ会社のコンサルタントです。P. c. では、全般性不安障害の経頭蓋 photobiomodulation に関する研究を実施する脳科学から資金を受け取った。他の著者はある利益相反を開示します。

Acknowledgments

この仕事に支えられ助成金 (号 61019 付与) タブリーズ大学医療科学から s. s. e.LiteCure LLC は、ニューアーク、DE、アメリカ L.D.T. からの出版助成金著者らは、免疫学専攻教育開発センター (EDC) タブリーズ医科大学のための科学のような支援に感謝したいと思います。

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Ketamine Alfasan #1608234-01
Xylazine Alfasan #1608238-01
Agarose Sigma #A4679
Superglue Quickstar
Vibratome Campden Instruments #MA752-707
Optical glass Sail Brand #7102
Power meter Thor labs #PM100D
Photodiode detector Thor labs #S121C
Caliper Pittsburgh
GaAlAs laser Thor Photomedicine
Etho Vision Noldus
Centrifuge Froilabo #SW14R
Earmuffs Blue Eagle
Digital camera Visionlite #VCS2-E742H
Sterio amplifier Sony
Ethanol Hamonteb #665.128321
Barnes maze Costom-made
ATP assay kit Sigma #MAK190
Elisa reader Awareness #Stat Fax 2100

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References

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マウスにおける経頭蓋 Photobiomodulation 療法のプロトコル
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Salehpour, F., De Taboada, L., Cassano, P., Kamari, F., Mahmoudi, J., Ahmadi-Kandjani, S., Rasta, S. H., Sadigh-Eteghad, S. A Protocol for Transcranial Photobiomodulation Therapy in Mice. J. Vis. Exp. (141), e59076, doi:10.3791/59076 (2018).More

Salehpour, F., De Taboada, L., Cassano, P., Kamari, F., Mahmoudi, J., Ahmadi-Kandjani, S., Rasta, S. H., Sadigh-Eteghad, S. A Protocol for Transcranial Photobiomodulation Therapy in Mice. J. Vis. Exp. (141), e59076, doi:10.3791/59076 (2018).

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