Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

Zwei-Schiff Okklusion Mausmodell der zerebralen Ischämie-reperfusion

Published: March 1, 2019 doi: 10.3791/59078
Automatic Translation
*1,2,3,4,5, *6,7, 5
1Research Center of Translational Imaging, College of Medicine, Taipei Medical University, 2Radiogenomic Research Center, Taipei Medical University Hospital, Taipei Medical University, 3Department of Radiology, School of Medicine, College of Medicine, Taipei Medical University, 4Department of Medical Imaging, Taipei Medical University Hospital, Taipei Medical University, 5Department of Medical Research, Taipei Medical University Hospital, Taipei Medical University, 6Department of Surgery, School of Medicine, College of Medicine, Taipei Medical University, 7Division of General Surgery, Department of Surgery, Taipei Medical University Hospital
* These authors contributed equally

Summary

Ein Maus-Modell der zerebralen Ischämie-Reperfusion wird gegründet, um die Pathophysiologie des Schlaganfalls zu untersuchen. Wir nach distal verbinden rechts mittlere zerebrale Arterie und rechts gemeinsame Halsschlagader und Blutfluss nach 10 oder 40 min der Ischämie wiederherstellen.

Abstract

In dieser Studie wird eine mittlere zerebrale Arterie (MCA) Okklusion Mausmodell eingesetzt, um zerebrale Ischämie-Reperfusion zu studieren. Eine reproduzierbare und zuverlässige Maus-Modell eignet sich zur Untersuchung der Pathophysiologie der zerebralen Ischämie-Reperfusion und mögliche therapeutische Strategien für Patienten mit Schlaganfall zu ermitteln. Variationen in der Anatomie des Kreises von Willis C57BL/6 Mäusen beeinflusst ihr Infarkt-Volumen nach zerebraler Ischämie-induzierte Verletzung. Studien haben gezeigt, dass distale MCA-Verschluss (MCAO) kann dieses Problem überwinden und eine stabile Infarkt-Größe. In dieser Studie stellen wir ein zwei-Schiff Okklusion Mausmodell der zerebralen Ischämie-Reperfusion durch die Unterbrechung des Blutflusses zu den richtigen MCA. Wir verbinden die richtige MCA und rechts gemeinsame Halsschlagader (CCA) nach distal und Wiederherstellung der Durchblutung nach einer gewissen Zeit der Ischämie. Diese Ischämie-Reperfusion Verletzungen induziert ein Infarkt stabile Größe und ein Verhaltens Defizit. Peripheren Immunzellen infiltrieren die ischämische Gehirn Infiltration innerhalb von 24 h. Darüber hinaus ist der neuronale Verlust im kortikalen Bereich weniger für eine längere Dauer der Reperfusion. Daher eignet sich dieses zwei-Schiff Okklusion-Modell für die Untersuchung der Immunantwort und neuronale Erholung im Bezugszeitraum nach zerebraler Ischämie Reperfusion.

Introduction

Der zerebralen Ischämie-Reperfusion-Maus-Modell ist eines der am weitesten verbreitete experimentelle Ansätze zur Untersuchung der Pathophysiologie der Ischämie-induzierte Gehirn Verletzungen1. Da zerebraler Ischämie-Reperfusion der peripheren Immunsystem aktiviert, peripheren Immunzellen in das ischämische Gehirn zu infiltrieren und verursachen neuronale Schäden2. Daher ist eine zuverlässige und reproduzierbare Mausmodell, die zerebrale Ischämie-Reperfusion imitiert erforderlich, um die Pathophysiologie des Schlaganfalls zu verstehen.

C57BL/6J (B6) Mäuse sind die am häufigsten verwendeten Dehnung in Schlaganfall-Experimente, weil sie genetisch leicht manipuliert werden können. Stehen zwei gemeinsame Modelle von MCAO/Reperfusion, die den Zustand der zerebralen Ischämie-Reperfusion zu imitieren. Das erste ist das Intraluminal Filament Modell des proximalen MCAO, wo ein Silikon-beschichtete Faden eingesetzt wird, um den Blutfluss in die MCA intravascularly verdecken; die verschließenden Filament wird anschließend entfernt, um Blut fließen3wiederherzustellen. Eine kurze Okklusion Dauer führt zu einer Läsion der subkortikalen Region, während eine längere Dauer der Okklusion Infarkte in den kortikalen und subkortikalen Bereichen verursacht. Das zweite Modell ist die Ligatur-Modell der distalen MCAO, einhergehende extravascular Ligatur der MCA und CCA, den Blutfluss durch die MCA zu reduzieren, nach der Blutfluss durch die Entfernung des Nahtmaterials und Aneurysmen Clip4wiederhergestellt wird. In diesem Modell ein Infarkt wird in den kortikalen Bereichen verursacht, und die Sterblichkeit ist gering. Da die Ligatur der MCAO/Reperfusion Modell Kraniektomien Ortsbild des distalen MCA aussetzen erfordert, kann die Website leicht bestätigt werden, und prüfen, ob die Durchblutung in den distalen MCA während des Verfahrens unterbrochen wird ist einfach.

B6-Mäuse zeigen erhebliche Unterschiede in der Anatomie der Kreis von Willis; Dies beeinträchtigt das Infarkt-Volumen nach zerebraler Ischämie-Reperfusion5,6,7. Derzeit kann dieses Problem durch Unterbindung der distalen MCA8überwunden werden. In dieser Studie stellen wir eine Methode für die MCA-Durchblutung zubeißt und damit nach einer vorgegebenen Zeitspanne Ischämie Reperfusion. Zwei-Schiff-Okklusion des zerebralen Ischämie-Reperfusion Modells induziert transiente Ischämie des Gebietes der MCA durch Unterbindung des rechten distalen MCA und richtige CCA mit Blutfluss wiederhergestellt nach einer gewissen Zeit der Ischämie. Dieses Modell MCAO/Reperfusion induziert ein Infarkt stabile Größe, ein Großteil der Gehirn-infiltrieren Immunzellen im ischämischen Gehirn und einem Verhaltens Defizit nach zerebraler Ischämie-Reperfusion4.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Die institutionelle Pflege der Tiere und Nutzung Ausschüsse der Academia Sinica und Taipei Medical University genehmigt dieses Protokolls für den Einsatz von Versuchstieren.

(1) MCAO/Reperfusion Modell

  1. Geben Sie die Mäuse mit freiem Zugang zu Wasser und Chow, bis die Operation.
  2. Autoklaven der chirurgische Werkzeuge und desinfizieren Sie den OP-Tisch und Ausrüstung mit 70 % Ethanol. Tragen Sie einen Mundschutz und sterile Handschuhe. Verwenden Sie ein trockenes Korn-Sterilisator, um chirurgische Instrumente restilisieren, wenn mehrere Maus-Operationen in einem Experiment durchgeführt werden.
  3. Eine 8 bis 12 Woche alte Maus zu betäuben (Masse: 25 – 30 g) mit 0,8 % Chloral Hydrate, über eine intraperitoneale Injektion. Stellen Sie sicher, dass die narkotisierten Maus nicht über ein Pedal Reflex (wie mit einer festen Fuß Klemme getestet) nach der Anesthetization.
  4. Verwenden Sie Tierarzt Salbe, um Augentrockenheit für die Maus zu verhindern, während es unter Narkose ist.
  5. Verwenden Sie eine nicht-invasive Blutdruck-System, um die Maus Blutdruck zu überwachen.
  6. Verwenden Sie ein physiologische monitoring-System zur Überwachung der Rektaltemperatur und arteriellen Blutgase. Aufrechterhaltung der Körpertemperatur auf 36,5 ± 0,5 ° C.
  7. Subkutan injizieren Sie die Maus mit einem prophylaktische Antibiotika (25 mg/kg Cefazolin)8.
  8. Platzieren Sie den Mauszeiger in die Rückenlage auf das Heizkissen.
  9. Verwenden Sie elektrischen Haarschneider, um die Haut durch das Rasieren der Maus Fell auf dem ventralen Halsbereich, sowie in der Region zwischen dem rechten Auge und Ohr verfügbar zu machen.
  10. Verwenden Sie Epilieren Creme, das Fell vom Körper der Maus und desinfizieren der Operationsstelle abwechselnd Scrbus mit Povidione-Jod und 70 % Ethanol.
  11. Mit Iris einer Schere schneiden Sie einen 1 cm langen Mittellinie Schnitt am Hals.
  12. Verwenden Sie Iris Zange vorsichtig frei von Vagus Nerven CCA sezieren ohne physische Verletzungen.
  13. Verwenden Sie 5-0 Seide Nähte, um CCA zu isolieren.
  14. Machen Sie einen 0,3 cm Schnitt in der Kopfhaut in der Mitte zwischen dem rechten Auge und Ohr.
  15. Verwenden Sie Microscissors, um die Temporalis Muskel um das Jochbein und squamosal Knochen freizulegen geschnitten.
  16. Verwenden Sie unter einem Stereomikroskop sezierenden eine Microdrill um eine 2 mm Durchmesser-Loch direkt über der rechten distalen MCA zu erstellen.
  17. Verbinden Sie den Kofferraum des rechten distalen MCA mit einer 10-0-Naht.
  18. Verdecken Sie mit Hilfe eines nichttraumatischen Aneurysma-Clips rechts CCA.
  19. Entfernen Sie nach 10 oder 40 min Ischämie Aneurysma-Clips und Naht Blutfluss in der MCA und CCA wiederherstellen.
  20. Verwenden Sie einen Naht Clip, um der Hautschnitt auf den Kopf zu versiegeln.
  21. Versiegeln Sie die zervikalen Hautschnitte mit einer einzigen Naht gefolgt von Halshaut mit Naht oder Grundnahrungsmittel9schließen.
  22. Buprenorphin (0,1 mg/kg) für Pain Relief9subkutan zu injizieren.
  23. Halten Sie die Maus Körpertemperatur auf 36,5 ± 0,5 ° C auf das Heizkissen, bis es vollständig aus der Narkose erholt hat. Das Tier, das Operation, um die Gesellschaft anderer Tiere durchlaufen hat, bis es vollständig erholt hat nicht zurück. Nicht unbeaufsichtigt lassen das Tier bis es ausreichend Bewusstsein wiedererlangt.
  24. Platzieren Sie den Mauszeiger in den Autoklaven Käfig, so dass es frei Zugang zu Wasser und Essen gehen, nachdem es vollständig erholt hat.

2. Färbung mit 2,3,5-Triphenyltetrazolium Chlorid

  1. Die Maus mit 0,8 % Chloral Hydrate über eine intraperitoneale Injektion zu betäuben.
  2. Verwenden Sie operative Schere, um das Tier zu enthaupten.
  3. Setzen Sie den Schädel mithilfe von Iris-Schere, um einen Einschnitt in die Haut des Kopfes zu machen.
  4. Mit operativen einer Schere schneiden Sie den vorderen Stirnbein.
  5. Verwenden Sie Iris-Schere zum Schneiden des Schädels entlang die sagittale Naht.
  6. Verwenden Sie einen Knochen Rongeur, beiseite schieben, die frontalen und parietalen Knochen und setzen das Gehirn.
  7. Verwenden Sie Iris Zange, um das Gehirn sezieren.
  8. Verwenden Sie eine Maus-Gehirn-Matrix und Rasierklingen, um 2 mm koronalen Scheiben zu erhalten.
  9. Färben Sie die Gehirnscheiben für 10 min bei 37 ° C mit 2 % 2,3,5-Triphenyltetrazolium-Chlorid (TTC) in 1 x Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung.
  10. Spülen Sie das Gehirn 2 X mit 10 % Formalin.
  11. Befestigen Sie das Gehirn in 10 % Formalin bei Raumtemperatur für 24 h.

3. Messung der Infarkt Größe

  1. Ordnen Sie die Abschnitte auf eine saubere Kunststoff Folie und orientieren Sie Querschnitte von rostral kaudalen.
  2. Scannen Sie die Folie mit Hilfe eines Scanners. Ein metrischen Lineal und stellen Sie sicher, dass es im gescannten Bild sichtbar ist. Die Folie umdrehen und die Rückseite zu scannen.
  3. Berechnen Sie die Infarkt-Fläche der einzelnen Abschnitte mit ImageJ-Software.
    1. Öffnen Sie die Image-Datei und richten Sie die Skala für das Bild.
    2. Verwenden Sie Freihandauswahl um den Infarkt-Bereich auszuwählen.
    3. Verwenden der Regionen von Interesse (ROI)-Manager, um den gewünschten Bereich zu messen.
  4. Summe der Infarkt-Bereiche für jeden Abschnitt und multiplizieren Sie das Ergebnis durch die Schnittdicke, das totale Infarkt Volumen zu schätzen.

4. statistische Analyse

  1. GraphPad Prism 6 verwenden, um festzustellen, die statistische Signifikanz mit der Student t-test.
    Hinweis: Die Fehlerbalken auf die Balkendiagramme darstellen Standardfehler des Mittelwerts (SEMs).
  2. Verwendung G * Power 3.1 zu den entsprechenden Stichprobenumfang ermitteln und führen Sie einen Power-Analyse-10.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Dieses MCAO/Reperfusion Verfahren produziert eine kortikale Infarkt in der Nähe der richtigen MCA und verursacht ein Verhaltens Defizit. Verschiedene Grade der Ischämie-induzierte Infarkt Volumen (Abb. 1AB) und neuronaler Verlust (Abbildung 1D) entstanden in der Hirnrinde des MCA-rechts durch eine Erhöhung der Ligatur Dauer. Dieser MCAO/Reperfusion Verletzungen verringert das Tier lokomotorischen Tätigkeit bei 48 h nach MCAO/Reperfusion (Abbildung 2). Ein Großteil der peripheren Immunzellen (CD45hohe Zellen) infiltriert auch ischämische Gehirn (ipsilateralen Hemisphäre) nach der zerebralen Ischämie-Reperfusion (Abbildung 3). Darüber hinaus wir dieses zwei-Schiff Okklusion-Modell mit dem MCAO-Modell verglichen und festgestellt, dass der Infarkt-Bände der beiden Modelle nicht signifikant unterschiedlich (Abbildung 4 waren). Die Sterblichkeit war gering (< 5 %) in den zwei-Schiff Okklusion Mausmodell der zerebralen Ischämie-Reperfusion. Wir Mäuse von weiteren Analysen ausgeschlossen, wenn starke Blutungen während der Operation stattgefunden hatte. Bei die chirurgischen Eingriffen korrekt befolgt wurden, war die Rate der tierischen Ausgrenzung aufgrund übermäßigen Blutungen aus Kraniektomien oder MCA weniger als 15 %. Verschluss der rechten MCA oder CCA allein nicht die Ursache für Herzinfarkt.

Figure 1
Abbildung 1: Infarkt Volumen und neuronaler Verlust sind positiv korreliert mit der Länge des Schiffes Okklusion. (A) repräsentative TTC Flecken von Hirnschnitten von Mäusen, 24 h nach der MCAO/Reperfusion. Die MCAO dauerte 10 oder 40 min. angezeigten Daten sind Vertreter von drei unabhängigen Experimenten. (B) Quantifizierung der Infarkt Volumen. Die Fehlerbalken darzustellen SEMs; n = 8; p < 0,05. (C) die MAP2 Ausdruck in B6 Gehirnen bei 24 h nach MCAO/Reperfusion wurde unter Verwendung Immunohistochemistry bestimmt. MAP2-Negative Bereiche werden durch eine gestrichelte Linie in das repräsentative Bild der MAP2 Färbung des Abschnitts Gehirn eingeschlossen. (D) Quantifizierung der MAP2 negativen Bereich. MAP2-negativen Bereich (%) = ipsilateral MAP2-negativen Bereich / kontralateralen Hemisphäre X 100; n = 3; * p < 0,05.

Figure 2
Abbildung 2: lokomotorische Aktivität verringert nach zerebraler Ischämie-Reperfusion. (A) lokomotorische Aktivität war 48 h nach der MCAO/Reperfusion analysiert. Die MCAO dauerte 40 Minuten. Die Daten wurden für 60 min in ein Open-Field-Test aufgezeichnet. Mäuse Tracking Entfernungen wurden mit CleverSys TopScan 1.0 analysiert. Die Schein-Kontrollgruppe umfasste Mäuse, die die Operation ohne die Okklusion der MCA oder CCA unterzogen hatte. (B) Quantifizierung der Abstand von der Schein und die MCAO/Reperfusion Mäuse verschoben. Die Daten werden dargestellt als ± SEM bedeuten; n = 7; p < 0,05. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.

Figure 3
Abbildung 3: peripheren Immunzellen in der ischämischen Hemisphäre nach zerebraler Ischämie-Reperfusion infiltrieren. (A) Gehirn-Infiltrating Immunzellen (CD45hohe Zellen) in der ipsilateralen und kontralateralen Hemisphäre auf 24 h nach der MCAO/Reperfusion, vom Fluss Cytometry analysiert wurden. Die Isolation der Gehirn-infiltrieren Immunzellen wurde in einer früheren Studie4beschrieben. Die MCAO dauerte 40 min. (B) die Quantifizierung der Gehirn-infiltrieren Immunzellen in der ipsilateralen und kontralateralen Hemisphäre auf 24 h nach der MCAO/Reperfusion. Die Daten werden dargestellt als ± SEM bedeuten; n = 4; p < 0,05.

Figure 4
Abbildung 4: Infarkt Volumen unterscheidet nicht zwischen MCAO- und MCAO/Reperfusion verursachte Verletzungen. (A) repräsentative TTC Flecken von Hirnschnitten von Mäusen, 24 h nach der MCAO. In der Versuchsgruppe MCAO wurde die richtige MCA dauerhaft abgeschnitten mit einem linken Schiff, während die richtige CCA 40 min Transient ligiert war. In der Versuchsgruppe MCAO/Reperfusion (MCAO/Rep) war das Verfahren im Abschnitt 1 des Protokolls beschrieben. Die MCAO dauerte 40 min. (B) Quantifizierung der Infarkt Volumen. Die Daten werden dargestellt als ± SEM bedeuten; n = 7.

Table 1
Tabelle 1: Vergleich der Infarkt Volumen und Variabilität von verschiedenen Experimenten. Das Infarkt-Volumen wurde bei 24 h nach der MCAO/Reperfusion von drei unabhängigen Experimenten bestimmt. Die MCAO dauerte 40 min. SD = Standardabweichung; n = Anzahl der Mäuse pro Experiment verwendet.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Die MCAO/Reperfusion-Maus-Modell ist ein Tiermodell häufig eingesetzt, um transiente Ischämie bei Menschen zu imitieren. Dieses Tiermodell kann auf transgenen und Knockout-Mäusen Stämme zu untersuchen, die Pathophysiologie des Schlaganfalls angewendet werden. Besonders kritisch sind mehrere Schritte im Protokoll. (1) die Microdrill muss vorsichtig verwendet werden, wenn Sie ein Loch in den Schädel, mit unangemessene Handlung leicht verursachen Blutungen aus der MCA erstellen. (2) die MCA dürfen nicht beschädigt, und Blutungen muss vor und nach der Ligatur Verfahren vermieden werden. Schäden an der MCA wirkt sich auf das Niveau der Reperfusion in der ischämischen Gehirn-7. Der MCA Reperfusion Status muss nach der MCAO überprüft werden. Die Okklusion und die Wiederherstellung des Blutflusses MCA können mit einem Laser Doppler analysiert werden. (3) die zuständige Behörde sollte nicht bluten, während die CCA-Isolierung. (4) den Nervus Vagus darf nicht während der CCA-Isolation beschädigt werden, weil dies das Infarkt-Größe und die Wahrscheinlichkeit der Sterblichkeit erhöhen könnte. (5) die Körpertemperatur der Maus sollte beibehalten werden, um 36,5 ± 0,5 ° C. Hyperthermie erhöht die Infarkt-Größe und Wahrscheinlichkeit der Sterblichkeit11. Hypothermie reduziert die Infarkt nach zerebraler Ischämie12.

Die Bedeutung dieses MCAO/Reperfusion-Modells ist, dass es hoch reproduzierbare kortikalen Infarkte und Verhaltensstörungen Defizite4erstellen kann. Im Vergleich mit verschiedenen MCAO-Modellen, wie z. B. die hypoxisch ischämische (H / ich) Schlaganfall Modell wie beschrieben in einer früheren Studie8, dieses zwei-Schiff Okklusion Modell induziert eine relativ kleine Variabilität im Infarkt Volumen (der Variationskoeffizient reichten von 0,11-0,17) (Tabelle 1). Alternative Hub Modelle, wie das Intraluminal Filament-Modell können in einem unvorhersehbaren Infarkt Volumen aufgrund des unsicheren Status der Okklusion und Reperfusion nach Chirurgie13führen. Im Vergleich mit dem drei-Gefäß-MCAO Modell (Ligatur der MCA rechts und links und rechts CCAs)14, beinhaltet das vorgeschlagene Modell der Ligatur nur zwei Schiffe (die richtige MCA und richtige CCA), zerebralen Ischämie zu erreichen. Infolgedessen ist eine kürzere Operationszeit erforderlich als in der drei-Gefäß-MCAO-Modell. Die Haupteinschränkung dieses MCAO/Reperfusion-Modells ist, dass es Kraniektomien MCA Ligatur durchzuführen erfordert. Eine Studie zeigte, dass die Kraniotomie transcriptional Änderungen im Gehirn15verursacht. Daher ist eine Schein-Kontrolle erforderlich, um die Auswirkungen von MCAO/Reperfusion auf die Genexpression zu bestimmen.

Neuronaler Verlust im kortikalen Bereich ist geringer, wenn eine längere Dauer der Reperfusion eingesetzt wird. Studien haben gezeigt, dass der MAP2-negativen Bereich kleinere nach 7 Tagen der Reperfusion, verglichen mit 2 Tage Reperfusion4,16. Allerdings dürfte dieser Erholungseffekt in einem Gehirn mit Ischämie induziert durch eine Intraluminal Monofile Modell MCAO17,18. Darüber hinaus verträgt das Intraluminal Monofile Modell des MCAO die Infarkt-Größe für mindestens 7 Tage.

B6-Mäuse haben umfangreiche Besicherung zwischen die vorderen zerebralen Arterie und der MCA-19. Wenn wir dauerhaft die MCA im ischämischen Gehirn abgeschnitten, fanden wir, dass der Infarkt-Volumen nicht signifikant verschieden von den Mäusen mit einer reperfused MCA bei 24 h nach der MCAO (Abbildung 4). Daher empfehlen wir, dass der Blutfluss aus der vorderen zerebralen Arterie Sicherheiten für die Ischämie-Auswirkungen des Gebiets MCA kompensieren könnte, wenn die distale MCA dauerhaft verschlossen ist.

In dieser Studie die zwei-Schiff-MCAO/Reperfusion-Modell erstellt ein Ischämie-Reperfusion Verletzungen und verursacht peripheren Immunzellen in das ischämische Gehirn zu infiltrieren. Dieses Modell kann eingesetzt werden, um das Zusammenspiel zwischen Gehirn und Immunsystem zu untersuchen. Darüber hinaus kann es verwendet werden, testen, mögliche Neuroprotectants oder Medikamente, die die Immunantwort nach zerebraler Ischämie-Reperfusion modulieren.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Acknowledgments

Diese Arbeit wurde durch das Ministerium für Wissenschaft und Technologie, Taiwan (am meisten 106-2320-B-038-024, die meisten 105-2221-E-038-007-MY3 und die meisten 104-2320-B-424-001) und Taipei Medical University Hospital (107TMUH-SP-01) unterstützt. Dieses Manuskript wurde von Wallace wissenschaftliche Bearbeitung bearbeitet.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Bone rongeur Diener Friedman
Buprenorphine Sigma B-044
Cefazolin Sigma 1097603
Chloral hydrate Sigma C8383
Dissection microscope Nikon SMZ-745
Electric clippers Petpro
10% formalin Sigma F5304
Germinator dry bead sterilizer Braintree Scientific
Iris Forceps Karl Klappenecker 10 cm
Iris Scissors Diener 9 cm
Iris Scissors STR Karl Klappenecker 11 cm
Microdrill Stoelting FOREEDOM K.1070
Micro-scissors-Vannas HEISS H-4240 blade 7mm, 8 cm
Mouse brain matrix World Precision Instruments
Non-invasive blood pressure system Muromachi MK-2000ST
Operating Scissors STR Karl Klappenecker 14 cm
Physiological Monitoring System Harvard Apparatus
Razor blades Ever-Ready
Stoelting Rodent Warmers Stoelting 53810 Heating pad
Suture clip Stoelting
Tweezers IDEALTEK No.3
Vetbond 3M 15672 Surgical glue
10-0 suture UNIK NT0410
2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride Sigma T8877

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Woodruff, T. M., et al. Pathophysiology, treatment, and animal and cellular models of human ischemic stroke. Molecular Neurodegeneration. 6 (1), 11 (2011).
  2. Chamorro, A., et al. The immunology of acute stroke. Nature Reviews. Neurology. 8 (7), 401-410 (2012).
  3. Engel, O., Kolodziej, S., Dirnagl, U., Prinz, V. Modeling stroke in mice - Middle cerebral artery occlusion with the filament model. Journal of Visualized Experiments. (47), e2423 (2011).
  4. Lee, G. A., et al. Interleukin 15 blockade protects the brain from cerebral ischemia-reperfusion injury. Brain, Behavior, and Immunity. 73, 562-570 (2018).
  5. Barone, F. C., Knudsen, D. J., Nelson, A. H., Feuerstein, G. Z., Willette, R. N. Mouse strain differences in susceptibility to cerebral ischemia are related to cerebral vascular anatomy. Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism: Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 13 (4), 683-692 (1993).
  6. Kitagawa, K., et al. Cerebral ischemia after bilateral carotid artery occlusion and intraluminal suture occlusion in mice: evaluation of the patency of the posterior communicating artery. Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism: Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 18 (5), 570-579 (1998).
  7. Wellons, J. C. 3rd, et al. A comparison of strain-related susceptibility in two murine recovery models of global cerebral ischemia. Brain Research. 868 (1), 14-21 (2000).
  8. Doyle, K. P., Fathali, N., Siddiqui, M. R., Buckwalter, M. S. Distal hypoxic stroke: a new mouse model of stroke with high throughput, low variability and a quantifiable functional deficit. Journal of Neuroscience Methods. 207 (1), 31-40 (2012).
  9. Doyle, K. P., Buckwalter, M. S. A mouse model of permanent focal ischemia: Distal middle cerebral artery occlusion. Methods in Molecular Biology. , 103-110 (2014).
  10. Wayman, C., et al. Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability. Journal Of Visualized Experiments. (108), e53106 (2016).
  11. Noor, R., Wang, C. X., Shuaib, A. Effects of hyperthermia on infarct volume in focal embolic model of cerebral ischemia in rats. Neuroscience Letters. 349 (2), 130-132 (2003).
  12. Florian, B., et al. Long-term hypothermia reduces infarct volume in aged rats after focal ischemia. Neuroscience Letters. 438 (2), 180-185 (2008).
  13. Carmichael, S. T. Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose. NeuroRx: The Journal of the American Society for Experimental NeuroTherapeutics. 2 (3), 396-409 (2005).
  14. Lin, T. N., Te, J., Huang, H. C., Chi, S. I., Hsu, C. Y. Prolongation and enhancement of postischemic c-fos expression after fasting. Stroke. 28 (2), 412-418 (1997).
  15. Glazier, S. S., O'Rourke, D. M., Graham, D. I., Welsh, F. A. Induction of ischemic tolerance following brief focal ischemia in rat brain. Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism: Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 14 (4), 545-553 (1994).
  16. Tachibana, M., et al. Early Reperfusion After Brain Ischemia Has Beneficial Effects Beyond Rescuing Neurons. Stroke. 48 (8), 2222-2230 (2017).
  17. Gan, Y., et al. Ischemic neurons recruit natural killer cells that accelerate brain infarction. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (7), 2704-2709 (2014).
  18. Li, M., et al. Astrocyte-derived interleukin-15 exacerbates ischemic brain injury via propagation of cellular immunity. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (3), E396-E405 (2017).
  19. Wang, S., Zhang, H., Dai, X., Sealock, R., Faber, J. E. Genetic architecture underlying variation in extent and remodeling of the collateral circulation. Circulation Research. 107 (4), (2010).

Tags

Medizin Ausgabe 145 zerebrale Ischämie-Reperfusion mittlere zerebrale Arterie Okklusion 2,3,5-Triphenyltetrazolium-Chlorid-Assay Open-Field-Assay Infarkt Volumen ImageJ
Zwei-Schiff Okklusion Mausmodell der zerebralen Ischämie-reperfusion
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Chen, C. Y., Chen, R. J., Lee, G. A. … More

Chen, C. Y., Chen, R. J., Lee, G. A. Two-vessel Occlusion Mouse Model of Cerebral Ischemia-reperfusion. J. Vis. Exp. (145), e59078, doi:10.3791/59078 (2019).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter